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ELISA试剂盒质控血清的制备
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
ELISA试剂盒是国内的生物行业带头企业，是集研发，生产、与销售为一体的生物试剂公司，以用心做好品质，企业方能远航为经营使命，起始于科研，专注于科研，持续为科研单位提供更更放心的科研产品，助力您的科学研究。质控血清的制备：1、收集新鲜的无溶血、无黄疸、无细菌污染的阳性血清。2、56℃加热10小时来活。3、离心或过滤除去沉淀。4、用10%的小牛血清或正常人血清（PBS缓冲液）将收集的血清稀释至所需的浓度。5、抽滤除菌，按一次使用的量分装小安瓿，封口，20℃保存备用，不可反复冻融，被检物要求检出的水平常被认为是质控血清应选择的水平。6、标定含量，20-30次测定结果删除>±2SD数据的均值作为靶值，并与已知定值血清对比测定。ELISA试剂盒信息参数：保存条件：2-8℃低温保存保质期： 六个月用途： 科研实验等领域科学研究，不得用于临床诊断。规格： （1）96T可用做84个标本，12个标准曲线。 （2）48T可用做42个标本，6个标准曲线。
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ELISA试剂盒根据已经使用的结果
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
ELISA试剂盒可通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应，颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。如果您一直被所困扰，那么也许您该花些时间来优化封闭液。这可能需要时间，但也是值得的。 ELISA试剂盒目前主要有两种类型的封闭液：蛋白和非离子型去污剂。您使用的类型须取决于多个因素，包括微孔板的表面ELISA检测试剂盒、吸附的抗原、您的抗体和检测试剂。好的封闭液应降低非特异性结合，但它不应当与抗原、抗体或检测试剂发生相互作用。 zui常用的非离子型去污剂是Tween-20。这种封闭液便宜、稳定，在去除洗涤过程中的一些非特异结合上很有用。在这种测定方法中有三个必要的试剂：（1）固相的抗原或抗体，即"免疫吸剂"（immunosorbent）；（2）酶标记的抗原或抗体，称为“酶联物"、“结合物"（conjugate）；ELISA试剂盒酶反应的底物。根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件，可设计出各种不同类型的检测方法。ELISA试剂盒法是免疫诊断中的一项新技术，现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、ELISA试剂盒寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定，认为ELISA试剂盒法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。
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PAA血清如何避免沉淀
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
血清解冻如何避免沉淀物的产生?1、解冻血清时，请按照所建议的逐步解冻法(-2O℃至4℃至室温)，若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃)，实验显示非常容易产生沉淀物。 2、解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。 3、请勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清会变得混浊，同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害，而影响血清的质量。4、血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。5、若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。血清解冻后发现有絮状沉淀物出现，该如何处理? 欲去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管内，以400g稍微离心，上清液即可接着加入培养基内一起过滤。但不建议以过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞过滤膜。PAA血清现货供应
