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大鼠γ干扰素ELISA试剂盒操作说明
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
大鼠γ干扰素ELISA试剂盒保存条件及有效期：2-8℃/6个月 标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 大鼠γ干扰素ELISA试剂盒操作步骤 1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 2400pg/ml 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 1200pg/ml 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 600pg/ml 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 300pg/ml 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 150pg/ml 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用 5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7. 温育：操作同3。 8. 洗涤：操作同5。 9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟. 10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。 大鼠γ干扰素ELISA试剂盒注意事项 1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 2．浓洗涤液可能会有结晶析出
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你都知道ELISA试剂盒操作中的哪些注意事项？
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
由于ELISA试剂盒灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点让其在科研事业中被广泛运用，但是您们知道操作时还应注意哪些吗？下面上海恒远就来解说elisa试剂盒的操作注意事项： 1、试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。 2、实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。 3、不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 4、使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。 5、使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。 6、洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。 7、底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。 8、加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。 9、按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
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对于细胞培养收获液的检查
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
正常细胞常规检测指标：产量、细胞活力、细胞密度等；同时也有关于污染及外源因子的检测指标：微生物负荷（微生物限度/无菌检查）、支原体、细菌内毒素、病毒检测；支原体的检查方法：扩增培养、Hochest 33342染色法、貌似也了解部分企业采用real-time PCR方法进行检测；关于病毒检测：一般是种数特异病毒检查、体外正常细胞接种培养法、电镜或者Real-time PCR检测逆转录病毒颗粒、报道的污染案例病毒如Real-time PCR检查MMV及zui近几年发现的Calicivirus isolate 2117。Humira是批批收获液检验，Remicade是每启动一次新的WCB的前3个批次检测病毒。中国药典提到常规的批批检验项目是产量、内毒素和支原体，战友们是否进行无菌检查或者微生物限度检测呢？中国药典提到至少对3次收获液进行外源病毒检测，这个没有讲太细，但我理解可以参考Remicade，申报临床的3个批次、后面涉及到正常细胞如WCB等工艺变更的3个批次可能都需要进行检验，那问题来了，企业不具备资质，这一块又需要委托中检院或者别的机构进行。
