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基因学证实了吸烟确实会引发冠心病！
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
研究人员已经找到基因学解释，说明吸烟是如何导致冠心病（CHD）的。许多人具有降低与动脉阻塞脂肪斑块和 CHD 相关酶水平的保护性基因型。然而，在携带该基因的人中，吸烟会抵制其保护作用。 研究 Muredach P. Reilly，MBBCH，MSCE，Herbert 和 Florence 等人说：“我们的研究结果表明，抑制这种酶的干预措施对吸烟者特别有益，也可能对缓解冠心病风险升高有帮助。” 该研究是同类研究中zui大的，今天在“循环”杂志上发表。 已知吸烟引起约五分之一的冠心病，并且与*每年约 160 万人死亡有关。但吸烟导致 CHD 的确切机制尚不清楚。为了进一步了解遗传学如何影响吸烟与心脏病之间的相互作用，研究人员汇集了以前 29 次研究中 14 多万人的遗传数据。他们分析了以前与 CHD 风险增加相关的 45 个小区域的基因组。他们假设，对于其中一些区域，吸烟者的相关心脏病风险与非吸烟者不同。 分析表明，在染色体 15 上单个 DNA“字母”（在表达血管中酶 ADAMTS7 的基因附近）的变化使非吸烟者的心脏风险降低了 12%。然而，具有相同变异性的吸烟者的 CHD 降低风险只有这种遗传变异的保护作用的一半以上。 位于基因附近的 DNA 变异有时抑制基因的活性，引起其产生的蛋白质的正常水平。在这种情况下，研究人员发现，保护患者免于 CHD 的单字母 DNA 变异导致 ADAMTS7 的产生显著下降。 在zui近的一项小鼠研究中，Reilly 博士的实验室证实，ADAMTS7 的遗传缺失减少了动脉中脂肪斑块的积累，这表明阻断该酶的产生或功能可能是降低 CHD 风险的一种方法。 在目前的研究中，当研究人员对冠状动脉细胞应用香烟烟雾液体提取物时，ADAMTS7 的细胞产量增加了一倍以上，支持了吸烟可能通过增加 ADAMTS7 水平来抵消对 CHD 的遗传保护的结论。 “这是解决导致 CHD 的基因 - 环境相互作用的复杂难题的*个大步骤之一，”该研究作者说道。 在未来的研究中，研究人员希望确定 ADAMTS7 变体如何保护 CHD，吸烟如何影响产生酶的基因的活性，以及是否减少或
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上海沪鼎为您分享培养基的配制原则
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
培养基由于配制的原料不同，使用要求不同，而贮存保管方面也稍有不同。一般培养基在受热、吸潮后，易被细菌污染或分解变质，因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。对一些需严格灭菌的培养基（如组织培养基），较长时间的贮存，必须放在3-6℃的冰箱内。由于液体培养基不易长期保管，均改制成粉末。今天下面的文章中给大家介绍培养基的配制原则。1、选择适宜的营养物质微生物生长繁殖都需要培养基含有碳源、氮源、无机盐、生长因子、水及能源。不同的微生物对营养物质的需求是不一样的。例如自养型微生物能从简单的简单的元机物合成自身需要的糖类、脂类、蛋白质、核酸、维生素等复杂的的有机物，因此培养自养型微生物的培养基本完全可以由简单的无机物组成。2、营养物质浓度及配比合适。培养基中营养物质浓度合适时微生物才能生长良好，养物质过低时不能满足微生物正生长需求，浓度过高则可能微生物生长起抑制作用。3.控制PH条件 养基的PH必须控制在一定的范围内，以满足不同类型微生物的生长繁殖或产生代谢产物。一般来讲，细菌与放线菌适于在PH7-7.5范围内生长，酵母菌和霉菌通常在PH4.5-6范围内生长。为了维持培养基PH的相对恒定，通常在培养基中加入PH缓冲剂，常用的缓冲剂是一氢和二氢磷酸盐组成的混合物。4.控制氧化还原电位 同类型微生物生长对氧化还原电位的要求不一样，一般好氧性微生物在氧化还原电位值为+0.1V以上时可以正常生长，一般在+0.3-+0.4V宜。厌氧性微生物只能在氧化还原电位值为+0.1V以下生长。5、原理来源的选择在配置培养基时应尽量利用廉价且易获得的原料作为培养基的成分，特别是在发酵工业中，培养基用量很大，利用低成本的原料更体现出经济价值。6、灭菌处理 对培养基一般采取高压蒸汽灭菌，在压蒸汽灭菌过程中，长时间高温会使某些不耐温物质遭到破坏。在配置培养基的过程中，泡沫的存在对灭菌处理不利，因为泡沫中的空气形成隔热层，使泡沫中的微生物难以杀死。因而有时需要在
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实验室正式操作ELISA时需要注意这几点
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
