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新品速报——淋巴细胞分离液
作者:德尔塔 日期:2022-04-06
Lymphocyte Separation Medium, human, Ficoll-Paque Overview Lymphocyte Separation Medium, Ficoll-Paque(From GE Healthcare),is a recognized standard in laboratories worldwide for the isolation of human lymphocytes forin vitro studies. • Ready to use sterile medium for isolation of human lymphocytes in high yield from peripheral blood. • Maintains viability and representative distribution of B and T lymphocytes. • Low levels of endotoxin (< 0.12 EU/ml). Lymphocyte Separation Medium, Ficoll-Paque is a ready to use, sterile medium for isolation of lymphocytes in high yield from peripheral blood using a simple and rapid centrifugation procedure. It maintains the viability and a representative distribution of B and T lymphocytes. Product Data Order Information For research use only. Application For in vitro isolation of lymphocytes from human peripheral blood. Density Max. 1.078 g/ml Endotoxin Activity Max. < 0.12 EU/ml Properties Lymphocyte Separation Medium, Ficoll-Paque is a sterile, ready-to-use density media containing Ficoll PM400, sodium diatrizoate and disodium calcium EDTA. The density has been optimized for the isolation of human lymphocytes from peripheral blood. Estimated Shelf Life from Manufacture Date 3 years Storage Conditions 4 - 30°C Stability Lymphocyte Separation Medium, Ficoll-Paque is provided as sterile solution which is stable for at least 3 yr when stored between 4°C and 30°C and protected from light. Deterioration of Lymphocyte Separation Medium, Ficoll-Paque product is indicated by the appearance of a yellow color or particu
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蓝星除垢剂化学分析
作者:德尔塔 日期:2022-04-06
