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3篇顶级论文揭示新一代肿瘤免疫疗法：正常化免疫**
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
2018年以来，肿瘤免疫研究进一步突破。本文将围绕陈列平教授的三篇顶级论文，揭示新一代肿瘤免疫疗法。 1、免疫正常化 2018年10月，陈列平教授团队在《Cell》杂志上发表了A Paradigm Shift in Cancer Immunotherapy: From Enhancement to Normalization关于“免疫正常化”的综述文章，肿瘤免疫正常化（Normalizing tumor immunity），在理念上改变了我们对肿瘤免疫的认识，文章指出抗PD**（这里包括所有目标在于阻断这个通路的所有方法），在原理上并不是增强免疫反应，而是把病人自身应该有的，但在肿瘤生长中被弱化的反应带回到常态。 文章中将免疫反应过程比作一条有流水的通道。在这个过程中，正常的免疫反应就是通道中正常通畅的水流。如果通道堵塞，水流受到影响，通道将无法充分排水。在这种情况下，“增强”策略可以解释为增加通道的压力，以克服排水不足，但如果通道内压力增加太多，就会有破坏通道的风险。反之，“正常化”策略则会通过识别并解除阻塞以恢复正常水流，避免危及通道管壁。 图1 免疫增强与免疫正常化 2、LAG-3-FGL1通路的作用 同年12月，陈列平教授团队再次在《Cell》上发表了题为Fibrinogen-like Protein 1 Is a Major Immune Inhibitory Ligand of LAG-3的论文，证明了纤维介素蛋白1(Fibrinogen-like protein 1, FGL1)是LAG-3的一个重要的功能性配体，并揭示了该LAG-3-FGL1通路在肿瘤免疫中的作用。 淋巴细胞活化基因3 (LAG-3)是一种主要存在于活化T细胞上的转基因膜蛋白，其主要作用是作为一种表达抑制信号的受体。纤维蛋白原样蛋白1 (FGL1)是一种肝脏分泌的蛋白质，可以抑制抗原特异性T细胞活化。 图2 FGL1作为LAG-3的功能性配体可以抑制T细胞活化 FGL1-LAG-3相互作用是独立于B7-H1-PD-1通路的另一条肿瘤免疫逃逸通路，阻断这条通路能和抗PD-1**起到协同作用。 总之，本研究发现并证明了FGL1-LAG-3是肿瘤免疫逃逸的一条新通路，且可作为肿瘤免疫**的潜在靶点。 3、肿
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IVIS视角 | 醛缩酶B介导的果糖代谢诱导了结肠癌肝转移过程中的代谢重组
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
癌症导致的死亡中，大部分是由恶性肿瘤转移而引起的，在临床上仍然是一个挑战。转移性癌细胞通常与原发癌细胞相似，但它们可能会受到所转移器官附近环境的影响。本文揭示了结直肠癌(CRC)细胞在转移至肝脏(一个关键的代谢器官)后经历代谢的重组过程。特别是肝转移细胞通过GATA结合蛋白6抗体 (GATA6) 上调醛缩酶B (ALDOB)的表达，提高果糖代谢，为肿瘤细胞增殖过程中的主要中心碳代谢提供能量。靶向ALDOB或降低膳食果糖可显著降低肝转移性生长，但对原发肿瘤几乎没有影响。本文的研究结果表明，转移细胞可以在新的微环境中利用代谢重组，尤其是在代谢活跃的器官，如肝脏中，对相关通路的操纵可能会影响转移性生长的过程。 原发性肿瘤逐渐累积遗传性改变，并受其肿瘤微环境的影响，直到获得能转移到远处器官的能力(Gupta和Massague, 2006;Valastyan和Weinberg, 2011)。这一过程的典型特征是，结直肠癌（CRC）经过腺瘤到癌的顺序发展，最终导致转移(Barker et al.， 2009)，(约70%的患者) 优先转移到肝脏这个部位 (Rothbarth和van de Velde, 2005) 。在这个阶段，该疾病变得很难**，并对大多数形式的联合**产生耐药性，使得结直肠癌（CRC）转移成为癌症相关死亡的主要原因。无法进行手术的肝转移患者对化疗干预**效果较差，中位生存期为6至9个月 (Alberts et al.， 2005) 。目前针对晚期结直肠癌的化疗并不针对肝转移。部分原因是由于观察到CRC转移与任何特定的基因突变并不一致 (Jones et al.， 2008) ，而且它们通常与原发肿瘤中的细胞相似。然而，新出现的证据表明，非遗传改变，如表观遗传和代谢重组，可能促进癌症转移。将这种机制作为研究的目标可能为开发结直肠癌转移的**方法提供新的途径。 在本研究中，来自临床样本和经盲肠移植的体内CRC转移模型的数据表明，结直肠癌（CRC）肝转移瘤的特定代谢通路发生了改变。特别是，肝转移会上调ALDOB的水平，这是一种参与果糖代谢的酶。肝内植入表明肝环境导致CRC细胞上调AL