1. 正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。2. 在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括： ① 固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。 ② 包被抗体(或抗原)的选择：将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18～24小时。蛋白质包被的zui适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg／ml等)进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值zui大而蛋白量zui少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg／ml。 ③ 酶标记抗体工作浓度的选择：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。 ④ 酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。 上海恒远为您提供上千种ELISA试剂盒，拥有专业的销售和技术服务团队，迎得了国内外厂商的一致好评，咨询。
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看完这些，让您对ELISA试剂盒更加了解
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
今天上海劲马有一个新的实验技术要分享给您：看完这些，让您对【ELISA试剂盒】更加了解。 在实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体--聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。 用于检测未知抗体的间接法： 用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时，洗涤。于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标禽ELISA试剂盒第二抗体0.1ml，37℃孵育30～60分钟，洗涤，zui后一遍用DDW洗涤。 现在朋友们对ELISA试剂盒是不是更加了解呢？购试剂盒就选上海劲马，质量有保障，价格低廉，咨询。
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ELISA试剂盒SCI文章实验技巧
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
1. ELISA试剂盒SCI文章操作前应对实验的物理参数有充分的了解，如环境温度(保持在18 C～25℃)、反应孵育温度和孵育时间、洗涤的次数等，要先查看水育箱温度，ELISA试剂盒是否符合要求。2. 正确使用加样器加样器应垂直加入标本或试剂，避免刮擦包被板底部。ELISA试剂盒加样过程中避免液体外溅，血清残留在反应孔壁上，加样器吸头要清洗干净，避免污染，加样次序要与ELISA试剂盒SCI文章说明书一致，否则可导致结果错误，实验重复性差。3. 手工洗板加洗液时冲击力不要太大，洗涤次数不要超过说明书推荐的洗涤次数，洗液在反应孑L内滞留的时间不宜太长。不要使洗液在孑L间窜流，造成孔问污染，导致假阴性或假阳性。4. 要保证加液量一致 我们在使用时感觉滴瓶加液不如加样器好，滴瓶不易控制加液量不准，造成显色不统一，判断错误。5. 显色液量不可过多 加样的工作环境不能处于阳光直射的环境下，加显色系统后要避光反应，显色液量不能过多，以免显色过强。ELISA试剂盒的影响因素应选用有国家批准文号，质量靠得住的产品，不能图便宜，忽视质量保证。试剂应妥善保存于4℃冰箱内，ELISA试剂盒SCI文章在使用时先平衡至室温，不同批号的试剂组分不宜交叉使用。试剂开启后要在一周内用完，剩余的试剂下次用时应先检查是否变质，显色剂如被污染变色将造成全部显色，导致错误结果。
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抗原elisa试剂盒清洗操作注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
抗原elisa试剂盒试验原理： 试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中的浓度呈比例关系。 自备材料： 1． 蒸馏水; 2． 加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul; 3． 振荡器及磁力搅拌器等。 抗原elisa试剂盒安全性： 1． 避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗; 2． 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品; 3． 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。 操作注意事项: 1． 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存； 2． 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质； 3． 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用； 4． 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器； 5． 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品； 6． 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水； 7． 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值； 8． 加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样； 9． 按照抗原elisa试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
