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PCR原理及常见问题解答
作者：德尔塔 日期：2022-04-21
PCR (Polymerase Chain Reaction)，中文翻译为聚合酶链式反应，是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制。 由1983年美国Mullis首先提出设想，1985年由其发明了聚合酶链反应，即简易DNA扩增法，意味着PCR技术的真正诞生。到如今，PCR技术已广泛应用于生命科学、医学研究、遗传工程、法医学、考古学、人类学等领域。 PCR原理 PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，双链DNA解离，成为单链；②模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在72℃、DNA聚合酶（如TaqDNA聚合酶）的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对原则，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链，重复此过程就可获得更多的“半保留复制链”。 PCR引物设计基本原则 ①引物长度：15-30bp，常用为20bp左右。 ②引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C 过多易出现非特异条带。 ③两个引物之间不应存在互补序列，尤其是避免3'端的互补重叠。 ④引物与非特异扩增区的序列的同源性不要超过70%，引物3′末端连续8个碱基在待扩增区以外不能有完全互补序列，否则易导致非特异性扩增。 ⑤引物的5'端可以修饰。如附加限制酶位点，引入突变位点，用生物素、荧光物质、地高辛标记，加入其它短序列，包括起始密码子、终止密码子等。 PCR反应特点 特异性强 简便灵敏 纯度要求低 常见问题与解答 1、Q: 不出现扩增条带？ A: 在酶和引物质量好时，不出现扩增带，极有可能是标本的消化处理，模板核酸提取过程出了毛病。例如，模板中含有杂蛋白质，在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。因而要配制有效而稳定的消化处理液，其程序亦
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GB5009.34—2016食品中二氧化硫的测定方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-21
GB5009.34—2016食品中二氧化硫的测定 食品中二氧化硫快速测试仪 型号：KSO2-GB（GB5009.34标准蒸馏方法仪器） 产品介绍： 对样品进行快速蒸馏2-5分钟完成，同时具有安全保护功能，性价比高，省时省力。 中华人民共和国国家标准 GB5009.34—2016 食品安全国家标准 2016-08-31发布2017-03-01实施 中华人民共和国 国家卫生和计划生育委员会发布 GB5009.34—2016 前 言 本标准代替GB/T5009.34—2003《食品中亚硫酸盐的测定》。 本标准与GB/T5009.34—2003相比,主要修改如下: ———标准名称修改为“食品安全国家标准 食品中二氧化硫的测定”; ———删除第一法和附录A; ———原第二法蒸馏法改为滴定法。 GB5009.34—2016 1 食品安全国家标准 食品中二氧化硫的测定 1 范围 本标准规定了果脯、干菜、米粉类、粉条、砂糖、食用菌和葡萄酒等食品中总二氧化硫的测定方法。 本标准适用于果脯、干菜、米粉类、粉条、砂糖、食用菌和葡萄酒等食品中总二氧化硫的测定。 2 原理 在密闭容器中对样品进行酸化、蒸馏,蒸馏物用乙酸铅溶液吸收。吸收后的溶液用盐酸酸化,碘标 准溶液滴定,根据所消耗的碘标准溶液量计算出样品中的二氧化硫含量。 3 试剂和材料 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的三级水。 