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液相色谱仪发展历史/发展过程详细介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-21
本文主要介绍液相色谱仪的发展历史。 早在古代罗马时期，人们已知道将一滴含有混合色素的溶液滴在一块布或一片纸上，通过观察溶液展开产生的同心圆环来分析染料与色素。实际上，这种简单操作已经采用了现代色谱学的基本原理。 19世纪中叶，德国化学家Runge对古罗马人的这种方法作了重要的改进，使其具有良好的重现性与定量能力，使盐溶液可在纸上分离;另外，化学家Goppalsr-oeder也在长条纸上分离了染料和动植物色素，这些研究标志着纸色谱法建立，并逐步发展成为现代色谱技术。 俄国植物学家Tswett在1903年的华沙自然科学学会生物学会会议上发表了题为“一种新型吸附现象及其在生化分析上的应用”的论文中提出了应用吸附原理分离植物色素的新方法，这一工作标志着现代色谱学的开始。他将碳酸钙装入竖直的玻璃柱中，从顶端倒入植物色素的石油醚浸取液，进一步采用溶剂冲洗，使溶质在柱的不同部位形成色带，第一次向人们公开展示了采用色谱法提纯的棺物色素溶液以及色谱图显示着彩色环带的柱管。Tswett将这种方法命名为色谱，管内填充物被称之为固定相，冲洗剂被称之为流动相。 20多年后，Kuhn等为了证实蛋黄内的叶黄素系植物叶黄素与玉米黄质的混合物，参考Tswett的方法，以粉碎的碳酸钙装填色谱柱，成功地从蛋黄中分离出植物叶黄素。他们工作的重要意义不仅仅在于证明了蛋黄叶黄素是试化类胡萝卜素的混合物，更重要的是证实色谱法可以用于制备分离。此后，色谱分离方法逐步为各国科学工作者所关注，并应用于各种天然有机化合物的分离分析。 1941年，Martin等采用水分饱和的硅胶为固定相，以含有乙醇的氯仿为流动相，分离乙酰基氨基酸的工作是分配色谱的首次应用。他们也在总结其研究成果的基础上提出了著名的色谱塔板理论。 液固色谱是最先创立的色谱方法，最初液相色谱柱多是采用碳酸钙、硅胶、氧化铝填充的玻璃柱管，流动相加在柱管±端，靠重力作用向下迁移，而组分的检测则依靠肉眼的观
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干货|毕克气体发生器上的那些灯
作者：德尔塔 日期：2022-04-21
在实验室里和仪器打交道的你，有没有这种经历，仪器上的一个从没亮过的指示灯突然亮起的时候觉得一头雾水，完全不知道是哪里出了问题~ 今天小编就来给大家科普一下毕克气体发生器上的那些个灯。还不了解的小伙伴们赶紧搬个小板凳一起来扫扫盲： 毕克气体发生器上总的来说有以下几种灯：Service灯，Alarm灯和High Duty灯。 Service灯旨在反应空压机的运行时长，顾名思义只要配备空压机的设备就会有Service灯。Genius全系列都是有内置空压机的氮气发生器，所以都具有Service灯。 根据设备型号的不同，空压机运行满一定时间后，Service灯就会亮起，提示需要给空压机做一个预防性维护，这就好比汽车行驶满多少公里就需要做维护的道理一样，空压机也是需要定期维护的哦！ 那么小伙伴们是不是就能举一反三——专用于GC的Precision系列空压机当然也有Service灯，而无内置空压机的Infinity系列氮气发生器也就没有Service灯啦！是不是感觉一下就豁然开朗了？ 如果说Service灯亮起的作用是告诉你仪器需要做预防性维护，那Alarm或High Duty灯亮起就说明仪器真的出现故障了，导致空压机连续运行超过8小时，需要立即维护。一般产生这个情况有多种原因：漏气、空压机输出的流量或压力不足或者某个部件损坏等......Genius 30系列、NM32LA和ABN2ZA等型号都具备Alarm或High Duty灯。 Genius 30系列，左边是High Duty灯，右边是Service灯 下次再遇到毕克气体发生器灯亮的情况，您是不是就能根据亮的是哪个灯而大概判断情况，不再是一脸懵圈了呢？如果小伙伴遇到任何关于售后服务相关问题，欢迎拨打400 888 1612，毕克专业售后工程师第一时间为您答疑解惑哦~ 更多精彩欢迎关注“毕克气体”公众号
