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蛋白marker--WB实验中的标尺
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
一、蛋白marker是什么？ 在WB实验中，蛋白marker的作用主要是用来指示蛋白条带所对应的分子量大小，只有标准量无误了，实验结果才有说服力，除此之外，蛋白标准还有表示转移成功或者蛋白在凝胶上的电泳程度等等的作用，所以选择正确的蛋白Marker也是western blot实验成功的必要条件之一。 二、蛋白marker的分类 总体来说，蛋白Marker可以分成未预染蛋白marker、预染marker二个级别。 1. 未染色（pre mixed）蛋白分子量标准 未预染蛋白marker即宽分子量蛋白标准、高分子量蛋白标准以及低分子量蛋白marker。 未染色的蛋白分子量标准是zui简单，也是zui准确的一种。由于没有附带染料分子或者是标记分子，所示大小正好是蛋白原本的大小，是判断蛋白大小必须的。现在的Marker多数都选用预混和的Marker，方便不同大小的蛋白比较。预混的Marker通常有几条带加倍浓度作为指示，因为混合的条带越多，越不好记，所以当看到特别浓的那几条可以作为标志带。不过小带通常都不那么容易看清楚。在选择上来说，当然是选择其中至少有一条条带和自己的目的蛋白大小相近的，越近越好。预混的Marker使用上不如预染Marker（pre-stained）好用，因为电泳过程中完全看不到，要和目标蛋白一起等到zui后染色才可以看到，无法对实验起预示参照作用。完全属于“后知后觉”型的。 ① 宽分子量蛋白标准 如果从实验室总体考虑的，就选范围尽量宽，条带分布比较均匀的，这样你的蛋白无论在哪个区间都容易判断，避免正好落在一段空白区。不过条带越多，相应的上样量也会增加。拿到Marker后，如果买的是大包装，就应该考虑分装，避免多次反复冻融。另外宽谱的Marker不一定每条都能看到的，特别是Mini Cell。如果侧重大蛋白，那小的可能就已经跑掉了。 ② 高分子量蛋白标准 通常在检测大分子量蛋白经常使用到高分子量蛋白标准 ③ 低分子量蛋白标准 在一般的蛋白电泳当中，更常用的是低分子量蛋白标准，除了有指示蛋白大小的作用以
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ELISA试剂盒标配包括哪些
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
咱们用专业的态度，超水准的试验技能，供给品牌ELISA试剂盒商品，咱们具有独立完善的酶联免疫试验室，能帮助需求代测的朋友们，完结代测试验（这个是完全免费的哦），全国各地区客户，咱们免费运输给您，让您试验省心、省力，试验作用还明显。完好的ELISA试剂盒包含以下各组分：（1）已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；（2）酶符号的抗原或抗体（物）；（3）酶的底物；（4）阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），参阅规范品和操控血清（定量测定中）；（5）物及标本的稀释液；（6）洗涤液，在板式ELISA中，常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水； （7）酶反响停止液，常用的HRP反响停止液为硫酸，其浓度按加量及比色液的终究体积而异，在板式ELISA中一般选用2mol/L。ELISA试剂盒检查意图：用于测定血清、血浆及相关液体等标本。我司供给的种属有：大鼠、小鼠、人、豚鼠、植物、牛、羊、猪、鸡、鸭等ELISA试剂盒，商品规格分为96T、48T，货期短，质量优，专门快递发送，更有上海客户送货上门，运用前请仔细阅读商品说明书。且我司重重许诺：如有质量问题免费退换（非人为因素形成）。
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ELISA试剂盒的检测根源
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