蓝星除垢剂化学分析 锅炉除垢剂 一、产品说明 钙垢清洗剂是一种中强酸清洗剂,具有不挥发、无臭味和对人体无毒的特点。 其水溶液能迅速有效的去除铁、钢、铜、不锈钢等材料制造的设备表面的水垢和腐蚀产物。 二、产品特点 适用于循环水、锅炉水、空调冷凝器、板式换热器的清洗低泡沫配方液体药剂,能缩短混合时间。在常温下,干燥条件下,固体的药剂不吸湿,性质稳定。 三、物理特性 状态:稠状液体 外 观:无色透明或略带浅黄色。 溶解度:完全溶于水 挥发性:不挥发 规格:工业用(85%、80%、75%),符合GB2091-2003 四、应用 钙垢清洗剂是适用于各种水系统的中强酸清洗剂清洗剂。本品能快速有效地清除系统内的污垢沉积物,净化金属表面。本品3%的水溶液即可完全溶解钙垢,将其分散在系统内通过排污置换排出系统。缺点是对系统清洗时,对材质存在一定的腐蚀,添加缓蚀剂后,能很好的控制腐蚀速率。适用于材质为铜、PP、PVC、PVDF等材质。 五、操作注意事项 配戴合适手套、眼罩,如不慎如眼,请立即用大量清水冲洗眼睛,并就诊眼科医师。如外溢,则以砂、其他吸收物质吸收后清除之,事后用清水冲洗干净即可;使用前可参阅物质安全数据(MSDS)。 六、包装及储存 钙垢清洗剂用塑料桶包装,每桶净重35公斤。贮存期一年以上。公司名称;廊坊市蓝星化工有限公司
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血清提取蛋白的制作方法
作者:德尔塔 日期:2022-04-06
血清提取蛋白是从血清中提取的蛋白质,适用于食品工业的食品添加剂和医药制剂。 通常提取蛋白质的方法是离心分离,除去血浆,使二价铁血红素酸化,并将其排除。但是这种方法产量很低(100毫升血液仅可提取蛋白质约10)克。 为了提高蛋白质得率,采用新的方法,即用每分钟2 500~3 000转的速度 在15~30分钟内将血液进行离心分离,使醋酸和氯化钠的混合物(比值为2∶1~4∶1)酸化。在温度90~110℃下加热5~15分钟。冷却,再添加*醚。 制作方法: 取经过稳定的血液,作离心分离15~30分钟,每分钟转速为2 500~3 000转。从而取得固形物,去除血浆,用水使固形物沉渣溶解。置血红素于培养基中。为了使培养基酸化而使血红素分子中的二价铁血红素和血球蛋白的结合体分离 预先制备好醋酸和氯化钠的混合物 并将它加热到90~110℃。混合时将固形物的溶血产物缓慢地添加到加热的混合物中。重新把温度逐渐地升高到沸点,煮沸5~15分钟,以便使结合体完全分离,接着将混合物逐步冷却到室温。 为了使二价铁血红素溶解并消除,在混合物中按溶物产物比值2∶1~5∶1添加*醚。这时提取出来的蛋白质呈白棉絮状。将溶液过滤,再用*醚清洗。 100毫升血中提取的蛋白质产品相当于14.4克。应用这种方法,每100毫升的血液可提高蛋白质得率45%。
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完全培养基的分类
作者:德尔塔 日期:2022-04-06
完全培养基是一种在基本培养基内加入一些富含氨基酸、维生素和碱基之类的天然物质,即加入生长因子而制成的各种营养基,可用来满足微生物的各种营养缺陷型菌株的生长需要,是微生物学上常用的一种培养基。 完全培养基根据添加血清量的多少,可分为细胞生长培养基和细胞维持培养基,用于不同细胞和不同研究。 一、细胞生长培养基 细胞生长培养基(液)是用以维持细胞生长增殖之用,含血清比例较大。生长培养液是培养细胞工作中zui主要的培养用液。其组成为:基础培养基80%~90%,血清(多用小牛血清) 10%~20%,抗生素(多用青霉素100U/mL和链霉素100μg/mL)。 这是适用于一般细胞的培养液组成。为培养特定细胞,还要选择适应性培养基,可能尚需添加基本培养基中缺少或该细胞需要的成分。 二、细胞维持培养基 这是为维持细胞缓慢生长或不死的培养液,血清含量甚少。一般细胞因缺少生长因子不能增殖,生长缓慢;但发生转化或癌细胞因自身有产生促生长增殖因子的能力,虽在血清缺少情况下仍能生长;因此维持液可用于选择发生恶性转化的细胞。其组成为:基本培养基95%,血清2%~5%,抗生素(多用青霉素100U/mL和链霉素100μg/mL)。 注意:如培养正常细胞完全不加血清,可维持细胞不死,但时间过长细胞难免退化。
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生物实验中细菌培养基的配方
作者:德尔塔 日期:2022-04-06
