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MD使用CloneSelect Imager系统在半固体培养基中进行单克隆验证
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
简介 优势 · 快速成像，高效鉴定单克隆细胞系 · 准确追踪单个细胞的生长 · 可以在半固体培养基或液体培养基中对细胞成像，实验方案灵活选择 生物药品审批的监管标准一直都在不断变化。其中用于细胞系单克隆来源的监管条例驱使我们要在生物药物开发过程中使用更有效的技术或方法。许多研究人员通常使用成像系统（如CloneSelect Imager）在液体培养基中验证单克隆和监控细胞的生长。其实，CloneSelect Imager系统也可以在半固体培养基中对细胞进行成像。细胞在半固体培养基中的位置比较固定，使研究人员可以更加准确地在不同时间点对同一个细胞进行成像。 实验室常规方法通常使用有限稀释进行细胞克隆。但是，这种方法使用液体培养基培养细胞，使追踪细胞变得比较困难或不够准确。因为在处理微孔板的过程中，悬浮细胞容易在孔内发生位置移动（Figure 1）。不能确保不同时间点成像的 是同一个细胞，从而大大降低单克隆验证的准确性。此外，有限稀释有可能在一个孔内加入多个细胞，需要进行额外多次亚克隆来提高单克隆的概率。 使用半固体培养基培养细胞给科研人员提供了一个更快更简单的克隆方法，而且有利于追踪细胞的生长。细胞在半固体培养基中的位置相对固定，在常规实验操作过程中细胞位置不会移动，可以生长成独立单个的细胞克隆。所以，可以在同一个孔内种植多个细胞，而且通过不同时间点成像，能够清晰追踪单个细胞的生长情况，提供单克隆的数字验证数据。 CloneSelect Imager为研究人员提供了一个在半固体培养基中对细胞进行成像的方法。这个系统使用非侵入性检测方法，无需标记细胞直接进行成像，可以对细胞生长情况进行准确定量；进行单细胞来源克隆验证，确保只选择稳定的单克隆用于下游研究。本文通过实际实验验证CloneSelect Imager在CloneMedia™ CHO Growth A半固体培养基中对悬浮CHO-s细胞的成像性能。这种半固体培养基成份经过专门优化，适合各种CHO细胞系的生长。 Figure 1：有限稀释铺
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在使用冷水机过程中注意避免出现的几个问题
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
在使用冷水机过程中注意避免出现的几个问题 深圳达沃西技术部www.davaohk.com 在系统的实际操作中，往往存在着以下几种误操作：- (1)开机前未将不需要开启的冷水机组上冷凝器的进水阀关闭造成窜水。一部分冷却回水从不开机组冷凝器中流走，减少了正在运行机组冷凝器内的冷却水流量，造成冷凝压力上升，主机的运行电流增加，机组的制冷量下降，严重的还会使机组停止运行，既浪费电，又降低了制冷效果，还容易损坏设备。 (2)由于上一项误操作，主机的冷凝压力和冷却水出水温度升高。给操作人员造成误判断，误认为是冷却水量不够而开大冷凝器进水阀和冷却水泵出水阀，有的还增开冷却塔风机，造成水泵、冷却塔风机耗电增加 (3)更有甚者，盲目地去增开一台冷却水泵。虽然增开冷却水泵的确可降低冷却水温和冷凝压力，但毕竟一台水泵运转的电能白白浪费掉了，因而是错上加错冷却水系统正确的操作方法是： (1)开机前将不需运行机组冷凝器进水阀关闭，防止窜水。 (2)打开将要运行机组冷凝器上的进出水阀(一般出水阀常开，进水阀根据需要开、关。冷凝器、蒸发器都一样)开启相应的冷却水泵，调整冷凝器进、出水压力降至68，6kPa(0，7kg/cm：)左右(压力降以能克服管路阻力为原则，低一些节电效果更佳)。 (3)若冷凝器进出水压力表指针摆动过大，说明冷却水系统有空气，需排空气待压力表指示正常后继续下一步操作。 (4)操作中，无论开几台机组，均是一台冷却水泵对一台主机(匹配要一样)。 对于一台正在运行的冷水机组.环境条件，负荷都已成为定值这时，冷凝热负荷也为定值。规定进、出水温差为5 ℃，冷却水量必然也为一定值而且该流量与进出水温差成反比。所以，冷水机组的运行.只要规定冷却水的进出水温差就行了这个流量通常用进、出冷凝器的冷却水压力降来控制。在标准工况下.冷凝器进出水压力降调定为68.6 kPa(0、7kg/cm：) 。
