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工业相机与一般相机的区别
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
工业相机（Industrial Camera）的确比较贵。 (http://www.aftvision.com )是国内少数几个能够自主研发工业相机的公司之一，比较清楚工业相机与普通相机（DSC）的区别： 1、工业相机的快门时间非常短，可以抓拍快速运动的物体。 例如，把名片贴在电风扇扇叶上，以最大速度旋转，然后用工业相机抓拍一张图像，仍能够清晰辨别名片上的字体。用一般的相机来拍摄，是不可能达到这样效果的。这里边的技术问题相当棘手，不在此赘述了。 2、工业相机的图像传感器是逐行扫描的，而一般摄像机的图像传感器是隔行扫描的，甚至是隔三行扫描的。 逐行扫描的图像传感器生产比较困难，成品率低，出货量也少，世界上只有少数几个公司能够提供这类产品，例如Dalsa、Sony，而且价格昂贵。百万级逐行扫描ccd的价格，从人民币4000元到3万元不等，其中的技术参数繁多，也不在此赘述了。只有采用逐行扫描的图像传感器，才有可能清晰抓拍快速运功物体。 如AFT-VD高速工业数字相机、AFT-VS系列1394接口CCD工业相机，无论从价格还是质量都是非常不错的。 3、工业相机的拍摄速度远远高于一般相机。 工业相机每秒可以拍摄十幅到几百幅图片，而一般相机只能拍摄2-3幅图像，相差太多了。 4、工业相机输出的是裸数据（raw data），其光谱范围也往往比较宽，比较适合进行高质量的图像处理算法，例如机器视觉（Machine Vision）应用。而一般的相机（DSC）拍摄的图片，其光谱范围只适合人眼视觉，并且经过了mjpeg压缩，图像质量较差。 机器视觉图像采集产品专业研发制造商 ＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝ 西安艾菲特光电技术有限公司 地 址：西安市南二环东段1号楼东方广场14层 邮编:710061 联系人：吉婧 销售工程师13488226980 QQ:906082413 西 安：(029)62273900 62273911 网址： http://www.aftvision.com Email：xamv11@126.com AFT@AFTvision.com
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目镜和物镜的使用方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
一般都是用一个放大倍数适中的目镜（10×）和最低倍的物镜开始观察，逐步改用倍数较高的物镜，从中找到符合实验要求的放大倍数。 转换物镜时，先用低倍镜观察，调节到正确的工作距离（成像最清晰）。如果进一步使用高倍物镜观察，应在转换高倍物镜之前，把物像中需要放大观察的部分移至视野中央（将低倍物镜转换成高倍物镜观察时，视野中的物像范围缩小了很多）。低倍物镜和高倍物镜基本齐焦（同高调焦），在用低倍物镜观察清晰时，换高倍物镜应可以见到物像，但物像不一定很清晰，可以转动细准焦螺旋进行调节。 通常认为，使用任何一个物镜时，有效放大倍数的上限是1，000乘它的数值孔径，下限是250乘它的数值孔径。如40×物镜的数值孔径是0.65，则上、下限分别为：1000×0.65=650倍和250×0.65≈163倍，超过有效放大倍数上限的叫做无效放大，不能提高观察效果。低于下限的放大倍数则人眼无法分辨，不利于观察。一般最实用的放大倍数范围是500—700乘数值孔径之间的数字。
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显微摄像装置之单反相机工作原理
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