培养基是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料,一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)以及维生素和水等。有的培养基还含有抗菌素和色素。 按所用原料不同,可分为两类:应用肉汤、马铃薯汁等天然成分配制的,称为天然培养基;应用化学药品配成并标明成分的,称为合成培养基或综合培养基。化学试剂中的培养基,大多为合成培养基。由于液体培养基不易长期保管,现在均改制成粉末。培养基由于配制的原料不同,使用要求不同,而贮存保管方面也稍有不同。一般培养基在受热、吸潮后,易被细菌污染或分解变质,因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。对一些需严格灭菌的培养基(如组织培养基),较长时间的贮存,必须放在2~6。C的冰箱内。 细菌培养基的配方: 牛*膏琼脂培养基的配方 牛*膏0.3克 ,蛋白胨1.0克,氯化钠 0.5克,琼脂 1.5克,水 100毫升 在烧杯内加水100毫升,放入牛*膏、蛋白胨和氯化钠,用蜡笔在烧杯外作上记号后,放在火上加热。待烧杯内各组分溶解后,加入琼脂,不断搅拌以免粘底。等琼脂完全溶解后补足失水,用10%盐酸或10%的氢氧*钠调整pH值到7.2~7.6,分装在各个试管里,加棉花塞,用高压蒸汽灭菌30分钟。 马铃薯培养基的配方 取新鲜牛心(除去脂肪和血管)250克,用刀细细剁成肉末后,加入500毫升蒸馏水和5克蛋白胨。在烧杯上做好记号,煮沸,转用文火炖2小时。过滤,滤出的肉末干燥处理,滤液pH值调到7.5左右。每支试管内加入10毫升肉汤和少量碎末状的干牛心,灭菌,备用。 根瘤菌培养基的配方 葡萄糖10克 磷酸氢二钾0.5克; 碳酸钙3克 硫酸镁0.2克; 酵母粉0.4克 琼脂20克; 水 1000毫升 1%结晶紫溶液 1毫升; 先把琼脂加水煮沸溶解,然后分别加入其他组分,搅拌使溶解后,分装,灭菌,备用。 建议实验家们在实验中可根据自己实验室所具备的配方材料,选择自己实验所需的细菌培养基的配方。
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完全培养基的分类
作者:德尔塔 日期:2022-04-06
完全培养基是一种在基本培养基内加入一些富含氨基酸、维生素和碱基之类的天然物质,即加入生长因子而制成的各种营养基,可用来满足微生物的各种营养缺陷型菌株的生长需要,是微生物学上常用的一种培养基。 完全培养基根据添加血清量的多少,可分为细胞生长培养基和细胞维持培养基,用于不同细胞和不同研究。 一、细胞生长培养基 细胞生长培养基(液)是用以维持细胞生长增殖之用,含血清比例较大。生长培养液是培养细胞工作中zui主要的培养用液。其组成为:基础培养基80%~90%,血清(多用小牛血清) 10%~20%,抗生素(多用青霉素100U/mL和链霉素100μg/mL)。 这是适用于一般细胞的培养液组成。为培养特定细胞,还要选择适应性培养基,可能尚需添加基本培养基中缺少或该细胞需要的成分。 二、细胞维持培养基 这是为维持细胞缓慢生长或不死的培养液,血清含量甚少。一般细胞因缺少生长因子不能增殖,生长缓慢;但发生转化或癌细胞因自身有产生促生长增殖因子的能力,虽在血清缺少情况下仍能生长;因此维持液可用于选择发生恶性转化的细胞。其组成为:基本培养基95%,血清2%~5%,抗生素(多用青霉素100U/mL和链霉素100μg/mL)。 注意:如培养正常细胞完全不加血清,可维持细胞不死,但时间过长细胞难免退化。
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ELISA的概念、原理、操作步骤
作者:德尔塔 日期:2022-04-06
ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。此项技术自70年代初问世以来,发展十分迅速,目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。 (一) 原理 ELISA是以免疫学反应为基础,将抗原、牽9体的特异性反应与酶对底物的催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行,每加入一种试剂孵育后,可通过洗涤除去多余的游离反应物,从而保证试验结果的特异性与稳定性。在实际应用中,通过不同的设计,具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法(图a)、用于检测抗原的双抗体夹心法(图b)以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。 (二) 操作步骤 方法一 用于检测未知抗原的双抗体夹心法: 1. 