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冷冻切片的方法及注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
一、实验前准备 1、清理实验台及仪器 2、开启冷冻切片机并将冷冻切片机预降至所需温度（- 15~-20 ℃*） 3、准备好处理好的载玻片、刀片、胶水以及药品 二、取材 解剖之后迅速取出所需的新鲜组织，用干纱布或滤纸擦干后不需固定直接取材（24×24×2mm*）,以防形成冰晶造成切片中形成形状不一的空泡,使细胞内结构移位。 注：取材中目的标本既要明确也要确保其结构的完整性，应避免不必要的脂肪及坏死组织附着;要尽量剔除毛发、硬骨或钙化物;保乳手术切缘由于脂肪组织较多,取材厚度**不要超过 3mm，厚者冰冻费时，大者难以切完整。甲状腺及淋巴结组织要带全组织被膜并除去多余的脂肪组织。 三、冷冻切片 1、取出组织支承器，放平摆好组织，周边滴上包埋剂，速放于冷冻台上冰冻，用吸热器压住组织，至包埋剂与组织冻结成白色冰体即可切片（1~3分种）。 2、将冷冻好的组织块，夹紧于切片机持承器上，启动粗进退键，转动旋钮，将组织修平。 3、调好欲切的厚度，根据不同的组织而定，原则上是细胞密集的薄切，纤维多细胞稀的可稍为厚切，一般在5 ～10μm间。 4、调好防卷板。制作冰冻切片，关键在于防卷板的调节上，这就要求操作者要细心，准确地将其调较好，调校至适当的位置。切片时，以切出完整、平滑的切片为准。切好的组织在干净的玻片上黏附时顺着一个方向稍微用力轻轻一带 ,可避免组织摊片过程中皱折 ,保证组织结构的完整及切片的美观。 注：①包埋剂的选用：包埋剂是对冷冻切片质量一重要影响因素，包埋剂用量要适宜，过多或过少都会影响标本冷冻质量。常用的有三种包埋剂OCT剂、B超藕合剂以及普通胶水。B超藕合剂适用于细胞丰富质地较嫩的组织,普通胶水或 OCT剂适用于纤维丰富质地偏硬组织。（OCT包埋剂骤冷时固化，其冷冻速度和软硬韧度与组织相近，其还具有水溶性，不影响染色等优点。） ②组织块过小：先将少量胶挤在托架上预先放在冰冻机中冷冻,约30秒钟左右待胶凝固时将小组织放上,组织周围再加一些胶,再次
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蜂蜜中抗生素残留检测使用步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
蜂蜜中抗生素残留使用步骤，抗生素的快速检验方法研究是世界各国关心的问题之一。在我国鲜乳中抗生素残留量的快速检测方法有多种，其中有：纸片法、TTC法、酶联免疫法等。用深芬仪器CSY-E96K抗生素残留检测仪来检测鲜乳抗生素残留的方法采用固相酶联免疫吸附ELISA的原理,即酶联免疫法，此方法具有时间短，操作简单、准确的优点，有利于严把农产品原料乳质量安全关。本文对用深芬仪器CSY-E96K来检测蜂产品中的抗生素残留快速检验方法方面进行了研究，研究结果表明，方法是可行的，适用于蜂蜜及其产品中的抗生素快素检测。下面我们具体讲解青霉素的检测步骤： 材 料 1．仪器 深芬仪器CSY-E96K抗生素残留检测仪、粉碎机、量筒、振荡器、漏斗、滤纸、微量移液器、去离子水或蒸馏水、甲醇。 2．