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正常角膜内皮细胞培养
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
正常角膜内皮细胞培养 实验材料： 1. 角膜材料：可以取自人眼、兔眼或者牛眼，人眼材料**来自胎儿； 2. 清洗液：不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加100IU/ml青霉素、100μg/ml链霉素，pH7.2； 3. 特殊器械：虹膜恢复器； 4. 消毒液：1：5000的升汞溶液与100IU/ml的庆大霉素生理盐水； 5. 消化液：0.25%胰蛋白酶-0.01%EDTA混合溶液； 6. 培养液：基础液由DMEM培养基加入HEPES 6.0g/L、NaHCO32.2 g/L以及L-谷氨酰胺0.06 g/L配制而成。应用液是在基础液内补加15%的胎牛血清、青霉素100IU/ml、链霉素100μg/ml，并用5% NaHCO3调节pH至7.0—7.2； 实验方法： 1. 切取角膜内皮层组织：以人眼为材料培养角膜上皮细胞时，**取自胎儿的眼角膜。因为成年人眼角膜细胞在体外培养时，生长活力不如胎儿眼角膜细胞； 1） 摘取眼球1只，用升汞溶液与庆大霉素生理盐水消毒液交替冲洗2次，以洗去眼球表面残留的血污并作初步消毒处理； 2） 无菌条件下，于角膜缘内侧1mm处作一环形小切口； 3） 用虹膜恢复器从切口处插入后弹力膜与角膜基质（实质层）之间，顺角膜弧度钝性分离去除整个角膜实质层； 4） 待角膜上皮层被完全分离之后，沿角巩膜缘内侧1mm处环形剪下全周内皮层组织； 2. 接种与培养； 1） 将所取的内皮层组织放在培养皿中，加入2—3滴牛血清； 2） 用角膜剪将其剪成约1.5mm×1.5mm大小的组织块； 3） 用无齿小镊子将组织块内皮面朝下平贴接种于培养瓶中； 4） 在培养箱中静置20—60min，待植块牢固黏附后，再加入足量培养液； 5） 按常规方法培养。每周换液2次；
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气相色谱常识
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
气相色谱常识 （gas chromatography 简称GC）是二十世纪五十年代出现的一项重大科学技术成就。这是一种新的分离、分析技术，它在工业、农业、国防、建设、科学研究中都得到了广泛应用。气相色谱可分为气固色谱和气液色谱。 分类 气相色谱可分为气固色谱和气液色谱。气固色谱的“气”字指流动相是气体，“固”字指固定相是固体物质。例如活性炭、硅胶等。气液色谱的“气”字指流动相是气体，“液”字指固定相是液体。例如在惰性材料硅藻土涂上一层角鲨烷，可以分离、测定纯乙烯中的微量甲烷、乙炔、丙烯、丙烷等杂质。 气相色谱发展历史 GC色谱的发展与下面两个方面的发展是密不可分的。一是气相色谱分离技术的发展，二是其他学科和技术的发展。1952年James和Martin提出气液相色谱法，同时也发明了第一个气相色谱检测器。这是一个接在填充柱出口的滴定装置，用来检测脂肪酸的分离。用滴定溶液体积对时间做图，得到积分色谱图。以后，他们又发明了气体密度天平。1954年Ray提出热导计，开创了现代气相色谱检测器的时代。此后至1957年，是填充柱、TCD年代。1958年Gloay首次提出毛细管，同年，Mcwillian和Harley同时发明了FID，Lovelock发明了氩电离检测器（AID）使检测方法的灵敏度提高了2～3个数量级。20世纪60和70年代，由于气相色谱技术的发展，柱效大为提高，环境科学等学科的发展，提出了痕量分析的要求，又陆续出现了一些高灵敏度、高选择性的检测器。如1960年Lovelock提出电子俘获检测器（ECD）；1966年Brody等发明了FPD；1974年Kolb和Bischoff提出了电加热的NPD；1976年美国HNU公司推出了实用的窗式光电离检测器（PID）等。同时，由于电子技术的发展，原有的检测器在结构和电路上又作了重大的改进。如TCD出现了衡电流、横热丝温度及衡热丝温度检测电路；ECD出现衡频率变电流、衡电流脉冲调制检测电路等，从而使性能又有所提高。20世纪80年代，由于弹性石英毛细管柱的快速广泛应用，对检测器提出了体积小、响应快、灵敏度