3.1 试剂 3.1.1 盐酸(HCl)。 3.1.2 硫酸(H2SO4)。 3.1.3 可溶性淀粉[(C6H10O5)n]。 3.1.4 氢氧化钠(NaOH)。 3.1.5 碳酸钠(Na2CO3)。 3.1.6 乙酸铅(C4H6O4Pb)。 3.1.7 硫代硫酸钠(Na2S2O3·5H2O)或无水硫代硫酸钠(Na2S2O3)。 3.1.8 碘(I2)。 3.1.9 碘化钾(KI)。 3.2 试剂配制 3.2.1 盐酸溶液(1+1):量取50mL盐酸,缓缓倾入50mL水中,边加边搅拌。 3.2.2 硫酸溶液(1+9):量取10mL硫酸,缓缓倾入90mL水中,边加边搅拌。 3.2.3 淀粉指示液(10g/L):称取1g可溶性淀粉,用少许水调成糊状,缓缓倾入100mL沸水中,边加 边搅拌,煮沸2min,放冷备用,临用现配。 3.2.4 乙酸铅溶液(20g/L):称取2g乙酸铅,溶于少
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如何测定明胶的凝胶强度？
作者：德尔塔 日期：2022-04-21
明胶是一种非常重要的天然生物高分子材料，是由动物的皮骨及结缔组织中的胶原部分降解成的。在食品、化妆品和制药工业被广泛使用。明胶一加热即成为液体，遇冷则变成弹性固体凝胶块。胶体的溶液-凝胶互相转换是明胶特有的现象。因此，形成凝胶的能力是明胶一项很重要的性能。很早就有人试图通过测算，用数字表示凝胶强度。 最早的评估凝胶强度的方法是完全依靠人的“指测”。“指测”方法是用手指简单按压一下明胶表面，再与已知标准明胶的抗力进行对比。这种方法虽然迅速，但是数据可靠性远远不及科学测量。再加上人体感官器官的灵敏性不够。很难通过指测进行精确、客观的评估。 国标GB6783-2013 中有关于凝胶强度的测定方法。配置指定浓度的明胶溶液，经过静置、水浴加热搅拌溶解、冷水浴等样品溶液制备过程后，取放于特定的样品杯内。选用特定的凝胶测试探头，对样品杯中心点进行穿刺测试。从而测得凝胶强度数值。 欧洲药典EP8.0中也采用相同的方法进行测定。具体方法如下： 柱形探头：12.7±0.1 mm 样品：明胶溶液浓度为6.67%，10℃下 样品瓶规格：59±1 mm（内径）* 85 mm（高度） 测试中速度：0.5 mm/s 刺入深度：4 mm 测试结果：达4 mm时得到的力值即为凝胶强度。 测试方法： 取7.5 g待测样品放入样品瓶内，加入105 ml的水，加盖静止1-4 h后，在65±2℃水浴加热15 min ，水浴加热过程中搅拌。室温下冷却15 min，加胶塞将样品瓶于10.0 ±0.1℃下冰浴17±1 h。擦干样品瓶外壁的水后进行凝胶强度测定，测定点为样品表面的中心点。取两组的平均值作为报告值。 上海保圣供应TA.Touch多功能凝胶测试仪，除了进行中国国标和欧洲药典EP 8.0中关于明胶的凝胶强度测试的实验。针对明胶，卡拉胶，刺槐胶。复合胶的强度测试，可以根据实验需求，自行设定测试前速度、测试中速度、测试后速度、触发模式和触发值、目标模式和目标值等。同时配套国标要求的凝胶测试探头和凝胶测试瓶。 上海保圣专注于物性研究十余年，致力打造以应用
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肉嫩度的检测方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-21
·肉嫩度：通过标准测试方法（中国农行业标准 NY/T 1180-2006)，使用测定仪器记录刀具切割肉样时的用力情况，并把测定的剪切力峰值作为肉样嫩度值。其中所使用的具体测定仪器就是肉嫩度仪。 肉嫩度仪包括几个组成部分：配有WBS(Warner-Bratzler Shear)刀具的相关剪切力测定仪（质构仪、国产质构仪），圆形钻孔取样器，恒温水浴锅，热电偶测温仪和真空包装机。 