ELISA试剂盒应用定性夹心免疫检测技术，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板条，这些多肽是中国型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很强的肽段，分别来自于该毒株的开放阅读框2和开放阅读框3。将样品或标准品加入孔中并孵育，如果其中存在HEV IgM抗体，这些抗体就会与HEV 的多肽抗原结合，并固定在上面，洗板除去其它非特异性抗体和样品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根过氧化物酶)酶结合物，ELISA试剂盒经第二次孵育后，酶结合物就会与*次孵育结合上的HEV IgM抗体相结合，洗板除去未结合的酶结合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育时会发生酶-底物反应，只有那些含有HEV IgM抗体和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化，加入硫酸溶液终止酶和底物间的反应，ELISA试剂盒并在波长: 450nm处测量O.D.值,按照本HEV IgM抗体elisa试剂盒的测试标准, O.D.值大于或等于Cut-Off值的样品被认为是初试阳性。
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2017值得思考的那些个ELISA检测技能推荐
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
三月下旬，经验总结，有哪些【ELISA检测技能】值得我们深思细想？上海恒远为您推荐一 供参考： 一、标本血清如何避免沉淀物的产生？ 1. 解冻血清时，请按照所建议的逐步解冻法。 2. 解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生 3. 请勿将血清置于37。C太久。若在37摄氏度放置太久，血清会变得混浊。 4. 血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。 5. 若必须做血清的热灭活，请遵守56摄氏度，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。二、ELISA加样如何防错？ 1. 用一张写满字的纸，字越多越好，比如报纸，垫在下面，这样，加过标本的小孔看过去下面的字会变小，没加的字正常，非常容易区分。 2. 可以利用液面反光与没有加的孔加以区别。 3. 在标本加完后，再把加样枪全压下，使液面产生小气泡，可以区分。 ELISA应用定性夹心免疫检测技术，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板条，这些多肽是中国型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很强的肽段。将样品或标准品加入孔中并孵育，如果其中存在HEV IgM抗体，这些抗体就会与HEV的多肽抗原结合，ELIS试剂盒并固定在上面，【ELISA检测技能】中洗板除去其它非特异性抗体和样品中的其它成份。 了解更多，请我司业务员！
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恒远*放送免疫PCR试验方法全解析
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
