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南京农大粟硕教授等大数据分析冠状病毒进化与重组
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
2016年3月21日，学术刊物《Cell》旗下子刊《Trends in Microbiology》在线发表了题为“Epidemiology, Genetic Recombination, and Pathogenesis of Coronaviruses”的论文。该文章*作者和通讯作者为南京农业大学动物医学院长江学者周继勇团队的粟硕教授，共同通讯作者为*青年传染病专家毕玉海副研究员和*高福院士。冠状病毒(CoV)感染主要引起呼吸系统(鸡传染性支气管炎病毒、犬冠状病毒)和消化系统疾病(猪传染性胃肠炎病毒、牛腹泻病毒、犬冠状病毒、猫冠状病毒等)。人的冠状病毒感染同样以呼吸系统疾病和消化道疾病为主要特征，但疾病发生程度有很大差异。到目前为止，主要感染人的冠状病毒有6种：229E、OC43、NL63、 HKU1、非典型肺炎病毒SARS-CoV和中东呼吸热综合征病毒(MERS-CoV)。其中SRAS-CoV在2003年引起了8273人感染，包括775人死于该疾病。MERS-CoV是2014年又一次爆发，截止到2015年12月31日，该病毒引起1621人感染，584人死亡，成为对人威胁和危害性极大的疾病之一。尽管MERS病毒目前仍然是有限的人传人的能力，但是仍需要监控其重组和进化，以防止其一旦适应人类后造成的潜在的大流行。针对目前MERS等冠状病毒复杂的流行情况和快速的重组等特点，这篇文章利用先进的生物信息学分析方法从流行病学调查、发病机理、进化和重组情况等方面对不同的冠状病毒进行了比较分析，并且用大数据网络监测和分析病毒序列预测了存在潜在威胁的动物源性重组冠状病毒，文章zui后针对MERS,SARS等冠状病毒的频繁重组提出了具体防控建议。该论文也是南京农业大学青年传染病专家粟硕教授继柳叶刀杂志回溯流行病学分析MERS病例输入中国之后，再一次在高水平期刊发表关于MERS等新发传染病流行病学的论文。
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关于选择WB中GAPDH抗体,你所不知道的事儿
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
在WesternBloting实验中，也许存在总蛋白浓度测定不，或许蛋白质样品在电泳前上样时产生的样品间的操作差错；这些差错可以经过测定每个样品中实际转到膜上的内参，比方内参GAPDH的含量来进行校对。当然除了GAPDH抗体，β-Actin抗体、β-Tubulin抗体等也是zui常见的内参抗体。GAPDH（甘油醛-3-磷酸脱氢酶）是参加糖酵解的一种关键酶，由4个30-40kDa的亚基构成，分子量146kDa，检查条带大约在36kDa。GAPDH基因简直在所有组织中都高水平表达，广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参。 选择合适的GAPDH抗体显得尤为重要，首先GAPDH的WB检测条带大约为36kDa，因此对于一些待检测分子量大于40kDa或者小于30kDa的目的蛋白尤为合适。一般来说，国产的抗体在质量稳定性、效价等方面存在不足，但是进口品牌如Abcam、Millipore、CST等价格偏高，一般在￥3000/100ul左右。下面我们为您推荐三款GAPDH*抗体。Abbkine的Anti-GAPDH Monoclonal Antibody（货号A01020）是小鼠源的单抗，其效价很高，厂商推荐的WB起始稀释比率为1:1000，实际应用过程中，有使用1:10000或更高的报告，远远高于此稀释比率，说明其免疫效价很高，另外，其检测种属也很多，包括人、牛、猪、小鼠、大鼠等。上图为Abbkine的Anti-GAPDH MonoclonalAntibody（货号A01020）在不同细胞系内WB的检测结果。 产品名称及描述 货号 规格 产品说明 Anti-GAPDH Mouse Monoclonal Antibody (2B5) A01020 50ul/1ml 详情 GAPDH Polyclonal Antibody ABP50152 30ul/200ul 详情 HRP Conjugated Anti-GAPDH Mouse Monoclonal Antibody （ 2B5） A01025 50ul/1ml 详情 Abbkine的HRP, Anti-GAPDH Mouse Monoclonal Antibody (2B5) （货号A01025）则是一款HRP直标的小鼠源单克隆GAPDH抗体，由于是HRP直接标记，因此不会受到二抗的干扰，在一些IP应用中非常合适，可有效排除IP-WB时的重链干扰。下图为Abbkine的GAPDH Monoclonal Antibody（货号A01020）抗体在石