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离心机分离生物T淋巴细胞的技术
作者：德尔塔 日期：2022-04-21
（一）原理 混合单个核细胞悬液在通过尼龙毛柱时，B细胞、浆细胞、单核细胞和一些辅助细胞被选择性粘附于尼龙毛上，而多数T细胞则通过尼龙毛柱，是获得富含T细胞群的有效方法。 （二）材料及试剂 1．尼龙毛（Femwall Laboratories,LP－1 Leukoqak leukocyte Filters）。 2．烧杯、铝箔、漏斗、一次性手套等。 3．装填尼龙毛柱，一次性注射器。 4．取自然沉降的上层血浆，过聚蔗糖—泛影葡胺分层液后，获取的血浆和分层液之间的单个核细胞层。 （三）操作方法 1．尼龙毛的清洗与干燥 （1）戴上已经洗去滑石粉的一次性手套，将尼龙毛（1包或2包，每包35g）放入烧杯中，加入蒸馏水或去离子水，用铝箔盖上烧杯并煮沸约10min。 （2）冷却至常温，倒入漏斗内，使水滴干。 （3）重复（1）、（2）步骤6次。 （4）将尼龙毛摊在铺有纱布的方盘内，37℃温箱干燥2～3天后，贮藏在带盖的方盘内。 2．装尼龙毛柱 （1）取50ml玻璃注射器，拔去注射芯，在注射器头上套一段带夹子的胶管。 （2）将尼龙毛梳理，并适当折叠，以适应注射器的直径，填入注射器内，约20ml的体积。 （3）将填好尼龙毛的注射器连同注射器芯一起包好，高压灭菌。 3．用离心机细胞分离 （1）将注射器固定在支架上，倒入37℃的细胞培养液，关闭阀门一定时间，然后打开阀门，放掉细胞培养液，以清洗几次尼龙毛，关上阀门。 （2）将要分离的细胞液用预先加温的培养液稀释成适当的浓度，约5.00×107个细胞／ml。 （3）将细胞液倒入注射器内，使之没过尼龙毛柱。盖上注射器，37℃温育45min 至1h。 （4）打开下口，缓慢放流（1滴／min），收集于离心管中。 （5）离心，即获所需的T淋巴细胞。 （6）关闭注射器下口，于注射器内加入0.85％冰冷生理盐水，振荡，并套上注射器芯，打开下口，使劲推出注射器内液体，即获得粘附于尼龙毛上的B淋巴细胞、浆细胞、巨噬细胞等。 （四）注意事项 1．此种分离法，T淋巴细胞也常有一部分被吸附，吸附的多少与尼龙毛的质
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剖析磁珠分离的学问——Dynabeads 细胞分离与扩增
作者：德尔塔 日期：2022-04-21
分离可以基于细胞不同的大小、质量或者细胞表面不同的标记蛋白等来实现，而相对应的技术有过柱、离心以及流式细胞术。但传统方法需要冗长的准备步骤和漫长的等待：准备柱子，加细胞溶液，冲洗，分离，收集；或者加液，离心，冲洗，加液，离心，冲洗……（反复n次）。如今，Dynabeads也逐渐被更多人使用，本文将围绕Dynabeads 细胞分离与扩增进行解析，帮助读者顺利进行实验。 Q1 对提升阴性分离法的靶细胞纯度有何建议？ 在此，我们整理了以下建议： ·良好的回收和纯度基于高质量的MNC制备，其中颗粒细胞和血小板的数量要低。 ·在混匀步骤使用HulaMixer™样品混合器（目录编号15920D）以确保有足够的抗体与靶细胞相结合。 ·在抗体结合步骤之后对细胞进行良好的洗涤，以去除未结合的抗体。 ·2X rosetting方案能够提升细胞纯度，而不增加分离过程中使用的Dynabeads™磁珠数量。 