包被:用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃过一夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。 2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。 3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小时,洗涤。 4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分钟。 5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。 6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测O·D值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔O·D值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。 方法二 用于检测未知抗体
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乳鼠轮状病毒(RV)ELISA试剂盒操作步骤
作者:德尔塔 日期:2022-04-06
本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定乳鼠血清,血浆及相关液体样本中乳鼠轮状病毒(RV)的表达。 实验原理: 本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫法(ELISA)测定标本中乳鼠轮状病毒(RV)。用纯化的乳鼠轮状病毒(RV)抗体包被微孔板,制成固相抗体,可与样品中轮状病毒(RV)相结合,经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的轮状病毒(RV)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),与CUTOFF值相比较,从而判定标本中乳鼠轮状病毒(RV)的存在与否。 试剂盒组成: 试剂盒组成 48孔配置 96孔配置 保存 说明书 1份 1份 封板膜 2片(48) 2片(96) 密封袋 1个 1个 酶标包被板 1×48 1×96 2-8℃保存 阴性对照 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存 阳性对照 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存 酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 终止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存 浓缩洗涤液 (20ml×20倍)×1瓶 (20ml×30倍)×1瓶 2-8℃保存 样本处理及要求: 1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。 2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。 3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清
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肿瘤细胞培养实验操作分析
作者:德尔塔 日期:2022-04-06
肿瘤细胞培养实验原理: 是将机体内的某组织取出,分散成单细胞,在人工条件下培养使其生存并不断生长、繁殖的方法。借助这种方法可以观察细胞的分裂繁殖、细胞的接触抑制、以及细胞的衰老,死亡等生命现象。 肿瘤细胞动物的选择: 选择大约一半足孕时间的胚胎,10-13天龄胚胎含有zui大数量的未分化的间质细胞,成纤维细胞可从这些细胞衍生获得。 每组小鼠胚胎1个 实验材料: 每组的超净台中有以下物品: 1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶 2. 