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费氏弧菌发光杆菌染菌原因分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
费氏弧菌发光杆菌染菌原因分析 （一）染菌的杂菌种类分析 对于每一个发酵过程而言，污染的杂菌种类的影响是不同的。如在抗生素的发酵过程中，青霉素的发酵污染细短产气杆菌比粗大杆菌的危害更大；链霉素的发酵污染细短杆菌、假单胞杆菌和产气杆菌比污染粗大杆菌更有危害；四环素的发酵过程zui怕污染双球菌、芽孢杆菌和夹膜杆菌；柠檬酸的发酵zui怕青霉菌的污染；谷氨酸发酵zui怕噬菌体污染。因噬菌体蔓延迅速，难以防治，容易造成连续污染。若污染的杂菌是耐热的芽孢杆菌，可能是由于培养基或设备灭菌不彻底、设备存在死角等引起；若污染的是球菌、无芽孢杆菌等不耐热菌，可能是由于种子带菌、空气过滤效率低、除菌不彻底、设备渗漏和操作问题等引起涸 污染的是真菌，就可能是由于设备或冷却盘管的渗漏、无菌室灭菌不彻底或无菌操作不理当、糖液灭菌不彻底(特别糖液放置时间较长)而引起。 (二)费氏弧菌发光杆菌发酵染菌的规模分析 从染菌的规模来看，主要有三种。 ①大批量发酵罐染菌。如发生在发酵前期，可是种子带菌或连消设备引起染菌；如果染菌发生在发酵中期、后期，且这些杂菌类型相同，则一般是空气净化系统存在诸如空气系统结构不合理、空气过滤器介质失效等问题。 ②部分发酵罐染菌。如果染菌发生在发酵前期，就可能是种子染菌、连消系统灭菌不彻底；如果是发酵后期染菌，则可能是中间补料染菌，如补料液带菌、补料管渗漏。 ③个别发酵罐连续染菌(此时如果采用间歇灭菌工艺，一般不会发生连续染菌)。个别发酵罐连续染菌，大都是由于设备渗漏造成，应仔细检查阀门、罐体，或罐器是否清洁等。一般设备渗漏引起的染菌，会出现每批染菌时间向前推移的现象。 (三)不同污染时间分析 从发生染菌的时间来分析，也是三种情况。 ①染菌发生在种子培养阶段，或称种子培养基染菌。此时通常是由种子带菌、培养基或设备灭菌不彻底，以及接种操作不当或设备因素等原因而引起染菌。 ②在发酵过程的初始阶段发生染菌，或称发
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抗原elisa试剂盒测定错误结果的原因分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
抗原elisa试剂盒ELISA基本原理是： ①使抗原(或抗体)结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性； ②使抗原(或抗体)与某种酶联结成酶标抗原(或抗体)，而且此酶标抗原(或抗体)既保留其免疫活性，又保留其酶活性； ③测定时将受检标本(抗体或抗原)和酶标抗原(或抗体)按不同步骤与固相载体表面的抗原或抗体进行反应，再用洗涤方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其它物质分开，zui后结合在固相载体上的酶量与标本中受检的抗体或抗原量成一定比例；再加入酶反应底物后，底物被酶催化后变为有色产物，根据其颜色反应的深浅进行定性或定量分析，以了解被测标本中抗体或抗原含量。 ELISA方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定。但ELISA测定中影响因素较多，而且其操作中有一定的技术要求，在临床检验中除正常反应外，有时常可见到一些错误结果(即假阳性或假阴性结果)。 引起ELISA测定错误结果的原因主要有： ①标本因素； ②试剂因素； ③操作因素。 血清是zui常用的ELISA标本，血浆一般可视为与血清同等的标本，标本引起的假阳性和假阴性结果主要是干扰性物质所致，抗原elisa试剂盒分为内源性物质和外源性物质两种： 1．内源性物质有人认为大约40%的人血清标本中含有非特异性干扰物质，可以不同程度影响检测结果。常见的干扰物质有：类风湿因子、补体、嗜异性抗体、嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠Ig(s)抗体、交叉反应物质和其它物质等。 (1)类风湿因子人血清中IgM、IgG型类风湿因子(RF)可以与ELISA系统中的捕获抗体及酶标记二抗的FC段直接结合，从而导致假阳性。 解决该情况的办法是： ①用F(ab)2替代完整的IgG； ②标本用联有热变性(63℃，10min)IgG的固相吸附剂处理(将热变性IgG加入到标本稀释液中同样有效)；③检测抗原时，可以用2-巯基乙醇等加入到标本稀释液中，使RF降解。 (2)补体ELISA系统中固相一抗和标记二抗过程中，抗体分子发生变构，其FC段的补体C1q分子结合位点被暴露出来，使C1q可以将二者连接起来，从而造成假阳性
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空肠弯曲菌样品处理和分离
