-
老年性痴呆的动物模型及评价
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
第一节 老年痴呆的定义 （Alzheimer’s disease，AD），又称老年性痴呆，是一种与衰老相关，以认知功能下降为特征的渐进性脑退行性疾病或综合症。病人整个大脑弥散性萎缩并出现明显的病 理组织学改变——老年斑（senile plaque, SP）（或神经炎性斑，neuritic plaque）和神经原纤维缠结(neurofibrillary tangle, NFT)。病人认知功能下降并伴有神经元功能障碍、神经元数量减少、神经元体积扩大及突触缺失（I型营养障碍轴突）和胞内磷酸化 tau（microtubule-associated protein tau）形成的成对螺旋丝，即NFT（II型营养障碍轴突）。此外，胞外的淀粉样蛋白（amyloid β-protein, Aβ）沉积形成SP，其周围环绕着营养障碍的突起。Aβ沉积形式由早期的弥散型聚集（不成熟的弥散斑）到形成成熟的致密斑，后者由直径为8nm的原纤维组 成，用刚果红染色后在偏振光的照射下表现出双折射的特性。晚期的病理变化是由激活的小胶质细胞和星形胶质细胞参与的炎性反应所引起的，它们包围着沉积斑 块。该病早期的行为学改变为轻微的记忆紊乱或个性改变，在5~10年内逐渐恶化，最终出现严重痴呆症状，生活不能自理。这种隐袭和破坏性的大脑退行性疾病 剥夺了受害者最具人类特征的品质——记忆、推理、抽象化和语言的能力。 一、临床症状 AD几乎都是以不可觉察的方式开始发病，最初常常是偶然地、在回忆日常生活最近事件时遇到困难。病人可能无法回忆与某个人的交谈或参与过的某项活动，或者可能是对最近接受的某个项目的信息变得很迷惑，亦即以轻微认知障碍 (mild cognitive impairment，MCI)为先兆。患者往往是以纯粹的遗忘症状开始，其他认知方面很少或根本没有任何困难[1]。MCI或早期AD患者完全保持清醒状态，没有明显的语言混乱，并保持着正常的运动和感觉功能。 AD发病的最初几年，多数病人在一般认知功能方面即已出现一些问题，例如在时间感和空间感及进行正确自如的复杂操作方面屡屡出错，并出现用词和数学运算困 难等。当这些轻微的差
-
小鼠中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)ELISA分析检测试剂盒使用说明书
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
小鼠中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)ELISA分析检测试剂盒技术资料 本试剂仅供研究使用 标本：血清或血浆 试验原理： NE试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知NE浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将NE和生物素标记的抗体同时温育。小鼠中性粒细胞弹性蛋白酶ELISA检测试剂盒洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中NE的浓度呈比例关系。 自备材料 蒸馏水。 加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。 振荡器及磁力搅拌器等。 安全性 避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。 操作注意事项 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。 使用干净的塑料容器配置洗涤液。小鼠中性粒细胞弹性蛋白酶ELISA检测试剂盒使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。 加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。 小鼠中性粒细胞弹性蛋白酶ELISA分析检测试剂盒 样品收集、处理及保存方法 血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 血浆-----EDTA、柠檬
-
小鼠α甘露糖苷酶(α Manase)ELISA分析检测试剂盒使用说明
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