测定仪器准确度应使用国家法定计量单位认可的标准砝码测试校正，测定仪器的测定值与检测标准砝码的准确值的误差范围应在±0.1%以内，测定仪器具有校正能力 力量感应元的选择：仪器最大量程≥49N，最低作用力感应值≤0.0098N，仪器精度≤0.02% 刀具厚度：3.0mm±0.2mm，刃口内角度是60°，内三角切口高度≥35mm，钻床口宽4.0mm±0.2mm 剪切速度：1mm/s 仪器空载运行所受到的最大剪切力应≤0.147N 将孔样（肉品取出的）置于仪器的刀槽上，使肌纤维与刀口走向垂直，启动仪器剪切肉样，测得刀具切割这一用力过程中的最大剪切力值（峰值），为孔样剪切的测定值 肉嫩度计算：记录所有的测定数据，取各个孔样剪切力的测定值的平均值扣除空载运行的最大剪切力，计算肉样的嫩度值 上海保圣科技 http://www.shbosin.com/ 微信号：保圣科技仪器 手机：18117403825 电话：021-61769285 邮箱：bsen001@163.com
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关于食品物性学，你了解多少？
作者：德尔塔 日期：2022-04-21
食品物性学是指以食品的物理学性质为基本内容的一门学科。一般主要研究食品的力学性质、光学性质、热学性质和电学性质及流变特性等。是研究食品品质特征与加工特性的理论基础，对于研制新产品，进行产品质量评定，质量控制及确定产品最佳工艺条件等有极大的帮助。 与国外相比我国在食品物性学的研究方面起步较晚，直至80年代初，我国才初步建立起了食品物性学的相关体系，近年来越来越多的高校开始将食品物性学列为研究生学位课或必修课，对物性学教材、相关资料的建设、物性学实验的建设等也有了长足的进步。 人们对食品的要求不仅表现在营养价值上 ，而且对于感观也有了更多的要求 。对于食品的选择，酥、脆、嫩、形态、色泽等口感 、视觉特质往往成了人们头号关心的对象。这些都属于食品的质构特性 ，是食品物性基本的研究范畴之一。 一般使用质构仪来测定食品的质构特性。 当样品受静态或动态力时，会伴随着压力或形变力而变化。质构仪可以精确地测定力、距离、时间的变化。再根据三者变量之间的关系进行数据分析，得到物性指标。 质构仪能避免人类感官品评的局限性，得到准确、稳定、重复性好的物性参数。常用来测定食品的硬度、坚实度、弹性、韧性、酥脆性、咀嚼度、胶着性和粘着性等。 食品物性学作为食品加工研究的重要基础课程之一，同时也是一门牵涉多学科领域的科学。学习时不但要求要掌握一定的物理学、物理化学、食品生化、高分子化学及食品工程原理等知识。同时也应涉及生物学、生理学、心理学等学科内容，所以我们在研究时应注意综合运用各个学科的知识。 为适应不同消费者对物性的不同嗜好，开发出满足市场需求的新产品，各高校应重视不断完善食品物性学的教学体系，不断加强教材建设，为社会多培养高质量食品人才，以满足社会对专业人才的需求。 上海保圣科技 http://www.shbosin.com/ 手机：18117403825电话：021-61769285 邮箱：bsen001@163.com
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如何让基因敲除效率提升3倍，价格降低一半？——记赛业生物的技术创新之路
作者：德尔塔 日期：2022-04-21
CRISPR/Cas9基因编辑技术以它效率高、操作简便、成本低等特点被广泛应用于基因敲除小鼠实验中，但是在将RNAs注入受精卵的环节中，传统的显微注射技术需要借助显微操作系统人工逐个进行受精卵注射，十分耗时。同时，想要提高基因敲除的成功率，需要获得更多受精卵，再加上人工设计基因打靶方案耗时费力，这些因素都在不同程度上增加了基因敲除小鼠的研发时间和成本。 为了给客户提供更快捷高效的服务，赛业设立让“基因敲除效率提升三倍，价格降低一半”的目标，从方案设计、受精卵注射、超排卵技术等环节进行改进。首先从注射受精卵的环节入手，用电转受精卵技术代替传统显微注射法，在CRISPR/Cas9技术的基础上创新性研发出CRISPR-Pro基因编辑技术。该技术采用一款最适用于动物受精卵电转的系统和配套体系，将发育到特殊阶段的小鼠受精卵进行特殊处理后，放入电场中进行电击处理，可实现大量的受精卵电转操作。CRISPR-Pro技术突破了注射环节的效率瓶颈，使得高通量生产成为可能。2015年下半年，赛业生物应用CRISPR-Pro高通量电转受精卵方式，首批测试了100个基因敲除小鼠项目，得到电转受精卵存活并发育成两细胞阶段的比率是96-98%，比显微注射方法的30-35%要高近三倍。