Q2 在阴性分离过程中，提升最终分选效率/得率的技巧是？ 在此，我们整理了以下建议： ·样本制备：所有的分离操作都必须在单细胞悬液中进行。 ·请确保使用了正确的细胞数量，稀释倍数和抗体混合物体积，Dynabeads™磁珠和缓冲液系统。 ·在混匀步骤使用HulaMixer™样品混合器（目录编号15920D）以确保分离操作中的混合效果良好。 ·在接触磁力架前的最后操作步骤中，用户须使用1 mL枪头吹打10次以上来将细胞/磁珠充分重悬。这一操作能够帮助用户捕获滞留的目的细胞。 ·配制分离和洗涤缓冲液的PBS应不含Ca2+和Mg2+，以避免细胞发生补体活化或聚集。 Q3 在进行单核细胞阴性分离时，遇到了细胞聚集的情况，该如何处理？ 血小板激活经常在单核细胞的分离过程中造成麻烦，因为激活后的血小板会结合单核细胞并产生单核细胞与血小板聚集的不利情况。有几类因子能够引发血小板的激活效应，如温度改变，机械因素（即剪切力），暴露于抗凝剂肝素（通常存在于样品管中）下，等等。为了避免血小板的活化（及后续的单核细胞聚集），这里提供一
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论光合作用与光合有效辐射的关系
作者：德尔塔 日期：2022-04-21
光合作用指含有叶绿体的绿色植物和某些细菌，在可见光的照射下，经过光反应和碳反应（旧称暗反应），利用光合色素，将二氧化碳（或硫化氢）和水转化为有机物，并释放出氧气（或氢气）的生化过程。同时也有将光能转变为有机物中化学能的能量转化过程。 光合作用是一系列复杂的代谢反应的总和，是生物界赖以生存的基础，也是地球碳-氧平衡（即二氧化碳与氧气的平衡）的重要媒介。光合作用可分为产氧光合作用（oxygenic photosynthesis）和不产氧光合作用（anoxygenic photosynthesis）。是绿色植物、和某些细菌利用叶绿素，在可见光的照射下，将二氧化碳和水转化为有机物（主要是淀粉），并释放出氧气的生化过程。对于生物界的几乎所有生物来说，这个过程是他们赖以生存的关键，而地球上的碳氧循环，光合作用是必不可少的。 太阳辐射中对植物光合作用有效的光谱成分称为光合有效辐射，波长范围380～710纳米，与可见光基本重合。光合有效辐射占太阳直接辐射的比例随太阳高度角增加而增加，最高可达45%。而在散射辐射中，光合有效辐射的比例可达60~70%之多，所以多云天反而提高了PAR的比例。光合有效辐射平均约占太阳总辐射的50%。 绿色植物进行光合作用过程中，吸收的太阳辐射中使叶绿素分子呈激发状态的那部分光谱能量。波长为，以符号Qp代表，单位为瓦/米2。光合有效辐射是植物生命活动、有机物质合成和产量形成的能量来源。 和大气混浊度的减小而增高。其比值随时间的变化在晴天快，一般早晚低，正午前后高而稳定，夏季高，冬季低。晴朗的冬季，当太阳高度从10°增加到45°时，光合有效辐射系数由0.35增加到0.45；夏季则由0.47增加到0.48。散射辐射中的光合有效辐射系数基本上不随太阳高度角改变，但在晴阴不同的天气类型下，却存在一定变化,并比直接辐射中的光合有效辐射系数偏大,介于0.50～0.60之间。 进入作物群体的光分为两部分：一是穿过上部叶片间隙的直射光，呈“光斑”；另一种是透过叶片以后的透射光
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名词解释汇总——Micro CT（微量 X射线断层扫描）相关监测指标
作者：德尔塔 日期：2022-04-21