小鼠α甘露糖苷酶(α Manase)ELISA分析检测试剂盒技术资料 本试剂仅供研究使用 标本：血清或血浆 试验原理： α Manase试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知α Manase浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将α Manase和生物素标记的抗体同时温育。小鼠α甘露糖苷酶ELISA检测试剂盒洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中α Manase的浓度呈比例关系。 自备材料 蒸馏水。 加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。 振荡器及磁力搅拌器等。 安全性 避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。 操作注意事项 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。 使用干净的塑料容器配置洗涤液。小鼠α甘露糖苷酶ELISA检测试剂盒使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。 加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。 样品收集、处理及保存方法 血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分
-
大鼠丙酮酸激酶M2型同工酶(M2-PK)ELISA分析检测试剂盒技术资料
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
大鼠丙酮酸激酶M2型同工酶(M2-PK)ELISA分析检测试剂盒技术资料 本试剂仅供研究使用 标本：血清或血浆 试验原理： M2-PK试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知M2-PK浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将M2-PK和生物素标记的抗体同时温育。大鼠丙酮酸激酶M2型同工酶ELISA检测试剂盒洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中M2-PK的浓度呈比例关系。 自备材料 蒸馏水。 加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。 振荡器及磁力搅拌器等。 安全性 避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。 操作注意事项 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。 使用干净的塑料容器配置洗涤液。大鼠丙酮酸激酶M2型同工酶ELISA检测试剂盒使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。 加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。 大鼠丙酮酸激酶M2型同工酶ELISA分析检测试剂盒 样品收集、处理及保存方法 血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 血浆-
-
小鼠血栓前体蛋白(TpP)ELISA分析检测试剂盒技术资料
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
小鼠血栓前体蛋白(TpP)ELISA分析检测试剂盒技术资料 本试剂仅供研究使用 标本：血清或血浆 试验原理： TpP试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知TpP浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将TpP和生物素标记的抗体同时温育。小鼠血栓前体蛋白ELISA检测试剂盒洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中TpP的浓度呈比例关系。 自备材料 蒸馏水。 加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。 振荡器及磁力搅拌器等。 安全性 避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。 操作注意事项 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。 使用干净的塑料容器配置洗涤液。小鼠血栓前体蛋白ELISA检测试剂盒使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。 加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。 小鼠血栓前体蛋白ELISA分析检测试剂盒 样品收集、处理及保存方法 血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离
-