试剂 青霉素试剂盒 试验方法 1取10ml样品，加 20ml 70%甲醇溶液 2强力振荡3分钟 3用Whatman No 1滤纸过滤 4取100µl处理后的样品，加入400µl样本稀释液 5取50μl稀释后的样本进行分析（稀释倍数5 结果与讨论 预先进行编号，标记B0、标准品和样品的位置，推荐进行双孔检测 2 取所需数量的微孔（微孔条可拆），将多余板条重新密封并立即放回2~8℃保存 3 样品稀释液（10×）、浓缩洗涤液（20×）稀释成工作液（蒸馏水或去离子水稀释） 4 在B0孔中加入50µl 0.0 ppb标准品溶液 5 在各标准孔中加入50μl的标准品溶液 6 在各样品孔中加入50µl样品溶液 7 在所有孔中加入50µl的抗青霉素（Benzyl penicillin， BP）抗体酶结合物 8 轻轻晃动反应板几秒钟。 2、 37℃温浴30min （温浴过程中不时轻拍反应板，可以减少双孔误差） 2.1 甩掉孔中液体，用洗液洗涤微孔板5次，最后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液体。 3 反应 3.1 洗涤程序完成后，立即用微量移液器在每个微孔中先加入50µl显色液A，再加 50µl显色
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从传统到现代，细胞迁移体外研究方法集锦
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
细胞的迁移运动不仅是细胞进行很多重要生理活动的基础，同时也是炎症反应和肿瘤发生等病理过程中的重要步骤和关键环节。胚胎发育、血管生成、伤口愈合、免疫反应、炎症反应、动脉粥样硬化、癌症转移等过程中都涉及细胞迁移。 随着研究的深入，细胞迁移的体外研究方法也日新月异。本文从传统的划痕法，到对活细胞的追踪，再到最新的芯片技术，结合高内涵成像系统，将传统到现代的细胞迁移研究方法高通量化，为迁移研究者提供实验利器。 点击下载按钮，即可同时收获：1、免费下载《细胞迁移能力相关实验检测方法介绍》2、免费下载《肿瘤研究应用集锦》3、免费获取网络讲堂"岂止于高！大数据时代如何高效筛选目标药物？"录像链接 美谷分子仪器（上海）有限公司电话：021-3372 1088邮箱：网址： 扫一扫官方微信，月月抽奖
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冷凝管简介
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
冷凝管是一种用作促成冷凝作用的实验室设备，通常由一里一外两条玻璃管组成，其中较小的玻璃管贯穿较大的玻璃管。它是利用热交换原理使冷凝性气体冷却凝结为液体的一种玻璃仪器。有直形、球形、蛇形三种，规格以长度（mm）表示，有150~350多种。 冷凝管的内管两端有驳口，可连接实验装置的其他设备，让较热的气体或液体流经内管而冷凝。外管则通常在两旁有一上一下的开口，接驳运载冷却物质（如水）的塑胶管。使用时，外管的下开口通常接驳到水龙头，因为水在冷凝管中会遇热而自动流往上方，达至较大的冷却功效。 用途 适用于科研、大专院校、石油、化工、制药工业、医疗卫生及中小学等单位化验室，作蒸馏、分馏或回流的装置上与蒸馏烧瓶、弯形接管配套使用时起冷凝蒸气和凝聚液滴的作用。冷凝管在选用时，一般讲蒸馏物的沸点越低蒸气越不易冷却，故需要冷凝管要长，内径要粗，反之沸点愈高则蒸气愈易冷却，因此冷凝管愈短愈细为宜。另一方面蒸馏物多、烧瓶容量大，受热面也增加。在同一单位时间蒸气排出的愈多，选用冷凝管也要相对地增加其长度。 球形冷凝管：内管由相连的球形组成（若干个玻璃球连接起来，球形部分为磨具机制，起到均与有效冷却的作用），用于有机制备的回流，适用于科研、大专院校、石油、化工、制药工业、医疗卫生及中小学等单位化验室，作蒸馏、分馏或回流的装置上与蒸馏烧瓶、弯形接管配套使用时起冷凝蒸气和凝聚液滴的作用。冷凝管在选用时，一般讲蒸馏物的沸点越低蒸气越不易冷却，故需要冷凝管要长，内径要粗，反之沸点愈高则蒸气愈易冷却，因此冷凝管愈短愈细为宜。另一方面蒸馏物多、烧瓶容量大，热面也增加。在同一单位时间蒸气排出的愈多，选用冷凝管也要相对地增加其长度。 直形冷凝管它是Liebig 氏设计，是将一根空气冷凝管作为内芯，在其外面焊有一较粗的外套管(水冷管)，在外套管的两端各焊接一个小嘴是用以连接冷凝水的进出口(下嘴用以连接冷却水源，上嘴用以作冷却水的出口)。它