今天上海德尔塔生物公司为您*放送的【免疫PCR试验方法】全解析资料主要包括了了所需材料、操作方法，该实验利用抗原抗体反应的特异性和PCR扩增反应的极高灵敏性而建立的一种微量抗原检测技术。 【分割线】 *、材料与方法 【生物素标记特异性抗体的制备】 免疫球蛋白的Fc片段上有糖基存在，因而可用能与糖基结合的Biotin-hydrazide作生物素标记。 ① 将纯化的抗体(IgM或IgG，0.1~1.0ml)在标记缓冲液(0.1Mol/L NaAc，pH值5.5，0.1Mol/L NaCl)中4℃透析放置一个晚上。 ② 吸取0.5ml至微量离心管中，加过碘酸钠溶液至终浓度为10mMol/L，置冰浴上于暗处孵育30min，使抗体分子上的糖基氧化。 ③ 将氧化的抗体过PBS平衡的Sephadex G25 PD-10预装柱，使之与过碘酸钠分开。收集蛋白峰。 ④ 向抗体管中加入Biotin-LC-hydrazide(Pierce)至终浓度5mMol/L，置混摇器上室温孵育1h。 ⑤ 用含0.02%NaN3的PBS平衡Sephadex G25预装柱，将生物素标记的抗体分子过柱与游离的生物素分开。收集蛋白峰，保存-20℃。 【生物素标记DNA段的制备】 作为将与抗体偶联的报告DNA段，应确保在待测抗原来源的机体DNA中无同源序列，如可选用大肠杆菌的序列作为报告DNA去检测人源的标本。DNA段大小为300~500bp，生物素标记可采用PCR方法，根据报告DNA的核苷酸序列合成一对引物，其中一个引物的5’端碱基上带有生物素标记。 在0.5mlPCR管中按表将下列试剂混合。 表PCR系统组成 ·加水至100uL ·混匀后上面覆盖液体石蜡。 ·95℃加热5min，然后在PCR仪上按下列程序扩增：94℃ 1min;55℃ 1min;72℃ 1min; 40个循环。zui后72℃延伸10min。 ·加等量酚-抽提，然后加10ul 3Mol/L Kac，250uL无水乙醇，置-70℃30min。 ·离心沉淀DNA段，用70%乙醇洗一次。 ·将沉淀DNA干燥后溶于TE缓冲液中，保存在-20℃。 【制备抗体-亲和素-DNA复合物】 将生物素标记的抗体与亲和素按等分子浓度混合于含有1mg/mlBSA的PBS中，室温孵育30min，再加入两倍分子浓度的生物素标记
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进来瞧瞧：微生物实验室的环境要求
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
细胞培养是一种无菌操作技术，要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受其它有害因素的影响。要求工作环境清洁、空气清新、干燥和无烟尘，下面来瞧瞧：微生物实验室的环境要求。 一、合适的气体环境 气体是哺乳动物细胞培养生存必需条件之一，所需气体主要有氧气和二氧化碳。氧气参与三羧酸循环，产生供给细胞生长增殖的能量和合成细胞生长所需用的各种成分。 开放培养时一般把细胞置于95%空气加5%二氧化碳混合气体环境中。二氧化碳既是细胞代谢产物，也是细胞生长繁殖所需成分，它在细胞培养中的主要作用在于维持培养基的pH值。大多数细胞的适宜pH为7.2-7.4，偏离这一范围对细胞培养将产生有害的影响.但细胞耐酸性比耐碱性大一些，在偏酸环境中更利于细胞生长。但有一些细胞也喜欢偏碱环境中生长，如成纤维细胞pH是7.4-7.6.每种细胞都有其zui适pH值。 二、培养器皿 器皿应选择透明度好，无毒，利于细胞粘附和生长的材料，常用一次性聚苯乙烯材料制品或中性硬度玻璃制品。常用的器皿有： 1.液体储存瓶； 2.培养瓶； 3.培养皿； 4.吸管； 5.离心管； 6.其它。 三、常用设施及设备 1.超净工作台：也称净化工作台，分为侧流式、直流式、外流式。 2.无菌操作间：一般由更衣间，缓冲间和操作间三部分组成。操作间放置净化工作台及二氧化碳培养箱，离心机，倒置显微镜等，缓冲间可放置电冰箱，冷藏器及消毒好的无菌物品等。 3.操作间：普通培养箱，离心机，水浴锅，定时钟，普通天平及日常分析处理物。 4.洗刷消毒间：烤箱，消毒锅，蒸馏水处理器及酸缸等。 5.分析间：显微镜，计算机及打印机等。
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CO2培养箱如何消毒
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
