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实验室内eppendorf移液器的自行快速检测
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
移液器在使用过程中，如果怀疑其精确度，可根据以下提示自行检测： ● 移液器是否有漏气的问题？ 1. 自行检测： 目视法检测：将吸取液体后的移液器垂直静置 15 秒，观察是否有液滴缓慢 的流出。若有流出，说明有漏气现象。 压力泵检测：使用专用的压力泵，检测压力情况，判断是否漏气。 2. 可能的原因： - 吸头是否匹配？ —— 使用原装匹配的吸头 - 装配吸头时有无上紧？ —— 注意装配吸头的方法（详见 P6） - 移液器内部气密性不好？ —— 与 Eppendorf 公司维修工程师联系 ● 液体、移液器、吸头以及环境的温度差异是否会影响移液器的准确度？ 移取液体的温度与吸头和移液器的温度不一致的情况下，液体温度高于吸 头的，移取的液体体积会偏大，液体温度低于吸头的，移取的液体体积会 偏小。 ● 液体样品的密度和水是否有非常明显的区别？ Eppendorf 移液器出厂前的校准是用水作为标准液进行测试的，如果所操 作的液体与水的比重有很大差异，所给出的不精确度和不准确度就不能满 足，从而产生误差。 ● 吸液速度太快，是否会导致移液体积不准确？ 吸液速度太快会产生反冲和气泡，导致移液体积不准确。
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原代细胞鉴定技术
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
PriCells-原代细胞鉴定技术 一、形态学鉴定 1. 在倒置显微镜中直接观察活细胞的形态学特征 2. 细胞染色检查 ： a) 将无菌玻片置于细胞培养皿中，加细胞悬液后培养； b) 待细胞长满玻片后取出，用PBS清洗，之后放于载玻片上，待其自然干燥； c) 用PBS/甲醇（1:1）固定15分钟； d) 弃固定液，加合适的染色液染色； e) 染色完毕后用清水洗净，置于空气中干燥， f) 干燥后，用二甲苯透明，光学树脂封片后观察。 二、免疫组织细胞化学鉴定 1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片； 2. PBS清洗标本3次，各1 分钟； 3. 4%多聚甲醛固定15分钟； 4. 置于空气中干燥； 5. PBS清洗标本3次，各2 分钟； 6. 0.5%Triton X-100孵育 1次20分钟； 7. PBS清洗标本 3次 各2分钟； 8. 3%H2O2孵育 15分钟； 9. DPBS清洗标本 3次 各2 分钟； 10. 封闭血清孵育（5%正常二抗血清DPBS液20分钟） 11. 一抗孵育，4℃ 过夜或37℃ 60 分钟； 12. PBS清洗标本3次 各5 分钟； 13. 二抗工作液孵育（湿盒）37℃ 30 分钟； 14. PBS清洗标本3次 各5 分钟； 15. C液（湿盒） 37℃ 30 分钟； 16. PBS清洗标本3次，各5 分钟； 17. 用显色液进行显色； 18. 蒸馏水洗涤2次1 分钟； 19. 苏木素复染1分钟； 20. 清水洗涤30分钟； 21. 光学树脂封片后观察。
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无血清培养基一些基本配方
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
PriCells-无血清培养基一些基本配方 1、基本适应于神经细胞，干细胞，PC12细胞 葡萄糖 0.6% 谷氨酰胺 2mM NaHCO3 3mM Hepes 5mM 胰岛素 2.5mg/ml 转铁蛋白 100ng/ml 孕 酮 20nM 丁二胺 60mM 硒酸钠 30nM 青霉素 50mg/ml 链霉素 50mg/ml 最后用DF12添加到100ml。 2. 基本适应于各类小鼠胚胎癌细胞系培养基 NaHCO3 2.4g HEPES(1.5M) 10.0ml 硒酸（5 X 10-6M) 10.0mg 纤粘连蛋白 1ug/cm2 (37度作用15－30分钟） 胰岛素 1000.0mg 转铁蛋白 5000.0mg 青霉素 50mg/ml 链霉素 50mg/ml DMEM/F12 1:1混合添加到1000ml。