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FISH荧光原位杂交技术简介
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
FISH荧光原位杂交技术：1969年，Gall和Pardue等首次将同位素探针用于原位杂交实验，获得成功。1987年，染色体原位抑制杂交法的创建，使FISH技术得以迅速发展。随后，Cremer等用生物素和汞或氨基乙酰荧光素等非放射性物质标记探针，创立了双色FISH荧光原位杂交技术 。1990年，Nederlof等用3种荧光素成功探测出了3种以上的靶位DNA序列，从而宣告了多色FISH技术的问世。 FISH荧光原位杂交技术是一种非放射性分子遗传学实验技术，其基本原理是将直接与荧光素结合的寡聚核苷酸探针或采用间接法用生物素、地高辛等标记的寡聚核苷酸探针与变性后的染色体、细胞或组织中的核酸按照碱基互补配对原则进行杂交，经变性-退火-复性-洗涤后即可形成靶DNA 与核酸探针的杂交体，直接检测或通过免疫荧光系统检测，最后在荧光显微镜下显影，即可对待测DNA进行定性、定量或相对定位分析。 【FISH荧光原位杂交基本原理】 荧光原位杂交技术问世于70年代后期，其曾多用于染色体异常的研究，近年来随着FISH所应用的探针钟类的不断增多，特别是全Cosmid探针及染色体原位抑制杂交技术的出现，使FISH技术不仅在细胞遗传学方面，而且还广泛应用于肿瘤学研究，如基因诊断基因定位等。 原有的放射性同位素原位杂交技术存在着较多缺点，诸如每次检验均 需重新标记探针，已标记的探针表现出明显的不稳定性，需要较和时间的曝光时间和对环境的污染等。在观察结果时，需要较多的分裂进行统计学分析。>>>胜创生物。 此外，由于放射性银粒和染色体聚集的不同平面，可能引起计数上的误差等。与之比FISH则具有①操作操作简便，探针标记后稳定，一次标记后可使用二年②方法敏感，能迅速得到结果③在同一标本上，可同时检测几种不同探针④不仅可用于分裂期细胞染色体数量或结构变化的研究，而且还可用于间期细胞的染色体数量及基因改变的研究等特点。 荧光原位杂交技术是一种重要的非放射性原位杂交技术。它的基本原理是：如果被检测的染色体或DNA纤维切片上的靶
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重组酶聚合酶扩增（RPA）技术简介
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
核酸检测革命：可替代PCR的犀利技术——RPA 重组酶聚合酶扩增（Recombinase Polymerase Amplification，RPA），被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。RPA技术主要依赖于三种酶：能结合单链核酸（寡核苷酸引物）的重组酶、单链DNA结合蛋白（SSB）和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性，最佳反应温度在37°C左右。 RPA原理介绍 重组酶与引物结合形成的蛋白-DNA复合物，能在双链DNA中寻找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就会发生链交换反应形成并启动DNA合成，对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的DNA链与SSB结合，防止进一步替换。在这个体系中，由两个相对的引物起始一个合成事件。整个过程进行得非常快，一般可在十分钟之内获得可检出水平的扩增产物。 RPA分析的关键在于扩增引物和探针的设计。PCR引物多半是不适用的，因为RPA引物比一般PCR引物长，通常需要达到30-38个碱基。引物过短会降低重组率，影响扩增速度和检测灵敏度。在设计RPA引物时，变性温度不再是影响扩增引物的关键因素。RPA的引物和探针设计不像传统PCR那样成熟，用户需要自己摸条件进行优化。 