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
菌种培养样品处理 1.空肠弯曲菌一般样品 取25g（mL)样品（水果、蔬菜、水产品为50g）加入盛有225mL Bolton肉汤的有滤网的均质袋中（若为无滤网均质袋可使用无菌纱布过滤），用拍击式均质器均质1min～2min，经滤网或无菌纱布过滤，将滤过液进行培养。 2.整禽等样品 用200mL0.1%的蛋白胨水中充分冲洗样品的内外部，并振荡2min～3min，经无菌纱布过滤至250mL离心管中，16000g离心15 min后弃去上清，用10 mL 0.1%蛋白胨水悬浮沉淀，吸取3 mL于100 mLBolton肉汤中进行培养。 3.贝类 菌种培养取至少12个带壳样品，除去外壳后将所有内容物放到均质袋中，用拍击式均质器均质1min～2min，取25g样品至225 mLBolton肉汤中（1:10稀释），充分震荡后再转移25mL于225 mLBolton肉汤中（1:100稀释），将1:10和1:100稀释的Bolton肉汤同时进行培养。 4.蛋黄液或蛋浆 取25 g（mL)样品于125mLBolton肉汤中并混匀（1:6稀释），再转移25mL于100mLBolton肉汤中并混匀（1:30稀释），同时将1:6和1:30稀释的Bolton肉汤进行培养。 5.鲜乳、冰淇淋、奶酪等 若为液体乳制品取50g；若为固体乳制品取50g加入盛有50mL0.1%蛋白胨水的有滤网均质袋中，用拍击式均质器均质15s～30 s，保留过滤液。必要时调整pH值至7.5±0.2，将液体乳制品或滤过液以20000g 离心30 min后弃去上清，用10 mL Bolton肉汤悬浮沉淀（尽量避免带入油层），再转移至90 mLBolton肉汤进行培养。 6.需表面涂拭检测的样品 无菌棉签擦拭检测样品的表面（面积至少100 cm2以上），将棉签头剪落到100 mLBolton肉汤中进行培养。 7.水样 将4 L 的水（对于氯处理的水，在过滤前每升水中加入5 mL1mol/L硫代硫酸钠溶液）经0.45 μm滤膜过滤，把滤膜浸没在100 mL Bolton肉汤中进行培养。 菌种培养分离 将24 h增菌液、48 h增菌液及对应的1:50稀释液分别划线接种于Skirrow血琼脂与mCCDA琼脂平板上，微需氧条件下42 ℃±1 ℃培养24 h～48 h。另外可选择使用空肠弯曲菌显色平板作为补充。 观察24 h培养与48 h
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转化细胞计数原理和计数方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
转化细胞实验原理 测定微生物细胞数量的方法很多，通常采用的有显微直接计数法和稀释平板计数法。 直接计数法适用于各种单细胞菌体的纯培养悬浮液，如有杂菌或杂质，则难于直接测定。菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板，一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽(Petrof Hausser)细菌计数板。两种计数板的原理和部件相同、只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。而血球计数板较厚，不能使用油镜，计数板下部的细菌难于区分。 血球汁数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽所构成的3个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区，计数区的刻度应有两种：一种是计数区分为16个大方格(大方格用三线隔开)，而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格(大方格之间用双线分开)，而每个大方格又分成16个小方格。但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。 计数区边长为1mm，则计数区的面积为1mm2，每个小方格的面积为1/400mm2。盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm，所以计数区的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为1／4000mm3。 使用血球计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每mL菌液(或每g样品)中微生物细胞的数量。 已知：1mL体积＝10mm×10mm×10mm＝1000mm3 所以：1mL体积应含有小方格数为1000mm3／(1／4000mm3)＝4x106个小方格。即系数K＝4x106。因此：每mL菌悬液中含有细胞数=每个小格中细胞平均数(N) x系数(K) x菌液稀释倍数(d)。 转化细胞实验方法 (1)视待测菌悬液浓度，加无菌水适量稀释(斜面一般稀释到10-2)，以每小格的菌数可数为度。 (2)取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。 (3)将酵母菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘滴入一小滴(不宜过多)，让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸
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从原培养容器中分离细胞操作流程
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
细胞系从基层迅速分离细胞，且保持细胞完整性的一般步骤。这一步骤并不意味着对于所有细胞系的广泛应用，每一种系统*条件和施用浓度应该根据经验加以确定。 再次培养时检测细胞的活性。 细胞的活率应该超过90% 对于无血清培养基，降低胰蛋白酶使用量。 1. 移弃使用过的细胞培养基。 2. 使用不包含有钙镁的平衡盐溶液或EDTA(ethylene diamine tetraacetic acid，乙二胺四乙酸.)清洗细胞系(看表确定正确的清洗溶液)。在培养瓶对着细胞的一面加入清洗溶液，通过转动培养瓶1到2分钟清洗细胞层，然后去除清洗液。 3. 以2～3ml/25cm2的量，加选择的分离液(见表)到培养瓶对着细胞的一面。确保分离液覆盖细胞层。在37℃孵育培养瓶，轻轻摇动培养瓶。通常，在5到15分钟内，细胞就会脱落。细胞分离需要的时间因细胞系不同而有所变化。仔细监测细胞分离过程，避免细胞受损伤。对难于从培养瓶基层分离的细胞系，可以轻轻敲打，以加速分离过程。 4. 当细胞完全分离时，垂直放置培养瓶，让细胞流到培养瓶的底部。在培养瓶中加入完全培养基，通过移液管在单层细胞表面反复吹打来分散细胞。计数并再次培养细胞系。 5. 对于无血清培养基，加入大豆胰蛋白酶抑制剂。通常使用1∶1(v∶v)0.25mg/ml胰蛋白酶抑制剂到胰蛋白酶中将抑制胰蛋白酶活性。
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细胞消化的操作步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
1. 绝大部分干细胞消化的时候是只要用胰酶润洗一遍即可。吸去胰酶后，残留的那些无法计算体积的附着在细胞表面的微量胰酶在37℃一般不到2min足够消化细胞。对于这些细胞原则上不要用胰酶孵育细胞，连续这样传代，对细胞伤害很大。简单的程序是PBS润洗吸去，胰酶润洗吸去，然后37℃消化。比较难消化的细胞（润洗方法5min还不能消化），这样的细胞一般需要用少量胰酶孵育。2.细胞如何算是消化好了呢？不是细胞全部成间隔分布很离散的单个圆形才算消化好了，一般你肉眼观察贴壁细胞层，只要能移动了，多半呈沙壮移动，其实已经可以了，很多人喜欢把细胞消化或者吹打成完全分离细胞，这是没有必要的。一般能移动了，说明细胞与培养基质材料的附着已经消失了，细胞之间的附着也已经消失了，细胞已经独立分布了（虽然没有呈现很广的离散分布）。这个时候应该停止消化，不要等到看到镜下所有细胞都分离得非常好，间隙很大，才停止。细胞就是完全成单个干细胞悬液，之后在贴壁的过程中仍然会聚集，这个是贴壁培养的细胞，尤其是肿瘤细胞的一个特性。如果和标准形态不一致，那可能是自己没消化好导致的，但如果消化方法正确，仍然成片分布，甚至完全吹打成单细胞悬液，贴壁后仍然成片分布，这是细胞的特性，是因为贴壁过程中重新聚集了。这个时候你拼了命要去让它均匀分布，你的细胞之后会对你越来越不好。3.EDTA的作用。胰酶切割ECM的一些负责粘连和附着的蛋白，而EDTA通过螯合Ca离子，作用于Integrin的活性，所以EDTA的作用更加温和。有的人在胰酶里添加一些EDTA，或者对付特别难消化的细胞，添加多一些EDTA。4.PBS洗涤。消化之前用PBS洗涤，是常见的操作，因为血清中含有抑制胰酶的蛋白。对于一些难消化细胞，那么可以配制不含Ca，Mg离子的PBS，因为这些离子也会抑制胰酶的活性。但对于绝大部分胰酶或者EDTA溶液润洗即可消化的干细胞，不需要配制如此溶液。
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专家对ELISA试剂盒的评价
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