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细胞培养 + ELISA的结合产物：ELISPOT技术
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
PriCells-细胞培养 + ELISA的结合产物：ELISPOT技术 ELISPOT（Enzyme-Linked Immunosorbent SPOT, 酶联免疫斑点法）：是一种体外检测特异性抗体分泌细胞和细胞因子分泌细胞的固相酶联免疫斑点技术，是ELISA技术和细胞培养技术结合而发展的新型技术。使体外检测各种细胞产生细胞因子及细胞分泌抗体研究有了新的突破 ELISPOT技术优点： 1. 特异性和敏感性高：能从 20万-30万 细胞中检出 1个 分泌该蛋白的细胞。 2. 显色反应：显现清晰可辨的斑点可直接在显微镜下人工计数斑点或通过ELISPOT分析系统对斑点进行计数，1个斑点代表1个细胞，从而计算出分泌该蛋白的细胞的频率。 3. 某些研究不仅要测细胞因子生成量，还需检测分泌此细胞因子的细胞频率。 4. 基本方法与ELISA相似。 ELISPOT技术应用： 1. 疫苗研究 2. 自身免疫病研究 3. 肿瘤研究 4. 移植中排斥反应的预测 5. 感染和免疫反应研究 6. 抗原决定簇图谱分析 7. 化合物和药物免疫学反应的筛选 ELISPOT技术基本原理 1. Coated Captured Ab in the plates 2. Added stimulated or unstimulated cells in the plates 3. Cytokines or Ab bound to plates 4. Detected Ab with enzyme 5. Counted spots with automated ELISpot reader systems or manually, using a stereomicroscope References Czerkinsky et al., A solid-phase enzyme-linked immunospot (ELISPOT) assay for enumeration of specific antibody-secreting cells. J Immunol Methods 1983; 65: 109. Asai et al., Evaluation of the modified ELISPOT assay for gamma interferon production in cancer patients receiving antitumor vaccines. Clin Diagn Lab Immunol 2000: 7: 145. Vasan et al., Phase 1 Safety and Immunogenicity Evaluation of ADMVA, a Multigenic, Modified Vaccinia Ankara-HIV-1 B'/C Candi
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免疫荧光技术简介
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