单反数码相机指的是单镜头反光数码相机，即Digital（数码）、Single（单独）、Lens（镜头）、Reflex（反光）的英文缩写DSLR。目前市面上常见的单反数码相机品牌有：尼康、佳能、宾得、索尼等。单反相机现在也很多人应用到显微镜上，成为显微摄像装置的一种。 单反相机的工作原理： 在单反数码相机的工作系统中，光线透过镜头到达反光镜后，折射到上面的对焦屏并结成影像，透过接目镜和五棱镜，我们可以在观景窗中看到外面的景物。与此相对的，一般数码相机只能通过LCD屏或电子取景器（EVF）看到所拍摄的影像。显然直接看到的影像比通过处理看到的影像更利于拍摄。 在DSLR拍摄时，当按下快门钮，反光镜便会往上弹起，感光元件（CCD或CMOS）前面的快门幕帘便同时打开，通过镜头的光线便投影到感光原件上感光，然后反光镜便立即恢复原状，观景窗中再次可以看到影像。单镜头反光相机的这种构造，确定了它是完全透过镜头对焦拍摄的，它能使观景窗中所看到的影像和胶片上永远一样，它的取景范围和实际拍摄范围基本上一致，十分有利于直观地取景构图。 如果要问什么是相机中最重要的部件，我想绝大多数的人都会说：镜头！因为它的好坏直接影响到拍摄成像的质量。同时镜头也是划分相机种类和档次的一个最为重要的标准。一般来说，根据镜头，我们可以把相机划分为专业相机，准专业相机和普通相机三个档次，无论是传统的胶片相机还是数码相机，都可以适用于这个划分。 专业相机也叫单反相机，完整的应该叫做单镜头反光相机。这类相机的反光镜和棱镜的独到设计使得摄影者可以从取景器中直接观察到通过镜头的影像。光线透过相机的镜头到达反光镜后，折射到上面的对焦屏并结成影像，透过接目镜和五棱镜，摄影者可以在观景窗中看到外面的景物。拍摄时，当按下快门键，反光镜便会往上弹起，前面的快门幕帘便同时打开，通过镜头的光线（影像）便投影到感光部件（传统相机是胶片，数码相机则是CCD或是CMOS）上使
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LightCycler最新应用--甲基化分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
主要应用: 应用实时荧光PCR技术进行快速准确的DNA甲基化分析 DNA甲基化是表观遗传学的重要研究内容之一，它可以在转录水平抑制基因的表达。具体的过程是在胞嘧啶－鸟嘧啶（CpG二核苷酸）的5位碳原子上添加了一个额外的甲基团，形成5－甲基胞嘧啶。CpG二核苷酸密度较高的区域在人体基因组中呈非随机分布于，优先分布于基因的启动子区，并被称为CpG岛[1]。对于癌症，其基因组的甲基化分布发生变化[2]。正常状态下应甲基化的区域未甲基化，而症状状态下非甲基化区域出现甲基化，例如CpG岛相关启动子呈超甲基化。这可导致受累基因座的染色质结构发生变化，致使基因沉默。启动子超甲基化可导致有关肿瘤演进的重要基因再次沉默，例如那些有关DNA修复、细胞周期调控和凋亡的基因。因此，可以认为DNA甲基化与肿瘤研究密切相关。肿瘤中某些基因的DNA甲基化状态的变化通过其生物学特征反映出来。因此，评估DNA甲基化的快速高通量方法对研究者和临床医生在诊断、**和预后都非常有实用价值[3]. 当前对于DNA甲基化研究，普遍使用的方法有甲基化特异性PCR，变性高效液相色谱法（DHPLC），联合亚硫酸氢钠限制性内切酶分析法（COBRA）等，这些方法各有优势，但是均存在诸如实验设计复杂，易产生假阴性或假阳性等问题，提示科学家寻找更加容易且准确的分析手段。 甲基化敏感性高分辨熔解分析（MS-HRM）是近年兴起的一种适用于评估特定基因DNA甲基化的新技术[4]。它基于当前实时荧光PCR仪器的前沿应用 – 高分辨率熔解曲线分析（HRM），使用既可扩增甲基化序列也可扩增非甲基化序列的引物对来自经重亚硫酸盐修饰的DNA的相关区进行PCR扩增。重亚硫酸盐修饰DNA，让非甲基化的胞嘧啶转换为尿嘧啶，而5－甲基胞嘧啶保持不变，随后通过PCR扩增检测感兴趣区域的甲基化状态。在MS-HRM中，在饱和的DNA结合染料存在的情况下进行PCR反应，在扩增后进行高分辨熔解曲线分析，HRM分析的特点为可以区分扩增产物中少至1个碱基变化的序列差异，从而通过尿嘧