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新生催化剂制备生物柴油
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
中科院在生物柴油制备工艺上取得新进展，在大量实验的基础上，提出采用廉价商业离子液体作为溶剂和催化剂，直接用于催化粗榨高酸值的小桐子油（酸值13.8 mg KOH/g），一步法制备生物柴油取代常规耗时的两步法。 酸性离子液体既可以用于催化游离脂肪酸与短链醇的酯化反应生产脂肪酸甲酯，又可以用于催化油脂的酯交换反应，在酸性离子液体提供的Br?nsted酸与氯化盐提供的Lewis酸协同催化作用下，将生物柴油得率提高至99.7%。在酯化反应或酯交换反应结束后回收甲醇，通过静置或离心的方式实现离子液体的分离回收，离子液体在干燥后可继续用作酯化反应或酯交换的催化剂，使催化剂得到循环使用。 相比较传统的化学法采用的液体酸碱法生产过程复杂、腐蚀设备，并存在催化剂难回收、副产甘油精制困难、后续处理产生大量废水等问题。酸性离子液体不仅具有优良的溶剂特性以及蒸汽压低、不燃烧、热稳定好（-40～300 oC）等特点，而且具有Lewis、Franklin酸的酸性，而含有SO4H的酸性离子液体，则同时具备了溶剂和Br?nsted酸特性，对环境无污染，在催化、有机合成、分离和电化学等领域有广泛的应用。 该研究结果为“利用低质的动植物油，快速和绿色生产生物柴油”提供了一种新的方法。
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抗体指南不迷路之抗体保存
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
抗体，作为科研者们经常会使用到的试剂，那么它的保存也一定非常重要。抗体的活性和使用效果和抗体是否保存得当有很大的关系，如果抗体保存得当，大部分的抗体活性都可以维持数月甚至数年。 1、 收到抗体后请务必在 12000rpm 离心 1-5分钟后再打开管盖进行分装和保存！Abcam 的抗体使用非常特殊的储存管，只有在12000rpm离心1-5分钟才能将附着在管壁或盖内的抗体全部离心下来。即使是在10000rpm离心也会导致离心不完全，导致出现抗体的量不足的现象！ 2、 对于 abcam大部分抗体，比较合适的保存方式是分装后保存在 -20度 or -80度 。 ? 对绝大多数抗体来说，保存在-20度是完全足够了。没有任何证据显示保存在-80度会有更多的好处！ ? 分装可以zui大程度的降低反复冻融对抗体活性的损害，同时也降低了由于多次从同一管中吸取抗体造成的污染可能性。 ? 分装的量以一次实验用完为好，zui少不能少于 10ul每份。因为分装体积越小，抗体的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响 ? 复融后的分装抗体如果一次用不完，将剩余母液保存在 4度，避免再冻起来！ ? 抗体工作液应该当天配制当天用完，在 4度尽量不要超过1 天。 ? 避免将抗体保存在自动除霜冰箱中。尽量将抗体保存在冰箱里层，而不是门上。 3、 大部分抗体收到后 4度 短暂保存 1-2周对抗体活性是没有影响的。如果抗体很快（1-2 周）会使用，推荐在 4度保存，这是为了避免反复冻融对抗体活性的损害。如果要长期保存则是在-20度 or -80度。zui关键的一点是要根据说明书推荐的方式来正确的保存抗体！但是，腹水形式的产品请在收到后立即冻起来！因为该类产品含有大量的蛋白酶，长期在4度保存会导致抗体的降解！ 4、 大部分抗体的运输条件：一般的运输过程需要 1-2周的时间，所以是在 4度的条件下来完成的。 4度 运输zui主要的目的是为了避免反复冻融对抗体活性的损害（如果使用干冰运输，那么收到时抗体是冻起来的，为了分装就需要解冻。这就多了一次冻融的过程）。所