免疫荧光技术简介 PriCells-免疫荧光技术（Immunofluorescence technique） 1941年，Coons等于首次采用荧光素进行标记而获得成功。这种以荧光物质标记抗体而进行抗原定位的技术称为荧光抗体技术（fluorescent antibody technique）。该技术的主要特点是：特异性强、敏感性高、速度快。主要缺点是：非特异性染色问题尚未完全解决，结果判定的客观性不足，技术程序也还比较复杂。 一、荧光免疫技术的概念： 免疫荧光技术（Immunofluorescence technique）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。将抗原或抗体用荧光素进行标记，标记的抗原或标记的抗体与相应的抗体或抗原反应后，测定复合物中的荧光素，这种免疫技术称为免疫荧光素技术。免疫荧光细胞化学分直接法、夹心法、间接法和补体法。 二、荧光免疫技术分类： （1）荧光抗体显微镜技术：抗原抗体反应后，利用荧光显微镜判定结果的检测方法。 （2）免疫荧光测定技术： 抗原抗体反应后，利用特殊仪器测定荧光强度而推算被测物浓度的检测方法 三、荧光的产生： 物质吸收外界能量而进入激发状态，在回复基态时多余的能量以电磁辐射的形式释放，即发光，这种光称为荧光。这种物质，称为荧光素。由光激发所引起的荧光，为光致荧光；由化学反应所引起的荧光，为化学荧光。 四、荧光素的荧光特性： （1）停止供能，荧光现象随即终止 （2）对光的吸收和荧光的发射具高度选择性入射光波长
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磁珠法分离小鼠T细胞和B细胞
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
PriCells: 磁珠法分离小鼠T细胞和B细胞 基本方案 用AUTOMACS系统进行总T细胞、CD4+细胞或CD8+T细胞的自动分离 实验材料 1、小鼠 2、HBSS洗涤缓冲液 3、MACS缓冲液 4、磁珠 5、RPMI-10完全培养基 6、AUTOMACS系统和分选柱 7、30μm尼龙网或40μm预分离滤膜 实验方法 1、用5只小鼠的淋巴结或2只小鼠的脾脏制备单细胞悬液并去除红细胞。 2、细胞在10mlHBSS洗涤缓冲液中混悬后用血细胞计数器计数。 3、细胞悬液在4℃，200g离心10min。弃上清后将沉淀按每108个细胞0.9ml MACS缓冲液的比例混悬。每108个细胞加入0.1ml适当的磁珠后在4℃孵育15min。 4、在孵育的时间里，打开AUTOMACS系统电源。按产品说明书中操作规程运行清洁程序。 5、细胞悬液在4℃，200g离心10min。弃上清，在沉淀中加入足量的MACS缓冲液使细胞浓度达到108个细胞/ml，充分混悬。将细胞通过30μm尼龙网或40μm预分离滤膜。用0.1～0.4mlMACS缓冲液冲洗滤网。 6、细胞放到AUTOMACS的上样通道。选择possel程序，这样标记的细胞将从阳性通道洗脱。 7、细胞悬液在4℃，200g离心10min。弃上清后将沉淀用2～5ml RPMI-10完全培养基混悬。计数。 附录： RPMI完全培养基： RPMI1640培养基含有: 2%、5%、10%、15%或20%FBS,56℃热灭活1h 2μmmol/L L-谷氨酰胺 50μmol/ml 2-ME 100U/ml 青霉素 100μg/ml 硫酸链霉素 RPMI-10完全培养基： 配制RPMI完全培养基加入: 10%（V/V）FBS 1mmol/L 丙酮酸钠 50μg/ml庆大霉素 10mmol/L HEPES 4℃可保存2周 过滤除菌 HBSS洗涤缓冲液： HBSS，含有： 5%（V/V）FBS 20mmol/L HEPES，pH7.0 100U/ml 青霉素 100μg/ml 链霉素 4℃可保存1个月 MACS缓冲液： PBS，pH7.2 0.5%（m/V）BSA 2mmol/L EDTA 过滤除菌 用于自动MACS系统，室温储存1个月
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小鼠单个核细胞分离一步梯度法去除死细胞
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