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HPLC前处理-过滤颗粒物来源
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
目前，HPLC已成为不可或缺的分析仪器。为了提高数据的可靠性和延长HPLC寿命，过滤是相当必要的。下面围绕液相前处理过滤时颗粒物主要的三种来源进行说明。 一、过滤的必要性 任何颗粒物进入HPLC系统后都会在柱子入口端被筛板挡住，最后的结果是将柱子堵塞，表现出的特征是系统压力增加并使色谱峰变形。因此，要采取各种预防措施，包括操作步骤和仪器自身的各种过滤设计，尽量减少颗粒物进入HPLC系统中，从而延长仪器和色谱柱的使用寿命，并提高数据的可靠性。 二、颗粒物的主要来源 颗粒物的主要来源有三个途径：流动相、被测样品和仪器系统部件的磨损物。 1、流动相 如果流动相均由高效液相色谱级溶剂组成，流动相没有必要过滤。这是因为高效液相色谱级的有机溶剂，例如乙腈、甲醇等，在制造的工艺过程中都已经过了0.2μm微孔滤膜过滤。同样的，无论你是买的HPLC级的水还是在实验室使用超纯水净化系统制备的水，最后一步也是通过0.2μm微孔滤膜。 2、被测样品 液相系统中的第二个颗粒物来源是被测样品。一些实验室在将他们的样品放置在自动进样器盘（或手动进样）以前，所有样品都先通过一个0.45μm针筒式过滤器过滤。这是一个有效除去被测样品中颗粒物的方法。但这个过程存在的问题：使用了针筒式过滤器，通过过滤器的被测样品，总会有或多或少的损失。主要来自这样几方面：过滤器滤膜的吸附、过滤器滤出的颗粒物上的吸附、针筒式滤膜过滤器与针筒连接处的渗漏等。在实际分析中，一般检测每一组样品会带一个外标，所以，只要最终检测时得到的信噪比能满足检出限要求，可将这步视为系统误差而忽略。 3、仪器系统部件的磨损物 在HPLC系统中颗粒物的另一个主要来源是输液泵密封垫和进样阀旋转轴的磨损。当然，输液泵的密封垫和旋转轴的密封垫磨损将增加更多研磨物在流动相中，加速对这些部件的损伤。无论颗粒物源于何物，实验时都要将其除去。
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正常大兔脑微血管内皮细胞的培养
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
正常大兔脑微血管内皮细胞的培养 实验材料： 1. 正常兔大脑皮质组织； 2. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素，pH7.2； 3. M199培养液（含20%小牛血清、肝素25U/ml、HEPES 10mmol/L、100IU/ml青霉素和100μg/ml链霉素）；D-Hanks液；0.05%胰蛋白酶溶液；0.05%胶原酶溶液；15%右旋糖苷（用Hanks配制，pH7.4）； 4. 匀浆器、手术刀、解剖剪、解剖镊、眼科剪，眼科镊，止血钳，无菌消毒手术器械； 5. 离心管（15ml、50ml） 6. 网筛：110μm尼龙网筛 实验方法： 1. 通过颈动脉放血将兔处死，去头皮。将头颅取出并浸入75%的乙醇中，消毒约1min。在无菌状态下迅速取出兔大脑皮质。需小心剔除大血管和软脑膜； 2. 将脑皮质放入D-Hanks液中，漂洗数次后，将其剪碎。再移入含0.05%胰蛋白酶溶液的小瓶内，在37℃水浴中消化10—20min； 3. 用有血清培养液中止消化。置于玻璃研磨器内研磨，制成粗悬液。经孔径为110μm尼龙筛网过滤，将滤液以4000r/min离心10min； 4. 弃离心后的上清液。给沉淀加入15%右旋糖苷溶液，重新悬浮沉淀。然后，再以4000r/min离心20min。收集微血管片段； 5. 用0.05%胶原酶溶液消化2—4h。用Hanks液洗涤并离心，给微血管片段加入M199培养液； 6. 接种到培养瓶中，置37℃、5%CO2的培养箱中（湿度100%）培养 7. 24h后换液，将未贴壁的微血管段移入其它培养瓶或皿中继续贴壁生长。之后，每3d换液一次，待细胞长至融合状态时，即可进行传代培养；