此外，赛业生物联合知名生物试剂公司共同进行促排卵试剂的研发，经过一系列优化，最终使得供卵小鼠的供卵数量提高了2-3倍，大幅减少了小鼠的使用，增加了动物福利，节约了成本，提高了制备效率。其他各项数据也表明CRISPR-Pro电转受精卵和促排卵技术大幅度提高了项目的成功率。 其次，赛业生物对基因敲除设计方案环节进行优化，并取得重大突破。赛业生物历经十一年发展，其独特优势就是拥有一个由国际顶尖生物技术专家、生物信息学专家和IT技术专家组成的一流团队，该团队已成功研发出全球首款基因载体智慧设计平台VectorBuilder (www.vectorbuilder.com)，且已服务全球数万实验室。针对人工设计基因打靶方案耗时费力的问题，赛业生物研发一款智
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浅析液相色谱仪色谱柱填料的种类与选择原则
作者：德尔塔 日期：2022-04-21
在现代高效液相色谱仪分析中，分离效果好坏很大程度上取决于色谱填料的选择。但是色谱填料的选择范围很宽，要做合适的选择，首先必须对此有一定的认识和了解。液相色谱仪填料可以是陶瓷性质的无机物基质，也可以是有机聚合物基质。无机物基质刚性大，在溶剂中不容易膨胀。有机物基质主要是硅胶和氧化铝。液相色谱仪填料中有机聚合物基质主要有交联苯乙烯-二乙烯苯、聚甲基丙烯酸酯。有机聚合物基质刚性小、易压缩，溶剂或溶质容易渗入有机基质中，导致填料颗粒膨胀，结果减少传质，最终使柱效降低。 以下鲁创分析仪器公司工程师简单介绍在液相色谱仪检测中应用最为广泛的三种基质的性质。 1）硅胶基质 硅胶基质是HPLC填料中最普遍的基质。除具有高强度外，还提供一个表面，可以通过成熟的硅烷化技术键合上各种配基，制成反相、离子交换、疏水作用、亲水作用或分子排阻色谱用填料。硅胶基质填料适用于广泛的极性和非极性溶剂。缺点是在碱性水溶性流动相中不稳定。通常，硅胶基质的填料推荐的常规分析pH范围为2~8。 2）氧化铝基质 氧化铝基质具有与硅胶相同的良好物理性质，也能耐较大的pH范围。它也是刚性的，不会在溶剂中收缩或膨胀。但与硅胶不同的是，氧化铝键合相在水性流动相中不稳定。不过现在已经出现了在水相中稳定的氧化铝键合相，并显示出优秀的pH稳定性。 3）聚合物基质 聚合物基质以高交联度的苯乙烯-二乙烯苯或聚甲基丙烯酸酯为基质的填料是用于普通压力下的HPLC，它们的压力限度比无机填料低。苯乙烯-二乙烯苯基质疏水性强。使用任何流动相，在整个pH范围内稳定，可以用NaOH或强碱来清洗色谱柱。甲基丙烯酸酯基质本质上比苯乙烯-二乙烯苯疏水性更强，但它可以通过适当的功能基修饰变成亲水性的。这种基质不如苯乙烯-二乙烯苯那样耐酸碱，但也可以承受在pH13下反复冲洗。 所有聚合物基质在流动相发生变化时都会出现膨胀或收缩。用于HPLC的高交联度聚合物填料，其膨胀和收缩要有限制。溶剂或小分子
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lnc-mg为**骨骼肌减少症提供新靶点
作者：德尔塔 日期：2022-04-21
骨骼肌减少症(Sarcopenia)是一种增龄性肌肉退行性疾病，表现为骨骼肌萎缩、肌力和机体运动功能下降。提高骨骼肌再生能力是对抗骨骼肌减少的主要策略。近期，来自暨南大学的王晓刚副研究员课题组在《Nature Communications》(IF= 12.124)上发表了题为Lnc-mg is a long non-coding RNA that promotes myogenesis的研究论文。该研究以骨骼肌再生为切入点，率先筛选了在骨骼肌干细胞分化过程中差异表达的长链非编码RNA分子(lncRNA)，并发现了可促进骨骼肌干细胞分化和骨骼肌再生的lncRNA分子，命名为lnc-mg，该分子的发现及机制研究有望为骨骼肌减少症的**提供新的药物靶点，本研究中使用的转基因小鼠来自赛业生物。 为筛选和肌细胞生成相关的lncRNA，研究人员运用lncRNA芯片对原始MuSCs和分化后的细胞进行了检测。在进行芯片筛选以及lnc-mg相关的mRNA功能富集实验后，研究人员找到了与肌细胞生成相关的lncRNA，命名为lnc-mg。 