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实验室常用的几款血清和品牌
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
实验室常用的血清品牌，HAKATA，HYCLONE，BOVOGEN,SERANA,GINIMI 一、特级类胎牛血清（于干细胞的胎牛血清）（常用血清 备有库存！） 1、Hyclone 北美特级胎牛血清（SH30070.03） 目前，性能的血清，实验室反馈不错的，那就是Hyclone SH30070.03的特级胎牛血清， Hyclone的“头牌”。 这款血清--Hyclone特级胎牛血清（Defined FBS），货号：SH30070，是世界上*经过40纳米过滤的*胎牛血清，的促细胞生长作用及产品稳定性。内毒素含量小于10EU/ml，血红蛋白含量小于10mg/dl。此血清可以广泛用于各种细胞培养，包含任何干细胞系的培养。 2、HAKATA北美特级胎牛血清（16000-044） invitrogen公司在美国原装生产的特级胎牛血清，货号：16000-044，是100nm过滤3次，内毒素和血红蛋白含量都可以与Hyclone的SH30070.03相媲美。也可以用于培养大部分的干细胞系。 二、优等类胎牛血清 1、Hyclone加拿大优等胎牛血清（SH30396） 的是Hyclone加拿大优等胎牛血清（Characterizend FBS），货号：SH30396，血清采自加拿大，由Hyclone公司总部的员工采集加工，采集方法，加工过程，检定标准与美国原产优等胎牛血清完全一致，市场*美国原产的。经过3次100nm过滤，内毒素含量小于25EU/ml，血红蛋白含量小于25mg/dl。此血清，在2005年以前，是很多实验室选择血清的，价格适中，质量过硬，应用细胞非常广泛。 2、Hyclone澳大利亚优等胎牛血清（SH30084） 基本与加拿大的优等血清是一样的，级别也非常相似，各种级别都有。 3、HAKATA澳大利亚胎牛血清（10099-141）与Hyclone澳大利亚胎牛血清差不多，市场价也是3200元/500ml左右。这一级别的血清，也能用于干细胞培养，可是，不象特级胎牛血清那么。 三、普通进口胎牛血清 Hyclone南美胎牛血清（SV30087）HAKATA南美胎牛血10270-106 目前市场上用的zui多的Hyclone血清是南美胎牛血清（FBS） SV30087 ，此血清采自南美，在国内（兰州）过滤并测试检验，经
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细胞周期的相关检测
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
Ⅰ、样品准备 准备以下一种或几种样品 A、组织单细胞悬浮液（如淋巴腺、脾、骨髓、胎盘细胞） B、组织培养细胞 C、Ficoll-hypaque分离的单核细胞 Ⅱ、反应体系－DNA低渗缓冲液 柠檬酸三钠 0.25g Triton-X 100 0.75ml Propidium iodide 0.025g 核糖核酸酶 0.005g 蒸馏水 250ml 我们将该DNA低渗溶液于密闭瓶子中存放数月后并无发现有任何染色活性的丢失 Ⅲ、染色 1、 每一个管子中放入1×106个细胞； 2、 样品离心后尽可能完全地移去上清液，并且不要打碎沉淀块； 3、 入1ml的DNA低渗染色（可用甲基绿进行染色）缓冲液至沉淀中，并混匀； 4、 样品于4℃下避光30分钟或zui长不超过1个小时以备流式细胞仪分析。 注意：延长在低渗缓冲液的曝光时间会引起样品碎片的增加。细胞周期检测可以作为生物相容性评价指标，示例如下： 应用体外细胞培养法，观察不同质量分数羟基磷灰石浸提液对L-929细胞的细胞学形态的影响，同时采用MTT比色法评价羟基磷灰石对L-929生长和增殖的影响，流式细胞仪检测羟基磷灰石浸提液对L-929细胞生长周期及凋亡的影响。