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三聚氰胺 ELISA检测试剂盒说明书
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
1.概述 此试剂盒的原理是酶联免疫测定法，这个试剂盒可用于一切样品中三聚氰胺的定性或定量检测。如果需要进一步测定可以利用HPLC, GC/MS技术。 2.安全指导 试剂盒标准中含有少量的三聚氰胺，另外，底物溶液中含有四甲基联苯胺，终止液里含有稀释的盐酸。尽量避免不要和这些试剂接触，如果这些试剂接触到皮肤请马上用水冲洗。 3.存储和稳定性 试剂盒应在 4–8℃保存，在使用前试剂盒内的所有试剂都要回温到室温(20-25℃)在有效期内试剂可以一直使用 4．原理 酶联免疫吸附测定法定量测定三聚氰胺残留。将标准、样品提取物和三聚氰胺酶标记物加入到已经包被有三聚氰胺抗体的微孔中开始反应。在30分钟的孵育过程中，样品萃取物中的三聚氰胺与三聚氰胺酶标记物竞争结合微孔中的三聚氰胺抗体，孵育30分钟后洗掉微孔中所有没有结合的三聚氰胺及三聚氰胺酶标记物。在用稀释的洗液清洗结束后，每孔中加入清澈的底物溶液，结合的酶标记物将无色的底物转化为蓝色的物质。孵育20分钟后停止此反应，根据各孔颜色深浅进行数据读取。依据标准的颜色得出样品中三聚氰胺的的浓度值。 5.局限性 我们已经对可能出现在检测样品中的很多有机和无机物做了检测，发现它们不和这个试剂盒发生交叉反应。然而在样品中也有一些易变质的化合物，它们通过基质影响来干扰测定，如含脂肪的食品，它们在测定前要通过稀释来消除一些基质影响。在使用的过程中出现失误也会影响结果，例如试剂盒存储的条件、吸取液体的程序、吸取液体的不准确、在发生免疫和底物反应的过程中孵育时间不准确。 6．工作数据 敏感性：三聚氰胺检测限10 μg/L，B/B0为50%时的值为150 μg/L，测定结果在标准曲线的中间是最精确的。 重复性： 标准的变异系数(CVs)
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氯霉素ELISA检测试剂盒
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
1 概述 氯霉素ELISA免疫检测方法用于定量或定性检测受污染样品中氯霉素的含量。如果需要阳性样品可以通过HPLC, GC/MS其它的传统方法来验证。 2 安全性指导 试剂盒中的标准含有少量的氯霉素。底物中含有TMB。终止液中含有稀硫酸。避免终止液与皮肤和粘膜接触，如果不小心接触了请用大量的水冲洗。 3 储存和稳定性 氯霉素ELISA试剂盒应该保存在4–8°C。在使用前一定要回复到室温（20-25°C）。试剂盒在有效期内都可以使用。供应的抗体是低压冻干的（3管）。在做检测之前抗体需要用合适的稀释液稀释。每次稀释都要根据每次测量的样品数定，不要稀释的太多，因为稀释后在冰箱中仅能保存1周。 4 原理 原理是直接竞争酶联免疫检测方法。通过克氯霉素特异性抗体来识别氯霉素。样品中的氯霉素和氯霉素酶结合物竞争与鼠抗氯霉素抗体的结合位点结合。氯霉素抗体和包被在微孔板上的羊抗鼠二抗结合。经过一个洗涤步骤加入底物溶液，发生显色反应（产生蓝色）。蓝色的强度和样品中氯霉素的含量成反比。经过一个特定的时间显色反应被终止。用酶标仪测定。通过绘制标准曲线计算样品中氯霉素的含量。 5 试剂盒的限制和干扰因素 样品中经常出现的多种有机物和无机物已近作过检测对此试剂盒的检测结果并无干扰。由于化合物的易变质性由基质反应引起的干扰是不可能完全避免的。操作不当可能导致检测结果错误，比如：试剂盒保存条件不对、错误的加液顺序、试剂的量没有加准确、孵育的时间太长或太短、孵育的温度太高或太低（低于10°C，高于30°C）。Abraxis氯霉素ELISA试剂盒提供一个初步检测结果，和其它检测方法一样对阳性结果要求通过其它传统的方法来验证。 重要性 食物中抗生素对人类的健康有很大的威胁。由于氯霉素的成本低，而且是一种光谱抗生素，发现最早在发展中国家被应用。在发达国家氯霉素仅限制用于**眼病。因为氯霉素可以严重的损害骨髓，是致命性的。 口服氯霉素**适当的用于**MRSA或其它抗体耐药性感染。氯霉素普遍用做兽药**小