为探究lnc-mg在肌细胞生成过程中的角色，研究人员对lnc-mg进行功能分析，首先进行了lnc-mg的敲降和过表达。结果显示，敲降后，MuSCs的分化受到抑制，其分子标志MyHC表达降低，肌小管数量减少；过表达后，MuSCs分化加强，肌小管数目增加。 此外，研究人员构建了lnc-mg敲除小鼠模型和转基因TG模型（模型来自赛业生物），分别检测腓肠肌（GAS），比目鱼肌（SOL），伸缩肌（EDL）和胫骨前肌的形状变化，检测发现lnc-mg敲除小鼠的肌肉重量变轻，体积变小，而TG小鼠的肌肉组织变重变大；此外，两种肌肉的僵直机能和运动能力也完全相反。这些体外和体内实验验证了lnc-mg是影响肌生成的重要lncRNA。 那么lnc-mg是通过什么调控机制影响肌细胞生成呢？研究人员首先对lnc-mg进行细胞定位，FISH实验结果发现lnc-mg在胞质和核内都有，但是在分化的成肌细胞中主要定位在细胞质中。因此，研究人员想到了ceRNA调控机制，为验证这个假设，研究人员通过芯片检测了过表达和敲降细胞的mi
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液相色谱仪常见六个故障的解决方法说明
作者：德尔塔 日期：2022-04-21
一、液相色谱仪峰分叉怎么回事? 造成这种情况的原因一般是色谱柱被污染，或柱头填料塌陷导致的。 对于第一种情况，先用纯水反向冲洗柱子，然后换成甲醇冲洗，接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定)，再换成甲醇冲洗，然后用纯水冲洗，最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。如冲洗后依然出峰不佳，则考虑第二种情况。 对于第二种情况，拧开柱头，检查柱填料是否硬结或塌陷。去除硬结部分(污染的填料)，装入新填料，滴一滴甲醇，填料下陷，再填，用与柱内径相同的顶端平滑的不锈钢杆压紧，再填平，滴甲醇，再压紧反复几次，直至装满填平。柱头用甲醇冲洗干净，擦净柱外壁的填料，拧紧柱头，用纯甲醇冲洗30分钟以上。 二、如何排除液相色谱仪气泡溢出的故障? 流动相内产生都无法清除不断产生的气泡，主要是因为过滤器长期沉浸于乙酸铵等缓冲液内，过滤器内部由于霉菌的生长繁殖，形成菌团，阻塞了过滤器，缓冲液难以流畅地通过过滤器，空气在泵的压力作用下经过滤器进入流动相。 过滤器浸泡于5%硝酸溶液中，超声清洗几分钟即可;亦可将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中12～36小时，轻轻震荡几次，再将过滤器用纯水清洗几次，打开泄压阀，打开purge键清洗脱气，如仍有气泡不断从过滤器冒出，继续将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中，如没有气泡不断从过滤器中冒出，说明过滤器内部的霉菌菌团已被硝酸破坏，流动相可以流畅地通过过滤器。打开泄压阀，打开泵，流速调至1.0～3.0ml/min，纯水冲洗过滤器1小时左右。即可将过滤器清洗干净。关闭泄压阀，纯甲醇冲洗半小时即可。 三、自检时，为什么有时会出现“钨灯能量低”的错误? 一般来说，原因是系统中有挡光物，光路偏离，钨灯电源系统或钨灯灯泡已坏。这时首先要检查光度室是否有挡光物;打开检测器光源室盖，检查氘灯是否点亮;如果氘灯不亮，则关机，更换新氘灯，换时，需注意型号;检查氘灯保险丝，看是否松动、氧化、烧断;如果故障，应立即更换;再
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不容错过的SSR分析技术
作者：德尔塔 日期：2022-04-21