RPA技术有哪些优势 常规PCR必须经过变性、退火、延伸三个步骤，而PCR仪本质上就是一个控制温度升降的设备。RPA反应的最适温度在37℃-42℃之间，无需变性，在常温下即可进行。这无疑能大大加快PCR的速度。此外，由于不需要温控设备，RPA可以真正实现便携式的快速核酸检测。 据介绍，RPA检测的灵敏度很高，能够将痕量的核酸（尤其是DNA）模板扩增到可以检出的水平，从单个模板分子得到大约1012扩增产物。而且RPA还用不着复杂的样品处理，适用于无法提取核酸的实地检测。 RPA既可以扩增DNA也可以扩增RNA，还省去了额外的cDNA合成步骤。你不仅可以对扩增产物进行终点检测，还可以对扩增过程进行实时监控，甚至可以通过试纸条（侧流层析试纸条LFD）读取结果。 【胜创生物】以“品质第一，客户第一“为公司价值观，以引进”新产品、新技术
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Western Blot样品制备注意事项及步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
Western Blot样品制备是这个实验的第一步。而且是关键步骤，要求尽可能的获得所有蛋白质。所以我们在做wtstern blot实验应注意以下问题： 1：在合适的盐浓度下，应保持蛋白质的最大溶解性和可重复性。 2：选择合适的表面活性剂和还原剂，破坏所有非共价结合的蛋白质复合物和共价键二硫键，使其形成一个各自多肽的溶液。 3：尽量去除核酸，多糖，脂类等干扰分子。 4：防止蛋白质在样品处理过程中的人为的修饰，制备过程应在低温下进行，以避免细胞破碎释放出的各种酶类的修饰（建议加入合适的蛋白酶抑制剂） 5：样品建议分装成合适的量，然后冷冻干燥或直接以液体状态置-80℃中保存，但要注意不要反复冻融。 下面我们详细介绍一下western blot实验的详细步骤。 一.准备工作： 一个水浴箱，一台超声装置，组织匀浆器 二.需要的溶液： 裂解液 Laemmli样品缓冲液 三.操作步骤： 1)培养细胞蛋白质样品的制备： 1：胰酶酶解后裂解： 细胞培养至80%左右密度时，以含0.05%胰蛋白酶消化，细胞经预冷的PBS漂洗3次，离心收集在离心管中，加入450μl裂解液反复吹打。 2：皿上直接裂解： 细胞培养至80%左右密度时，细胞经预冷的PBS漂洗3次，加入450μl裂解液，细胞刮刀收集，用移液器转移至离心管中，反复吹打。 以上所得的样品最终用超声细胞破碎仪超声处理，超声时为5S，间歇时间为10S，功率为100-120W至溶液清澈无粘稠为止，处理过程在水浴中进行，后4℃25000g离心1小时取上清或以最大强度超声4次，每次15-30S，在每次超声步骤之间将样品转置水浴中15S，加入Laemmli 样品缓冲液（视蛋白样品浓度，以1：1或1：2的比例混合），强力混匀，样品置100℃水浴箱里水浴加热3-5分钟，10000g离心10分钟，取出清液，将其移入另一洁净试管中，至此，电泳样品已准备就绪。（样品可立即使用也可以分装冻存，-20℃存放的样品可稳定保持数月）。 2)组织样品的制备： 手术切除的组织块迅速置于预冷的0.95生理盐水中，漂洗数次，以
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血清使用常见问题
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