PriCells-小鼠单个核细胞分离一步梯度法去除死细胞 基本原理 活细胞（密度较小）和死细胞（密度较大）密度不同，从而有助于将活的淋巴细胞和红细胞分离。 附加材料 高密度溶液：Ficoll-Paque（Ficoll和泛影酸钠；Pharmacia LKB）或Lympholyte-M（Cedarlane） 12ml或50ml聚丙烯离心管（比聚苯乙烯离心管好） 注：Ficoll-Paque和Lympholyte-M的密度与温度有关；该方法中所采用的以及其他商品化的高密度溶液适合在室温中使用。因此应注意使细胞悬液、离心和高密度溶液控制在室温。否则会因活细胞沉入离心管底导致在密度界面上损失活细胞。 实验方案 1、用RPMI-5完全培养基混悬细胞，分装到离心管中使其细胞数达到0.5×108～1×108个细胞/2ml（12ml离心管）或1×108～5×108个细胞/5ml（50ml离心管）。 2、用移液器吸取3ml（使用12ml离心管时）或5ml（使用50ml离心管时）高密度溶液，将枪头伸到离心管底，缓慢将高密度溶液加入细胞悬液下方。 3、室温，800g离心15min。为了取得好的分离效果，**将离心机的“brake”开关关掉。 4、使用5ml移液器，沿高密度层表面缓慢移动移液器枪头，吸入漂浮在高密度层上方的活细胞，尽量少收集高密度溶液。将活细胞移入另一管中。 5、加入RPMI-5完全培养基（少量细胞加入10ml，细胞量较多时加入40ml），室温，200g离心10min。重复一次。 6、以适量培养基混悬细胞以便进行下一步操作。
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AUTOMACS系统自动分选体系分选小鼠CD4+ CD25+抑制性细胞
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
PriCells-AUTOMACS系统自动分选体系分选小鼠CD4+ CD25+抑制性细胞 由此方法得到的阴性细胞（CD4+ CD25-）可用作反应细胞或对照细胞 实验材料： 1. 小鼠 2. HBSS洗涤缓冲液 3. MACS缓冲液 4. CD8a（Ly-2）磁珠 5. 结合缓冲液 6. biotin-抗CD25（7D4） 7. Streptavidin-PE 8. 抗PE磁珠 9. 完全RPMI培养基 10. 小鼠CD3+T细胞富集柱和1×纯化柱缓冲液 11. 15ml离心管，无菌 12. autoMACS系统和分选柱 13. 30mm尼龙网或40mm预分离滤膜 实验方法： 1. 用20只小鼠的淋巴结制备单细胞悬液并去除红细胞。 2. 将细胞在20mlHBSS洗涤缓冲液中混悬后用血细胞计数器计数。 3. 将细胞悬液在4℃，200g离心10min。离心过程中，准备3支小鼠CD3+T细胞纯化柱，按说明书的指导用1×纯化柱缓冲液洗3遍。弃洗脱液，在每支纯化柱下方放置一支15ml离心管。 4. 用3ml 1×纯化柱缓冲液和3ml HBSS洗涤缓冲液混悬细胞。将细胞通过30mm尼龙网或40mm预分离滤膜后，每支纯化柱中加入2ml细胞。室温孵育15min。 5. 用2ml 1×纯化柱缓冲液洗涤纯化柱4或5遍以洗脱T细胞。用血细胞计数器计数后，将细胞悬液在4℃，200g离心10min。 6. 将沉淀按每108个细胞加0.9ml MACS缓冲液的比例混悬。每108个细胞加入0.1ml CD8a（Ly-2）磁珠后4℃孵育15min。 7. 4℃，200g离心10min。 8. 以MACS缓冲液混悬细胞，使细胞浓度达到108个细胞/ml。将细胞通过30mm尼龙网或40mm预分离滤膜。将细胞放到autoMACS的上样通道。选择depletes程序（CD4+ T细胞将从阴性通道洗脱。 9. 回收细胞计数，在4℃，200g离心10min。 10. 用结合缓冲液混悬细胞使其浓度达到108个细胞/ml。每108个细胞加入15mg biotin-抗CD25（7D4）。4℃孵育15min。4℃，200g离心10min。 11. 用结合缓冲液混悬细胞使其浓度达到108个细胞/ml。每108个细胞加入7.5mg Streptavidin-PE。4℃孵育15min。 12. 4℃，200g离心10min. 13. 用MACS缓冲