微卫星标记（microsatellite），又称为短串联重复序列(short tandem repeats，STR)或简单重复序列（simple sequence repeats，SSR），是均匀分布于真核生物基因组中的简单重复序列，由2~6个核苷酸的串联重复片段构成。由于重复单位的重复次数在个体间呈高度变异性并且数量丰富，因此微卫星标记的应用非常广泛。微卫星位点通常通过PCR扩增，扩增产物通过电泳分析，并根据大小分离等位基因进行检测。 由于单个微卫星位点重复单元在数量上的变异，个体的扩增产物在长度上的变化就产生长度的多态性，这一多态性称为简单序列重复长度多态性(SSLP)，每一扩增位点就代表了这一位点的一对等位基因。由于SSR重复数目变化很大，所以SSR标记能揭示比RFLP（限制性内切酶片段长度多态性）高得多的多态性，这就是SSR标记的原理。 技术特点 （1）数量丰富，覆盖整个基因组，揭示的多态性高； （2）具有多等位基因的特性，提供的信息量高； （3）以孟德尔方式遗传，呈共显性（如果双亲的性状同时在F1个体上表现出来，即一对等位基因的两个成员在杂合体中都表达的遗传现象称为共显性），可鉴定出纯合子和杂合子； （4）实验重复性好，结果可靠。每个位点由设计的引物顺序决定，便于不同的实验室相互交流合作开发引物。 应用范围 遗传杂交育种 绘制染色体遗传图谱 DNA指纹和品种鉴定 种质资源保存和利用 基因组关联分析 经典案例 案例一 题目：SSR linkage map construction and QTL identification for plant height and ear height in Maize（玉米SSR连锁图谱构建与株高及穗位高QTL定位） 主要技术：SSR分型 技术流程： 文章摘要：用玉米自交系组合R15×掖478的F2群体构建连锁图谱，并通过1年2点随机区组试验设计，考察玉米229个F2：4家系成株期的株高和穗位高。所建连锁图谱上共拟合146个SSR标记位点，覆盖基因组1666cM，标记间平均距离为11．4cM。用复合区间作图法进行QTL分析，共检测到8个控制株高的QTL，分别位于第2、3
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Nature子刊：揭示lncRNA在EMT过程中发挥的作用
作者：德尔塔 日期：2022-04-21
西班牙塞利维亚大学教授José A Pintor-Toro长期从事生物化学与细胞生物学研究， 近期，其实验室利用Arraystar LncRNA芯片研究发现了在TGF-β诱导的上皮-间质细胞转化（EMT）过程早期起直接调控作用的lncRNA分子—lnc-Spry1，TGF-β诱导直接引起lnc-Spry1下调，从而引发EMT过程影响细胞侵袭迁移。lnc-Spry1也可与U2AF65作用，影响可变剪切，从而在转录和转录后层面调控基因表达。该研究成果发表在细胞凋亡领域权威期刊Cell Death & Differentiation（IF: 8.218）（芯片实验由Arraystar提供技术服务） 研究背景 上皮-间质细胞转化（EMT）过程是一个基本的细胞表型转变过程。期间上皮细胞失去胞间紧密连接和与基底膜的附着极性，转化为间质细胞，获得侵袭和迁移活性。在转录层面上，TGF-β可以直接激活EMT过程，导致下游通路和一系列基因表达的改变。除此之外， pre-mRNA的可变剪接和lncRNA的调控作用也在转录后层面上增加了调控层面的复杂性。LncRNA作为重要的调控型RNA分子，可以在多个层面影响EMT过程。目前已有的文章只研究了TGF-β信号下游和影响细胞稳定性的lncRNA，本文章的研究目的在于找到EMT早期起直接调控作用的lncRNA分子。 研究思路 为了探究EMT过程中直接影响早期调控的lncRNA分子，本次研究应用美国Arraystar mouse LncRNA芯片筛选TGF-β诱导NMuMG细胞系2h后差异表达的lncRNA和mRNA。其中435个lncRNA和1090个mRNA发生了显著差异变化。之后选择了表达下调的Spry1临近lncRNA—lnc-Spry1进行研究，qPCR验证表达趋势与芯片相符。 对该lncRNA进行功能研究发现，该分子在TGF-β诱导后15min就开始下调，说明是一个早期的调控分子，敲除Smad4后lnc-Spry1发生显著变化，因此该lncRNA分子是TGF-β-Smad依赖通路的靶标基因。将该分子进行shRNA敲除实验，发现间质细胞特征marker vimentin和Snail1升高，上皮细胞特征marker E-cadherin降低，产生迁移和侵袭表型变化，说明lnc-Spry1可以重塑细胞骨架，影响细胞迁移