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这些ELISA实验通用规则，您得知道！
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
我公司elisa试剂盒拥有快速、简便、准确、灵敏度高等几大特点。elisa实验条件主要由实验室的操作环境和操作人员的操作熟练程度两方面组成，但试剂盒对实验室操作环境的要求是几种药物残留检测方法中相对较低的。 由于大部分的试验操作步骤都是由实验人员来完成的，人为的误差相对严重一些。ELISA的实验操作所要求的条件是比较严格的，无论是对实验的硬件条件还是对实验的操作人员的技术要求，都是如此。下面所提到的就是一些在进行ELISA实验时所要注意的一些通用规则。 一、ELISA实验通用规则 1、要保证移液枪的准确性，误差不能超过2%。可用水和电子天平进行确定。但有专业人员进行矫正。 2、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。吸取不同的液体后，要更换枪头。即使是吸取标准品时。 3、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出，使各种试剂都恢复到室温，以使结果更稳定。 4、实验时，要使底物避光保存。 5、用枪吸取液体时速度不能太快，以免产生气泡而使吸取量不准确。 6、吸取液体时，要用量程和需要量接近的枪去吸，减少误差。 7、将液体加到酶标孔中时，避免枪头和孔内液体接触，可使枪头上的液滴和孔壁接触，液滴会自然流下去。 8、液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。 9、温浴时，要用不干胶或胶带纸封好酶标板，防止水分的蒸发。 10、洗板时，每次洗液加入后，应静置1分钟，使清洗更加彻底。没有洗板机时，倒去液体后，要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。 11、洗液不够时，可用蒸馏水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸缓冲液，加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。 12、底物是光敏感的，要在临用前现配。 13、检测前，要打开酶标仪，使之稳定10分钟以上。 14、底物有一定的毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，应尽量避免接触。 15、待检样品要澄清，否则会影响结果。 16、温浴时间应遵守试剂盒规定。 17、应尽量做双孔
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elisa试剂盒白介素类保温方法分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
在elisa试剂盒白介素类中一般有两次抗原抗体反应，即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间，这一保温过程称为温育，有人称之为孵育，在ELISA试剂盒中似不恰当。ELISA属固相免疫测定，抗原、抗体的结合只在固相表面上发生。以抗体包被的夹心法为例，加入板孔中的标本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗结合的机会，只有zui贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触。这是一个逐步平衡的过程，因此需经扩散才能达到反应的终点。在其后加入的酶标记抗体与固相抗原的结合也同样如此。这就是为什么ELISA反应总是需要一定时间的温育。温育常采用的温度有43℃、37℃、室温和4℃等。37℃是实验室中常用的保温温度，也是大多数抗原抗体结合的合适温度。在建立ELISA方法作反应动力学研究时，实验表明，两次抗原抗体反应一般在37℃经1～2小时，产物的生成可达。为加速反应，可提高反应的温度，有些试验在43℃进行，但不宜采用更高的温度。抗原抗体反应4℃更为彻底，在放射免疫测定中多使反应在冰箱中，以形成zui多的沉淀。