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小鼠脾脏树突细胞的分离－胶原酶消化制备脾脏细胞悬液
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
PriCells-小鼠脾脏树突细胞的分离－胶原酶消化制备脾脏细胞悬液 辅助方案： 胶原酶消化制备脾脏细胞悬液 实验材料： 1. 4000U/ml胶原酶D，融化后置于冰上 2. HBSS，已灭菌，含Ca+、Mg2+（购置于Life Technologies） 3. 小鼠脾脏 4. 皮下注射针，22G×11/2in内径（Becton Dickinson） 5. 10ml、5ml一次性注射器（如Becton Dickinson） 6. 100mm直径培养皿（如Falcon） 7. 2个高压灭菌锅的锯齿状解剖镊（如Roboz） 8. 高压灭菌的不锈钢网：将40目的不锈钢网剪成5cm×5cm的小方格，向下折叠边缘，然后将四边弯成浅的矩形碗；锡箔纸包裹后高压灭菌。 实验方法： 1. 将2管1ml的4000U/ml胶原酶D稀释（足够用于20个脾脏）：1ml加入9ml HBSS（稀释至4000U/ml，步骤8使用），1ml加入39ml的HBSS（稀释至100 U/ml）。置于冰上。 2. 将22G针头连接在10ml的注射器上，充满100 U/ml的胶原酶。将10ml的100 U/ml溶液加入100mm的培养皿中。 3. 取另外一个直径100mm的培养皿进行操作。一只手拿镊子，另一只手拿注射器，拇指放在活塞上。用镊子夹住小鼠脾脏，用针头刺入脾脏被膜的狭窄边缘，注入100 U/ml胶原酶100ml。用镊子将脾脏推向针头，使针头前进几毫米。重复注射胶原酶，继续直到1ml胶原酶都注射入脾脏，针头从另一端刺穿脾脏。 4. 用针头撕开脾脏，将其转移至含胶原酶的培养皿中（步骤2）。重复操作，直到所有脾脏都注射和撕开。 5. 从第二个培养皿中收集细胞悬液加入到置于冰上的50ml离心管中。用3ml 100 U/ml的胶原酶漂洗培养皿后加到上述50ml离心管中。 6. 加入3ml 100 U/ml胶原酶至培养皿中。将撕碎的脾脏依次转移至培养皿。用2个镊子将它们撕成边长1mm的小碎块，使其能通过5ml吸管的内径。当所有的脾脏都撕碎后，将先前放置脾脏碎块的培养皿中的胶原酶溶液加入进来，用5ml吸管猛烈吹打多次。 7. 倾斜培养皿，将大块碎片除开，将细胞悬液转移至第5步的置于冰上的50ml离心管
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气相色谱中的衍生试剂
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
气相色谱中的衍生试剂 气相色谱中化学衍生的作用主要是：1改善样品挥发性，2改善样品的峰形，3改善样品的分离，4提高化合物的检测灵敏度。 硅烷化衍生试剂 硅烷化试剂与样品化合物的衍生反应是通过硅烷基取代羟基，羧基，巯基，氨基及亚氨基的活性氢而进行的。衍生反应的产物是硅醚或硅酯。几乎所有含这些活性氢的化合物都能与硅烷化试剂发生衍生反应，其反应活性顺序：醇〉酚〉羧酸〉胺〉酰胺。 硅烷化衍生试剂包括三甲硅烷化衍生试剂，如六甲基二硅氮烷、三甲基氯硅烷、N-甲基-N-三甲硅基乙酰胺、N-甲基-N-三甲硅基三氟乙酰胺、N,O-双(三甲硅基)乙酰胺、N,O-双(三甲硅基)三氟乙酰胺、N-三甲硅基咪唑等；卤代硅烷基衍生试剂，如氯甲基二甲硅基氯硅烷、碘甲基二甲硅基氯硅烷、氯甲基二甲硅基二硅氮烷、碘甲基二甲硅基二硅氮烷、五氟苯基二甲硅基氯硅烷、特丁基五氟苯基甲硅氯硅烷、五氟苯基异丙基甲硅基氯硅烷等。 烷基化衍生试剂 制备烷基化衍生物的反应是亲核取代反应，衍生试剂的烷基取代化合物的酸性氢。衍生反应得到的产物是醚、酯、硫醚、硫酯、N-烷基胺、N-烷基酰胺。 