结果表明，羟基磷灰石浸提液对体外培养的细胞形态无明显影响，对细胞生长和增殖无明显抑制作用；不同质量分数材料浸提液的细胞毒性为 0~1级，随羟基磷灰石浸提液质量分数的升高，细胞凋亡率逐渐上升；50%、75%、100%羟基磷灰石浸提液组能明显降低G0 /G1 期细胞比例，增加S,G2 /M期细胞比例，能增加L-929细胞DNA的合成，促进细胞生长和组织修复。细胞周期检测是生物材料生物相容性评价的一种可靠方法和指标。 其他资料 细胞周期口诀 以植物细胞有丝分裂为例： 有丝分裂分五段 间前中后末相连 间期首先作准备 间期染体复制在其间 前期 两消两现一散乱 中期 着丝点聚赤道板 后期 丝牵染体两极走 末期 两消两现壁重建 注：动物细胞末期不生成细胞壁。 舜冉（上海）生物科技有限公司更多人AB血清、进口血清、国产血清，豚鼠血清、兔血清、绵羊血清、山羊血清、
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血清获取蛋白的制作办法
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
血清获取蛋白的制作办法 血清获取蛋白是从血清中获取的蛋白质，适用于食品工业的食品增加剂和医药制剂。一般获取蛋白质的办法是离心别离，除掉血浆，使二价铁血红素酸化，并将其扫除。可是这种办法产值很低(100毫升血液仅可获取蛋白质约10)克。为了进步蛋白质得率，选用新的办法，即用每分钟2 500～3 000转的速度 在15～30分钟内将血液进行离心别离，使醋酸和氯化钠的混合物(比值为2∶1～4∶1)酸化。在温度90～110℃下加热5～15分钟。冷却，再增加*醚。制作办法：取通过安稳的血液，作离心别离15～30分钟，每分钟转速为2 500～3 000转。然后获得固形物，去除血浆，用水使固形物沉渣溶解。置血红素于培养基中。为了使培养基酸化而使血红素分子中的二价铁血红素和血球蛋白的结合体别离 预先制备好醋酸和氯化钠的混合物 并将它加热到90～110℃。混合时将固形物的溶血商品缓慢地增加到加热的混合物中。从头把温度逐渐地增加到沸点，煮沸5～15分钟，以便使结合体彻底别离，接着将混合物逐渐冷却到室温。为了使二价铁血红素溶解并消除，在混合物中按溶物商品比值2∶1～5∶1增加*醚。这时获取出来的蛋白质呈白棉絮状。将溶液过滤，再用*醚清洁。100毫升血中获取的蛋白质商品相当于14.4克。使用这种办法，每100毫升的血液可进步蛋白质得率45%。
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封闭液小知识：ELISA实验中的封闭液等常用试剂的配制
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
我公司为您介绍ELISA实验中的封闭液等常用试剂的配制。ELISA的试剂盒说明上写封闭液用蔗糖溶液，一般是用BSA或酪蛋白的蛋白分子封闭空白位点，蔗糖封闭的原理： 1、ELISA实验中，蔗糖本身没有封闭作用; 2、封闭液一般是BSA、酪蛋白等或者是Tween等。 3、加蔗糖的主要目的是保护ELISA板子吸附(包被)的蛋白，起到“保护剂”的作用。 4、蔗糖溶液一般在ELISA板子经过BSA封闭后加，当然也有将蔗糖加到封闭液中同时进行处理;那一种更好需要你实验后来验证。但多数选择前者。 封闭剂还可用5%的脱脂乳(市售即可)，0.4%的明胶，但是实验表明前者比较好，后者不容易洗干净未结合上的明胶。 封闭剂的原理就是与酶联板上未结合抗原或抗体的微孔中用封闭剂封闭上，结合抗体或抗原的时候就不会产生非特异结合了，不会影响实验的准确度。 tween的作用：虽然不能单独封闭，但和BSA在封闭时会起到清洗非特异性结合或结合不牢固的蛋白的作用，假如抗体包被在板上会出现YY- 附件：ELISA实验中缓冲溶液等试剂的配置 ELISA实验中是以抗原和抗体的免疫反应为基础，ELISA试剂以及各种溶液如何配置?zui近刚做了下ELISA实验，把各种ELISA配置方法汇总如下：(1) ELISA实验包被缓冲液(2) ELISA实验洗涤缓冲液(2) ELISA实验洗涤缓冲液(3) ELISA实验稀释液;(4)ELISA实验终止液(5)ELISA底物缓冲液(6)ELISA实验TMB(四甲基联苯胺)使用液(7) ELISA实验ABTS使用液(8)ELISC。 