但因所需时间太长，在elisa试剂盒白介素类中一般不予采用。保温的方式除有的ELISA仪器附有特制的电热块外，一般均采用水浴，可将ELISA试剂盒板置于水浴箱中，ELISA板底应贴着水面，使温度迅速平衡。为避免蒸发，板上应加盖，也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔，此时可让反应板漂浮在水面上。若用保温箱，ELISA试剂盒应放在湿盒内，湿盒要选用传热性良好的材料如金属等，在盒底垫湿的纱布，zui后将ELISA板放在湿纱布上。湿盒应先放在保温箱中预温至规定的温度，特别是在气温较低的时候更应如此。无论是水浴还是湿盒温育，反应板均不宜叠放，以保证各板的温度都能迅速平衡。室温温育的反应，操作时的室温应严格限制在规定的范围内，标准室温温度是指20～25℃，但具体操作时可根据说明书的要求控制温育。室温温育时，elisa试剂盒白介素类只要平置于操作台上即可。应注意温育的温度和时间应
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细胞色素C释放和Caspases激活的生物化学途经
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
细胞核是细胞生命活动控制中心，它不仅是细胞呼吸链和氧化磷酸化的中心，而且是细胞凋亡调控中心。实验表明了细胞色素C从线粒体释放是细胞凋亡的关键步骤。释放到细胞浆的细胞色素C在dATP存在的条件下能与凋亡相关因子1（Apaf-1）结合，使其形成多聚体，并促使caspase-9与其结合形成凋亡小体，caspase-9被激活，被激活的caspase-9能激活其它的caspase如caspase-3等，从而诱导细胞凋亡。此外，线粒体还释放凋亡诱导因子，如AIF，参与激活caspase。可见，细胞凋亡小体的相关组份存在于正常细胞的不同部位。促凋亡因子能诱导细胞色素C释放和凋亡小体的形成。很显然，细胞色素C从线粒体释放的调节是细胞凋亡分子机理研究的关键问题。多数凋亡刺激因子通过线粒体激活细胞凋亡途经。有人认为受体介导的凋亡途经也有细胞色素C从线粒体的释放。如对Fas应答的细胞中，一类细胞（type1）中含有足够的胱解酶8 （caspase8）可被死亡受体活化从而导致细胞凋亡。在这类细胞中高表达Bcl-2并不能抑制Fas诱导的细胞凋亡。在另一类细胞（type2）如肝细胞中，Fas受体介导的胱解酶8活化不能达到很高的水平。因此这类细胞中的凋亡信号需要借助凋亡的线粒体途经来放大，而Bid -- 一种仅含有BH3结构域的Bcl-2家族蛋白是将凋亡信号从胱解酶8向线粒体传递的信使。
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核酸分离与纯化过程中材料与方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
(一)费氏弧菌发光杆菌材料与方法的选择临床常见的标本有血液、尿液、唾液、组织及培养细胞等;核酸分离与纯化的方法非常多，如何恰当地收集与准备材料，选择适宜的分离与纯化方法是一个首要的问题。首先我们应当明确核酸的分离与纯化并不是zui终的目的，不同的实验研究与应用对核酸的产量、完整性、纯度和浓度可能有不同的要求;至于分离与纯化核酸所需的时间与成本也往往需要考虑;在不影响核酸质量的情况下，应选择安全无毒的试剂与方案。(二)选择的原则核酸分离与纯化的方法很多，应根据具体生物材料的性质与起始量、待分离核酸的性质与用途而采取不同的方案。无论采取何种方法，都应遵循总的原则：一是保证核酸一级结构的完整性，因为完整的一级结构是核酸结构和功能研究的zui基本的要求;二是尽量排除其它分子的污染，保证核酸样品的纯度，这是本章讨论的主要内容。(三)核酸完整性的保持为了保证核酸的完整性，在操作过程中，首先应尽量避免各种有害因素对核酸的破坏。影响核酸完整性的因素很多，包括物理、化学与生物学的因素，其中有些是可以避免的。如过酸或过碱，对核酸链中的磷酸二酯键有破坏作用，费氏弧菌发光杆菌在核酸的提取过程中，采用适宜的缓冲液，始终控制pH在4～10之间，就可以很好地避免其危害;另外如高温加热，除高温本身对核酸分子中的化学键的破坏作用外，还可能因煮沸带来液体剪切力，因此核酸提取常常在0～4℃的条件下进行。其次对无法避免的有害因素，应采取多种措施，尽量减轻各种有害因素对核酸的破坏。应尽量简化分离纯化的步骤，缩短提取的时间，减轻各种有害因素对核酸完整性的破坏; DNA酶(DNase或DNAase)的激活需要Mg2+、Ca2+等二价金属离子，费氏弧菌发光杆菌若使用EDTA、柠檬酸盐并在低温条件下操作，基本上就可以抑制DNA酶的活性。RNA酶(RNase或RNAase)的广泛存在与不易失活的特点，决定了生物降解是RNA提取过程中的主要危害因素。