血清使用常见问题 1、血清保存的**方法？ 建议血清**保存在-15℃以下。若一次使用不完一瓶，建议无菌分装于适当的灭菌容器内冷冻备用。 2、如何解冻血清，才能保证其质量不会受损？ 我们建议将血清从冷冻箱取出后，置于2℃～8℃冰箱中解冻，然后在室温下全融，解冻过程中必须规则地摇晃均匀。 3、为什么血清在解冻后会出现絮状沉淀？应该怎样处理？ 血清中絮状沉淀产生的原因有很多，其中最普遍的还是由于血清中脂蛋白的变性所致，而血纤维蛋白（形成凝血的蛋白之一）在血清解冻后，也会存在于血清中，这也是造成沉淀的主要原因，但这些絮状沉淀并不影响血清本身的质量。欲去除沉淀，可采取自然沉降法或者将血清分装于无菌离心管中，2000～3000rpm离心5min。一般不建议用过滤的方法去除絮状沉淀，因为沉淀会阻塞滤膜，造成过滤困难或无法过滤。 4、为什么要热灭活血清？有必要热灭活吗？ 加热可以灭活血清中的补体系统，使补体去活化。通常未灭活的补体能够刺激平滑肌收缩、肥大细胞和血小板组胺的释放、激活淋巴细胞和巨噬细胞，同时还能够参与溶解细胞的过程。 诸多研究表明大多数细胞的培养无须进行血清的热灭活；而在免疫学研究和ES细胞、昆虫细胞、平滑肌细胞的培养过程中，推荐使用热灭活血清。实验显示，经正确热灭活处理的血清，对细胞的生长只有微小的促进或完全没有促进作用，而通常因为高温处理影响了血清的质量，造成细胞生长速率降低。并且热处理过的血清，沉淀物明显增多，倒置显微镜下观察呈“小黑点”，往往会使研究者误以为是血清受到了污染，而把血清放于37℃中，沉淀物又会更增多，有会使研究者误认为是微生物的分裂增殖。因此我们建议若非必须，可以不进行热处理，既节省时间又确保质量。 5、如何避免沉淀物的产生？ 我们建议您在血清使用的过程中，采用正确的解冻方法（冷冻→4℃→室温，参考Procell血清产品使用说明），若血清解冻时改变的温度太大（如冷冻→37℃）非常容易产生沉淀物。 温度过高
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细胞的冻存和复苏
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
细胞冻存和复苏 细胞冻存后可保存种子细胞，以便随时取用；减少细胞被微生物污染的危险性；减少细胞之间交叉污染的危险性；减少细胞因传代培养而引起的遗传变异和形态改变；避免有限细胞系出现衰老或恶性转化。冻存细胞前，应对细胞进行鉴定并检查是否被污染。 细胞冻存及复苏的基本原则是“慢冻快融”，这样可以最大限度的保存细胞活力。目前细胞冻存多用甘油或二甲基亚砜（DMSO）作为保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性；缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少冰晶对细胞的物理损伤。复苏细胞采用快速融化的方法可以保证细胞外结晶在很短的时间内融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。需要特别注意的是DMSO 稀释时会释放大量热量，因此DMSO 不能直接加到细胞液中，必须事先配制。 细胞冻存 细胞冻存前12-24h，换新鲜培养基，使细胞一直处于对数生长期。 待细胞长至80%汇合时胰酶消化，用新鲜培养基吹打后制成细胞悬液，1000rpm离心10min。悬浮细胞则直接离心。 弃上清，加入冻存液重悬细胞沉淀，调整细胞浓度为3×10^6-1×10^7cells/mL。将细胞悬液分至冻存管内，每管1-1.5mL，拧紧盖子。在管壁上做好标记，标明细胞名称、冻存日期等。 按下列顺序依次降温：室温→4℃ 20min →-20℃ 30min →-80℃过夜→液氮保存。也可使用程序降温盒更为方便，细胞冻存管放入程序降温盒内可直接放入-80℃过夜，再转至液氮罐内。注意程序降温盒内异丙醇的量必须高于最低刻度线；冻存5次后异丙醇需要更换一次，以免影响冻存效果。 细胞冻存后应取出一管复苏，检测细胞的存活率。理论上细胞可在液氮内长期保存，为稳妥起见可在细胞冻存半年后复苏培养，观察细胞生长情况，再继续冻存。 细胞复苏 冻存细胞十分脆弱，必须轻柔操作。除少数对冷冻保护剂（DMSO或甘油）敏感的细胞，绝大部分细胞在解冻之后，可直接接种到完全培养基中，隔天再换新鲜培养基以去除DMSO
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预防细胞污染的注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