烷基化衍生试剂包括重氮烷烃类，如重氮甲烷等；烷基卤化物类，如五氟苄基溴、碘乙腈等；季胺盐类，如氟化二甲基苯基苄基胺，氢氧化三甲基苯基胺；醇类，如1,1,1,3,3,3-六氟异丙醇等；烷基氯甲酸酯，如三氯乙基氯甲酸酯等。 酰基化衍生试剂 酰基化衍生反应的实质是衍生试剂的酰基取代极性化合物中的活性氢。该类试剂可用于醇、酚、硫醇、胺、酰胺、磺酰胺等化合物的衍生。 酰基化试剂主要有酰卤， 如4-乙酯基六氟丁酰氯、全氟辛酰氯等；酸酐，如乙酸酐等；酰基咪唑与酰胺，如全氟乙酰咪唑、N-甲基双三氟乙酰胺。 其他衍生试剂 形成环状衍生物试剂，如硼酸和顺式1,2-二醇反应生成的环状硼酸酯、含羰基的化合物与合适的二胺生成的杂环衍生物等；手性衍生试剂，如S-(-)-七氟丁酰脯氨酰氯、R-(+)-2-甲氧基-2-苯基-3,3,3-三氟丙酰氯等
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各种真空泵的工作原理
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
真空泵是用各种方法在某一封闭空间中产生、改善和维持真空的装置。真空泵可以定义为：利用机械、物理、化学或物理化学的方法对被抽容器进行抽气而获得真空的器件或设备。随着真空应用的发展，真空泵的种类已发展了很多种，其抽速从每秒零点几升到每秒几十万、数百万升。按真空泵的工作原理，真空泵基本上可以分为两种类型，即气体传输泵和气体捕集泵。随着真空应用技术在生产和科学研究领域中对其应用压强范围的要求越来越宽，大多需要由几种真空泵组成真空抽气系统共同抽气后才能满足生产和科学研究过程的要求，由于真空应用部门所涉及的工作压力的范围很宽，因此任何一种类型的真空泵都不可能完全适用于所有的工作压力范围，只能根据不同的工作压力范围和不同的工作要求，使用不同类型的真空泵。为了使用方便和各种真空工艺过程的需要，有时将各种真空泵按其性能要求组合起来，以机组型式应用。 各种真空泵的工作原理 水环式真空泵/液环真空泵工作原理 水环真空泵（简称水环泵）是一种粗真空泵，它所能获得的极限真空为2000~4000Pa，串联大气喷射器可达270~670Pa。水环泵也可用作压缩机，称为水环式压缩机，是属于低压的压缩机，其压力范围为1~2×105Pa表压力。 水环泵最初用作自吸水泵，而后逐渐用于石油、化工、机械、矿山、轻工、医药及食品等许多工业部门。在工业生产的许多工艺过程中，如真空过滤、真空引水、真空送料、真空蒸发、真空浓缩、真空回潮和真空脱气等，水环泵得到广泛的应用。由于真空应用技术的飞跃发展，水环泵在粗真空获得方面一直被人们所重视。由于水环泵中气体压缩是等温的，故可抽除易燃、易爆的气体，此外还可抽除含尘、含水的气体，因此，水环泵应用日益增多。 在泵体中装有适量的水作为工作液。当叶轮按图中顺时针方向旋转时，水被叶轮抛向四周，由于离心力的作用，水形成了一个决定于泵腔形状的近似于等厚度的封闭圆环。水环的下部分内表面恰好与叶轮轮毂相切，水环的上部
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密度高度以及其与温度、湿度、大气压力的关系
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
密度高度 和非标准大气条件下的空气动力学性能有关的更合适的术语是密度高度- 对应于特定空气密度时的标准大气条件下的高度。 密度高度是经非标准温度修正后的压力高度。当空气的密度增加(较低的密度高度)时，飞机性能增加，相反地，随着空气密度降低(较高的密度高度)时，空气性能降低。空气密度的下降意味着高密度高度；空气密度增加意味着较低的密度高度。密度高度用于计算性能。在标准大气条件下，大气中每个高度上的空气都有特定的密度，且在标准条件下，压力高度和密度高度表示的高度相同。因而，密度高度是标准大气条件下给定密度位置在海平面上的垂直距离。 密度高度的计算必须要考虑压力(压力高度)和温度。因为任何高度上飞机性能是基于标准白天条件下的空气密度，应用到空气密度高度的这个性能数据可能和高度计指示不一致。