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ELISA试剂盒的化学组成和结构
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
羊源性成分核酸检测PCR-荧光探针试剂盒大分子蛋白质，分子量大于10000者，可含有大量不同的抗原决定簇，是zui强的免疫原。如异种血清蛋白、酶蛋白及细菌毒等，是强免疫原蛋白质的例子。多糖是重要的天然抗原，纯化多糖或糖蛋白、脂蛋白以及糖脂蛋白等复合物中的糖分子部分都具有免疫原性。在自然界，许多微生物有富含多糖的荚膜或胞壁，细菌内毒素是脂多糖，以及一些血型抗原（A、B、C、H）也是多糖。核酸分子多无免疫原性，但如与蛋白质结合形成为核蛋白则有免疫原性。羊源性成分核酸检测PCR-荧光探针试剂盒在自身免疫病中，可见对天然核蛋白诱导的免疫应答产生的抗DNA或RNA抗体。此外，多肽类激素如胰岛素虽为小分子量（6000）亦具有免疫原性。来自一种动物的胰岛素，如长期用于另一种动物，亦能诱导免疫应答产生抗体。在蛋白质分子中，凡含有大量芳香族氨基酸，尤其是含有酷氨酸的蛋白质，其免疫原性强；而以非芳香族氨基酸为主的蛋白质，其免疫原性较弱。蛋白质和多糖抗原，凡结构复杂者免疫原性强，反之则较弱。其复杂性是由氨基酸和单糖的类型及数量等决定的。如聚合体蛋白质分子较单体可溶性蛋白质分子的免疫原性强羊源性成分核酸检测PCR-荧光探针试剂盒。
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微生物菌种使用常压蒸汽灭菌改为高压蒸汽灭菌注意以下几方面
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
1微生物菌种塑料袋的选择不同常压蒸汽灭菌一般选用聚乙烯薄膜，而高压蒸汽灭菌应选用聚丙烯薄膜，厚度为5～6丝，过薄，耐压和耐热能力低，会影响成品率。聚乙烯薄膜不耐高压，在1.2公斤/平方厘米高压下会融化，不能使用。2消毒压力和温度不能过高高压蒸汽消毒压力比较高，但由于培养基包装大多使用塑料薄膜，消毒压力不能超过1.4公斤/平方厘米，可以通过延长消毒时间至2小时左右来达到消毒效果。消毒压力和温度过高，薄膜会出现融化或膨胀，微生物菌种产生裂缝、小洞，接种后易感染杂菌。3消毒时间应随培养基质不同而不同一般而言，颗粒大的消毒时间长，麦粒、玉米作为基质时的消毒时应该长于木屑。4加压过程中应先放尽锅内冷气由于高压锅加热初始锅内存有冷空气，开始加热后，热蒸汽集聚在锅的上部，越聚越多，压力越来越高，冷空气却还集聚底部，这时压力表上显示的压力是虚假的，只有把底部的冷空气放掉，显示的才是真实的压力。方法是加热后，当压力表压力达到0.5公斤/平方厘米时，打开放气阀，放尽空气，再加热灭菌。如能放二次空气，效果会更好。5加热升温和放气减压要慢塑料袋的薄膜是软性的，高压锅加热和减压过程中塑料袋内外存有压力差，加热或减压过快，内外压力差异就大，容易引起塑料袋变形或胀袋、裂缝，接种后易感染杂菌。6其他另外，在菌种袋外套一牛皮纸袋（可以反复利用），可以减少因装袋、搬运、接种过程中硬物碰撞造成的塑料袋破损。由于各个厂生产的灭菌锅，其质量、结构、容量不同，塑料袋的均匀度、培养料的颗粒、质地不一样，加上工作人员操作技术不同，在大面积应用时应反复比较试验，微生物菌种选出一个*方案后再应用。
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不同细胞培养基的除菌方式及注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
细胞系培养基灭菌的方式分为高压灭菌和膜过滤除菌，不同的培养基由于其营养成份不同，灭菌方式也可能不同。绝大多数细胞培养基不适宜高压灭菌。因为高压灭菌易破坏细胞培养基中的一些成份，如某些维生素等，因此，在通常的高压灭菌型细胞培养基中，配方中的维生素种类与过滤型培养基相比较少，对于细胞系生长不可或缺的谷氨酰胺等，需待高压后补充到培养基中。在高压过程中，灭菌用器皿的选择应注意避免蒸发或是污染。在大规模工业化生产中，可以采用短时超高温处理的方法进行流水线式的灭菌，能够提高自动化生产效率，降低成本。膜过滤除菌是当前较为常用及便捷的一种方法，常采用0.2μm孔径的滤膜，部份采用0.1μm孔径，与高压过滤方式相比，虽然滤膜具有使用期限且价格较高，但对细胞系培养基的营养成份破坏性较小。
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细胞培养基常用几种重要的添加成份及使用过程中应注意的问题