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电泳槽常见问题解决办法
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
电泳槽常见问题解决办法 手工粘接电泳槽的铂金电极孔处漏液 该处可能是因为电泳槽工作时间较长所至，对此应使用堵漏胶（稠合液）进行封堵即可。 模具水平电泳槽电极孔处漏液 检查电极下的密封圈是否被螺丝拧紧在正确位置或已经损坏。如有损坏需更换密封胶圈。 电泳槽有机板粘接处漏液或开胶 有机板开胶此类情况不宜发生，若发现开胶我们可以就地取材使用三氯甲烷进行局部粘接，等胶粘剂凝固后再用堵漏胶粘剂（稠合液）进行封堵即可。 电泳槽密封条漏液(垂直槽) 一般情况下，电泳槽较窄的密封条不易漏夜，反之较宽的则比较容易漏，此时先检查： 1、密封条是否老化或损坏，若已经老化或损坏，应更换密封条。 2、如果密封条完好无损，目测检查密封条是否有凹凸不平现象，如果有应将密封条拆下进行重新安装。安装时注意不要拉扯密封条，使其自然地嵌入密封槽内，并保证安装均匀，避免密封条出现凹凸现象。 3、如果缓冲液是从密封条的中间漏出，则说明漏处比两边凹（不在同一水平线上），我们则需要把密封条拆下，清理干净槽内胶粘剂，然后再将薄厚相当的窄边条（如0.4毫米）粘在槽内，以垫起凹下的密封条，使其与两边保持一致，此后再将密封条粘在槽内即可。 电泳槽内无电流（铂紧电极上无气泡） 1、首先利用万用表检查电泳仪有无输出电压（注意选择直流电压挡，输出不得超过量程，以免损坏万用表） 2、利用万用表电阻挡检查电泳输出线是否导通。 3、利用万用表电阻挡检查电泳槽电极插座与铂金丝之间是否可靠导通，重点检查输出插座与插头是否与连接铂金丝的焊片紧密连接，如发现松动请使用尖嘴钳将其紧固即可，完毕进行检测若还没有电流则检查铂金丝是否断裂，若铂金丝有断裂迹象则用电烙铁将其焊接，首先将助焊剂涂在铂金丝上再用电烙铁粘上焊锡将断裂的两段铂金丝焊连即可。 铝扳散热效果不佳 先检测铝板与玻璃板之间有无缝隙，若有缝隙首先应紧固螺栓，如果经坚固螺栓仍无法使铝板与玻璃板帖平，可将铝板拆下清理上面的
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零残留活性剂、零絮凝纳米球在免疫检测试剂中的应用
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
国家生化工程技术中心(北京) 1.现代免疫检测的工作原理 免疫检测是目前医疗卫生和生物科学研究领域常用的诊断方法。免疫检测的核心步骤为抗原-抗体间特异性的复合反应，通过复合反应产生检测信号，实现对溶液中抗体或抗原性的定量。由于抗体分子能够识别非常有限的分子种类，因此免疫检测能够获得极高的准确性。 酶标抗体技术是通过共价键将酶连接在抗体上，制成酶标抗体，再借酶对底物的特异催化作用，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，于普通显微镜或电镜下进行细胞表面及细胞内各种抗原成分的定位，根据酶标记的部位可将其分为直接法（一步法）、间接法（二步法）、桥联法（多步法）等，用于标记的抗体可以是用免疫动物制备的多克隆抗体或特异性单克隆抗体，**是特异性强的高效价的单克隆抗体。直接法是将酶直接标记在第一抗体上，间接法是将酶标记在第二抗体上，检测组织细胞内的特定抗原物质。 2. 纳米材料推动免疫诊断试剂盒的开发 随着材料科学的进步，纳米人工材料开始进入免疫诊断试剂的开发领域。纳米材料，特别是纳米球形材料被广泛应用于抗体/抗原分子的负载，在众多复合反应过程中起到增强信号的作用。通过载体的放大，检测灵敏度可提高几个数量级，达到准确的定量效果。 