【Micro CT 相关名词解释】 CT值 CT值（CT number）是以水的CT值为零，而相对于其他物质X线的衰减值。例如，空气的CT值为 -1000，而骨密质的CT值为 +1000，人体除骨密质和肺以外，CT值基本在 -100～+100之间。CT值的标准单位是 HU（Hounsfield）。组织密度越大，CT值越高。如果某一组织发生病变而致密度改变，则会影响到CT值的改变，这对CT诊断有很大价值。 BMC 骨矿含量或骨矿物质含量（Bone Mineral Content，BMC），单位是g BMD 骨密度或骨矿物质密度（Bone Mineral Density，BMD），2D BMD的单位是g/cm^2，3D BMD 的单位是mg/cc。 BMP 骨形态发生蛋白（Bone Morphogenetic Protein，BMP）是转化生长因子β超家族成员之一，具有诱导未分化的间充质干细胞向成软骨细胞和成骨细胞定向分化与增殖的能力，能促进新骨形成。 BS 骨表面积（Bone Surface，BS），单位是mm^2 BS/BV 骨表面积和骨体积的比值，单位是1/mm。 BS/TV 骨表面积和组织体积的比值，单位是1/mm。 BV 骨体积（Bone Volume），单位是mm^3。 BV/TV 相对骨体积或骨体积分数，单位是%。 Conn.D. 连接密度（Connectivity Density，Conn.D.），单位是1/mm^3。 Ct.Ar 皮质骨面积（Cortical b
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无细胞表达系统——难度蛋白表达的福音
作者：德尔塔 日期：2022-04-21
1964年有两个人开创了体外蛋白表达的先河，这两个人的名字大家必定不会陌生—马太和尼伦伯格。因为他们的创新思维让人类破译了编码氨基酸的64种翻译密码子。从此，体外蛋白表达开始为科学界所关注，不过彼时这个系统蛋白表达量低、持续时间短、稳定性差，使其未能得到进一步发展。 到80年代中期Spirin等对其进行优化提高了蛋白合成产率之后，体外蛋白表达系统—无细胞表达系统，开始为生物工程领域所逐步重视，逐步发展出多种类型的无细胞表达体系。常用的有四种：大肠杆菌抽提物无细胞表达系统、酵母抽提物无细胞表达系统、小麦胚芽抽提物无细胞表达系统和兔网织红细胞抽提物无细胞表达系统。 利用细胞抽提物（比如大肠杆菌、酵母细胞、小麦胚芽、兔红血球细胞等）提供RNA聚合酶、tRNA、核糖体、氨基酸、起始因子、延伸因子、终止因子等物质，添加表达模板质粒或PCR产物，并不断提供反应底物氨基酸、能量-ATP等物质，同时通过透析等手段去除反应副产物，在体外环境中进行蛋白的表达，这项技术称为无细胞表达技术。 无细胞表达的几大重磅级优势： 1. 无细胞表达系统最大优势是避开了细胞内环境对细胞表达的影响，可以人为控制反应条件和进程。金开瑞生物的无细胞表达系统可对系统进行各项优化，如Tag优化、M优化、K优化，以此得到最优表达条件。 对yua3蛋白的Tag优化 对VACV I5蛋白的M优化 对TMEM65蛋白的K优化 2. 大大缩短实验周期。普通的表达过程需要2~3天，无细胞的表达过程则大大缩短到1~2小时，节省了不少时间成本，为那些着急毕业的实验小伙伴解决了燃眉之急。 3. 对常规细胞内表达难以表达的蛋白也可轻松解决，例如膜蛋白和毒性蛋白等。哺乳动物基因组的近三分之一由膜蛋白组成，其中约一半可以成为药物靶标，研究这些靶标膜蛋白，开发潜在的生物靶向药物，对疾病的致病机理及药物开发具有重要意义。
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如何使用全自动定氮仪测定食品中挥发性盐基氮
作者：德尔塔 日期：2022-04-21