ELISA的试剂盒(1) ELISA实验包被缓冲液(PH9.6 0.05M碳酸盐缓冲液): NaHCO3 1.59克 NaHCO3 2.93克 加蒸馏水至1000ml (2) ELISA实验洗涤缓冲液(PH7.4 PBS)：0.15M KH2PO4 0.2克 Na2HPO4·12H2O 2.9克 NaCl 8.0克 KCl 0.2克 Tween-20 0.05% 0.5ml 加蒸馏水至1000ml (3) ELISA实验稀释液： 牛血清白蛋白(BSA) 0.1克 加洗涤缓冲液至100ml 或以羊血清、兔血清等血清与洗涤液配成5～10%使用。 (4) ELISA实验终止液(2M H2SO4)： 蒸馏水178.3ml，逐滴加入浓硫酸(98%)21.7ml。 (5) ELISA底物缓冲
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基因诊断的概念、常用技术与应用
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
基因诊断的概念 一、基本概念： 1．人类的绝大多数疾病都与基因有关，基因变异引起疾病两种类型： 1) 内源基因变异：由于先天遗传和后天内外环境因素的影响，人类的基因结构及表达的各个环节都可发生异常，从而导致疾病。分基因结构突变和表达异常。 2) 外源基因的入侵：各种病原体感染人体后，其特异的基因被带入人体并在体内增殖引起各种疾病。基因改变引起各种表型改变，从而引起疾病，从基因水平探测分析病因和疾病的发病机制，并采用针对性的手段矫正疾病是近年基础和临床的方向。 ２．基因诊断：利用现代生物学和分子遗传学的技术方法，直接检测基因结构及表达水平是否正常，从而对疾病作出诊断的方法。 二、基因诊断的特点： 1．以基因做检查材料和检查目标针对性强； 2．分子杂交选用特定基因序列作探针，故特异性强； 3．分子杂交和PCR具有放大效应，故有较大的灵敏度； 4．适用性强，诊断范围广。 基因诊断的常用技术 一、核酸分子杂交： 核酸杂交是从核酸分子混合液中检测特定大小的核酸分子的传统方法。其原理是核酸变性和复性理论。即双链的核酸分子在某些理化因素作用下双链解开，而在条件恢复后又可依碱基配对规律形成双链结构。杂交通常在一支持膜上进行，因此又称为核酸印迹杂交。根据检测样品的不同又被分为DNA印迹杂交（Southern blot hybridization ）和RNA印迹杂交（Northern blot hybridization）。 （一）核酸分子杂交的基本过程： ①．DNA或RNA的制备：将待测样品用一定方法提取DNA或RNA。 ②．制备探针； ③．杂交； ④．检测。 1．DNA或RNA的制备：将待测样品用一定方法提取DNA或RNA。 2．基因探针的概念： ① 基因探针（probe）就是一段与目的基因或DNA互补的特异核苷酸序列，它可以包括整个基因，也可以仅仅是/基因的一部分；可以是DNA本身，也可以是由之转录而来的RNA。 ② 探针的来源： DNA探针根据其来源有3种：一种来自基因组中有关的基因本
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菌液的制备分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
1.费氏弧菌发光杆菌原液制备： 菌液的制备：将合格的伤寒杆菌H菌株接种于普通琼脂的克氏瓶或大试管内37℃孵育18—24小时。肉眼观察有无杂菌生长，必要时作镜检。用无菌甲醛生理盐水洗下菌苔，将洗下液体装入无菌试管内，置37℃恒温箱18—24小时以杀菌。得到原液。用作无菌试验即将菌液接种于肉汤及琼脂培养基培养4天，无活菌生长者才可使用。 菌液的制备：将合格的伤寒杆菌菌株依上法培养后，用无菌0.5%石灰酸盐水将菌苔洗下，洗液装入无菌试管置于37℃温箱中18—24小时杀菌得原液。经检查无菌时可以使用(如无伤寒杆菌菌株也可用菌株制备抗原。即用0.5%石灰酸生理盐水洗下菌液置100℃水浴60分钟，破坏其H抗原即为O菌液。 2.费氏弧菌发光杆菌应用液的制备： 合格的原液用标准比浊管计算含菌落数目后，用生理盐水稀释至每毫升含菌10亿。是为了应用液加入适量甲醛使其为0.25%，制备好的原液及应用液均保存在2—10℃冰箱中备用，有效期为1年。 菌液浓度的计算及稀释法： 菌液的浓度可用标准比浊法来测定，方法如下： (1)分别配制1%硫酸溶液及1%氯化钡溶液 (2)取口径相等质地相同的试管10支，依下表所示分别将硫酸及氯化钡溶液加入，封固管口，费氏弧菌发光杆菌注明号码备用。