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
酚红在ATCC细胞培养基中用作pH值的指示剂，一般情况下，可以通过酚红的指示作用判断培养基的pH值，中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色；但低血清或是无血清细胞培养基中酚红的含量与普通细胞培养基中的酚红含量不同，不能通过肉眼观察或通过经验来判定pH值，建议使用pH计进行测定。酚红通常对含血清的细胞培养基生产的生物制品质量并不会产生明显影响，也可通过纯化技术去除，但酚红在无血清细胞培养基中可能带来胞内钠/钾失衡，影响细胞生长，这种作用能被血清所中和或减轻。因此，酚红并不是细胞培养基中必需的一种成份，很多国外的疫苗或抗体生产企业在生产过程中都使用无酚红细胞培养基。碳酸氢钠在ATCC细胞培养基中主要是作为缓冲系统，此外还具有调节渗透压的作用。通常产品使用说明中的碳酸氢钠推荐量是一个标准、安全量，是在科学的基础上根据实践经验所得，但是由于不同的细胞系（株）不同，同一株细胞适应环境也可能不同（细胞耐受性不同等），且存在的地域性水质差异等，在实际生产过程中也可稍作改动，但使用者需做相应的检测（理化及细胞生产试验等）。HEPES是一种非离子缓冲液，在pH 7.2 ～7.4范围内具有较好的缓冲能力，其在高浓度时对一些细胞可能有毒。HEPES缓冲液可与低水平的碳酸钠（0.34 g /L）共用，以抵消因额外加入HEPES引起的渗透压增加。其安全浓度范围是10～25 mmol/L。丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是，如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，4℃下放置1周可分解50%，使用中单独配制，置-20℃冰箱中保存，使用前加入ATCC细胞培养液中。
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His标签蛋白纯化工具，你Z需要的
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
His标签蛋白纯化工具 在大肠杆菌和别的原核系统中表达的多组氨酸标签重组蛋白一般运用固定的金属离子亲和色谱来纯化或称为 IMAC. 在这个进程中，支撑物 (一般是珠状琼脂糖凝胶或磁珠颗粒) 用适宜的耦合试剂来进行衍生，比方氨三乙酸 nitrilotriacetic acid (NTA) 或亚氨乙酸 iminodiacetic acid (IDA). 这些螯合的基团会固定所需求的二价金属离子 (比方镍，铜，钴和锌)，然后这些金属离子zui后担任和别离混合液蛋白中的目标分子。在挑选运用哪个配基上，你需要考虑 IMAC 树脂的结合能力主要取决于被纯化蛋白的性质和在纯化进程中所运用的金属离子。 NTA，IDA，IMCA形式的His标签纯化填料或者预装柱产品，纯化His标签融合蛋白 His-Tag亲和层析填料 His-Tag可与多种金属离子发生特殊的相互作用，如Ca2+、Mg2+、Ni2+、Cu2+，Fe3+等，其原理是利用蛋白质表面的特性，使之被吸附在凝胶柱上，从而达到分离纯化蛋白的目的。 Ni2+在亲和纯化实验中的使用。根据结合基团的不同，Ni2+亲和层析柱可分为俩类——Ni-IDA和Ni-NTA。Ni2+有六个螯合价位，其中Ni-IDA螯合了三价，Ni-NTA螯合了四价。所以IDA的载量要比NTA的高，在同样条件下Ni-IDA洗脱时的咪唑浓度也高于Ni-NTA。但其弱的结合力使金属离子在洗脱阶段时很容易浸出，与目的蛋白紧密结合，从而导致分离蛋白产量偏低，产品不纯及金属离子污染等问题。而NTA的颗粒粒度均匀，粒径更小，并且螯合镍更稳定，能耐受较高的还原剂，使填料更加稳定，镍离子不易脱落。 His-tag作为蛋白纯化时的标签，其优势在于： 1. N-端的His-Tag与细菌的转录翻译机制兼容，有利于蛋白表达； 2. 采用IMAC（固定化金属离子亲合层析）纯化His-Tag融合蛋白操作更加简便； 3. His-Tag对目的蛋白本身特性几乎没有影响，不会改变目的蛋白本身的可溶性和生物学功能； 4. His-Tag非常小，在融合蛋白结晶后对蛋白的结构没有影响；His-Tag的免疫原性相对较低，可将纯化的蛋白直接注射入动物体内进
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大鼠白介素6elisa试剂盒中到底有哪些试剂
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
ELISA快速检测技术越来越多的用于疾病诊断、食品安全检测中，那么elisa试剂盒的主要组成成份是什么呢？根据ELISA试剂盒的应用范围，可将ELISA试剂盒分为拿几种呢？ 完整的elisa试剂盒主要的组成成份如下： (1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂); (2)C的抗原或抗体(结合物); (3)酶的底物; (4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中)，参考标准品和控制血清(定量测定中); (5)结合物及标本的稀释液; (6)洗涤液，在板式ELISA中，常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水; (7)酶反应终止液，常用的HRP反应终止液为硫酸，其浓度按加量及比色液的zui终体积而异