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影响显微成像质量的因素--显微镜镜头
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
分不同类型，但即使对于同一类型的镜头，其成像质量也有着很大的差异，这主要是由于材质、加工精度和镜片结构的不同等因素造成的，同时也导致不同档次的镜头价格从几百元到几万元的巨大差异。比较著名的如四片三组式天塞镜头、六片四组式双高斯镜头。对于镜头设计及生产厂家，一般用光学传递函数OTF(Optical Transfer Function)来综合评价镜头成像质量，光学系统传递的是亮度沿空间分布的信息，光学系统在传递被摄景物信息时，被传递之各空间频率的正弦波信号，其调制度和位相在成实际像时的变化，均为空间频率的函数，此函数称为光学传递函数。OTF一般由调制传递函数MTF(Modulation Transfer Function)与位相传递函数PTF(Phase Transfer Function )两部分组成。像差是影响图像质量的重要方面，常见的像差有如下六种： 球差: 由主轴上某一物点向光学系统发出的单色圆锥形光束，经该光学系列折射后，若原光束不同孔径角的各光线，不能交于主轴上的同一位置，以至在主轴上的理想像平面处，形成一弥散光斑(俗称模糊圈)，则此光学系统的成像误差称为球差。 慧差: 由位于主轴外的某一轴外物点，向光学系统发出的单色圆锥形光束，经该光学系列折射后，若在理想像平面处不能结成清晰点，而是结成拖着明亮尾巴的慧星形光斑，则此光学系统的成像误差称为慧差。 像散: 由位于主轴外的某一轴外物点，向光学系统发出的斜射单色圆锥形光束，经该光学系列折射后，不能结成一个清晰像点，而只能结成一弥散光斑，则此光学系统的成像误差称为像散。 场曲: 垂直于主轴的平面物体经光学系统所结成的清晰影像，若不在一垂直于主轴的像平面内，而在一以主轴为对称的弯曲表面上，即最佳像面为一曲面，则此光学系统的成像误差称为场曲。当调焦至画面中央处的影像清晰时，画面四周的影像模糊;而当调焦至画面四周处的影像清晰时，画面中央处的影像又开始模糊。 色差: 由白色物体向光学系统发出一束白光，经光学系统折射后，各色光不能会
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ELISA实验数据处理方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
方法： 1、拟和曲线： 输入第一行： 浓度值， 如0 10 50 100 400 输入第二行：该浓度下的调整后的od值，如0 0.586 1.397 1.997 3.42 选择这些输入的数据，用插入里的图表按钮，进入图表向导，在“标准类型”中选择“xy散点图”；在“子图表类型”中选择“折线散点图”，按“下一步”；选择“系列产生在行”，按“下一步”；数据标志，可以填写：如数据y轴，OD值；数据x轴，浓度；按下一步，点击完成。可得曲线图。 单击曲线，按右键，选择“添加趋势线”，在类型中，选择多项式；在选项中，选择显示公式，选择显示R平方值。 得到公式和R平方值。 也可以用上面说的方法： 双击图表，把它输入到图表的数据中，就可以拟和曲线。 2、计算浓度： 第一次实验： 标准曲线为： y = -4E-05x2 + 0.026x R2 = 0.9745 为例，已知OD值，计算浓度。 由于y = -4E-05x2 + 0.026x，所以可以得到： 4E-05x2 －0.026x ＋y＝0 ax2 ＋bx ＋y＝0 a＝4E-05；b＝ －0.026； x＝（－b－（b*b－4ay）（平方根）） /(2*a) 代入a，b，和y值，得 x＝（0.026－（0.026*0.026-0.00016*y）(平方根）)/(2*0.00004） 在excel里可以用以下公式表示： x＝(0.026-EXP(LN(0.026*0.026-0.00016*y)/2))/(2*0.00004) 通用公式为： x＝（－b－EXP(LN（b*b－4ay）/2)）/(2*a) 您可以应用excel的公式拷贝功能，计算所有浓度