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分子杂交基本原理分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
(一)抗原elisa试剂盒DNA变性 ： DNA变性是指双螺旋之间氢键断裂，双螺旋解开，形成单链无规则线团，因而发生性质改变(如粘度下降，沉降速度增加，浮力上升，紫外吸收增加等) 。 1、DNA变性的方法： 1)加热; 2)改变DNA溶液的pH; 3)有机溶剂(如乙醇、尿素、甲酰胺及丙酰胺等)等理化因素。 2、增色效应：DNA在260nm处有zui大吸收值，这一特征是由于含有碱基的缘故。在DNA双螺旋结构模型中碱基藏于内侧，变性时由于双螺旋解开，于是碱基外露，260nm紫外吸收值因而增加，这一现象称为增色效应(hyperchromic effect) 。利用DNA变性后波长260nm处紫外吸收的变化可追踪变性过程。 3、溶解曲线：如果升高温度使DNA变性，以温度对紫外吸收作图，可得到一条曲线，称为溶解曲线。 4、融解温度：通常人们把50%DNA分子发生变性的温度称为变性温度(即熔解曲线中点对应的温度)，由于这一现象和结晶的融解相类似，故又称融点或融解温度(melting temperature， Tm)。因此Tm是指消光值上升到zui大消光值一半时的温度。 5、影响Tm值的因素：Tm不是一个固定的数值，它与很多因素有关： 1) 部因素：pH、离子强度。随着溶剂内离子强度上升，Tm值也随着增大。 2) 部因素：DNA的碱基比例、DNA的均一性 ;在相同条件下，DNA内G-C配对含量高，其Tm值也高。 6、DNA中的GC含量与Tm值关系： Tm = 69。3+0。41 × % (G+C) 对于小于20bp的寡核苷酸，Tm=4(G+C)+2(A+T) 实验表明DNA分子中(G+C)克分子含量百分比的大小与Tm值的高低呈直线关系。 (二)复性：变性DNA只要消除变性条件，二条互补链还可以重新结合，恢复原来的双螺旋结构，这一过程称为复性(renaturation) 。 退火：通常DNA热变性后，将温度缓慢冷却，并维持在比Tm低25～30℃左右时，变性后的单链DNA即可恢复双螺旋结构，因此，这一过程又叫做退火。 复性后的DNA，理化性质都能得到恢复。倘若DNA热变后快速冷却，则不能复性。 抗原elisa试剂盒影响复性速度的因
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夹心法ELISA检测白介素8操作步骤及注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
羊源性成分核酸检测PCR-荧光探针试剂盒操作步骤： 1. 包被：pH9.5 碳酸盐缓液稀释4D7单克隆抗体粗提γ球蛋白至1μg/ml,加入96孔板,100μl/孔，放4℃,36小时。 2. 封闭：0.1%吐温PBS(Buffer A)冲洗96孔板三次，加3%BSA Buffer A(Buffer B)200μl/孔，放37℃,1小时。 3. 加待检样品：Buffer A 冲洗96孔板三次，加待检样品及Buffer B 稀释的标准品100μl/孔，放37℃,3小时。 4. 加酶标抗体：Buffer A冲洗96孔板五次,3%PEG Buffer A稀释酶标抗体至1∶800，加入96孔板，100μl/孔，放37℃,1小时。 5. 显色：Buffer A冲洗96孔板五次，pH5.4柠檬酸缓冲液溶解底物(ABTS),0.2mg/ml,加3%H2O2,2μl/ml，加入96孔板，100μ/孔，室温下或37℃显色羊源性成分核酸检测PCR-荧光探针试剂盒。 注意事项： 1. 待检标本如为血清，应采用一次性容器，血液采集后尽快(6小时以内)分离血清。 2. 封闭液或抗体稀释液应新鲜配制或冻存羊源性成分核酸检测PCR-荧光探针试剂盒。
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分析elisa酶联免疫试剂盒说明书出现异常原因