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燃情奥秘——爱的激动剂
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
春天了，应时节而生，今天的主题是——激动剂！噢，不，是爱情。你造吗？所谓执子之手摘星揽月，所谓海誓山盟共此一生，多是由一些叫“爱情物质”的东西助力产生。 有趣的研究报道指出： ① 只要让脑中产生足够多的Phenylethylamine（PEA，苯基乙胺），那么就会有“来电”的感觉，PEA能让人感到一种极度兴奋的感觉，使人觉得更加有精力、信心和勇气。由于PEA的作用，人的呼吸加速，心跳加速，手心出汗，颜面发红……（咳咳，就不多说了）。 ② 当你头脑中充满Hydroxytyramine（Dopamine，多巴胺）的时候，能产生一种“欢愉”的感觉，它会使得你意乱情迷。多巴胺是神经传导物质，负责将神经系统发出的命令传达出去。一般认为拥抱时所感受到的那种安全感和满足感与这种激素密不可分。 ③ norepinephrine（去甲肾上腺素）是由多巴胺合成，有强大的血管收缩作用和神经传导作用，会引起血压、心率和血糖含量的增高。所谓“心跳”的感觉大概就是它在搞怪吧。 爱情物质还有很多，如oxytocin（催产素）、vasopressin（加压素）、serotonin（血清素）、pheromones（信息素）、cortisol（皮质醇）、nerve growth factor（神经生长因子），和testosterone（睾酮，睾丸素）等，都或多或少的参与择偶和恋爱的过程。 这些“爱情物质”简直就是爱的“激动剂”！ 一旦“爱情物质”消失，人也就从这样的迷醉状态中恢复过来，或者就像我们常说的那样，失去了爱的感觉。 然而，不要害怕，爱情之所以为长久的爱情，那是因为在长久的相恋和婚姻过程中，体内还产生了一种叫做Endorphin（内啡呔）的物质，它可以降低焦虑感，让人体会到一种安逸的、温暖的、亲密且平静的感觉，用以填补激情。科学家指出，运动能让大脑释放情绪元素内啡呔，它能使人感到快乐和充满活力，你运动越多，这感觉越强烈；内啡呔所带来的感觉和PEA之类的物质是完全不同的，后者使我们like being in love，而前者让我们like loving。虽然这并不能让人激动和兴奋，但这种温馨的
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抗原elisa试剂盒洗涤液的配制与使用
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
抗原elisa试剂盒洗涤液的配制洗涤液分浓溶液与稀溶液两种，配方如下：自来水 150 ml浓硫酸（工业用） 800 ml自来水 850 ml浓硫酸（工业用） 100 ml配法都是将先溶解于自来水中，可慢慢加温，使溶解，冷却后徐徐加入浓硫酸，边加边搅动。配好后的洗涤液应是棕红色或桔红色。抗原elisa试剂盒贮存于有盖容器内。使用注意事项1.洗涤液中的硫酸具有强腐蚀作用，玻璃器皿浸泡时间太长，会使玻璃变质，因此切忌到时忘记将器皿取出冲洗。其次，洗涤液若沾污衣服和皮肤应立即用水洗，再用苏打水或氨液洗。如果溅在桌椅上，应立即用水洗去或湿布抹去；2.玻璃器皿投入前，应尽量干燥，避免洗涤液稀释；3.此液的使用于玻璃和瓷质器皿，不适用于金属和塑料器皿；4.有大量有机质的器皿应先行擦洗，然后再用洗涤液，这是因为有机质过多，会加快洗涤液失效，此外，洗涤液虽为很强的去污剂，但也不是所有的污迹都可清除；5.盛洗涤液的容器应始终加盖，以防氧化变质；6.抗原elisa试剂盒洗涤液可反复使用，但当其变为墨绿色时即已失效，不能再用。
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微生物空玻璃器皿的包装
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