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发酵罐在线清洗（CIP）系统基础知识
作者：德尔塔 日期：2022-04-21
一个具备工业使用的 CIP 系统应该具备以下特性: 通过消耗最少的水和化学药剂、消耗最少的电、蒸汽等成本，产生最小量的污水并实现剩余化学药剂的回收; 最大限度地避免 CIP 系统人为的操作失误，确保可重复的生产操作，而使产品质量产生的偏差达到最小; 可以在保证产品质量的同时缩短不同批次间的生产周期以及清洗次数。可以实现降低成本、提高效率、稳定产品质量以及扩大效益的目的。 1、传统清洗方式的不足 传统的手工清洗，会造成刷罐周期长，频率高的现状，直接导致产量降低。而且还可能导致罐类、换热器、管路清洗不彻底，留有死角，致使整个液糖化、发酵工段染菌。当长期清洗效率低下时，对后续的动力能源消耗、升酸差、残总糖、成熟醪酒分等指标造成很大负面影响。 2、在线清洗系统介绍 现在工业给在线清洗这样的一个定义，所谓的 CIP，就是英文 Clean in place,它的单词大写字母的缩写。主要是指当代大型的生产装置或者大型的设备在不拆卸或者正常生产的情况下进行清洗的方法。 3、CIP的优点 3.1.清洗彻底 3.2.高效清洗，提高装置有效运行时间，提高产品质量和品质； 3.3.减少了人为操作失误和不彻底的因素； 3.4.实现清洗液全回收，降低生产成本； 3.5.可以延长装置的使用寿命。 4、CIP 的组成 4.1清洗剂站: 相关清洗、消毒剂的调配、贮存系统，就酒精工业而言，主要是指液碱罐及相关附属设备。 4.2循环调节体系: 输送泵、清洗泵、回收泵及相关输送管路等设备。 4.3执行设备: 是指在设备和装置中预先安装好的低压或高压的各类喷头。 各类喷头 ASME BPE 2012 中对喷淋设备的分类为静态喷淋设备和动态喷淋设备两大类 所谓静态喷淋设备即固定式清洗球，这种清洗球的轴不能旋转。 旋转式清洗球 动态喷淋设备即为旋转式清洗球。在旋转式清洗球中，又分为单轴旋转式清洗球和多轴旋转式清洗球。单轴旋转式清洗球可旋转轴为中心轴，喷淋过程中清洗球围绕中心轴单作向圆周运动，一般来说圆周轨迹与水平
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染色质免疫沉淀（ChIP）技术的难点
作者：德尔塔 日期：2022-04-21
染色质免疫沉淀技术（Chromatin Immunoprecipitation，简称ChIP）是研究体内蛋白质与DNA相互作用的一种技术。它利用抗原抗体的特异性反应，可以真实地反映体内蛋白分子与基因组DNA结合的状况。下面我们就最基本的实验步骤，实验中的小技巧以及需要注意的问题简单介绍一下。 1. 细胞固定 甲醛能有效的使蛋白质-蛋白质，蛋白质-DNA，蛋白质-RNA交联，形成生物复合体，防止细胞内组分的重新分布。交联所用的甲醛终浓度为1%，交联时间通常为5分钟到1个小时。需注意的是，交联时间如果过长，细胞染色质难以用超声波破碎，影响ChIP结果，而且实验材料也容易在离心过程中丢失。交联时间如果过短，则交联不完全，产生假阴性。甲醛的交联反应可被加入的甘氨酸终止。 2. 染色质片段化 交联后的染色质需被超声波切成400~600 bp的片段，以便目的蛋白的暴露，利于抗体识别，其片段破碎的均匀一致性对结果影响至关重要。传统的超声波破碎是利用机械力断裂染色质，容易引起升温或产生泡沫，这都会引起蛋白质变性，进而影响ChIP的效率。而来自比利时的Bioruptor非接触式超声波破碎仪采用温和的破碎方式，保证了蛋白的活性，DNA破碎效果均一，同时外接水循环仪保证了实验的温度稳定性，成为目前ChIP实验的**。 3. 染色质免疫沉淀反应 Input对照： 在进行免疫沉淀前，需要取一部分断裂后的染色质做Input对照。Input需要与沉淀后的样品DNA一起经过逆转交联，DNA纯化，以及最后的检测。Input对照不仅可以验证染色质断裂的效果，还可以根据Input中的靶序列的含量以及染色质沉淀中的靶序列的含量，按照取样比例换算出ChIP的效率，所以Input对照是ChIP实验必不可少的步骤。 Beads选择： 接下来，利用目的蛋白质的特异抗体通过抗原-抗体特异反应形成DNA-蛋白质-抗体复合物，然后使用Agarose beads或Magnabeads沉淀此复合物，特异性地富集与目的蛋白结合的DNA片段。再经过多次洗涤，除去非特异结合的染色质后，用SDS+NaHCO3洗脱免疫沉淀