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动物胸腺上皮细胞的培养
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
正常动物胸腺上皮细胞的培养 实验材料： 1. 胸腺上皮细胞来源；一般取材小鼠或手术切取的儿童之胸腺； 2. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素，pH7.2； 3. 有血清培养液：可使用RPMI1640培养液，添加10%胎牛血清、谷氨酰胺2mmol/L、丙酮酸钠1mmol/L、非必需氨基酸1mmol/L、2-巯基乙醇（2-ME）5×10-5 mol/L、青霉素100IU/ml、链霉素100μg/ml（Schreiber et al.1991）。也可以DMEM作为基础培养基； 4. 化学限定性培养液：基础培养液为DMEM，添加HDL100μg/ml、转铁蛋白50μg/ml、胰岛素5μg/ml、氢化可的松2.7×10-7 mol/L、EGF 10ng/ml、硒25 ng/ml以及三碘甲腺原氨酸（T3）1×10-10mol/L（Schreiber et al.1991）； 5. 消化液：原代培养时，从胸腺组织制备细胞悬液时，所用的消化液为1mg/ml的胶原酶，用含有15%胎牛血清的DMEM配制。传代时所用的消化液为0.02%EDTA-0.25%胰蛋白酶混合液； 6. 手术刀、解剖剪、解剖镊、眼科剪，眼科镊，止血钳，无菌消毒手术器械； 7. 离心管（15ml、50ml） 实验方法： 1. 若取材于小鼠，先将动物处死，用75%乙醇消毒。打开胸腔，取出胸腺。如果取材于手术切除的儿童胸腺，将所取胸腺组织置于含抗生素的平衡盐溶液中； 2. 将切取的胸腺组织尽可能去除表面的结缔组织被膜。将胸腺实质剪成约1mm3大小的植块； 3. 用平衡盐溶液反复洗涤植块，以尽量洗去胸腺细胞； 4. 在37℃、5%CO2的培养箱中，用胶原酶消化液消化约1.5h； 5. 在胶原酶消化液中，将组织块进一步剪碎； 6. 静置，待组织块下沉，弃去上清液。将组织块重新悬浮于无血清培养液中； 7. 重复步骤5可达3次； 8. 将将植块接种于培养瓶或培养皿内，置37℃、5%CO2的培养箱中培养。培养器皿可以用生长基质物质预先包被。在原代培养最初6d内，不更换培养液； 注意事项： 胸腺上皮细胞体外培养最大的问题是成纤维细胞的过度生长，故抑制成纤维细胞的生长是上皮细胞培养的成功的关键。
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ELISA操作要点
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
优质的试剂，良好的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。 1 标本的采取和保存 可用作ELISA测定的标本十分广泛，体液、分泌物和排泄物）等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定（如血清、尿液），有些则需经预处理（如粪便和某些分泌物）。大部分ELISA检测均以血清为标本。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外，其他成份均同等于血清。制备血浆标本需借助于抗凝剂，而血清标本只要待血清自然凝固、血块收缩后即可取得。除特殊情况外，在医学检验中均以血清作为检测标本。在ELISA中血浆和血清可同等应用。血清标本可按常规方法采集，应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为标记的ELISA测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。 