人抗人类免疫缺陷病毒抗体(HIV)ELISA分析检测试剂盒技术资料
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
人抗人类免疫缺陷病毒抗体(HIV)ELISA分析检测试剂盒技术资料 本试剂仅供研究使用 标本：血清或血浆 试验原理： HIV试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知HIV浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将HIV和生物素标记的抗体同时温育。人抗人类免疫缺陷病毒抗体ELISA检测试剂盒洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中HIV的浓度呈比例关系。 自备材料 蒸馏水。 加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。 振荡器及磁力搅拌器等。 安全性 避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。 操作注意事项 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。 使用干净的塑料容器配置洗涤液。人抗人类免疫缺陷病毒抗体ELISA检测试剂盒使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。 加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。 人抗人类免疫缺陷病毒抗体ELISA分析检测试剂盒 样品收集、处理及保存方法 血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 血浆-----EDTA、柠檬酸
-
冻干技术原理之预冻阶段
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
预冻就是将溶液中的自由水固化，赋予干后产品与干燥前相同的形态，防止抽空干燥时起泡、浓缩和溶质移动等不可逆变化发生，尽量减少由温度引起的物质可溶性减少和生命特性的变化。 1、 预冻的方法 溶液的预冻方法有两种：冻干箱内预冻法和箱外预冻法。 箱内预冻法是直接把产品放置在冻干机内的多层搁板上，由冻干机的冷冻机来进行冷冻，大量的小瓶和安瓶进行冻干时为了进箱和出箱方便，一般把小瓶或安瓶分放在若干金属盘内，再装进箱子，为了改善热传递。有些金属盘制成可抽活底式，进箱时把底抽走，让小瓶直接与冻干箱的金属板接触；对于不可抽底的盘子，要求盘底平整，以获得产品的均一性。采用旋冻法的大血浆瓶要事先冻好后加上导热用的金属架后再进箱进行冷冻。 箱外预冻法有二种方法。有些小型冻干机没有进行预冻产品的装置，只能利用低温冰箱或酒精加干冰来进行预冻。另一种是专用的旋冻器，它可把大瓶的产品边旋转边冷冻成壳状结构，然后再进入冻干箱内。 图1 旋转型冷冻 还有一种特殊的离心式预冻法，离心式冻干机就采用此法。利用在真空下液体迅速蒸发，吸收本身的热量而冻结。旋转的离心力防止产品的气体逸出，使产品能“平静地”冻结成一定的形状。转速一般为800转/分左右。 图2 靠离心或旋转液体形成楔状或壳状 2、 预冻的过程 水溶液温度降到一定时，根据溶液共晶浓度，浓度淡溶液里开始结冰，这个温度就叫结冰点。一般来说结冰点受浓度的支配与浓度一起下降。溶液温度低于结冰点时，溶液中的一部分会结晶析出，剩下的溶液浓度将会上升，就这样结冰点下降，接着继续冷却，冰结晶随着冷却而增加，剩下的溶液浓度随之而增大。可是温度降到某一点时剩下的溶液就全部冻结，这时的冻结物里混杂着冰晶体，这时的温度就是共晶点。 溶液需过冷到冰点以后，其内产生晶核以后，自由水才会开始以冰的形式结晶，同时放出结晶热使其温度上升到冰点，随着晶体的生长，溶液浓度的增加，当浓度达到共晶浓
-
免疫荧光染色原理及步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
免疫荧光又称免疫荧光抗体。免疫荧光实验原理是将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高，非特异性荧光染色少，相对使用标记抗体用量偏大。利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。 下面详细介绍免疫荧光染色步骤： 1. 滴加 0.01mol/L，pH7.4 的PBS于待检标本片上，10min后弃去，使标本保持一定湿度。 2. 滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液，使其完全覆盖标本，置于有盖搪瓷盒内，保温一定时间(参考：30min)。 3. 取出玻片，置玻片架上，先用 0.01mol/L，pH7.4 的 PBS 冲洗后，再按顺序过 0.01mol/L，pH7.4 的 PBS 三缸浸泡，每缸 3-5 min，不时振荡。 4. 取出玻片，用滤纸吸去多余水分，但不使标本干燥，加一滴缓冲甘油，以盖玻片覆盖。 5. 立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度，一般可用“+”表示：(-)无荧光；(±)极弱的可疑荧光；(+)荧光较弱，但清楚可见；(++)荧光明亮；(+++--++++)荧光闪亮。待检标本特异性荧光染色强度达“++”以上，而各种对照显示为(±)或(-)，即可判定为阳性。 想要更全面了解，可以浏览索莱宝实验专题。