最新国标GB5009.228-2016食品中挥发性盐基氮的测定方法，最引人关注的是在该方法中，增加了自动凯氏定氮法作为第二法，本文对如何正确理解和应用第二法进行探讨，以及如何使用全自动定氮仪测定食品中挥发性盐基氮的含量和分析参数设定。 1. 样品预处理：第一法中要求使用100ml三氯化镁对样品进行处理，静置15分钟后还需过滤；而第二法中由于使用全自动凯氏定氮仪，对含有固体的样品可以直接分析，因而无需使用三氯化镁对样品进行处理，也无需过滤过程。 2. 氧化镁的添加：第一法中要求添加5ml氧化镁混悬液；而第二法中由于全自动凯氏定氮仪的蒸馏管为750ml，直接加入1.0克氧化镁固体，无需配置氧化镁混悬液。 3. 蒸馏设定：第一法中由于手动仪器蒸汽强度弱，蒸馏时间为5分钟；而第二法中10.1.4要求蒸馏时间180秒或蒸馏体积200ml，以先到者为准。 4. 标准滴定溶液的浓度：第一法中使用0.0100mol/L的溶液；而第二法中使用0.1000mol/L的溶液。 5. 结果单位：mg/100g或者mg/100ml。 瑞典OPSIS公司具有30年的凯氏定氮仪经验，其全自动凯氏定氮仪KD-310针对国标GB5009.228-2016的要求，进行了的全面优化，无需硬件改动，让操作者使用起来非常方便。 ①、设置了两种滴定终点判断方式：流出液体积+颜色终点判断或者蒸馏时间+颜色终点判断；在程序中直接设定蒸馏时间180秒即可完成，仪器自动扣除添加试剂的时间，无需人工估算。 ②、设置了两种滴定模式：正常样品的滴定和超低含量样品的滴定，由于大部分食品中挥发性盐基氮的含量比较低，滴定体积一般
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灭菌达不到预期效果？艾力特帮您找原因
作者：德尔塔 日期：2022-04-21
在制药灭菌中，你是否遇到过灭菌之后的衣服湿哒哒不能穿、培养基长菌、孢子条阳性等灭菌失败的情况？到底是什么原因导致的灭菌失败呢？ 下面从蒸汽灭菌原理生物角度进行分析： a)时间：依据半对数模型的微生物存活曲线可知：假设等效灭菌时间减少5min，只能杀灭4个log的微生物（无菌水平是杀灭6个log微生物） b)温度：从图上可以看出，在 118°C时同等数量的微生物的杀死率是121°C时的一半。因此，在 118°C时，需要2倍的暴露时间才能杀死同等数量的微生物。 c)蒸汽接触：相同温度下，储存在蒸汽中的能量大于干空气和水。蒸汽灭菌接触到物品发生冷凝，才会释放能量。因此，蒸汽必须与待灭菌物品全面接触。例如灭菌柜中放入关闭阀门的容器、旋紧瓶盖或紧扣铝盖的空玻璃瓶。这样，蒸汽就不能直接接触到内表面，不能进行灭菌。 d)空气移除：空气是灭菌的最大阻碍，必须从腔室移除。如果腔室中存在空气，就会存在冷点，存在灭菌不彻底的区域。 e)蒸汽质量：蒸汽的质量对饱和蒸汽灭菌中灭菌率L影响的大小取决于蒸汽质量偏离理想蒸汽状态的程度。干燥值小于1.0的蒸汽所含的能量＜纯饱和蒸汽；过热蒸汽灭菌率＜饱和蒸汽；含不凝气体的蒸汽使得蒸汽成为混合体，存在冷点。 f)干燥：液体在开放大气中会是理想的污染传导体，所以保证装载干燥是预防二次污染的必要条件。 作为德国MMM集团在中国长期的合作伙伴，艾力特可针对客户的特殊需求进行定制咨询服务，为客户开发细节完善的解决方案。每一种型号的灭菌柜都可以针对不同产品的、独特的材料特性来调整温度、时间、压力和压力改变速率。
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客户细胞培养过程中常见的问题说明【赛百慷】
作者：德尔塔 日期：2022-04-21