1. 羊源性成分核酸检测PCR-荧光探针试剂盒培养皿的包装培养皿常用旧报纸密密包紧，一般以5-8套培养皿作一包，少于5套工作量太大，多于8套不易操作。包好后行于热灭菌。如将培养皿放入铜筒内进行干热灭菌，则不必用纸包，铜筒有一圆筒形的带盖外筒，里面放一装培养皿的带底框架，此框架可自圆筒内提出，以便装取培养皿。 2. 吸管的包装准备好干燥的吸管，在距其粗头顶端约0．5cm处，塞一小段约1．5cm长的棉花，以免使用时将杂菌吹入其中，或不慎将微生物吸出管外。棉花要塞得松紧恰当，过紧，吹吸液体太费力；过松，吹气时棉花会下滑。然后分别将每支吸管斜放在旧报纸条的近左端，与报纸约呈45度角，并将左端多余的一段纸覆折在吸管上，再将整根吸管卷入报纸，右端多余的报纸打一小结。如此包好的很多吸管可再用一张大报纸包好，羊源性成分核酸检测PCR-荧光探针试剂盒进行干热灭菌。 如果有装吸管的铜筒，亦可将分别包好的吸管一起装入铜筒，进行干热灭菌；若预计一筒灭菌的吸管可一次用完，亦可不用报纸包而直接装入铜筒灭菌，但要求将吸管的插入筒底，粗端在筒口，使用时，铜筒卧放在桌上，用手持粗端拔出。 3. 试管和三角烧瓶等的包装试管管口和三角烧瓶瓶口塞以棉花塞（做棉塞的方法见实验十九），然后在棉花塞与管口和瓶口的外面用两层报纸（不可用油纸）与细线包扎好，进行干热灭菌。试管塞好棉花塞后也可一起装在铁丝篓中，用大张报纸将一篓试管口做一次包扎，包纸的目的在于保存期避免灰尘侵入。 空的玻璃器皿一般用干热灭菌，若需湿热灭菌，则要多用几层报纸包扎，外面再加一层牛皮纸。如果试管是盖的铝帽，则不必包纸，可直接干热灭菌。用塑料帽，则宜湿热灭菌羊源性成分核酸检测PCR-荧光探针试剂盒。
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标准品的溶解和稀释分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
1. elisa酶联免疫试剂盒说明书粉末标准品短暂离心，让因运输沾到管盖、管壁的标准品沉到管底。2. 根据瓶标签加入一定体积的蒸馏水，加水后轻柔涡旋震荡，室温静置溶解 10-30min，让粉末完全溶解。注意：加水后暂不用移液枪吹吸，避免蛋白未溶解，枪头带出部分蛋白，待完全溶解后可吹吸或涡旋振荡混匀。3. elisa酶联免疫试剂盒说明书标准品梯度稀释:（1）标准品稀释液的选择：若血清、血浆、组织匀浆样本，用试剂盒中的标准品稀释液，梯度稀释标准品。若细胞上清样本，建议用细胞培养基梯度稀释标准品。（2）耗材准备：准备8个1.5Ml离心管，写上S1-S7、空白。（3）梯度稀释：根据说明书，每管加入等体积的标准品稀释液（培养基）。吸取同体积溶解好的标准品到S1管中，吹打10次混匀，涡旋5S。从S1管中吸取同体积溶液到 S2管，吹打10次混匀，涡旋5s。同法稀释S3-S7浓度。（4）空白: 标准品稀释液（培养基）作为空白即零浓度。注意：梯度稀释标准品时，涡旋震荡混匀后可短暂离心，让到盖子、壁上的液体到管底，再开始稀释下个浓度。elisa酶联免疫试剂盒说明书标准品溶解、梯度稀释是ELISA实验关键点，按以上方法梯度稀释就可！
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菌种培养采取哪些措施防止衰退
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
菌种培养选育菌种时所处理的细胞应使用单核的，避免使用多核细胞；合理选择诱变剂的种类和剂量或增加突变位点，以减少分离回复；在诱变处理后进行充分的后培养及分离纯化，以保证保藏菌种纯萃。这些可有效的防止菌种的退化。选用合适的培养基有人发现用老苜蓿根汁培养基培养"5406"抗生菌--细黄链霉菌可以防止它的退化。在赤霉菌产生菌--藤仓赤霉的培养基中，加入糖蜜、天门冬素、谷氨酰胺、5-核苷酸或甘露醇等物质时，也有防止菌种退化的效果。也有选取营养相对贫乏的培养基做菌种保藏培养基，如培养基中适当限制容易利用的糖源葡萄糖等的添加，因为变异多半是通过菌株的生长繁殖而产生的，当培养基营养丰富时，菌株会处于旺盛的生长状态，代谢水平较高，为变异提供了良好的条件，大大提高了菌种培养的退化几率。创造良好的培养条件在生产实践中，创造和发现一个适合原种生长的条件可以防止菌种退化，如低温、干燥、缺氧等。在栖土曲霉3.942的培养中，有人曾用改变培养温度的措施(从20-30℃提高到33-34℃)来防止它产孢子能力的退化。