-
气浴恒温振荡器转速不显示的解决办法
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
气浴恒温振荡器转速不显示的解决办法 已经是上市已久的老产品了，经过一代一代的更新，其技术已经是非常成熟的了，在此对于它的结构原理今天就不做过多详解了，当然我们在使用过程中难免会遇到一些小故障，今天就给大家简单说说。 首先，在使用时大家如果遇到气浴恒温振荡器可以正常工作，但速度显示屏不亮，对此我们一般可判断为测速仪无供电电源，此时检查有无12v（交流电）输入，有则检查测速仪有无5v直流电输出，一般此种现象较多。无12v（交流电）则要检查电源电路。 其次，若遇到气浴恒温振荡器可以正常使用，但速度显示为“0”， 此种现象一般表现为传感器坏或传感器在使用过程中由于外力以及安装时螺丝松动造成传感器移位，也有出现测速磁铁脱落造成（采用霍尔传感器适用，对于光电传感器不适用） 最后，对于带有速度反馈的电路（设定速度以后，速度偏差为±1rpm），一般伴随现象为速度不可控制（转速超过300rpm以上）或启动一下即停止，且显示屏显示转速为“0”，此故障多为传感器损坏或偏位。此时必须更换传感器或重新调整位置。 尽管目前对于气浴恒温振荡器而言，其技术较为成熟，但难免电子设备会出现一些故障，我们在遇到此类问题是就要学会自我判断，对于小问题能及时解决。尽快恢复工作。 了解更多信息您还可以访问：
-
使用实验室自动洗瓶机的常见误区
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
随着社会的发展，越来越多的实验室开始使用自动洗瓶机来清洗实验室玻璃器皿。自动清洗工艺对玻璃器件、实验设备和操作人员提供了**的保护。机器的自动化处理更容易标准化、进行验证和保存记录。大型的自动清洗机可以批量处理玻璃器皿，极大的提高了清洗的效率，降低操作人员的劳动强度。使得科研工作者有更多宝贵的时间处理其它重要工作。 我们与实验室用户交流的过程中，也发现了不少使用自动洗瓶机方面的误区，希望与大家分享和讨论。 误区一：自动洗瓶机是功能强大的设备，所以什么玻璃器皿都能洗。 由于自动清洗机一次可以将大批量相同/相近规格的玻璃器皿清洗干净，例如大型自动洗瓶机可以一次清洗300个或更多的培养皿，1000只以上的试管，或者几十个容量瓶。考虑到实验室的玻璃器皿有不同的结构、尺寸和容量，如果能够将玻璃器皿进行适当的分类，选配合适的装置支架，这样才能够最大程度的发挥自动清洗机的强大的清洗能力。 有些形状复杂或者细小的器皿或零部件，使用其它的清洗方式，例如超声波，可能效率更高、效果更好。 如果残留物中含有遇热会凝固的蛋白质，使用自动清洗机时需要特别的小心，需要在室温下先将蛋白质清洗干净，然后再加热清洗。但仍然存在蛋白质凝固后粘附在设备内表面或器件表面的可能性，清理起来非常麻烦。类似的情况还有非常粘附的聚合物等。在这种情况下，适当的预处理可能是必须的。 另外，受制于清洗设备和水基清洗剂适用范围的限制，某些水基清洗剂无法湿润渗透或溶解的难溶性残留物，例如某些试验需要用到强氧化性酸高温消解样品时残留的复杂的难溶物，无法通过自动清洗机清洗干净。 误区二：自动清洗机清洗能力强大，有压力、喷淋和循环，无需使用专用的清洗剂，可以自己随意配制清洗溶液。 设计良好的自动清洗机拥有强大的循环泵和精心设计的喷嘴，可以将清洗溶液均匀和持续不断的喷射到器件表面，以去除
-
免疫荧光技术简介
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
免疫荧光技术（Immunofluorescence technique） 1941年，Coons等于首次采用荧光素进行标记而获得成功。这种以荧光物质标记抗体而进行抗原定位的技术称为荧光抗体技术（fluorescent antibody technique）。该技术的主要特点是：特异性强、敏感性高、速度快。主要缺点是：非特异性染色问题尚未完全解决，结果判定的客观性不足，技术程序也还比较复杂。 一、荧光免疫技术的概念： 免疫荧光技术（Immunofluorescence technique）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。将抗原或抗体用荧光素进行标记，标记的抗原或标记的抗体与相应的抗体或抗原反应后，测定复合物中的荧光素，这种免疫技术称为免疫荧光素技术。免疫荧光细胞化学分直接法、夹心法、间接法和补体法。 二、荧光免疫技术分类： （1）荧光抗体显微镜技术：抗原抗体反应后，利用荧光显微镜判定结果的检测方法。 （2）免疫荧光测定技术： 抗原抗体反应后，利用特殊仪器测定荧光强度而推算被测物浓度的检测方法 三、荧光的产生： 物质吸收外界能量而进入激发状态，在回复基态时多余的能量以电磁辐射的形式释放，即发光，这种光称为荧光。这种物质，称为荧光素。由光激发所引起的荧光，为光致荧光；由化学反应所引起的荧光，为化学荧光。 四、荧光素的荧光特性： （1）停止供能，荧光现象随即终止 （2）对光的吸收和荧光的发射具高度选择性入射光波长