干细胞CO2培养箱如果是隔水式培养箱可以采用甲酸熏蒸(甲醛与高锰酸钾反应生成甲酸)，然后再用75%酒精擦培养箱内壁即可，效果比较好。如果是气套式的培养箱用75%酒精直接擦培养箱内壁即可，或采用隔水式熏蒸，但熏蒸前要先将二氧化碳和温度探头封闭好，防止甲酸腐蚀。干细胞CO2培养箱是实验室*的仪器，但因其中需放置盛水容器而湿度较高，从而导致霉斑(经培养鉴定为丝状真菌)快速生长而影响工作，有碍观瞻和可能导致试验样本污染或院内感染扩散。虽使用了硫酸铜溶液、75%乙醇溶液或紫外线照射等多种消毒措施，仍然没有显著的效果。我们从文献和实践中发现，一般认为不适合在这种情况下使用的市售高氯消毒片当加大剂量和使用中和剂时，具有安全和彻底的去除这类霉斑的效果干细胞。
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细胞培养中使用血清的缺点
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
肿瘤细胞血清成分复杂，虽含许多对细胞有利成分，也含有对细胞有害的成分，使血清有几个明显的缺点：●对大多数细胞，在体内状态，血清不是它们接触的生理学液体，只是在损伤愈合以及血液凝固过程中才接触血清，因此使用血清有可能改变某种细胞在体内的正常状态，血清可能促进某些细胞的生长(成纤维细胞)同时抑制另一类细胞生长(表皮细胞)。●血清含一些对肿瘤细胞产生毒性的物质，如多胺氧化酶，能与来自高度繁殖细胞的多胺反应(如精胺、亚精胺)形成有细胞毒性作用的聚精胺。补体、抗体、细菌毒素等都会影响细胞生长，甚至造成细胞死亡。●动物个体不同，血清产地、批号不同，每批质量差异甚大，其成分不能保持一致。●取材中可能带入支原体、病毒，对细胞产生潜在影响，可能导致实验失败或实验结果不可靠性。●血清的使用使得实验和生产的标准化困难，其中的蛋白质使得某些转基因蛋白生物药品生产中分离纯化工作很难完成。●大规模生产中，血清来源越来越困难，价格昂贵，是构成动物肿瘤细胞培养对生产成本的主要部分之一。
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真菌的培养操作分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
ATCC菌种材料： 菌种、沙保氏培养基、平皿、载玻片、盖玻片。 方法： 1、ATCC菌种一般培养：分别将新型隐球菌、白色念珠菌、絮状表皮癣菌接种于沙保氏培养基，于22℃-28℃下培养（深部真菌可培养于37℃环境），一周后观察菌落特征。真菌菌落在形态上可分为三大类： 酵母型菌落：与细菌菌落相似，圆形、白色、边缘整齐、表面光滑湿润。 类酵母型菌落：同酵母型菌落，圆形、较大、白色，但菌落根部有假菌丝长入培养基内。 丝状菌落：是多细胞真菌的菌落形式。有许多疏松的菌丝体构成，菌落呈棉絮状、绒毛状或粉末状，菌落中央有皱折，外围有放射状沟。其正面和背景又可显示各种不同颜色。 2、小培养（玻片法）：在无菌平皿中先倾注10-15ml沙保葡萄糖琼脂，待凝固后，无菌操作将琼脂切成约0.5cm的方块，再将琼脂块移放在灭菌的载玻片上，然后在小块培养基四边接种已分纯的真菌菌种，盖上无菌盖玻片，移入有一定湿度的无菌平皿内，置22℃-28℃孵育。动态观察生长过程，ATCC菌种根据菌丝和孢子的特点鉴定真菌类别。
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Sci Rep：中国学者建立老年艾滋病动物模型
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
来自*昆明动物研究所，动物模型与人类疾病机理重点实验室的研究人员发表了题为“Accelerated disease progression and robust innate host response in aged SIVmac239-infected Chinese rhesus macaques is associated with enhanced immunosenescence”的文章，建立了老年AIDS动物模型，发现免疫衰老在老年艾滋病的发展过程中起到关键作用。这项研究显示SIV感染老年中国恒河猴是研究老年AIDS发病机制的良好动物模型，老年艾滋病的**手段应注重逆转免疫衰老和控制异常的免疫反应。 这一研究成果在线公布于Scientific Reports上，文章的通讯作者是昆明动物研究所郑永唐研究员，*作者为郑宏毅博士。郑永唐研究员主要研究方向包括建立5种SIV/SHIV AIDS灵长类动物模型，进行HIV/AIDS发病机制、药物及疫苗的评价研究等。 