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两种新型 CRISPR 脱靶效应的分析方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
昨日，在 Nature Methods 同时刊登的两篇研究中，发表了两种分析 CRISPR/Cas- 9 基因组编辑脱靶效应的新方法。其中一种方法可以鉴定细胞类型特异性 SNP 相关的脱靶突变，另一种则可以检测潜在脱靶切割位点。 *项研究中，来自麻省综合医院（MGH）和哈弗大学的研究人员开发了一种通过测序体外检测切割效应的方法，称作 CIRCLE-seq，该方法是一种高度灵敏的体外筛查法，比现有识别 CRISPR/Cas9 全基因组脱靶突变的细胞学或生化方法更有效。 “与之前的体外方法不同，我们所展示的 CIRCLE-seq 可以使用下一代测序技术，并且不需要参考基因组序列。”作者在文章提到，“更重要的是，CIRCLE-seq 可以用来识别与细胞类型特异性 SNP 相关的脱靶突变，进而证明个性化的特异性分析的可行性和重要性。CIRCLE-seq 提供了一种快速、全面可行的识别全基因组范围 CRISPR/Cas9 脱靶突变的方法。” 研究人员检测了新方法的灵敏性，将靶向 HBB 基因的 sgRNA 的脱靶结果与利用另一种方法 Digenome-seq 识别的脱靶结果进行比较。他们发现 CIRCLE-seq 鉴定出了 Digenome-seq 已检测到的 29 个位点中的 26 个，并且还检测到 156 个其他方法无法检测的新位点。 研究人员表示，“这些结果表明，与 Digenome-seq 检测到的结果相比，CIRCLE-seq 具有更高的信噪比，而且使用的测序 reads 减少了一百倍，这可能是由于该技术在识别全基因组范围脱靶位点方面具有更高的灵敏度。” 第二项研究中，来自驯鹿生物科学实验室和美国杜邦公司的研究人员描述了一种生化方法，称作 SITE-Seq，该技术使用了 sgRNA 编程的 Cas9 对基因组 DNA 中的剪切位点序列进行识别。 “我们使用 SITE-Seq 检测靶向人类基因组的 sgRNA 与 Cas9 的特异性。识别的位点数量依赖于 sgRNA 序列和核苷酸浓度。低浓度条件下鉴定到的位点更有可能是细胞中的脱靶突变。”研究小组说，“细胞中具有活性的脱靶位点会受到 sgRNP 传递、细胞类型和在核苷酸环境接触的持续时间影响。总而
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上海恒远教你如何测定干扰素含量
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
干扰素能刺激某些指示细胞(如人羊膜上皮细胞Wish株、人喉癌细胞株Hep-2、人胚肌皮、肺单层细胞等)产生抗病毒蛋白，从而使细胞免受水疱性口炎病毒(VSV)的攻击，根据待测样品不同稀释度的保护能力，计算出干扰素生物学活性单位。【材料】 VSV、Wish细胞、MTT、二甲亚砜(DMSO)、10％FCS RPMI1640、培养板、培养瓶、CO2孵箱、超净台、酶标检测仪。【结果】以保护半数(50％)细胞免受病毒损害的zui高干扰素稀释度为1个干扰素活性单位。也可从标准曲线中求得待测样品的IFN活性单位。【注意事项】1、实验时先加IFN，后加指示细胞，以使细胞均匀分布于培养板底部。2、本法对天然培养上清或重组IFN-α、IFN-β和IFN-γ均可检测其活性单位。
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树鼩中APP基因特征描述及可变剪接体的分型鉴定
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
目的： 区分并鉴定树鼩中APP基因mRNA的多种可变剪接体，对APP基因特征进行描述，并确定其在各组织中的表达分布。方法： 参考已知人的和树鼩基因组预测的APP基因序列，设计树鼩APP基因mRNA剪切体外显子的共同特异性引物。分别从树鼩不同组织中提取总RNA，反转录为cDNA，利用高保真酶扩增目的剪切体DNA。根据PCR扩增产物电泳条带的有无和大小初步判断剪接体的型别，zui后将PCR产物胶回收进行测序鉴定，对获得的基因进行特征描述，并结合定量PCR的结果确定了各剪接体在不同组织中分布情况。结果： 结果表明树鼩APP剪接体的全长为3514 bp，有一个109 bp的5'-UTR，1092bp的3'-UTP。APP基因在调查的9个物种中高度同源保守，显示树鼩与灵长类存在一个较近的亲缘关系。通过三维建模获得了树鼩和人的APP基因共同拥有的4个结构域。同时确认这4种通过外显子跳跃产生的APP可变剪接体在不同组织中的分布和表达。4种检测到的剪接体APP770，APP695，APP751，APP677均表达于肺、肾和肠，表达量zui高的是肺、肌肉和睾丸。结论： 对树鼩APP基因可变剪接体的表达研究，有助于推动树鼩作为阿尔茨海默病模型深入研究疾病的发生机制和药物研发。
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