通过多次与客户的了解和反馈，赛百慷的售后服务人员发现，客户在收到经过专业包装的细胞后，由于没有经过系统专业的检查和处理，就直接进行实验，以致于后期容易产生了一系列问题。鉴于客户对这一方面的知识有所欠缺薄弱，赛百慷的技术人员经过总结，对于在收到细胞怎样专业处理做了以下说明： 一、问：细胞收到之后怎么处理？ 答：常温运输的细胞 首先观察包装是否完好，瓶口是否漏液，然后显微镜先拍摄4x 、10x、 40x不同倍数下的照片各两张。放入培养箱稳定两小时后开始换液，贴壁细胞把培养基全部吸去，加入6ml新的完全培养基，悬浮细胞离心后，用6ml完全培养基重悬细胞。注意细胞的培养环境。 低温运输的细胞，通常是用干冰寄送。 客户收到细胞后，观察干冰是否挥发，细胞是否溶解。没有问题可以直接放入液氮罐保存（长时间），或者超低温冰箱（不超过一周）。 二、问：细胞冻存后，复苏效果不好？ 答：目前还有很多人采取4°、﹣20°各半小时再转入-80°冰箱，这方法不好控制，有的细胞适合，有的细胞就达不到理想效果。现可采用程序降温盒来冻存，降温盒内添加的异丙醇可以达到每分钟降一度的要求，操作也简单。 冻存液采用90%血清+10%DMSO。部分低分化或干细胞可以添加马血清冻存，另外可以先将冻存液配置成80%血清+20%DMSO,重悬细胞时用血清重悬，避免直接用DMSO对细胞吹打造成损伤。 三、问：细胞有黑点怎么回事？ 答：这种情况可能性就比较多了，首先判断黑点是在细胞表面，还是胞质内，还是在细胞外。细胞表面黑点增多可能是因为状态变差，可能是培养条件不适合导致，或者细胞活性降低。细胞质内黑点增多，先确认是否是多核细胞。细胞外有黑点，黑点游动则可能是细菌污染，不游动但随着培养时间增长黑点数量增多，应该检测是不是支原体污染，悬浮细胞多数有黑点，可能是碎片，可低速离心去除。腺癌多数是分泌因子，看着黑点增多。 四、培养基，血清怎么选？ 答：**和细胞来源用的什么品牌使用相同的
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原代细胞免疫荧光鉴定步骤【赛百慷】
作者：德尔塔 日期：2022-04-21
为了更好的帮助客户提供真实的原代细胞，使用免疫荧光鉴定出提取的细胞类型，免疫荧光技术又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。该技术的主要特点是：特异性强、敏感性高、速度快。 一下是赛百慷技术人员提供的免疫荧光细胞鉴定的步骤，仅做参考： 1.细胞爬片 取4片玻璃片于24孔板中，每孔加入培养基1mL，加入细胞0.02million个/孔。置培养箱2h或过夜。 2.固定 细胞爬片后，吸出培养基，用PBS洗一遍，加入4% PFA于4℃固定30min。用PBS洗3×5min/次。也可最后一次不吸出PBS，放4℃过夜。 3.破膜封闭 将玻片除去水分，置于培养皿支撑物上，玻璃片封闭液配置：0.5% Trition X-100与PBS 1:1混合，再加10% 血清，取50uL破膜封闭液滴于防水膜上，将玻片上有细胞的一面盖上2h。 4.一抗孵育 一抗配置：抗体与PBS 1:100（200）稀释 破膜后，取50uL一抗于防水膜上（湿盒中），将玻片有细胞的一面盖上置于4℃（最多可放置一周） 阴性对照组可用PBS代替一抗。 5.二抗孵育 PBS洗3×5min/次， 二抗混合液配置：二抗：PBS=1:500 DAPI:PBS=1:1000 防水膜上滴50uL二抗混合液，盖上玻片，避光，室温放置2h。 6.包埋 PBS洗3×5min/次，玻片上各滴1滴Fluoromount-G，将有细胞的一面盖上。
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细胞筛选方法和步骤【赛百慷】
作者：德尔塔 日期：2022-04-21
筛选步骤： a.杀灭曲线的确定 1.将未转染的细胞按每孔0.05million铺入24孔板，孵育过夜， 2.第二天，除去24孔板中旧的培养基， 3.将含不同浓度嘌呤霉素（1ug/mL，2ug/mL，3ug/mL，4ug/mL，5 ug/mL，6ug/mL，7ug/mL）的新鲜培养基加入已铺有细胞的24孔板， 4.每2天更换新鲜的筛选培养基， 5.每天观察细胞的存活比例， 6.最小的嘌呤霉素使用浓度就是从嘌呤霉素筛选开始1-4d内杀死所有细胞的最低筛选浓度。 b.嘌呤霉素筛选转染细胞 1.第一天，将转染的细胞按每孔0.05million铺入24孔板，孵育过夜 2.第二天，除去24孔板中旧的培养基， 3.加入含嘌呤霉素（2ug/mL）的筛选培养基，孵育， 4.每2天更换新鲜的筛选培养基， 5.每天观察细胞的存活比例， 6.在同一时间点（2d）存活的细胞，即为转染成功细胞， 7.对筛选后的细胞进行扩增。