图 1. 纳米乳胶粒辅助的免疫检测；A：免疫比浊反应；B：免疫荧光检测；C：常规和纳米载体辅助的酶联免疫显色（HRP辣根过氧化物酶） A：免疫比浊检查，检测原理如图1A所示，免疫比浊试剂中抗体被固载于纳米颗粒表面，当抗体-抗原复合反应发生时，会造成纳米颗粒间聚集，通过分光光度计测量相应抗原/抗体添加前后液体浊度的变化。相比传统的分子间聚集，纳米乳胶的团聚体处于纳米尺度，会带来更明显的信号相应。 B：免疫荧光检测，检测原理如图1B所示，使用亚微米尺度的载体辅助初级抗体，载体粒径为400-800nm，同样需要将抗体固载于载体球表面，抗体抓住抗原分子后，再与荧光标记
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如何校正偏光显微镜的偏振片？
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
在实际操作中，偏正显微镜的上下偏振镜的振动方向要互相正交，或东西和南北方向，各自与目镜十字丝的横、纵向一致。有时只用一个下偏振镜来观测，必须确定下偏振镜的振动方向，因此操作时必须对偏振镜进行校正。 （1） 目镜十字丝的检测 一般要检查目镜十字丝是否正交，以及是否与上下偏振镜振动方向一致，同时选一块解理极完全的黑云母，移至目镜十字丝的中心，将解理缝平行于十字丝的一根丝，记下载物台的刻度数，再转动物台使解理缝平行于另一十字丝，记下载物台的刻度数，两个刻度数之差为90°，说明十字丝正交。 （2） 下偏振镜振动方向的确定和校正 一般用黑云母来检查下偏振镜的振动方向，这是因为黑云母是一种分布广泛的透明矿物，在单偏光下很有特征。首先找一块解理和清晰的黑云母，移至目镜十字丝中心，推出上偏光镜，转动载物台一周，观察黑云母颜色的变化，因为黑云母对解理方向的振动光吸收最强，所以使黑云母颜色达到最深时，解理缝的方向就是下偏光镜的振动方向。 （3） 上下偏振镜正交的校正 下偏振镜的方向校正好之后，取下薄片，推人上偏振镜，观察视域是否全黑即是否处于消光状态。如果全黑，则表明上下偏光的振动方向互相正交。否则，上偏振镜须进行校正，即转动上偏振镜，使视域达到最暗为止。转动时必须先松开上偏振镜的止动螺丝，校正好后再拧紧。 如对偏振镜校正方法还有疑问，欢迎咨询我司在线客服人员或来电咨询020-38250606.
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正常视网膜色素上皮细胞原代培养
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
正常视网膜色素上皮细胞原代培养 实验材料： 1. 材料来源：人眼、兔眼或者猪眼等； 2. 清洗液：不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加100IU/ml青霉素、100μg/ml链霉素，pH7.2； 3. 特殊取材器械：眼球托与7-0尼龙线。以灭菌的白色橡胶反口胶塞作为眼球托； 4. 消毒液：200IU/ml的庆大霉素生理盐水； 5. 消化液：0.01%EDTA-0.125%胰蛋白酶的混合消化液； 6. 培养液：为含10%胎牛血清的DMEM培养液； 7. 培养器皿：培养瓶、24孔培养板或培养皿若干； 实验方法： 1. 摘取眼球，用200IU/ml的庆大霉素生理盐水浸泡消毒5min。沿锯齿缘后2—3mm处环形剪开眼球前段，去除角膜、晶状体以及玻璃体。分离去掉视网膜神经上皮层。将眼球后段制成眼杯； 2. 将眼杯置于眼球托（可以洗净消毒过的盐水瓶胶塞替代）上，取持针器用7-0尼龙线在4个对称方向上，把眼杯缝合固定在眼球托的壁缘上； 3. 用毛细吸管轻轻从眼杯中吸出视网膜神经上皮层。以PBS液漂洗眼杯2次，吸干； 4. 加入0.01%EDTA-0.125%胰蛋白酶的混合消化液，置于无菌的烧杯中。于37℃恒温箱中消化30min； 5. 吸去消化液。用PBS液稍洗。加入有血清培养液终止消化酶的作用，并用毛细吸管轻轻吹打眼杯内壁，以使视网膜色素上皮细胞脱落； 6. 收集眼杯内的细胞悬液，离心（800r/min）8min； 7. 弃上清液，将沉淀的视网膜色素上皮细胞重新用培养液悬浮。计数； 8. 以8×104—10×104个/ml的密度接种于培养瓶中； 9. 送人培养箱中，按常规方法培养，每周换液2次； 10. 也可直接用机械分离植块法：用无齿镊撕下视网膜色素上皮细胞层，经PBS漂洗后，将其剪成1.5mm×1.5mm大小的组织块，直接接种于24孔培养板进行培养；