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
一、elisa酶联免疫试剂盒说明书白板异常：显色步骤结束后，酶标板所有孔均无颜色。阳性对照不显色。1. 试剂已过效期，或不同试剂盒组分混用（解决方式：检查试剂的组分及批号，确认未过期以及所有组分均属对应的试剂盒。不同试剂盒或不同批号的试剂不能混用）。2. 错加、漏加试剂底物、显色剂 A或B（解决方式：严格按说明书的步骤操作，加完试剂后可观察一下液面高度是否一致，以减少漏加现象）。3. 洗板及加样过程中，酶标受污染失活失去催化显色剂显色的能力（解决方式：确认盛酶标的容器不含酶抑制剂如叠氮钠等，确认配制洗液的容器已洗干净）。4. 终止液误作洗涤液稀释或当底物缓冲液配制（解决方式：每次配制时都应看清标签标明物质）。5. 蒸馏水有问题（解决方式：确认配制洗液的纯化水达到要求且未污染，与好蒸馏水比较）。·显色弱、灵敏度低：实验结束后，包括阳性对照、质控在内的所有板孔颜色均较淡。 二、elisa酶联免疫试剂盒说明书阴阳性对照正常，但质控、参考品或个别弱阳性标本未能检出。1. 未达要求的孵育温度及孵育时间可检出强阳性标本，但质控或弱阳性标本受 温度变化影响较大而被未检出（解决方式：质控品或标本避免反复冻融。标本在一周内使用的，可存于 2-8℃，如需长期保存，应置于-20℃以下保存。质控品应小量分装，并置于-20℃以下保存）。2. 质控品或标本高温放置过久，或被反复冻融致待测物滴度下降，而未能检出（解决方式：重新设定酶标仪的参数，特别是检查滤光片是否匹配）。3. 仪器设定不正确，滤光片不匹配（解决方式：重新设定酶标仪的参数，特别是检查滤光片是否匹配）。三、实验结束后，阴阳性对照正常，质控正常，但临床标本感觉显色较弱 1. 待测标本中可能不含强阳性标本，故结果可能是正常的（解决方式：如有怀疑，可复检）。2.elisa酶联免疫试剂盒说明书 标本加入叠氮钠作为防腐剂（解决方式：酶免实验中的标本禁用叠氮钠作为防腐剂，可选用 proclin、硫柳汞等其他防腐剂）。
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食品卫生微生物灭菌处理
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
(1) 菌生物菌种干热灭菌法：此法适应于在干热情况下，不损坏、不变质、不蒸发的物品、较常用于玻璃器皿、金属制品、陶瓷制品等的灭菌。 ① 器械器皿应清洗后再干烤，以防附着在表面的污物炭化。 ② 灭菌时安放物品不能过挤，不要直接接触底和箱壁，物品之间留有空隙。 ③ 菌时将箱门关紧，接上电源，先将排气孔打开约30min，排除灭菌器中的冷空气，温度升至160℃调节指示灯，维持1.5 –2h。 ④ 灭菌完毕后或温度升温过程中，须在60℃以下才能打开箱门。 (2) 手提式高压锅或立式压力蒸气灭菌器的使用应按下列步骤进行： ① 手提式高压锅在主体内加入3L清水，立式高压锅加水16L(重复使用时应将水量补足，水变混浊需更换). ② 手提式压力锅将顶盖上的排气管插入消毒桶内壁的方管中(无软管或软管锈蚀破裂的灭菌器不得使用)。 ③ 盖好顶盖拧紧，勿使漏气;置灭菌器于火源上加热，立式压力锅通上电源，并打开顶盖上的排气阀放了冷气(水沸腾后排气10-15min)。 ④ 关闭排气阀，使蒸气压上升到规定要求，并维持规定时间(按灭菌物品性质与有关情况而定)。 ⑤ 达到规定时间后，对需干燥的物品，立即打开排气阀排出蒸气，待压力恢复到零时，自然冷却至60℃后开盖取物，如为液体物品，不要打开排气阀，而应立即将锅去除热源，待自然冷却，压力恢复至零，温度降到60℃以下 再开盖取物，以防突然减压液体剧烈沸腾或容器爆破。 (3) 菌生物菌种卧式压力锅蒸气灭菌器的使用按下列步骤进行： ① 关紧锅门，打开进气阀，将蒸气引入夹层进行预热，夹层内冷空气经阻气器自动排出。 ② 夹层达到预定温度后，打开锅室进气阀，将蒸气引入锅室，锅室内冷空气经锅室阻气器自动排出。 ③ 待锅室达到规定的压力与温度时，调节进气阀，使保持恒定至 ④ 自然或人工降温至60℃再开门取物，不得使用快速排出蒸气法，以防突然降压，液体剧烈沸腾或容器爆破。 ⑤ 使用自动程序控制式压力蒸气灭菌器，在放好物品关紧门后，应根据物品类别按动相应开