在高于或者低于标准的条件下，这些高度不能直接从高度计来计算。 密度高度先通过首次测得的压力高度来计算，然后为非标准温度的变化而修正这个高度。由于密度直接随压力而变化，随温度相反地变化，允许密度变化的时候一个给定的压力高度可能存在于很大范围的温度 内。然而，一个已知的密度会在任何一个温度和压力高度下发生。当然，空气的密度对飞机和发动机性能有明显的影响。不管飞机运行的实际高度是多少，它会表现出好像它运行在一个等于当前密度高度的高度上。 例如，当设定为29.92时，高度计可能指示压力高度为5000英尺。根据飞机飞行手册/飞行员操作手册，在标准温度条件下 起飞时的地面滑跑可能要求距离为790英尺。然而，如果温度是标准之上的20摄氏度，空气的膨胀提高了密度高度。使用表格或者图表中的温度修正数据或者用计算机得出密度高度，可能发现密度高度是7000英尺，需要的地面滑跑距离可能会接近1000英尺。 空气密度受高度，温度和湿度变化的影响。高密度高度指的是稀薄空气而低密度高度指的是稠密的空气。导致高密度高度的条件是高海拔高度，低大气压力，高温，高
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色谱室应该如何设计
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
色谱室色谱台高0.75米，宽0.80米，台面离墙0.5米，，TCD检测器的尾气要用管线连接到室外。色谱用助燃气可用空气压缩泵，氢气可用氢气发生器，也有用三气发生器的，色谱室要配备样品 处理间，样品处理间要有通风橱，上下水，药品柜。 电路：单相三线（火、零、地），仪器多的色谱室三相五线。 气路：一般设三种气路管线，氮气、氢气、空气，有条件的可加氦气。气路由室外钢瓶间进入室内，气路上要加过滤器进入室内 后总管线通过稳压阀分向每一台色谱仪，在连接每一台色谱仪前加针型阀。 通风：色谱室有氢气和燃烧放出的二氧化碳，因此要有良好的通风，一般在房间靠走廊侧墙的下边离地面200mm高设400×400mm 的百叶通风口。 室温：色谱室温度一般要求在22-27度，大的化验室都采用整体空调，空调出风口要设在房间的上部，风不能直吹色谱仪。 液相色谱是用于分离和分析蛋白质、肽、氨基酸、复杂有机物等的一种经典和有效的方法。绝大部分低挥发性有机物均可使用液相色谱进行分离和检测。由于各组份具有不同的物理或化学性质，当它们通过不同的分离介质或改变分离条件时，利用在保留时间上的差异，就可以有效地分离出所需的组份。按压力大小液相色谱可分为：高压液相色谱、中压液相色谱和常规液相色谱。液相色谱还可以使用一种或多种检测器来检测样品，常用有：紫外、电导、pH、荧光、电化学、红外联用、圆二色谱仪、折光率检测仪、质谱和生物反应器等。目前液相色谱在分子生物学、药理学、有机化学等研究中起到相当重要的作用。 液相色谱室色谱台高0.75米，宽0.80米，台面离墙0.5米，液相色谱不易和气相色谱放在一个房间，液相色谱室要配备样品处理间，样品处理间要有通风橱，上下水，药品柜。 电路：单相三线（火、零、地），仪器多的色谱室三相五线。 通风：液相色谱室有有机气体，因此要有良好的通风，在仪器上方安装排风罩（如图所示），采用屋顶风机，一般在房间靠走廊侧墙的下边离地面2
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正常人脐静脉内皮细胞的培养
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