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正常小梁细胞原代培养
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
正常小梁细胞原代培养 实验材料： 1. 材料来源：人眼、兔眼或者猪眼等； 2. 清洗液：不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加100IU/ml青霉素、100μg/ml链霉素，pH7.2； 3. 器械：小梁剪与无齿镊等； 4. 消毒液：200IU/ml的庆大霉素生理盐水； 5. 培养液：基础液由DMEM培养基加入HEPES 6.0g/L、NaHCO32.2 g/L以及L-谷氨酰胺0.06 g/L配制而成。应用液是在基础液内补加15%的胎牛血清、青霉素100IU/ml、链霉素100μg/ml，并用5% NaHCO3调节pH至7.0—7.2； 6. 培养器皿：培养瓶、24孔培养板或培养皿若干； 实验方法： 1. 将离体的供体眼球用200IU/ml的庆大霉素溶液浸泡消毒5min； 2. 无菌条件下，沿角膜缘后5mm处环形剪开眼球，剪断晶状体悬韧带，去除晶状体和玻璃体； 3. 将眼前段倒放在培养皿中，在显微镜下用无齿镊把虹膜抹离角膜内皮面，暴露房角结构。用角膜剪紧贴虹膜与巩膜的附着部位，剪除色素膜； 4. 以PBS溶液或平衡盐溶液轻微冲洗小梁组织表面。用小梁剪伸入Schlemm管，楔形剪取小梁组织。前界至Schwalbe线，后界至巩膜嵴。环形取出一块小梁组织，置于培养皿中； 5. 经PBS漂洗后将小梁组织剪碎，几乎成浆状； 6. 用无齿镊挑起少许小梁组织，接种于24孔培养板后培养瓶皿中，轻轻铺平。待组织稍干后加入适量培养液，在CO2培养箱静置培养。第四天后开始换液，每周2次；
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Real-time PCR 基础知识
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
理论基础 聚合酶链式反应作为一种革命性的方法在生物学研究的历史中占据了重要的地位。以此为基础发展出包括real-time PCR在内的多项应用技术。自诞生后real-time PCR技术持续发展，从简单的增扩到整个PCR过程，real-time PCR表现出比PCR更敏感、更明确的定量分析特性和对识别等位基因的能力。 不少人以为real-time就是意味着可以在显示器上看到每个循环增扩曲线的增长。事实并非如此，早期的软件不能在运行期间提供可视化的增扩曲线。主要是因为SDS软件采用整个平台最终的数据执行数据分析工作，而不是分析每个单独的反应循环。对某些设备来说，必须向分析软件提供实时的最终的数据，有些设备则不需要。前一种设备允许软件实时跟踪每个加样口的增扩曲线，同时显示在电脑屏幕上。Real-time PCR其实是一种real-time设备。 RNA定量分析依靠逆转录酶制作cDNA（complementary DNA）。常见的逆转录酶有2种，AMV和MMLV。AMV是一种鸟类myeloblastosis病毒的二聚体蛋白质，MMLV来自于鼠科leukemia病毒的monomeric蛋白。2种酶都有RNase把RNA变性为RNA-DNA杂交体的活性，比较而言AMV有更高的RNase H活性。RNase H活性和依赖于RNA的DNA聚合酶活性能被mutagenesis区分开来。更重要的是每个AMV能把较多的分子聚拢在一起，推动增扩反应的进行。