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程序降温盒提高细胞冻存的存活率的方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
1.细胞系实验室冻存盒平时放4度，需要冻细胞时直接拿出来用就可以了。第二天转移至液氮，贵重的细胞尽快转移，不然会影响复苏成活率的。一般是用5次就更换一下异丙醇。现在也有一些商品化冻存液可以直接丢进-80的，很方便，效果也不错的。 2.异丙醇的量是要保证的，不能低于表明的线，否则不能起到很好的程序性降温作用，我们是在4度放置，放了细胞后立马放到-80度冰箱，第二天再转移到液氮，效果很不错。异丙醇熔点：-87.9度的色透明具有乙醇气味的可燃性有毒液体。注意了有可燃性!急性毒性：口服- 大鼠 LD50: 5840 毫克/ 公斤; 口服- 小鼠 LC50: 3600 毫克/ 公斤。刺激数据：眼睛- 兔子100 毫克/ !请注意清理! 3.细胞系应该不可以把冻存盒放4°的，因为梯度降温的起始点是室温20°左右，所以从-80℃拿出来的冻存盒应该现在室温静置一段时间待其恢复到室温再使用。而其中的异丙醇应使用6~7此后更换一次，而且保证液体量达到刻度线，否则降温效果会受到影响。 4.冻存盒里的异丙醇一般是250ml，低于刻度了要加上，理论上是5次以后更换异丙醇，但是异丙醇对环境有害，我们可以多用几次，只是少了的时候要加满。还有冻存液里面的DMSO对细胞有毒性，尤其是室温的时候，所以冻存盒和冻存液先放4°，等把细胞用冻存液重悬好了放在冻存盒里，还放回4°，细胞系等到出细胞间的时候再拿到-80°里面保存。
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几种转染方法对比
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
转染方法 原理 主要应用 特点 厂家及产品 DEAE－葡聚糖法 带正电的DEAE-葡聚糖与核酸带负电的磷酸骨架相互作用形成的复合物被细胞内吞 瞬时转染 相对简便、重复比磷酸钙好,但对细胞有一定的毒副作用,转染时需除血清且一般只用于BSC-1,CV-1,COS细胞系 sigma-aldrich(DEAE-Dextran Transfection Kit) 磷酸钙法 磷酸钙DNA复合物吸附细胞膜被细胞内吞 稳定转染,染瞬转染 不适用于原代细胞（所需的DNA浓度较高）,操作简便但重复性差,有些细胞不适用 细胞建议用CSCL梯度离心，转染是拷贝数较多 GIBCO BRL ，Promega 阳离子脂质体法 带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物，然后脂质体上剩余的电核与细胞膜上的唾液酸残基的负电核结合；另一种解释是通过细胞是内吞作用而被进入细胞。(若DNA浓度过高，中和脂质体表面电核，而降低了与细胞的结合能力) 稳定转染,瞬时转染,所有细胞 使用方法简单，可携带大片段DNA，通用于各种类型的裸露DNA或RNA，能转染各种类型的细胞，没有免疫原性。虽在体外基因转染中有很高的效率，但在体内，能被血清清除，并在肺组织内累积，诱发强烈的抗炎反应，导致高水平的毒性，这在很大程度上限制了其应用 Invitrogen（Lipofectamine 2000，Lipofectamine，Lipofectin，Lipofectamine Plus，Cellfectin） Roche（Dosper，DOTAP，FuGENE 6） CPG Biotech Co（GeneLimo Plus，GeneLimo Super） Promega（Transfast，Tfx，Transfectam） 阳离子聚合物 带正电的聚合物与核酸带负电的磷酸基团形成带正电的复合物后与细胞表面带负电的蛋白多糖相互作用，并通过内吞作用进入细胞。 稳定转染,瞬时转染,所有细胞 除了具有阳离子脂质体的转染效率高，操作简单，适用范围广，重复性好等特点外，还具有在体内，转染效率高，细胞毒性低等特点，是新一代的转染试剂。 Sunma(梭华－Sofast®) Qbiogene（jetPEI™） Qiagen(SuperFect，Polyfect） 病毒介导法 逆转录病毒(RNA) 通过病毒中膜糖蛋白和宿主细胞表面
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