血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。如在冰箱中保存过久，其中的可发生聚合，在间接法ELISA中可使本底加深。一般说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃，超过一周测定的需低温冰存。冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡，可上下颠倒混和，不要在混匀器上强烈振荡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落，所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存。保存血清自采集时就应注意无菌操作，也可加入适当防腐剂（见3.2.4）。 2 试剂的准备 按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。ELISA中用的蒸馏水或去离子水，包括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液应用pH计测量较正。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。 3 加样 在ELISA中一般有3次加样步聚，即加标本，加酶结合物，加底物。加样时应将所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可
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正常人胚肺成纤维细胞的培养
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
正常人胚肺成纤维细胞的培养 实验材料： 1. 肺组织：取自妊娠14—18周的胎儿； 2. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素，pH7.2； 3. 消化液：0.25%胰蛋白酶（pH7.6—7.8），0.02%EDTA溶液； 4. 培养液：DMEM或RPMI1640，加10%—20%胎牛血清、青霉素100IU/ml、链霉素100μg/ml； 5. 保存液：10%二甲亚砜或10%甘油； 6. 眼科剪、眼科镊等无菌消毒手术器械； 7. 离心管（15ml、50ml） 实验方法： 1. 取水囊引产的妊娠3—6个月的胎儿。用75%乙醇消毒胸壁。剖胸取出两肺。剪去肺内较大的支气管后，将肺边缘组织置于平皿中，用PBS液清洗3次，除去血液。选择苍白色的肺组织，剪成1mm3左右的碎块。再用PBS液洗2—3次，直至液体澄清为止； 2. 将肺组织块移入三角瓶中，加入5—6倍量的0.25%胰蛋白酶，密封瓶口。置4℃冰箱内消化20h； 3. 吸弃上层液体。往三角瓶中加入少量培养液，用吸管反复吹打分散细胞。稍静置，待残存的组织块下沉后，吸出细胞悬液； 4. 计数细胞，并用培养液调节细胞密度； 5. 将细胞以3×106个/ml的密度接种于培养瓶中，于37℃、5%CO2培养箱中培养。24h后换液，除去未贴壁的细胞及细胞碎片。以后每隔2—3d换液一次； 6. 待细胞汇合成片后，用0.25%胰蛋白酶与0.02%EDTA（1：1，V/V）混合消化液消化细胞，进行继代培养； 7. 如果要冻存细胞，以便长期使用，可以将成片细胞经消化分散后，悬浮于保存液中，调节细胞密度至1.5×106—2.0×106个/ml。每管1—2ml分装入冻存管，置于液氮罐中保存；
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第三代高通量测序技术简介--纳米孔
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