原生的AMV有高于MMLV的适用温度，42˚C对37˚C。修改后的变种可以有更高的温度极限，分别是AMV58˚C，MMLV55˚C。 按照以上的描述，大家可能认为改造后的AMV是适宜从RNA制作cDNA的酶。然而，在实际使用中经改造的MMLV工作的较好。其中的原因目前仍不明，猜测高温破坏了2种酶的聚合酶活性，但残留的DNA绑定活性对Taq polymerase形成物理障碍。二聚体构象和较高的温度极限也许使得AMV表现不佳。出于这个原因应在实验中尽可能少的使用逆转录酶。需要强调的是即使没有引物cDNA仍然能被逆转录反应制造出来，RNA模板的二级结构可能自我引发反应。有3种方法可以准备逆转录反应：oligo-dT，random
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简单介绍荧光显微镜操作
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
1.开机: 1.1.打开房间总电源开关 1.2.打开电脑电源开关 1.3.打开数码相机电源开关 1.4.打开显微镜电源开关(打开汞灯电源开关) 2.调试显微镜光路: 2.1.把载玻片放到载物台上。调节聚焦。 2.2.根据物镜指数乘0.8确定聚光镜光圈值,调整到位。 2.3.将视场光阑缩小,然后调节聚光镜高度,直到从目镜中观察到视场光阑的清晰成像。 2.4.放大视场光阑,使其在目镜中的黑框扩展到视野以外。 3.调试数码相机拍摄照片: 3.1.在显微镜取景器中对好视野及焦距。 3.2.打开photoshop程序。 3.3.点击"文件--自动–Kodakmds290acquine…。"调出相机控制窗口。 3.4.ZOOM定为77。拍摄图片格式为640*480不要改变。 3.5.在相机控制窗口上点preview,观察预览图象的亮度。选择适当的曝光时间使预览图片的亮度合适。 3.6.点拍摄按纽拍摄,等待几秒钟后图片传回电脑并在photoshop窗口里显示。 3.7.继续拍摄下一张照片。 3.8.拍摄十来张照片后要及时保存照片。 3.9.先关闭相机控制按纽。并保存拍摄条件到默认值。 3.10.在photoshop中保存刚拍摄的照片到指定文件夹中,保存后要关闭照片。 3.11.保存并关闭全部照片后重新打开相机控制窗口继续拍摄。 3.12.拍摄全部完成后保存所拍摄的照片。需要时将照片通过网络上传到校园网服务器上,不能使用U盘或软盘转移文件。或者将照片文件刻录到光盘上。 4.关机: 4.1.关闭显微镜电源。 4.2.关闭汞灯电源。 4.3.关闭数码相机电源。 4.4.关闭电脑时点"重新启动电脑",待电脑进入关闭状态并重新启动时按电脑电源开关强制关机。注意不能直接点击"关闭电脑"。 4.5.关闭房间电源总开关。
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海洋声学技术
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
海洋声学技术 海洋研究和开发所用的水声技术，如回声探测、被动探测、水声通讯、水声遥测和水声遥控等。 回声探测 利用一组换能器发射声信号，通过另一组换能器接收从目标反射的回声信号，再由处理后的信号判断目标的参数和性质。 回声测深仪 它向海底发射一束较窄的声脉冲，测量此信号由海底反射并回到水听器的时间，在声速已知的条件下，就可测出船只所在处的水深。现代大功率的测深仪，能够描绘出最深洋底的形状。多波束式或多振子的测深仪，可同时获得多个水深点的数据，并往往采用数字显示，和计算机联用而自动绘制海底地形图。 多普勒导航仪（多普勒声呐） 根据多普勒效应，若船只和海底有相对运动，回波信号就会产生频移。同时测量 4个波束中由于船只对海底相对运动而出现的频移，经信号处理后，就可精确地测出船只对海底的运动速度，并画出航迹来。多普勒声呐也是一种引导大型船只靠岸的有效工具。 鱼探仪 由它获得的鱼群回波，可大致判断出鱼群的位置、范围和密集程度。通常使用的垂直鱼探仪，可以探测底层的鱼类；水平鱼探仪则以探测上层和中层的鱼类为主。