近几年来老年艾滋病患者正在逐年增加，老年人已成为HIV感染高危人群，老年艾滋病逐渐得到广泛关注。目前中老年HIV感染者的**效果不理想，其死亡风险和AIDS进展风险仍要高于年轻感染者，免疫重建效果也远不如年轻患者。考虑到人口老龄化的趋势，对老年艾滋病的研究迫在眉睫。其中的瓶颈在于难以在HIV整个感染过程中纵向研究老年艾滋病发病机制，解决问题的关键在于合适的动物模型，然而至今尚无老年AIDS动物模型的研究报道。 在这篇文章中，研究人员使用SIVmac239病毒感染老年中国猕猴的方法建立了老年AIDS动物模型，发现免疫衰老在老年艾滋病的发展过程中起到关键作用。感染后的老年猴血浆病毒载量快速上升，CD4/CD8比值严重倒置，CD4+T细胞迅速减少，表明其疾病进展更快和发展为AIDS的风险更高。 免疫衰老一些特征指标如低水平的CD4+初始T细胞比例和感染后高水平的稳态增殖水平预示了进一步的疾病进展。老年猴的宿主天然免疫反应更快更强，与其快速提高的稳态增殖水平和严重的CD4+初始T细胞耗竭相关，网络分析发现免疫衰老是中心因素。这种补偿效应虽能一定程度上缓解老年猴CD4+初始T细胞
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几种常用的染色方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
（一）亮发光杆菌单染色法 只应用一种染料进行染色的方法，如美蓝染色法。 美蓝染色法：在已干燥、固定好的抹片上，滴加适量的（足够覆盖抹片点即可）美蓝染色液，经1～2分钟，水洗，沥去多余的水分，吸干或烘干（不能太热），然后镜检。 （二）复染色法 应用两种或两种以上的染料或再加助染剂进行染色的方法。染色时，有些是将染料分别先后使用，有些则同时混合使用，染色后不同的细菌和物体或者细菌结构的不同部分，可以呈现不同颜色，有鉴别细菌的作用，又可称为鉴别染色，如革兰氏染色法，抗酸染色法，瑞特氏染色法和姬姆萨氏染色法等。 1．革兰氏染色法 （1）在已干燥，固定好的抹片上，滴加草酸铵结晶紫染色液，经1～2分钟，水洗。 （2）加革兰氏碘液于抹片上媒染，1～3分钟，水洗。 （3）加95％酒精于抹片上脱色，约30秒至1分钟，水洗。 （4）加10倍稀释石炭酸复红液复染1～2分钟，水洗。 （5）吸干或烘干，镜检。革兰氏阳性细菌呈蓝紫色，革兰氏阴性细菌呈红色。 2．抗酸染色法 （1）在已干燥，固定好的抹片上滴加较多量的石炭酸复红染色液，将玻片置酒精灯火焰上缓缓加热，至产生蒸汽即止（不要煮沸），维持微微产生蒸汽，经3～5分钟，水洗。 （2）用3％盐酸酒精脱色，直至标本无颜色脱出为止，充分水洗。 （3）用美蓝染色液复染约1分钟，水洗。 （4）吸干或烘干，镜检。抗酸性细菌呈红色，非抗酸性细菌呈蓝色。 3．瑞特氏染色法 抹片自然干燥后，滴加瑞氏染色液于其上，为了避免很快变干，染色液可稍多加些，或者看情况补充滴加，经1～3分钟，加约与染液等量的中性蒸馏水或磷酸盐缓冲液，轻轻晃动玻片，使与染液混匀，经3分钟左右，直接用水冲洗（不可先将染液倾去），吸干或烘干，镜检。细菌染成蓝色，组织、细胞等呈其他颜色。 4．姬姆萨氏染色法 （1）于5ml新煮过的中性蒸馏水中滴加5～10滴姬姆萨氏染色液原液，即稀释成为常用的姬姆萨氏染色液。 （2）抹片经甲醇固定并干燥后，在其上滴加足量的染色液或
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elisa标准操作要点分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