100ml灭菌烧杯2个; 3、50ml离心筒2个 4、灭菌培养皿1个,细胞培养瓶1个 4、1ml ,200μl移液器各1支;枪头盒2个;无菌玻璃搅拌棒1个 5、细胞计数板1块; 6、灭好菌的镊子1把,剪刀1把; 7、酒精灯1台; 肿瘤细胞试验操作步骤: 1)胚胎的分离。适用哺乳动物(仓鼠、小鼠和大鼠) a.采用认可的方案处死啮齿动物。 b.立即在无菌超净台内用70%乙醇擦洗整个动物。 c.用无菌的镊子和剪子在前腿下作一腹部水平切口,用无菌镊子将皮肤扯向后腿。 d.用另一无菌的剪刀和镊子切开腹部,取出含有胚胎的子宫,置于无菌的培养皿上。 e.剔除胚胎周围的包膜,将胚胎放于无菌的含有无菌PBS的100ml烧杯中。 f.漂洗胚胎,去掉PBS。继续用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮为止。 2)将1-2个胚胎转移至一个小的无菌培养皿中,用新的无菌剪刀小心地绞碎胚胎, 用PBS漂洗。 3)在无菌状态下,将绞碎的胚胎转移于一50ml 的无菌离心筒中, 加入40ml 0.25%的无菌胰蛋白酶,用搅拌棒轻轻搅动 。 4)在温暖的环境中或置于37 °C培养箱中轻轻摇动15分钟。 5)让存留的组织块在重力作用下慢慢沉降,将含有悬浮细胞的液体转移至一无菌50ml的离心管中,该管内按照每10ml上清加入l ml小牛血清的比例加入牛血清以灭活,胰蛋白酶。 6)加人新鲜胰蛋白酶溶液(见前述步骤)于含有残留未消化组织块的原来的50ml离心筒中,重复步骤4和5。 7)离心混合的细
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原代细胞计数的操作步骤
作者:德尔塔 日期:2022-04-06
(一)原代细胞计数 1、将血球计数板及盖片用擦试干净,并将盖片盖在计数板上。 2、将细胞悬液吸出少许,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片和计数板之间。 3、静置3分钟。 4、镜下观察,计算计数板四大格细胞总数,压线细胞只计左侧和上方的。然后按下式计算: 细胞数/ml=4大格细胞总数/ 4×10000 注意:镜下偶见由两个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算,若细胞团占10%以上,说明分散不好,需重新制备细胞悬液。 (二)原代细胞活力 1、将细胞悬液以0.5ml加入试管中。 2、加入0.5ml 0.4%台盼兰染液,染色2一3分钟。 3、吸取少许悬液涂于载玻片上,加上盖片。 4、镜下取几个任意视野分别计死细胞和活细胞数,计细胞活力。 死细胞能被台盼兰染上色,镜下可见深兰色的细胞,活细胞不被染色,镜下呈无色透明状。 活力测定可以和细胞计数合起来进行,但要考虑到染液对原细胞悬液的加倍稀释作用。 (三)MTT法测细胞相对数和相对活力 活细胞中的琥珀酸脱氢酶可使MTT分解产生兰色结晶状甲赞颗粒积于细胞内和细胞周围。其量与细胞数呈正比,也与细胞活力呈正比。 l、细胞悬液以1000rpm离心10分钟,弃上清液。 2、沉淀加入0.5-1ml MTT,吹打成悬液。 3、37℃下保温2小时。 4、加入4—5 ml酸化异丙醇(定容)。打匀。 5、1000 rpm离心,取上清液酶标仪或分光光度计570nm比色,酸化异丙醇调零点。 注意:MTT法只能测定原代细胞相对数和相对活力,不能测定细胞数。 附:1、0.4%台盼兰染液配制: 台盼兰 0.4克 加双蒸水至100 ml。 2、MTT配制: MTT 0.5克,溶于100 ml的磷酸缓冲液或无酚红的基础液中。4℃下保存。 3、酸化异丙醇配制: 异丙醇中加入HCl使zui终达0.04mol/L。
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如何调整培养基PH测定 劲马教你一招
作者:德尔塔 日期:2022-04-06