预防细胞污染的注意事项 实验进行前，超净台用紫外灯照射30-60min，然后用75%酒精擦拭超净台台面，并开启超净台风扇运转10min左右再开始实验操作。 实验用品用75%酒精擦拭后才能放入超净台内；实验用品用完应移出超净台，以利于气流的流通。实验完成后用75%酒精擦拭超净台台面。 每次操作只处理一种细胞；即使不同细胞使用相同的培养基也不要共享同一瓶培养基，避免细胞间的交叉污染。 操作时小心取用无菌的物品，避免污染。勿碰触吸管尖头，不小心碰触后应立即更换；不要在打开的容器瓶口正上方操作，容器打开后，倾斜45°操作，操作完成后及时盖上瓶盖。 CO2培养箱的清洁是较易被忽视的地方，应1-2个月对培养箱定期进行清洁消毒。先用75%酒精擦拭培养箱内壁、隔板、水盘2-3次，用双蒸水清洗，再用酒精棉球擦拭一遍，最后紫外灯照射4h以上。水盘内加入无菌水（应每周更换），待培养箱内温度、湿度、CO2浓度稳定后再放入细胞。 定期清洗或更换超净台过滤膜、预滤网。
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细胞培养常见问题及可能原因的建议解决方案
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
细胞培养常见问题及可能原因的建议解决方案 培养基pH值变化迅速 培养箱CO2分压设置错误---根据培养基中NaHCO3的浓度增大或降低培养箱CO2的分压，NaHCO3浓度为2.0-3.7g/L时，应相应地使用5%-10%的CO2分压 细胞培养瓶瓶盖过紧---将瓶盖旋松1/4圈 碳酸氢盐缓存系统缓冲能力不足---加入HEPES缓冲液，使其终浓度为10-25mM 培养基中盐含量不正确---CO2平衡环境中使用以Earle平衡盐为基础的培养基，大气条件下使用以Hanks平衡盐为基础的培养基 细菌、酵母或真菌污染---将细胞和培养基灭菌处理后丢弃 细胞无法在培养器皿上贴壁生长 细胞胰酶消化过度---缩短胰酶消化时间或减少胰酶用量 支原体污染---隔离细胞，检测是否感染支原体；清洗通风厨和培养箱，如细胞被污染，灭菌处理后丢弃 培养基中无附着因子---如果使用的是无血清配方，应确保含有附着因子或者使用经过包被的培养板 悬浮细胞聚集成团 存在钙离子和镁离子---用不含钙离子和镁离子的平衡盐溶液清洗细胞，轻轻吹打细胞，使其形成单细胞悬液 支原体污染---隔离细胞，检测是否感染支原体；清洗通风厨和培养箱，如细胞被污染，灭菌处理后丢弃 蛋白水解酶消化过度导致细胞裂解、DNA释放 用0.001%DNA酶I处理细胞；用PBS冲洗后再接种到新培养基中 细胞生长缓慢 培养基或血清改变---比较不同培养基配方中葡萄糖、氨基酸及其他成分有无差异；通过生长实验比较新老批次血清有无差异；增大细胞初始接种密度；使细胞逐步适应新的培养基 必需生长促进成分（如L-谷氨酰胺或生长因子）耗竭、缺乏或分解---去除原培养基，加入新鲜培养基；向培养基中添加生长促进成分（如L-谷氨酰胺） 轻度细菌或真菌污染---在不添加抗生素的条件下进行培养，如细胞被污染，灭菌处理后丢弃 时间存储不当---血清应于-5℃至-20℃下储存；培养基应于2℃~8℃下避光储存；尽量减少血清和培养基见光时间 细胞初始接种密度低---增大活细胞接种密度 细胞衰老、老化---将老化细胞
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食品中黄曲霉素的简介
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