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【Molecular Devices应用文章下载】干细胞成像应用宝典
作者：德尔塔 日期：2022-04-21
干细胞成像应用宝典 干细胞（stem cells）是一类具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能的细胞群体干细胞。正是干细胞的这种特性，为细胞生物学的研究提供了更有力的永生化的稳定细胞株。干细胞水平的研究比在普通的细胞株提供了更接近临床相关性的生理学信息，并且和原代细胞相比更容易获得，且具有更好的实验重复性。 干细胞水平的实验比传统的单线性单参数的实验具有更多的检测目标，包括其分化能力、分化过程、分化类型及不同类型的量化分析统计等。高内涵成像分析系统以其自身的高分辨率、多参数及智能化分析的特性，恰如其分的满足了干细胞研究的以上需求，而高内涵成像系统的自动化和高通量的特点又以海量的有效数据加速了该研究的过程。 Molecular Devices提供了干细胞研究的完全解决方案。 ImageXpress® Micro 高内涵成像与分析系统和MetaXpress®分析软件是复杂成像实验的有力工具，多功能酶标仪成像模块和多种毒性试剂盒可以快速的完成高通量筛选，得到统计学意义的数据。 下载应用文章 美谷分子仪器（上海）有限公司 咨询服务热线: 400-820-3586 售前服务邮箱: info.china@moldev.com 售后服务邮箱: support.china@moldev.com 官方网站: www.MolecularDevices.com.cn 欢迎关注官方微信
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上海远慕浅谈影响胎牛血清质量的几大因素？
作者：德尔塔 日期：2022-04-21
一、外观 拿到血清，最先接触的是血清外观，对于缺少细胞培养经验的人来说，外观的判断尤为重要。 1、颜色 根据血红蛋白含量的不同，胎牛血清可表现出黄色或红色，我国的细胞培养用血清标准是不高于20mg/dl，实际上，血红蛋白含量的高低对血清并无直接影响，这个指标的意义在于能体现出采血过程的严谨规范程度，良好的操作能降低 血清的溶血。 国产血清的采血点很分散，大多是由屠户采血后马上离心收集，所以很少会有溶血，表现出明亮的蜡黄色，当然，国产血清也很少有标准意义上的胎牛血清。 进口胎牛血清或多或少总有点溶血，因为真正的胎牛血清凝血功能差，红细胞容易破裂。 总的来说，国产的血清呈现出蜡黄。进口的血清，质量**的呈现出谈黄、微红色，如Gibco16000，差点的呈现出橘红色或鲜红色。当然，热灭活血清或保存不当的血清，由于血红蛋白的破坏氧化，会呈现出暗红，甚至咖啡色。 2、沉淀 很多血清客户，会发现进口血清有沉淀，从而怀疑血清的质量问题，这是没有根据的。 血清中的沉淀是由纤维蛋白的凝聚产生，对血清质量没有任何影响，沉淀的产生原因很多，和厂家的加工生产方式密切相关。 国产的血清，大多来自北方，由于价格低廉，保存环境都不好，从采血、冷冻、运输到生产会经过多次冻融，每次冻融过程，就会析出部分纤维蛋白沉淀，这样，血清成品过滤后看起来反而更加的“干净”，很少有沉淀产生。 进口的胎牛血清，过滤分装前很少会反复冻融，生产后的成品也是清澈的，但随着时间的推移，血清中的大量纤维蛋白会析出形成沉淀。当然，进口的新生牛血清，一般牛龄都在2周左右，血清中的各种蛋白含量明显偏高，生产后血清可能会浑浊，甚至有大量沉淀。 当然，购买回来的血清都是冰冻状态，使用时需要融化，融化过程**在温度较低的状态下慢慢进行，否则沉淀相对较多，虽然沉淀并不直接影响血清的质量，但对细胞的显微观察有一定的阻碍。 3、澄清度
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