所存微生物都受到其生存环境中pH的影响通常,选择性物质的存在会缩小它们 生长的pH范围。有时,培养基的酸度或碱度也能作为一种生长选择因子。而对于生化 测试培养基,微生物在基质中显tk活性的pH的范围比生长所耑的PH范围窄:因此,将 培养基的PH调至预期的范围内是很蓽要的。当实验室根据培养基成分自己配制培养基 时,必须检测并调整pH必须指出的是,即使是生产厂商提供的现成的合成脱水培养基 (尤其是对一些库存的脱水培养基),在制成实验用培养基后也需要对其zui终PH进行测定。 测定培养基pH的zui准确的方法是使用pH计。使用前必须用已知pH的(通常PH 为4~7)标准缓冲溶液进行校准。将pH计的电极用蒸馏水冲洗后浸入到烧杯的培养基 中,就可以从pH汁的刻度读出培养基的pH。每个生产厂商对每种不同pH计都提供有 详细的操作说明。 配制培养基时,使用带机械搅拌的pH计可以很容易地调整pH 培养基应在能够不停搅拌的荇器(如大烧杯)中配制,使用磁力搅拌器,磁力搅拌器带有聚乙烯或聚四氟乙烯包装的磁棒。含琼脂的培养基需在融化后调整其pH,用可加 热的磁力搅拃器很容易办到。调节pH时用巳知pH的标准缓冲液溶液先对pH计迸行 校准。然后将复合电极和电阻温度计(如果有)置于培养基中,从烧杯远离电极的一端缓 慢加入适量的盐酸,直到培养基达到并保持所需的pH。 PH计的温度补偿应考虑到温度对电极系统的影响:在一些稀释液和培养基中,PH 随温度的变化而有相当大的变化。对于液体培养基和稀释液而言,pH通常既可以在25℃下,也可以在其使用时的温度下调整和测定。 琼脂培养基必须在溶解后进行PH的调整,溶解的温度在45℃以上:因此,固体培养 基应在其使用温度确定pH这时应使用平头的复合电极,同吋用手动校准PII计的温度 补偿。在制备培养基时,若测定出培养基在熔化状态和凝固状态的pH有所不同时,说明 在调整pH时产生误差。 同样,制备的培养基在加热灭菌处理(如高压灭菌)时,也可能会产生PH的变化。对
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细胞内碱性蛋白和酸性蛋白的显示原理和方法
作者:德尔塔 日期:2022-04-06
原理 转化细胞由于不同的蛋白质分子所带的碱性和酸性基团的数目不同,在pH值不同的溶液中,蛋白质分子所带的净电荷多少不同。如在生理条件下,整个蛋白质所带负电荷多,则为酸性蛋白质;带正电荷多,则为碱性蛋白质。据此,可将标本经三氯醋酸处理提出核酸后,用不同pH值的固绿染液分别染色,细胞内的酸性蛋白和碱性蛋白质显示出来。 转化细胞方法 1.以破坏脊髓法处死蟾蜍,将其腹面向上放人蜡盘中,剪开胸腔,打开心包。小心将心脏剪一小口,取心脏血一滴滴在干净载玻片一端,推片,按此法制备二张血涂片,室温晾干。 2. 将涂片作好标记放在70%乙醇中固定5分钟,室温晾干。 3.放入5%三氯醋酸中60℃30分钟,抽提出核酸。 4.清水冲洗多次(3分钟以上),以冲去痕迹的三氯醋酸。 5.滤纸吸干玻片上水分。 6. 一张片放入0.1%碱性固绿(pH8.0~8.5)中染色10~15分钟,另一张片放入0.1%酸性固绿(pH2.0~2.5)染色5~10分钟。 7.清水冲洗,盖上盖片镜检。 转化细胞结果经碱性固绿染色片中,胞质、核仁不着色,细胞核大部分被染成绿色,是为碱性蛋白质存在处。经酸性固绿染色片中,因胞质和核仁中有酸性蛋白,被染成绿色。
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高压蒸汽灭菌应注意哪些方面
作者:德尔塔 日期:2022-04-06
1.ATCC菌种塑料袋的选择不同常压蒸汽灭菌一般选用聚乙烯薄膜,而高压蒸汽灭菌应选用聚丙烯薄膜,厚度为5~6丝,过薄,耐压和耐热能力低,会影响成品率。聚乙烯薄膜不耐高压,在1.2公斤/平方厘米高压下会融化,不能使用。2.消毒压力和温度不能过高高压蒸汽消毒压力比较高,但由于培养基包装大多使用塑料薄膜,消毒压力不能超过1.4公斤/平方厘米,可以通过延长消毒时间至2小时左右来达到消毒效果。消毒压力和温度过高,薄膜会出现融化或膨胀,产生裂缝、小洞,接种后易感染杂菌。3.消毒时间应随培养基质不同而不同一般而言,颗粒大的消毒时间长,麦粒、玉米作为基质时的消毒时应该长于木屑。4.ATCC菌种加压过程中应先放尽锅内冷气由于高压锅加热初始锅内存有冷空气,开始加热后,热蒸汽集聚在锅的上部,越聚越多,压力越来越高,冷空气却还集聚底部,这时压力表上显示的压力是虚假的,只有把底部的冷空气放掉,显示的才是真实的压力。方法是加热后,当压力表压力达到0.5公斤/平方厘米时,打开放气阀,放尽空气,再加热灭菌。如能放二次空气,效果会更好。5.加热升温和放气减压要慢塑料袋的薄膜是软性的,高压锅加热和减压过程中塑料袋内外存有压力差,加热或减压过快,内外压力差异就大,容易引起塑料袋变形或胀袋、裂缝,接种后易感染杂菌。6.其他另外,ATCC菌种在菌种袋外套一牛皮纸袋(可以反复利用),可以减少因装袋、搬运、接种过程中硬物碰撞造成的塑料袋破损。由于各个厂生产的灭菌锅,其质量、结构、容量不同,塑料袋的均匀度、培养料的颗粒、质地不一样,加上工作人员操作技术不同,在大面积应用时应反复比较试验,选出一个*方案后再应用。