ELISA试剂盒是一种十分常用的定性定量方法，人体和动物、体外细胞培养中超过80％蛋白定量都使用其作为检测的手段。ELISA试剂盒价格一般非常昂贵，但各家试剂公司的质量却良莠不齐。ELISA的试剂盒有用于科研的，也有用于临床诊断的。应用于临床诊断的试剂盒必须有卫生部的许可文号，国家对应用于临床诊断的试剂盒有严格的规定和要求，制定相关的手则来管理试剂盒的质量。 仔细阅读说明书，对说明书的内容有一个详细的了解。 审查内容包括： 1. 试剂盒的名称：ELISA试剂盒名称一般由“(物种)＋(测定指标)＋酶联免疫试剂盒(ELISA)”，物种和测定指标不能搞错，否则买错了就是你的事情；另外有的试剂盒说明书试剂盒名称明显与写在试剂盒上的名称不符，这要引起你的警惕。 2. 用途：应用于科研还是临床诊断，用于临床诊断的有卫生部的批准文号。 3. 测定原理：现在ELISA试剂盒除非是测定抗体的以外，一般使用的是双抗体夹心法，此种方法大多数用的是增强的双抗体夹心法，即使用生物素-亲和素系统，还有少数的指标可能使用竞争法，这类方法适用于半抗原的测定。具有复杂结构的多表位蛋白抗原，其双抗体夹心法中的一个抗体必须用单抗，否则背景很高。当然如果两个都是单抗(这两个单抗针对不同表位)，那么测定的线性范围就较宽，试剂盒性能就较好；一个用单抗，一个用多抗，测定的灵敏度会较高。某些简单的化合物用ELISA测定时，因为没有两个或以上的表位，一般只能作为半抗原，只能用竞争法测定。如果你发现有测定简单化合物(如雌激素、NO、地高辛等)用双抗体夹心法作测定原理时，这个试剂盒你就要怀疑了。另外还要说明一步双抗体夹心法与两步双抗体夹心法的区别。 一步双抗体夹心法的吸光度-剂量曲线呈钟形，随着待则标本中抗原浓度的增加而升高至一定程度后，测定吸光度即随抗原浓度的增加而开始下降直至不显色，即所谓的“钩状效应”(hook eHect)，也就是我们在免疫沉淀试验中所称的“带现象”(zone phenomenon)。所以当
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HBsAg ELISA试剂动态质量评价
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
目的建立HBsAg ELISA试剂质量评价方法,控制试剂质量。方法采用国家参考品对HBsAg ELISA试剂进行考核。结果抽检的不同厂家或同一厂家不同批号的国产HBsAg ELISA试剂对弱阳性标本的检出能力存在差异;进口试剂对弱阳性标本的检出能力较稳定;进口试剂的批间差异小于国产试剂。结论建立在选择试剂前进行质量评估并实施进货前抽样检测、定期对试剂进行质量评价的制度是保证试剂检测结果的一致性的必要手段。
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细胞污染的清除
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
培养细胞一经污染，多数较难处理。如果污染细胞价值不大，宜弃之;在寻找原因后彻底消毒操作室，复苏或重新购置细胞，再培养。 若污染细胞价值较大，又难于重新得到，可采取以下办法清除。 一、细菌和真菌的清除 1、使用抗生素 抗生素对杀灭细菌较有效。联合用药比单独用药效果好。预防用药比污染后再用药效果好。预防用药一般用双抗生素，污染后清除用药需采用大于常用量5～10倍的冲洗法，于加药后作用24～48小时，再换常规培养液。此法在污染早期有效。 二、支原体的清除 1、用MRA处理 用MRA(Mycoplasma Removal Agent)处理细胞，每4天换一次液,连续处理15天以确保细胞纯洁健康，效果好. 2、用清洗纯化法清除支原体污染的方法 细胞营养驯化→细胞群的筛选→细胞清洗→反复离心洗涤 其原理是利用离心力、细胞、微生物质量和悬液的浮力差达到清除支原体的目的。由于支原体个体小且除发酵支原体外多为细胞外寄生,所以通过反复洗涤细胞和低速离心换液使其中潜在的支原体数量降低限。 如结合敏感抗生素的抑杀作用，可达到更好的效果。 3、药物辅助加温处理 先用药物处理后，再将污染的组织培养物放在41℃培养18小时，可杀死支原体，但对细胞有不良影响。 4、使用支原体特异性血清 用5%的兔支原体免疫血清可去除支原体污染，因特异抗体可抑制支原体生长，故经抗血清处理后11天即转为阴性，并且5个月后仍为阴性。但此法比较麻烦，不如用抗生素方便、经济。 上海传秋生物 生物试剂一站式采购
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细胞污染的预防
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
预防是防止细胞培养过程中发生污染的办法。只有预防工作做在前，才能将发生污染的可能性降到zui小程度。 一般预防可从以下几方面着手： 1、添加抗生素 2、从物品、用品消毒灭菌着手 细胞培养所用物品清洗、消毒要彻底，各种溶液灭菌除菌要仔细，并在无菌试验阴性后才能使用。 操作室及剩余的无菌器材要定期清洁消毒灭菌。 3、从操作者做起 (1)进无菌室前要用肥皂洗手，按规定穿隔离衣。工作开始要先用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和烧灼瓶口。 (2)操作者动作要轻，必须在火焰周围无菌区内打开瓶口，并将瓶口转动烧灼。操作时尽量不要谈话，若打喷嚏或咳嗽应转向背面。 (3)操作时要常更换吸管，一旦发现吸管口接触了手和其他污染物品应弃去。实验完毕用消毒水浸泡的纱布擦台面。 4、防止细胞交叉污染 在进行多种细胞培养操作时，所用器具要严格区分。 在进行换液或传代操作时，注射器和滴管不要触及细胞培养瓶瓶口，以免把细胞带到培养液中污染其他细胞。 细胞一旦购置或从别处引入，均应及早留种冻存，一旦发生污染可重新复苏培养。 5、无菌室的彻底消毒 1) 0.1%新洁尔灭全面彻底擦洗无菌室; 2)甲醛熏蒸法：甲醛是一种广谱灭菌剂菌，其水溶液和气休对各种细菌、芽孢及真菌等微生物均有杀灭作用。 上海传秋生物 生物试剂一站式采购欢迎 更多细胞培养 血清 相关技术问题 欢迎您致电咨询！！