采用电子扫描等先进技术之后，探测的范围就大得多。 侧扫描声纳（海底地貌仪） 用以调查海底地质地貌的水声设备，种类很多，这是其中的一种。在船的两侧安装垂直方向角较宽而水平方向角很窄的一组换能器，记录海底的散射回波，就可获得离两侧船舷一定距离内精细的海底地貌声图。为了适应深水探测的需要，也可把换能器置于拖曳体中。此仪器还可用于海底油管的铺设检查和沉埋物的搜索等水下工程中。浅地层剖面仪使用低频声信号，可以穿透地层，从其回波的分析获得底质的结构资料，故广泛应用于水下工程的地质勘探。地震探测系统使用大功率低频声源、多道接收拖曳电缆和多道数据处理记录系统，可以取得深层地质结构的资料，用于海底石油及其他矿物的勘探等。爆炸声源发出的大功率低频声波，可以穿透到很深的底层。若在离爆炸
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选择比表面仪的必备常识
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
近来比表面测试仪市场竞争越来趋于白热化，有很多用户被广泛散布的网络消息迷惑了双眼，为便于用户选择质优价廉的比表面仪，作为仪器生产厂家，本着对用户负责的原则，简单介绍一下在购买比表面及孔径分布测定仪过程中需要了解的几个问题及注意事项： 一、比表面仪的广泛应用领域 催化剂，广泛用于石化、化工、医药、食品、农业、精细化工等领域吸附剂，如活性炭、分子筛、活性氧化铝等，广泛用于环保领域；颜填料，无机颜料、碳酸钙、氧化锌、氧化硅、矿物粉等；陶瓷材料原料，氧化铝、氧化锆、氧化釔、氮化硅、碳化硅等；炭黑、白炭黑、纳米碳酸钙等用于橡塑材料的补强剂等；新型电池材料，如钴酸锂、锰酸锂、石墨等电极材料；发光稀土粉末材料；磁性粉末材料，如四氧化三铁、铁氧体等；纳米粉体材料，包括纳米陶瓷材料、纳米金属材料，纳米银粉、铁粉、铜粉、钨粉、镍粉等； 其他，如超细纤维、多孔织物、复合材料、沉积物、悬浮物等。 二、比表面及孔径分析仪分类 连续流动色谱法：采用气相色谱仪中的热导检测器来测定粉体表面的氮吸附量的方法。以氮气为吸附质，氦气为载气，两种气体按指定比例混合达到一定的氮气分压，让混合气流经装有粉末样品的样品管，置于液氮温度下时，氮气分子在样品表面产生物理吸附，而氦气不被吸附，这时气流中氮气的浓度减少，在热导检测器的输出端产生电信号，形成氮气吸附峰。当样品管回到室温时，样品表面被吸附的氮气会全部脱附出来，形成一个脱附峰。吸（脱）附峰面积的大小正比于样品表面的氮吸附量。这种方法可以实现直接对比法快速测定比表面，BET比表面测定和介孔孔径分布测定，目前国内动态仪器趋向于一机多能，在仪器结构基本相同的情况下，只要软件功能齐全，就可实现既能测比表面，又能测孔径分布，而且也能实现自动化。 静态容量法：测量氮吸附量与动态法不同，他是在一个密闭的真空系统中，精密的改变粉体样品表面的氮气压力，从0逐步变化到接近1个大气压，用
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正常关节软骨细胞的短期培养
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
正常关节软骨细胞的短期培养 实验材料： 1. 软骨细胞来源：动物材料可选用未成年兔的膝关节、鸡胚胸软骨。人体材料可取自引产胎儿或成年人手术切除的软骨标本； 2. 清洗液：不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加100IU/ml青霉素、100μg/ml链霉素，pH7.2； 3. 消化液：0.2%胶原酶Ⅱ溶液，用PBS液配制，过滤除菌； 4. 培养液：RPMI1640或Ham F12、DMEM培养基，一般在培养液中加20%—30%的小牛血清； 5. 筛网：200目铜网； 实验方法： 1. 用手术刀片从关节表面削下软骨组织片，收集在PBS中。反复清洗除去软骨片表面的血液以及可能误带的滑膜组织。新鲜软骨呈乳白浅蓝色、半透明状，略具弹性； 2. 