-
β-半乳糖苷酶染色简介
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
β- 半乳糖苷酶是一种是细胞溶酶体中的水解酶，能把乳糖水解成葡萄糖和半乳糖的酶。其结构基因为LacZ，与LacY（半乳糖苷透性酶）和LacA（半乳糖苷转乙酰酶）同组成乳糖操纵子，并在特异的乳糖操纵系统中的阻遏物、操纵基因、启动子等的协同下，支配调节β-半乳糖苷酶的合成。β-半乳糖苷酶一般广泛存在于动植物界中。在临床上，β半乳糖苷酶，在肾近曲小管上皮细胞中含量较高。尿中β半乳糖苷酶活性可反映肾实质，特别是肾小管的早期损伤，与尿中N-乙酰β-D-氨基葡糖苷酶一同测定作尿酶谱分析，有助于病程观察和预后评价。如对各种肾病的鉴别诊断、药物对肾的毒性作用、感染、休克、肾移植排异反应、急性肾小管坏死等疾病的早期监测等。衰老相关β- 半乳糖苷酶染（senescenceassociatedb-galactosidase SA- b-Gal）：体外培养细胞在 p H 为 6 时 , 其β-半乳糖苷酶染色的阳性率随代龄增加而增加 , 这种中性β 2 半乳糖苷酶被定义为衰老相关的β-半乳糖苷酶 ( SA 2 β 2 gal) 。血清饥饿引发的生长抑制并不能提高 SA 2 β 2 gal 的活性 ,Werner 综合症患者皮肤成纤维细胞体外培养时增殖能力的丧失快于正常人 ,同时 ,SA 2 β 2 gal 阳性细胞的积累速度也加快。永生化细胞检测不到 SA 2 β 2gal 的活性 , 转基因技术诱导永生化细胞衰老的同时 ,也诱导衰老相关β 2 半乳糖苷酶的活性。而且 ,老年个体皮肤组织切片衰老相关β 2 半乳糖苷酶染色的阳性率高于年轻个体。基于以上观察 ,人们认为这种中性β 2 半乳糖苷酶是一种很好的可用于体内外衰老研究的生物学标志。
-
Q-PCR实验操作流程
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
Q-PCR实验流程 一、 ①实验前准备，每天早上到实验室后，先把超净工作台的紫外灯打开15-20分钟。②超净台前做实验，需佩戴干净的橡胶手套/一次性薄膜手套，RNA抽提需带口罩。③取EP管/枪头时需用镊子，不可以用使用过的手套直接取用。取完EP管/枪头后，袋子及时封好。④橡胶手套须放入超净台照射紫外，实验操作过程中不得带出超净台，移液器在一天工作结束后调至最大量程，并用75%乙醇清洁移液器，枪头盒及超净台面。⑤实验进行的过程中或观看实验时，没有带口罩不要在超净台前讲话。 二、 总RNA抽提 1)细胞培养皿中细胞样品用1*PBS洗两次后，用1ml枪将PBS吸干净，加入1ml Trizol (invitrogen)溶液，吹打混匀，并吸至1.5ml RNase free EP管中使细胞充分裂解，室温静置5min; 如使用组织样品，则先用液氮充分研磨组织样品，然后加入1ml Trizol (Invitrogen)溶液，混匀，室温放置5min使其充分裂解;(管盖与管壁都需标记样品名称) 2)加入200μl氯仿，剧烈振荡混匀30s，使水相和有机相充分接触，室温静置3-5min;(离心时离心管按顺序排放，离心完毕，离心管的顺序也按顺序排好，与第一步的顺序一致) 3) 4℃下，14,000g离心15min，可见分为三层，RNA在上层水相，移至另一个新的RNase free EP管;(用20-200ul的枪吸取上清，吸上清时，枪头应沿着液面上层吸取上清，枪头不可碰到、吸到中间层) 4)沉淀RNA：加入等体积异丙醇，轻柔地充分混匀(颠倒6-8次)(不应用振荡器混匀)，室温静置10min; 5)4℃下，14,000g离心10min，收集RNA沉淀(如离心后仍不见EP管底部有沉淀，应将EP管放置在-80度冰箱过夜，继续在4℃下，14,000g离心10min，收集RNA沉淀)，去上清; 6)用75%乙醇洗涤两次(12,000g离心5min)(加入乙醇后只需轻轻颠倒EP管即可，不用振荡器震荡或枪头吸打沉淀)，超净台风干;沉淀不能过干或过湿，过干则不易溶解，过湿则乙醇残留。 7)视沉淀量加入适量DEPC水(至少15ul)溶解沉淀。 三、去基因组 使用RNase-free的DNase І(Promega)，按
-
单克隆抗体制备过程与原理
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