正常人脐静脉内皮细胞的培养 实验材料： 1. 婴儿脐带； 2. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素，pH7.2； 3. 培养用液：M199培养液（含20%小牛血清）；0.125%胰蛋白酶-0.01%EDTA（1:1，V：V）混合消化液；D-Hanks液、100IU/ml青霉素和100μg/ml链霉素； 4. 培养器具：玻璃插管与输液胶管，培养瓶或皿、白内障、眼科剪、镊子等； 培养方法： 1． 在无菌条件下，取健康产妇分娩后新鲜的婴儿脐带（长20cm以上，不宜超过6h），选择无夹痕、无扭曲、无凝血阻塞的部分； 2． 在脐静脉两端开口处，分别用丝线扎紧并固定在50ml注射器和带输液胶管的玻璃插管上，注入D-Hanks液冲洗脐静脉，至无血迹； 3． 用止血钳夹住玻璃插管上的输液胶管，从另一端的注射器向脐静脉徐徐注入0.1%胶原酶溶液，至血管充盈。注意两端封闭，以防液体返流。立即放入37℃的无菌D-Hanks液内，15min后取出； 4． 通过注射器吸取收集酶液，同时注入含20%小牛血清的M199培养液冲洗静脉，合并于同一离心管内，以1000r/min离心7—10min； 5． 弃去离心沉淀后的上清液。加入20%小牛血清的M199培养液（pH7.2），重新悬浮细胞。并调整至细胞密度为1.5×105—2.0×105个/ml，接种于培养瓶或培养皿中。置37℃,5%CO2培养箱培养； 6． 第二天弃培养液，用D-Hanks液轻轻洗1次，以去除不贴壁的细胞或死细胞。换入新鲜含20%小牛血清、100IU/ml青霉素和100μg/ml链霉素的M199培养液（pH7.2）。继续置37℃,5%CO2培养箱培养； 7． 每2—3d换培养液1次。换液时将原培养液弃掉1/2—2/3，然后加入新鲜的上述培养液至原来的量。待细胞长至融合状态后，即可行传代培养；
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中国科学家为植物在有氧条件下释放甲烷提供新的证据
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
日前，中国科学院西北高原生物研究所曹广民研究员及中国科学院地理科学与资源研究所徐兴良副研究员带领研究小组，在青藏高原生态系统甲烷排放研究方面取得重要成果。其研究论文“Methane Emissions by Alpine Plant Communities in the Qinghai–Tibet Plateau”已在著名生物学刊物Biology Letters上正式发表。这是首次关于青藏高原高寒生态系统植物群落甲烷排放相关研究成果的报道。该项成果一经发表，即得到了国际学术界的和媒体广泛关注，世界著名的学术刊物《自然》（Nature）对该项目的参与完成人、中国科学院西北高原生物研究所所长赵新博士进行了专访，并在“NATURE NEWS”上发表了重要评论，英国皇家化学会（RSC —Royal Society of Chemistry)也在其网站刊登了相关报道。 该项研究采用密闭箱式法，选择青藏高原两种主要高寒草甸群落类型，对高寒草甸生态系统甲烷排放进行了长达三年的监测，取得了重要的研究数据。研究结果表明，高寒草甸植物在地球甲烷循环中具有重要的作用，同时，在进行高寒草甸生态系统对大气甲烷的贡献作用研究中须将植物类群和生长环境的不同纳入考虑因素。 世界著名学术杂志《自然》（Nature）就这一研究成果对中国科学院西北高原生物研究所所长赵新全博士进行了专访，并在2008年8月20日的NATURE NEWS 中刊登了题为“Tibetan Meadows Emit Methane-Field Survey Confirms That Plants Can Boost Levels of the Greenhouse Gas.”(青藏高原草甸释放甲烷——野外监测证实植物可能增加温室气体的排放)的评论文章。文章指出，早在2006年，德国科学家Frank Keppler就揭示出植物可能在大量地释放甲烷，而甲烷正是众所周知的造成地球表面温室效应的罪魁祸首之一。这一发现与过去人们一直以来认为植物可以吸收二氧化碳从而有效抵制大气变暖的理论正好相反。根据Frank Keppler的实验结果，全球范围内，植物每年约释放23,600万吨甲烷，约占甲烷总释放量的30％。然而，针对这一理论，不同的研究组得出的
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