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利用EarlyTox细胞活力检测试剂盒评估GM-CSF和TNFα诱导的细胞凋亡
作者：德尔塔 日期：2022-04-21
前言： 肿瘤坏死因子(TNFα)是一个关键的细胞炎症因子，它可以通过许多细胞通路来调控各种细胞事件。此因子是在造血细胞中引起凋亡而被人们熟知的，如U937，通过激活细胞内半胱天冬酶的级联过程。另一方面，粒巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)是 造血生长因子成员之一，可促进增殖和/或分化。然而，有报道称U937细胞会应答 GM-CSF而发生生长抑制和凋亡。因为TNFα和GM-CSF都会在U937细胞中引起 凋亡，但这两种细胞活素之间有着不同的时间进程。当两者结合起来，两种细胞活素的高度协同作用便会被观察到。 EarlyTox™细胞活力试剂盒是评价细胞生 长条件的一类试剂之一，包括细胞活性和各种凋亡事件。这些试剂设计为均相免洗实验并针对荧光微孔读板机做了优化。这里,我们使用三种不同的试剂盒, Live/Dead测定、Caspase-3/7 R110测定和Caspase-3/7 NucView 488测定来检测TNFα 和GM-CSF处理U937细胞的效果(图 1) • EarlyTox™ Live/Dead检测试剂盒包含两种针对哺乳动物活细胞或死细胞的标记物。Calcein AM是一种广泛用于活细 胞的标记物，而溴化乙锭二聚体-III (EthD-III)通过受损的细胞膜进入死细胞与DNA结合以产生明亮的红色荧光。 • EarlyTox™ Caspase-3/7 R110检测试剂盒提供一步、均相测定，只需细胞裂解 来对凋亡过程进行终点法分析。 • EarlyTox™ Caspase-3/7 NucView 488 检测试剂盒能够通过利用NucView 488 Caspase-3底物在未受损细胞群中检测 凋亡细胞。这种试剂对细胞无毒并且可 用于凋亡的动态学研究。 在这一基于细胞的实验中，荧光信号通过 SpectraMax® i3x微孔读板机上底读孔域扫 描功能进行检测，可获得孔底12个位置的 平均信号以避免因为潜在的细胞生长不均 所造成的孔与孔之间的差异。 材料： • U937细胞(ATCC Cat.# CRL-1593.2) • 细胞因子： • 人类TNFα (Peprotech Cat# 300-01) • 人类GM-CSF (Peprotech Cat# 300-03) • EarlyTox细胞活力试剂盒(Molecular Devices, LLC)： • EarlyTox Live/Dea
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如何区别过氧化氢灭菌是干法还是湿法？
作者：德尔塔 日期：2022-04-20