单克隆抗体(MAb)是针专一的抗原决定簇产生的抗体，单克隆技术又名杂交瘤技术起源于1975年，由G.KÖhler和Milstein创立。主要原理是利用产生抗体的B细胞与肿瘤细胞杂交融合成杂交瘤细胞，生产抗体。单克隆抗体制备过程有以下几个步骤，下面讲简要介绍。 1、免疫动物 免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性Balb/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。 2、细胞融合 采用眼球摘除放血法处死小鼠，无菌操作取出脾脏，在平皿内挤压研磨，制备脾细胞悬液。 将准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合，并加入促融合剂聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各种淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合，形成杂交瘤细胞。 3、选择性培养 选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞，一般采用HAT选择性培养基。在HAT培养基中，未融合的骨髓瘤细胞因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，不能利用补救途径合成DNA而死亡。 未融合的淋巴细胞虽具有次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，但其本身不能在体外长期存活也逐渐死亡。 只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶，并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性，因此能在HAT培养基中存活和增殖。 4、杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化 在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞，只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞，因此，必须进行筛选和克隆化。通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。采用灵敏、快速、特异的免疫学方法，筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞，并进行克隆扩增。经过全面鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后，及时进行冻存。 5、单克隆抗体的大量制备 单克隆抗体的大量制备重要采用动物体内诱生法和体外培
-
离心萃取机处理含油废水过程介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
油水分离主要是根据水和油的密度差或者化学性质不同，利用重力沉降原理或者其他物化反应去除杂质或完成油份和水份的分离。其主要方法有：重力法、离心法、电脱法、吸附法、化学法、蒸发法和气浮法等。离心萃取机对于常见的原油、重油、柴油和石油等除水、除盐具有明显的优势。 油水分离是一个负熵过程，必须加入能量。目前最常用的重力沉降池和离心设备都是利用油水间的密度差对其进行分离的。离心萃取机作为新型的萃取分离设备，具有物料分相性能好，处理能力大，设备紧凑，所需辅助设备少，厂房占地面积小等优点，具有广阔的市场前景。对于重力式油水分离器，虽已在市场上得到广泛应用，有多种类型，但缺点是处理能力低、设备占地面积大。 离心萃取机利用油水密度的不同,使高速旋转的油水混合液产生不同的离心力,从而使油与水分开。由于离心萃取机可以达到非常高的转速，产生高达几百倍重力加速度的离心力，因此离心萃取机可以较为彻底地将油水分离开，并且只需很短的停留时间和较小的设备体积。近年来，随着国内科技的腾飞，离心萃取机设备的放大已经得到了多发面验证和应用，具有非常好的市场效益。 分离过程 油水在自吸泵的作用下进入转鼓中，由副板形成的隔舱区使油水很快的与转鼓同步回旋，进而使油水液体相互平衡；在离心力的作用下，比重大的水向上流动过程中逐步远离转鼓中心而靠向转鼓壁；比重小的油逐步远离转鼓壁靠向中心。分离区从挡流盘直到轻相堰，保证有足够的时间形成液-液分层面。最终油水分别通过各自的堰板进入收集室由引管分别引出机外，完成两相分离过程，至此单级萃取完成。 离心萃取机可以单级萃取也可以多级处理，把多级离心萃取机串联起来以提高分离效果的工艺，又称为串级萃取。按有机相与水相流动方式的不同离心萃取机串级萃取的分类可分为以下3种。 1.错流萃取。料液由第一级流入，以后各级的萃余液，都与新鲜的有机相进行接触的串级萃取。 2.逆流萃取。料液及有机相分别由两端流入
咨询热线
18133906270
德尔塔官方微信