黄曲霉毒素(aflatoxin，简称为AF)是到目前为止所发现的毒性最大的真菌毒素。它可通过多种途径污染食品和饲料，直接或间接进入人类食物链，威胁人类健康和生命安全，对人体及动物内脏器官尤其是肝脏损害严重，该毒素是黄曲霉和寄生曲霉中产毒菌株的代谢产物，普遍存在于霉变的粮食及粮食制品中。曲霉毒素可以有曲霉菌黄曲霉、寄生曲霉、集封曲霉和伪溜曲霉4种真菌产生，是一组化学结构类素的二呋喃香豆素的衍生化合物，中药在贮藏、制备、运输过程中如保存不当有受潮霉变而污染黄曲霉毒素的可能。黄曲霉毒素是目前世界上已知的毒性最强的化合物之一，其致癌性肯定。对中药中黄曲霉毒素残留量进行严格控制对保证药用安全具有重要意义。 黄曲霉毒素对人体的危害 1、引起急、慢性中毒 黄曲霉毒素是剧毒物质，其毒性相当于氰化钾的10倍，砒霜的68倍。黄曲霉毒素属肝脏毒，除抑制DNA、RNA的合成外，也抑制肝脏蛋白质的合成，黄曲霉毒索引起人类的急性中毒事件，国内外均有许多报导，最典型的是印度的霉变玉米事件，该事件直接导致了数十人丧生，数百人患上不同类型的肝脏疾病。 2、致癌性 黄曲霉毒素有极强的致癌性，长期摄入黄曲霉毒素会诱发肝癌。它诱发肝癌的能力比二甲基亚硝胺大75倍，是目前公认的致癌性最强的物质之一。另据世界卫生组织报导，黄曲霉毒素含量在30?50ug/kg时为低毒，50?100ug/kg时为中毒，100?1000ug/kg时为高毒，1000ug/kg以上为极毒。鉴于黄曲霉毒素对人类的巨大危害性，我国对其在食品中的含量作了严格规定，其中，乳制品中黄曲霉毒素最高允许量为5ug/kg（即5ppb）。 黄曲霉毒素的种类 黄曲霉毒素主要有4种：即B1、B2、C1、G2，其中B1被认为是主要的有毒物质，有2种这些毒素的代谢产物M1和M2。其中黄曲霉毒素B1主要存在于农产品，动物饲料，中药等产品中；黄曲霉毒素M1是动物摄入黄曲霉毒素B1后在体内经羟基化代谢的产物，一部分从尿和乳汁排出，一部分存在于动物的可食部分，如乳、肝、
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查找SNP信息的方法介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
命名方法有以下几种： 1、GenBank官方的refSNP ID单核苷酸多态性命名法 GenBank官方的refSNP ID单核苷酸多态性命名法是相对比较完善的命名体系，命名方法是rs+7位阿拉伯数字。如果已知一个SNP的refSNP ID，那么就可以在GenBank的SNP数据库中搜索到相关的信息和在基因组中的位置了。譬如我搜索rs776746，你会发现CYP3A5和 RS776746是一个东西。 网址：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/snp/ 2、突变信息之间加上位置信息： 又分为三种方式： 突变信息之间+cDNA的位置，如C188T； 突变信息之间加上DNA的位置，如A2546G； 突变氨基酸信息之间加上氨基酸位置，如Glu145Lys. 3、惯用名或频率顺序拟定的惯用名称： 在文献中出现的等位基因常见的标注方式，大家最熟悉的如CYP2D6*10、CYP2C9*3等，还有一些前面加个m，表示突变，如CYP2C19m2 等，还有一些也可以在文献中看到，如CYP2E1的C1>C2突变等等，总之形式百花齐放，百家争鸣，让人头晕。其实这就是一种非常不正规的用 HGVS Names标注SNP位置的方法，很明显，由于缺少引用核酸序列的接受号，因此读者无法从这样的表示在GenBank中查到对应的信息。这是个历史遗留问 题，责任也不能全怪原文的作者标注不明。 4、HGVS命名法： HGVS是Human Genome VariationSociety(人类基因组变异协会)的简称，是一个非政府的民间学术组织，其官方网站的网 址：http://www.hgvs.org/。HGVS命名SNP法的规则是标出引用的核酸序列号（Reference Sequence，RefSeq）和SNP在该核酸序列中的位置，例如：NG_000004.3:g.247167G>A，其中红色的部分是核酸序 列接受号，绿色的部分是该单核苷酸多态性位点在该核酸序列中的位置，G>A表示原始碱基是G，突变碱基是A。这样的命名方法有利于找出所在基因序列 中的位置。 幸福来得太快，但还是完全不知道要从如何查找？您只需要联系，我们将免费为您查找相关SNP位点信息
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