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鸭源性核酸PCR-荧光探针试剂盒Folin-酚试剂法操作分析
作者:德尔塔 日期:2022-04-06
一、鸭源性核酸PCR-荧光探针试剂盒Folin-酚试剂法目前实验室较多用用Folin-酚法测定蛋白质含量,此法的特点是灵敏度高,较双缩脲高两个数量级,较紫外法略高,操作稍微麻烦,反应约在15分钟有zui大显色,并zui少可稳定几个小时,其不足之处是干扰因素较多,有较多种类的物质都会影响测定结果的准确性。原 理蛋白质中含有酚基的酪氨酸,可与酚试剂中的磷钼钨酸作用产生兰色化合物,颜色深浅与蛋白含量成正比。鸭源性核酸PCR-荧光探针试剂盒操 作1、标准曲线的制备:按下表操作,在试管中分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1ml蛋白标准溶液,用生理盐水补足到1ml。加入5ml的碱性酮试剂,混匀后室温放置20分钟后,再加入0.5ml酚试剂混匀。编 号 1 2 3 4 5 6 蛋白标准(ml) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 0.9% NaCl(ml) 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 碱性酮试剂(ml) 5 5 5 5 5 5 混匀后室温(25℃)放置20分钟 酚试剂(ml) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 30分钟后,以第1管为空白,在650nm波长比色,读出吸光度,以各客的标准蛋白浓度为横坐标,以其吸光度为纵坐标绘出标准曲线。2、血清蛋白质测定。稀释血清(或其它蛋白样品浓度):准确吸取0.1ml血清,置于50ml容量瓶中,用生理盐水释释至刻度(此为稀释500倍,其它蛋白样品酌情而定)。再取三只试管,分别标以1、2、3号,按下表操作:编 号 测定管 标准管 空白管 稀释标本(ml) 0.2 — — 稀释标准液(ml) — 0.2 — 0.9%NaCl(ml) — — 0.2 碱性酮液(ml) 1.0 1.0 1.0 混匀后于室温放置20分钟 酚试剂(ml) 0.1 0.1 0.1混匀各管,30分钟后,在波长650nm比色,读取吸光度。鸭源性核酸PCR-荧光探针试剂盒计 算1、以测定管读数查找标准曲线求得血清蛋白含量。2、无标准曲线时,可以与测定管同样操作的标准管按下式计算蛋白含量。
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抗原elisa试剂盒使用时需要注意的细节
作者:德尔塔 日期:2022-04-06
抗原elisa试剂盒专注科研试剂盒的研发及销售多年,涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学等生命科学的各个领域,满足您实验所需,以实现与客户的双赢,完善的库存及供应体系以及稳定的纯化技术,保证产品均能现货供应。期待您的来电。抗原elisa试剂盒使用时需留心的细节:(1)不管是试剂盒,还是其它产品,在使用之前都要仔细阅读说明书,同时确定试剂盒是不是在有效期内。(2)标本制备要规范,每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备(贮存),尽量分装做备份,短期内无法实验者,注意低温保存。(3)根据检测标本数量确定所需试剂盒的量。(4)按说明书将所用试剂盒平衡至室温,配制所需试剂盒,DIY夹心法ELISA常见技术指南。(5)选择抗体时选择一个单抗和一个多抗进行配对,若选择两个单抗,必须识别不同表位的抗体,从同一家公司选择抗体。(6)若使用过氧化物酶作为显色系统,应严禁在洗液和稀释液中加叠氮钠,叠氮钠可抑制过氧化物酶的活性。(7)当测定混合液体中的抗原时,如血清,建议在标本稀释液中加不相干的Ig。(8)准备好所有实验额外所需物品,如试管、吸头、移液器、离心机等。抗原elisa试剂盒加板时产生气泡的处理办法:A、使用吹风机,将吹风机打开,并调节到zui高温度,对96孔板吹1-2秒就可以了。B、采用更好材质的板、或采用专门的96孔板振荡器。C、可以用tip吸走,但实验中费事、效果还不是很理想。D、使用注射器针头扎破。