控制传代次数由于微生物存在着自发突变，而突变都是在繁殖过程中发生而表现出来的。所以应尽量避免不必要的移种和传代，把必要的传代降低到zui低水平，以降低自发突发的机率。菌种传代次数越多，产生突变的几率就越高，因而菌种发生退化的机会就越多。这要求不论在实验室还是在生产实践上，必须严格控制菌种的移种传代次数，并根据菌种保藏方法的不同，确立恰当的移种传代的时间间隔。如同时采用斜面保藏和其它的保藏方式(真空冻干保藏、砂土管、液氮保藏等)，以延长菌种保藏时间。菌种培养在有些微生物中，如放线菌和霉菌，由于其菌的细胞常含有几个核或甚至是异核体，因此用菌丝接种就会出现不纯和衰退，而孢子一般是单核的，用它接种时，就没有这种现象发生。有人在实践中发现构巢曲霉如用分生孢子传代就容易退化，而改用子囊孢子移种传代则不易退化;还有人采用灭过菌的棉团轻巧地沾取"54
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动物细胞培养条件分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
转化细胞在所有的细胞离体培养中，zui困难的是动物细胞培养。下面是它所需要的特殊条件。⑴血清:动物细胞离体培养常常需要血清。zui常用的是小牛血清。血清提供生长必需因子，如激素、微量元素、矿物质和脂肪。有一天人们真正学会了配制和血清一样的培养液，那时血清才可被取代。在这里，血清等于是动物细胞离体培养的天然营养液。⑵支持物:大多数动物转化细胞有贴壁生长的习惯。离体培养常用玻璃，⑶气体交换:二氧化碳和氧气的比例要在细胞培养过程中不断进行调节，不断维持所需要的气体条件，每一次开箱操作后的快速恢复对设备的要求可想而知有多难?由此决定了动物转化细胞离体培养设备要求高、投资大。
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新生大鼠颈上交感神经元分散细胞培养
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
干细胞交感神经系统在维持机体的正常功能和对环境的适应性反应中起着十分重要的作用。交感神经细胞培养特别有助于神经细胞发育和可塑性研究，利用体外培养系统可进行交感神经细胞的发生、死亡、形态和生化发育、递质表形的获得，以及靶组织与传入纤维的突触形成的研究。此外，通过体外培养系统可获得关于神经营养因子、激素，细胞因子等调节交感神经元发育的信息，了解传入纤维的输入以及与靶组织的的机制。1、材料和方法实验用出生当天的昆明种大鼠，在无菌条件下腹部朝上固定于塑料泡沫板上,用微解剖镊在解剖显微镜下找到气管两侧的颈总动脉,并以此为标志,在颈总动脉分为颈内外动脉交叉处找到上颈交感节, 取出上颈交感节, 置于含 1 % 胶元酶(Collagenase)和1 % 消化酶(Dispase)的2ml混合消化液中消化(37℃， 1 h)分散后，用种植(Plating)培养液稀释成0.2×105个细胞/ml密度的的细胞悬液;接种于涂有小牛皮胶或以大鼠脑皮层胶质细胞为背景的35mm塑料培养皿中，每皿2ml细胞悬液置。置标本于36℃、10%CO2培养箱中培养。24h后倾去培养皿内种植培养液,改用饲养(Feeding)培养液培养。接种第3d, 在培养皿中分别加入细胞分裂抑制剂5-氟-2'-脱氧尿苷15μg/ml和尿苷35μg/ml, 作用48 h后更换新鲜饲养培养液,以后每周换液两次, 每次更换一半新鲜饲养培养液。2、培养液成份干细胞种植培养液: 80%Eagle's DMEM(含葡萄糖600mg/100ml、NaHCO3 3.7g/L);10%胎牛血清;10%马血清;NGF 20ng/ml; 谷氨酰胺100μg/ml。脱氧核糖核酸酶 I 40μg/ml。饲养培养液: 95%Eagle's DMEM(含葡萄糖600mg/100ml、NaHCO3 3.7g/L,);5%马血清; NGF 20 ng/ml;神经营养素 1ml/100ml;谷氨酰胺100μg/ml。3、新生大鼠交感节神经元的生长分化和形态特征新生大鼠交感节神经元在含 NGF 的培养液中种植后4h, 细胞即开始贴附在胶元薄膜或在皮层胶质细胞层上生长, 交感神经元的胞体一般为圆形, 有时亦可见椭圆或梭形,体积较大, 直径约8-14μm左右,胞体周围呈现一圈光晕,神经元的细
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