我们在面对客户的时候，发现很多客户都有这样一个疑问：是不是过氧化氢发生器带除湿功能就是干法，不带除湿功能就是湿法呢？显然答案是否定的，那干法和湿法究竟有怎样的区别呢？ 一、灭菌工艺 干法：干法的核心技术是闪蒸技术，可使过氧化氢完全气化，分子粒径级别在10-10m,可在空间做布朗运动，分布均匀，整个过程控制在冷凝点以下，因此是“干”工艺，从而避免结露和腐蚀。 湿法：不管是微冷凝，干雾，或是其他电离方法总的概括起来属于简单加热法，不除湿，分子粒径在微米级别，分布不能保证均匀，单台设备最大可灭空间体积小于600m³，而且灭菌过程不控制湿度，很容易达到结露点，从而易对接触表面产生腐蚀。 二、灭菌循环 干法：可以有效控制灭菌空间相对湿度，确保H2O2蒸汽不冷凝，保持低浓度高效杀菌能力的特性；每次灭菌前控制的相对湿度相同，开发出的参数代表所有工况；有很强的可重复验证性。 湿法：不控制相对湿度，注入的H2O2蒸汽要依据房间内原始的相对湿度确定注入量，否则很难控制冷凝点；故开发出的参数不能代表所有的工况，难于重复验证。 三、验证方法 干法： - 被灭菌空间内，先用化学指示剂模拟出该空间的气流模型，找出最不利点； - 依据化学指示剂验证结果，分高、中、低三个层面布置生物指示剂， - 重点关注最不利点，可达到完全的6log灭菌 - 验证方法科学，严谨；受到广大认证专家的高度认可。 湿法： - 客户自己依照原有甲醛或臭氧方法验证； - 验证点少，结果无代表性，很难通过高标准、严要求的认证专家的认可； - 无法达到完全的6log的灭菌效果。 四、排放 干法： - VHP整个灭菌过程维持在汽化状态,与湿法工艺相比，汽化状态排放时间更短； - 相对于液体过氧化氢来讲，无残留；不需要做残留验证。 湿法： - 在接触表面有很高浓度的H2O2冷凝液，如果接触表面要通过1ppm以下残留浓度的验证测试，要增加排放时间； - 需要残留验证，证明接触表面残留浓度在1ppm以
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免疫组化常见问题及对策
作者：德尔塔 日期：2022-04-20
免疫组织化学是应用抗原和抗体结合的原理，检测细胞内多肽、蛋白质等大分子物质的分布。这种方法的特异性强、敏感度高、发展迅速、应用广泛，成为生物学和医学众多学科的重要研究手段。做免疫组化可能遇到许多问题，大体归纳起来，主要有非特异性着色﹑着色部位不对﹑假阳性﹑无阳性﹑阳性弱五大类以及其他一些小问题。现在就以上几点分别说明。 1、非特异性着色 非特异性着色就是在理论着色区域外的着色，这种着色与背景是有区别性的。造成非特异性着色的原因主要有： 1) 标本原因，肝肾内源性生物素含量高，与 SABC 结合导致非特异性着色，皮肤，肺组织胶原含量高，由于胶原带负电荷，易吸附试剂导致非特异性着色。 2) 切片干涸导致的边缘效应。 3) 抗体浓度过高。 4) 组织在处理中存在出血区或坏死区。 5) 洗涤不充分。 6) 显色剂氧化，显色时间长。 解决方法 ： 1) 一抗应做浓度梯度，选择阳性强背景好，信躁比高的浓度，做为抗体实验浓度。二抗浓度和时间一般不变。 2) 稳定实验条件，严格按操作说明进行。 3) 在实验中应保持切片始终处于水平状态避免抗体流失，从而使切片使切片干涸。 4) 在实验中应将试剂覆盖面积大于切片面积 5) 洗涤要充分，在背景十分深时，可用 37 ℃ 预温的 PBS 浸泡 6) 显色剂的配制要防止氧化，尤其是显色剂的配制是使用的用的容器，**是灭菌过的。显色时间应在显微镜下严格控制。 2、着色部位不对 着色部位不对有三种情况。 情况一 : 本是胞浆抗原，但实验显示结果却在胞核有着色。 原因及解决办法： 1) 修复时间过长，修复条件十分严苛，这时应降低反应强度 2) 组织在二甲苯中静置时间过长，这时应更换标本。 3) 抗体中含有抗核蛋白抗体，这种情况已不多见。 4) 标本原因，标本处理不慎会导致总在同一个地方出现着色。 情况二 : 本是胞核抗原但显示结果却在胞浆。 原因及解决办法： 1) 核抗原不易暴露，需用热修复或延长修复时间来充分暴露。 2) 蛋白质是在胞
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