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ELISA实验操作之保温
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
在ELISA中一般有两次抗原抗体反应，即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间，这一保温过程称为温育(incubation)，有人称之为孵育，在ELISA中似不恰当。 ELISA属固相免疫测定，抗原、抗体的结合只在固相表面上发生。以抗体包被的夹心法为例，加入板孔中的标本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗结合的机会，只有zui贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触。这是一个逐步平衡的过程，因此需经扩散才能达到反应的终点。在其后加入的酶标记抗体与固相抗原的结合也同样如此。这就是为什么ELISA反应总是需要一定时间的温育。温育常采用的温度有 43℃、37℃、室温和4℃（冰箱温度）等。37℃是实验室中常用的保温温度，也是大多数抗原抗体结合的合适温度。在建立ELI SA方法作反应动力学研究时，实验表明，两次抗原抗体反应一般在37℃经1-2小时，产物的生成可达。为加速反应，可提高反应的温度，有些试验在43℃进行，但不宜采用更高的温度。抗原抗体反应4℃更为彻底，在放射免疫测定中多使反应在冰箱中过一夜，以形成zui多的沉淀。但因所需时间太长，在ELISA中一般不予采用。 保温的方式除有的 ELISA仪器附有特制的电热块外，一般均采用水浴，可将ELISA板置于水浴箱中，ELISA板底应贴着水面，使温度迅速平衡。为避免蒸发，板上应加盖，也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔，此时可让反应板漂浮在水面上。若用保温箱，ELISA板应放在湿盒内，湿盒要选用传热性良好的材料如金属等，在盒底垫湿的纱布，zui后将ELISA板放在湿纱布上。湿盒应先放在保温箱中预温至规定的温度，特别是在气温较低的时候更应如此。无论是水浴还是湿盒温育，反应板均不宜叠放，以保证各板的温度都能迅速平衡。室温温育的反应，操作时的室温应严格限制在规定的范围内，标准室温温度是指20-25℃，但具体操作时可根据说明书的要求控制温育。室温温育时，ELISA板只要平置于操作台上即可。应注意温育的温度和时间应按规定力求准确。为保
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养好细胞注意点（一）
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
（一）冷冻管应如何解冻 取出冷冻管后，须立即放入 37 ℃ 水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在 1 分钟内全部融化，并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管的爆裂。 （二）细胞冷冻管解冻培养时，DMSO如何处理 在细胞解冻之后，可直接离心去除DMSO，用新鲜的培养基悬浮后直接放入含有 新鲜培养基的培养角瓶中进行细胞培养，如此可避免解冻后细胞生长受到DMSO影响。 （三）可否使用与原先培养条件不同的培养基 每一细胞株均有其特定使用且已适应的细胞培养基，若骤然使用和原先提供培养条件不同的培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活，不应该马上替换。 （四）可否使用与原先培养条件不同的血清种类 血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。 （五）何谓 FBS，FCS，CS，HS FBS （fetal bovine serum） 和 FCS （fetal calf serum） 是相同的意思，两者都是指胎牛血清。CS （calf serum） 则是指小牛血清。HS （horseserum） 则是指马血清。 （六）培养细胞时应使用 5% 或 10% CO2 一般培养基中大都使用 HCO3-/CO32-/H+ 作为 pH 的缓冲系统，而培养基中 NaHCO3 的含量将决定细胞培养时应使用的 CO2 浓度。理论当培养基中 NaHCO3 含量为每公升 3.7 g 时，细胞培养时应使用 10% CO2；当培养基中 NaHCO3 为每公升 1.5 g 时，则应使用 5% CO2 培养细胞。
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