将软骨片充分剪成1mm3以下的组织块，用PBS清洗2次； 3. 按组织块与消化液的体积比例为1：10的量加入消化液，置于37℃水浴中轻微振荡消化5h以上，直至软骨组织块基本消失、溶液变浑浊为止。或采用分阶段消化法。即每消化1h就过滤、离心1次，将分离后的软骨细胞立即放入培养液中保存起来，这样反复进行，直至所有软骨组织块消化完全； 4. 以1500r/min离心10min。收集细胞； 5. 加入PBS清洗细胞； 6. 在细胞团中加入培养液制成细胞悬液，用200目铜网过滤，收集滤液； 7. 计数细胞，根据需要调节细胞密度； 8. 以1×105—1×106个/ml的密度接种。置于37℃、5%CO2、饱和湿度的CO2培养箱中培养。每2d换1次培养液； 9. 细胞长满瓶壁后，即可传代。届时，用PBS清洗培养物，加入0.125%胰蛋白酶溶液，37℃下消化。镜下观察可见大部分细胞间基质溶解消失。当细胞变圆时，小心倾出含酶液，加入培养液，吹打分散细胞； 10.分瓶接种并培养；
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正常人关节软骨细胞的长期培养
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
正常人关节软骨细胞的长期培养 实验材料： 1. 软骨细胞来源：20—24周自然流产胎儿的股骨和胫骨； 2. 清洗液：不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加100IU/ml青霉素、100μg/ml链霉素，pH7.2； 3. 消化液Ⅰ：2mg/ml胰蛋白酶和2mg/ml胶原酶混合消化液，用PBS液配制； 4. 消化液Ⅱ：0.5mg/ml胶原酶，用培养液Ⅰ配制； 5. 培养液Ⅰ：DMEM培养液，补充10%胎牛血清； 6. 培养液Ⅱ：DMEM培养液中补加10%胎牛血清、青霉素1000IU/ml、链霉素1mg/ml、两性霉素2.5μg/ml、谷氨酰胺2mmol/L、1%维生素添加剂（vitamin supplements）以及维生素C 50μg/ml； 7. 10% poly HEMA：称取6g多聚2-羟乙基甲基丙烯酸酯（2-hydroxyethylmethacrylate，poly HEMA），加到50ml 95%乙醇中，于37℃恒温振荡水浴箱中缓慢振荡过夜，次日将所得溶液离心（2500r/min，10min），除去未溶解的颗粒，此为干液。取1ml干液与9ml 95%乙醇混合，稀释成10%（V/V）的poly HEMA溶液； 8. 筛网：孔径为100μm的尼龙筛网； 实验方法： 1. 在无菌条件下，从20—24周自然流产胎儿的股骨头和胫骨坪切取骺软骨。用PBS液洗净血液。尽量除去纤维性组织； 2. 将软骨放入消化液Ⅰ中，于37℃孵育1h； 3. 弃孵育液。将软骨块充分切碎，加入消化液Ⅱ，在37℃孵育过夜； 4. 用尼龙筛网过滤，滤液中加入培养液Ⅰ。再经250g离心5min，弃上清液； 5. 用培养液Ⅰ将细胞团吹散，重新悬浮细胞，离心。重复4次。用培养液将最后得到的细胞团制成悬液； 6. 计数细胞。从每克软骨平均可获得大约3.0×108个软骨细胞； 7. 取0.9ml 10% poly HEMA溶液铺在直径为60mm的塑料培养皿内，水平放置在通风的超净工作台上干燥（过夜）； 8. 使用前将包被poly HEMA的培养皿用灭菌紫外灯照射30min； 9. 将含5×106个软骨细胞的悬液接种到已包被poly HEMA的培养皿中，在37℃、5%CO2、饱和湿度的CO2培养箱中培养； 10.每3—4d换一次液。培养可持续半年以上；
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石英晶体微天平的原理和应用
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