抗原elisa试剂盒的试剂，良好的仪器和正确的操作是保证ELISA 检测结果准确可靠的必要条件。ELISA 中用的蒸馏水或去离子水，包括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的本公司要求使用的纯化水电导率小于1.5μs/cm。1. 标本的采取和保存大部分ELISA 检测均以血清为标本。血清标本可按常规方法采集，应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP 为标记的ELISA 测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。一般说来，在5 天内测定的血清标本可放置于4℃，标本在冰箱中保存时间过长导致血清IgG 聚合，使间接法的试剂本底加深。超过一周测定的需－20℃保存。冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀并避免产生气泡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落，所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存。保存血清自采集时就应注意无菌操作，也可加入适当防腐剂。抗凝不完全的标本因纤维蛋白原的干扰而造成假阳性，建议尽量不用抗凝血尤其是肝素抗凝剂。2.加样加样时应将所加物加在ELISA 板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出。3.保温在建立ELISA 方法作反应动力学研究时，实验表明，两次抗原抗体反应一般在37℃经1-2 小时，产物的生成可达。为避免蒸发，板上应加盖，也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔，反应板不宜叠放，以保证各板的温度都能迅速平衡。应注意温育的温度和时间应按规定力求准确。由于公司的试剂盒温育是在空气浴中完成，采用水浴会造成值偏高或花板。另外温育中还有边缘效应，边上的值会偏高，建议为了客观的判断结果，将质控放在非边缘位置。4.抗原elisa试剂盒洗涤洗涤在ELISA 过程中虽不是一个反应步骤，但却决定着实验的成败。ELSIA 就是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与
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进口elisa酶联免疫试剂盒如何选择*化的包被条件?
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
1.进口elisa酶联免疫试剂盒包被抗原的选择 包被抗原可分为天然蛋白、重组蛋白和小分子抗原三大类。天然蛋白需经纯化才能用直接吸附法包被，对于含杂质较多的抗原可以采用间接捕获法包被(先用能够与目的抗原反应的物质如抗体直接吸附在酶标板上，再通过特异性反应使抗原固相化)。经纯化的重组蛋白一般皆可直接包板。小分子抗原比如多肽以及一些小分子有机化合物，由于分子量太小，往往难于直接吸附在酶标板上，一般都先使其与无关蛋白质如BSA等偶联，偶联物吸附于固相载体上。 2.包被液的选择 一般常用的是pH9.6的碳酸盐缓冲液，如果包被的抗原在碱性条件下不稳定的话，也可以使用pH7.2的磷酸盐缓冲液。 3.进口elisa酶联免疫试剂盒包被温度的选择 通常是4-8度条件下或者37度保温2小时，我们强烈建议4-8度条件下包被，有利于蛋白活性的保持。 4.包被浓度的选择 包被的zui适浓度随固相载体和包被物的性质变化，一般蛋白质的包被浓度为1-5ug/ml，要明确针对特定包被抗原的zui适包被浓度需要通过实验来确定。 包板后需要封闭吗?应该选择什么样的封闭体系? 封闭是否必要，取决于ELISA的模式及具体的实验条件。一般说来，双抗体夹心法，只要酶标记物是高活性的，操作时洗涤彻底，不经封闭也可得到满意的结果。而在间接法测定中，封闭一般是*的。 进口elisa酶联免疫试剂盒常用的封闭剂有0.05%-0.5%的BSA、10%的小牛血清、1%明胶、5%的脱脂奶粉，AbMART推荐使用5%脱脂奶粉，价廉而且封闭能力强，不过5%脱脂奶粉只适合短期内使用，不宜长期保存，所以试剂盒中较少使用。
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抗体特异性的选择
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