第一代Sanger法为DNA测序打开了大门，但它高昂的费用限制了在大规模测序工程上的使用。当今发展迅猛的第二代高通量测序设备，包括Illumina的Solexa、Roche 454系列以及ABI的SOLiD系统等，使测序费用大幅降低到60-1美元/megabase。 它们共同的缺点是每条读出的DNA序列太短，大致在35-250之间，使得后续的装配工作困难重重。 现今，第三代测序设备也初露端倪。基于一个纳米级大小微孔的设备在将来有可能成为高通量、廉价且能得到较长DNA序列的单分子测序方法。纳米孔严格限制了DNA单链可以通过的空间，每次只允许一个核苷酸按照原有的次序通过。DNA分子通过纳米孔时，它们的序列会被逐一分辨出。整个过程无需繁琐的增扩、标示步骤。 图一 纳米孔测序使用DNA合成和光学识别技术。目标DNA被转化为较长的单链，每个原有的核苷酸被连续12次复制到新链上。经过杂交后形成双链结构，进入纳米孔前，其中一条链将被剥离。可用于制作纳米孔的材料比如氮化硅的厚度超过DNA分子的10-100倍，这就可能在同一时间内有1个以上的核苷酸在隧道内，引起互相干扰无法读出正确的数据。因此有必要在新链上多次复制同一个核苷酸。 荷兰Kavli Institute of Nanoscience开发出厚度仅为一个原子的新材料（graphene），是否能投入实际使用有待于进一步检验。 图二 每个纳米微孔的开闭由离子震荡控制，α-溶血素明确地分辨出微孔是否有DNA分子（图二 红色部分）。DNA链进入微孔的速率由电压调节。 图三 A 图三 B 核酸外切酶依附到α-溶血素的顶部（图三B 浅蓝色部分），持续地从单链上切割下碱基（金色）。单个碱基通过微孔内的氨基化环糊精（红色）时，它们的遗传符号（A，T，G或C）被逐一读出。几毫秒后，碱基穿过了整个纳米孔，到达双分子膜的另一端（图三 A）。 图四 横截面的电流探测遗传符号。核苷酸通过隧道时其自身的极性改变了原有的电磁场，由此探测器得知每个
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PCR工作机制及高级使用
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
本文仅供参考 PCR的工作机制 PCR由一系列复杂的化学反应，包含前、中、后三个阶段。最重要的化学变化是热循环期间的产物合成。每次循环后产物、模板、聚合酶、引物和脱氧核苷酸的余量都会改变，处于连续的不稳定状态。所有的循环都是从模板和先前产物的变性开始。当温度较低时，引物退火到模板上。 早先若干循环的退火步骤要求引物寻找正确的染色体模板作为它们的目标。在中期的循环中，先前合成的产物优先成为模板。最后几个循环中，增扩后的高浓度产物互相杂交，由此阻止与引物的杂交。 引物退火后，Taq DNA聚合酶把自己定位到引物和模板综合体上，提取介质中的自由dNTPs然后沿着模板延伸。从本质上讲，引物和模板的任何反应都会造成产物扩展，它们的特异性在最初的几个循环中可能很难控制，得到非特异性产物的摩尔量超过在模板上正确退火位置的量。PCR反应特异性的可靠度依赖于2个引物必须定位到互补的DNA链上。进一步讲，退火温度和Mg2+离子的浓度影响引物稳定的杂交到模板上，杂交位置间距应小于10kb。 相比之下，增扩阶段的大部分循环里，模板被很好的与先前增扩的片段区分开。这些片段的数量取决于早先若干个循环的严密性。甄选同源性引物的退火位置是较简单的，增扩期间由染色体DNA贡献的有效的模板数量只是可以忽略一小部分。甄选的复杂性被超量由引物从互补位点新增扩的片段所降低。 PCR的化学计量 热力学方面的影响对PCR来讲是试剂浓度和模板间的对应关系。在起先的循环中PCR试剂的摩尔比率是最高的，随着PCR产物的增加而降低。令人惊讶的是这种减低是由增扩的目标分子的增加引起的而不是由于试剂的消耗。最初剩余的引物和脱氧核苷酸与模板的比率是固定的，反应结束后，dNTP的浓度下降超过1倍，引物任然剩余95%，Taq DNA聚合酶没有变化。增扩千万倍目标分子后，模板分子远多于酶分子。当产物增加后，酶全部被占用了，引物和模板的比率减低，推动自身退火。当自身退火的数量增加或酶的总量有限时，
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