一、 石英晶体微天平的基本原理： 石英晶体微天平最基本的原理是利用了石英晶体的压电效应：石英晶体内部每个晶格在不受外力作用时呈正六边形，若在晶片的两侧施加机械压力，会使晶格的电荷中心发生偏移而极化，则在晶片相应的方向上将产生电场；反之，若在石英晶体的两个电极上加一电场，晶片就会产生机械变形，这种物理现象称为压电效应。如果在晶片的两极上加交变电压，晶片就会产生机械振动，同时晶片的机械振动又会产生交变电场。在一般情况下，晶片机械振动的振幅和交变电场的振幅非常微小，但当外加交变电压的频率为某一特定值时，振幅明显加大，这种现象称为压电谐振。它其实与LC 回路的谐振现象十分相似：当晶体不振动时，可把它看成一个平板电容器称为静电电容C，一般约几个PF 到几十PF；当晶体振荡时，机械振动的惯性可用电感L 来等效，一般L 的值为几十mH 到几百mH。由此就构成了石英晶体微天平的振荡器，电路的振荡频率等于石英晶体振荡片的谐振频率，再通过主机将测的得谐振频率转化为电信号输出。由于晶片本身的谐振频率基本上只与晶片的切割方式、几何形状、尺寸有关，而且可以做得精确，因此利用石英谐振器组成的振荡电路可获得很高的频率稳定度。 二、石英晶体微天平的主要构造： QCM 主要由石英晶体传感器、信号检测和数据处理等部分组成。石英晶体传感器的基本构成大致是：从一块石英晶体上沿着与石英晶体主光轴成35015'切割(AT—CUT)得到石英晶体振荡片，在它的两个对应面上涂敷银层作为电极，石英晶体夹在两片电极中间形成三明治结构。在每个电极上各焊一根引线接到管脚上，再加上封装外壳就构成了石英晶体谐振器，其产品一般用金属外壳封装，也有用玻璃壳、陶瓷或塑料封装的。石英晶体微天平的其他组成结构在不同型号和规格的仪器中也不尽相同，可根据测量需要选用或联用。一般附属结构还包括振荡线路、频率计数器、计算机系统等；电化学石英晶体微天平在此基础上还包括恒电位仪、电化
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仪器和测量技术中的DSP
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
概述 所谓信号处理是指对信号进行滤波、变换、分析、加工、提取特征参数等的过程。在电子仪器和测量中，最典型的是用频谱分析仪对信号进行频谱分析，从而了解和取得信号的频率（或频谱）特性。在现代计算机和相关的技术发展起来以前，这一过程只能用以硬线技术构成的传统的频谱分析仪实现。众所周知，这种传统的频谱分析仪，无论在设计制造还是所采用的元器件方面，都要求较高的水平。尤其是频率范围宽、指标高的，设计制造的难度就更高，而其价格也非常昂贵。但是，自从计算机及随之而兴起的数字信号处理（即DSP〉技术日趋成熟和发展起来以后，解决信号频谱分析的途径，正在逐步由DSP所取代。 关于离散傅立叶变换和数字滤波 作为信号处理，和频谱分析最直接相关的是傅立叶（Fourier）变换即FT。人们已经熟知，离散傅立叶变换（即DFT）和数字滤波是DSP的基本内容。目前，DFT已有许多实用有效的快速DFT算法即FFT算法和软件，其性能主要决定于采样（实际上还包括模/数转换）率和CPU的运算速度。将任意信号（主要是反映客观物理世界的各种变化量，而且多半是连续变化的模拟量）转换为能够由CPU处理的数字数据这一过程称为“数字化”，它包括采样和量化两个步骤，量化即通常所说的模/数转换。采样的速率和被处理的信号有关。为了保证数字化后的信号数据不丧失原信号的特性，采样频率应大于或至少等于信号截止频率的2倍。这就是著名的奈奎斯特（Nyquist）采样定理，或称奈奎斯特采样率。奈奎斯特采样定理是很容易证明的。至于CPU的运算速度，众所周知，现在的微机已达数百甚至上千兆赫的水平。为了提高或实现主要是FFT等运算的高速化，美国得州仪器公司（IT）很早开始就一直致力于专用的DSP芯片的研制和生产。著名TMS320系列芯片已为科技界所熟知。据最近报道，新的TMS320C64x的运行速度己高达600MHz，其内核的8个功能单元能在每个周期同时执行4组16位MAC运算或8组8位MAC运算。单个C64xDSP芯片能同时完成一个信
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