随着生命科学的发展，围绕蛋白进行的研究越来越多，抗体试剂在实验中的重要性越来越举足轻重。面临着纷呈复杂的抗体试剂市场，如何选择到适合自己实验的抗体就变得尤为重要。 抗体特异性的选择主要需要考虑四个方面：蛋白特异性、种属特异性、实验方法特异性、标记物的特异性。 1、蛋白特异性： 针对需要检测的蛋白查找抗体，几个细节要区分，重组表达的蛋白和内源性蛋白的检测，对抗体的要求是不一样的，注意查看抗体说明书的检测说明。如果重组蛋白不是全长表达，则需要注意抗体的免疫原区域是否在重组蛋白区域内。内源性蛋白能清楚其剪切与修饰的方式，特殊表型的蛋白需要进行序列比对，并结合抗体免疫原序列，查看交叉反应的情况。磷酸化蛋白检测需要确定具体位点，不同位点的磷酸化意味着可能有不同的机制存在，不宜一概而论。 2、种属特异性： 同种蛋白不同物种，有着或大或小的差异。目前大部分商品化抗体都是以人源蛋白序列为模板重组蛋白或设计多肽抗原的，根据蛋白的同源性情况与其他种属发生交叉反应。需要参照说明书注明的可反应种属信息。一些稀有种属很难找到抗体，可以通过蛋白的序列比对，选择同源序列免疫的抗体，不过一般这种情况生产商不会受理其关于质量的申诉，如果可以申请到免费的抗体样品，则利于抗体选择。 3、实验方法特异性： 目前使用抗体的实验方法有很多，不同的使用方法过程中，因为对蛋白样品的处理方式不一样，蛋白的含量有差异，对抗体的识别表位和效价要求都是不一样的。具体的根据说明书注明的产品应用方法进行选择。但是生产商一般不会将每个抗体都进行各种实验的检测，目前检测比较多的只是WB、IHC、IF等，如果针对具体的实验方法没有找到合适的抗体的，可以结合蛋白序列分析和抗体的抗原信息，选择尽可能有效果的抗体。同样，申请到免费的抗体样品是个很好的途径。 4、标记物的特异性 一般基于实验操作的实验方法不会使用带有标记的一抗，比如WB、IHC等，都是通过二抗类
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当培养细胞不贴壁时怎么办？
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
培养细胞不贴壁的可能原因及建议解决方法： 1.细胞系培养瓶瓶底不干净 建议解决方法：注意刷洗，或换用一次性塑料培养瓶 2.培养液pH值过碱(NaHCO3分解) 建议解决方法：使用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO2(将培养液敞口放入培养箱也可) 3.消化液或培养液配制错误、过期储存、储存不当 建议解决方法：重新配置消化液或培养液 4.细胞老化(如传代前细胞已汇合导致失去贴附性) 建议解决方法：启用新的保种细胞 5.接种细胞起始浓度太低或太高 建议解决方法：调节*接种细胞浓度 6.胰蛋白酶消化过度 建议解决方法：缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度。 7.支原体污染 细胞系建议解决方法：分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。 肠粘膜上皮细胞 包装： 5 × 105次方（1ml） 成骨细胞 包装： 5 × 105次方（1ml） 成骨细胞 包装： 5 × 105次方（1ml） 成骨细胞 包装： 5 × 105次方（1ml） 成骨细胞 包装： 5 × 105次方（1ml） 成人表皮角化细胞 包装： 5 × 105次方（1ml） 成人成纤维细胞 包装： 5 × 105次方（1ml） 大隐静脉平滑肌细胞 包装： 5 × 105次方（1ml） 大隐静脉平滑肌细胞 包装： 5 × 105次方（1ml） 大隐静脉平滑肌细胞 包装： 5 × 105次方（1ml） 大隐静脉平滑肌细胞 包装： 5 × 105次方（1ml） 单核细胞 包装： 5 × 105次方（1ml） 胆道癌组织源性原代细胞 包装： 5 × 105次方（1ml）/1ml 肺癌组织源性原代细胞 包装： 5 × 105次方（1ml）/1ml 肺成纤维细胞 包装： 5 × 105次方（1ml） 肺成纤维细胞 包装： 5 × 105次方（1ml） 肺成纤维细胞 包装： 5 × 105次方（1ml） 肺成纤维细胞 包装： 5 × 105次方（1ml） 细胞系
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