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贴壁细胞传代的培养技巧
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
如何传代贴壁细胞？ 细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。一般使用蛋白水解酶（比如胰蛋白酶）消化贴壁细胞成单个细胞，也可加入乙二胺四乙酸（EDTA）提高消化能力，EDTA 是一种二价离子的螯合剂，能抑制细胞膜上的Ca2+和Mg2+。常用的细胞消化液一般含有0.25%(w/v)的胰酶和0.03% (w/v) EDTA，一般用不含Ca2+和Mg2+的盐溶液配置，先用胰酶-EDTA 消化液清洗细胞（5.0 -10.0 ml/75cm），然后弃去消化液，重新加入少量的胰酶-EDTA 消化液(2.0 to 5.0 ml/75 sq. cm flask) ，观察细胞直到细胞变圆脱离瓶壁，此过程一般需要5-15分钟，为了避免细胞成团，消化细胞的过程中不要拍打细胞瓶。对于特别难消化的细胞，可以加入胰酶EDTA 消化液后把细胞置于37°C 促进消化，细胞脱离瓶壁后，立刻加入含有血清的完全培养基中止消化，血清中某些蛋白质能够抑制胰酶的活性。一般情况下，离心并不需要。如果细胞需要无血清或者低血清的培养基，可以以125000g 转速离心5分钟，然后弃去中止用的培养基，加入适合的新的培养基轻轻混匀细胞，移入到新的培养瓶。传代的比例视细胞类型而定，一般是1:2-1:20，具体比例可参考说明书。胰蛋白酶会对某些细胞的细胞膜产生损伤，对于这种类型的细胞，可用细胞刮轻轻刮下细胞，加入适量的培养基，轻轻吹打混匀细胞，然后进行传代培养。 传代细胞的频率多久较合适？ 传代是指把细胞从一个培养瓶移到另一个培养瓶，传代的间隔是指两次传代之间的时间。贴壁型的细胞的汇合度达到或者接近100%的时候，需进行传代操作，但是，有些细胞以克隆的形式生长，汇合度永远达不到100%，对于这种类型的细胞，细胞达到或者接近最大密度的时候，就需传代。接触抑制型细胞（比如3T3）需
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烟用香精酸值的测定说明
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
YC/T 145.1-2012 烟用香精 酸值的测定 范围 YC/T 145 的本部分规定了烟用香精酸值的测定方法。 本部分适用于烟用香精酸值的测定。 烟用香精的酸值 acid value of tobacco flavor 中和 1g 烟用香精所含的游离酸所需氢氧化钾的毫克数。 原理 用氢氧化钠标准溶液或氢氧化钾乙醇标准溶液中和游离酸。 测定 称取5g(精确到0.0001g)烟用香精于烧杯中，溶于20mL乙醇水溶液。用氢氧化钠标准溶液或氢氧化钾乙醇标准溶液滴定至酸度计读数为pH=8时即为滴定终点。 如果滴定消耗的标准碱溶液不足1.0mL时，则应增大试样量，重新滴定。 如果滴定消耗的标准碱溶液大于50mL时，则应更换高浓度的标准碱溶液，重新滴定。 对于颜色较浅的烟用香精，可采用指示剂代替酸度计确定终点，见附录A。 自动滴定仪法见附录B。 结果的计算 按式(1)计算酸值A.V.: 式中: A.V.一一烟用香精试样的酸值； m一一试样的质量，单位为克(g)； V 一一消耗氢氧化钠标准溶液或氢氧化钾乙醇标准溶液的体积，单位为毫升(mL)； c 一一氢氧化钠标准溶液的浓度或氢氧化钾乙醇标准溶液的浓度，单位为摩尔每升(mol/L)； 56.1一一氢氧化钾的分子量，单位为克每摩尔(g/mol)。 取两次平行测定结果的算术平均值作为测定结果，精确至0.1。 当测定结果小于或等于10时，获得的两次平行测定结果的绝对差值不大于0.2；当测定结果大于10小于或等于100时，获得的两次平行测定结果的绝对差值不大于0.5；当测定结果大于100时，获得的两次独立平行测定结果的绝对差值不大于1.0。 附录B (规范性附录) 烟用香精酸值的测定自动滴定仪法 仪器 自动电位滴定仪。 测定步骤 称取 5g 烟用香精(精确到0.0001g)于滴定杯中，溶于20 mL 乙醇水溶液中，用氢氧化钠标准溶液或氢氧化钾乙醇标准溶液做滴定剂。将指示电极和参比电极插入至样品中，与仪器连接。滴定过程中，溶液的 pH 发生变化， pH 复合电极作为指示电极，将电位的变化转化为 pH 的变化，在 pH 达到 8 的时候，自动滴定仪停止滴定
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一般配合力育种思考之测验种
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
配合力试验设计，常用到的是1948年由Comstock 和Robinson提出的NCⅡ设计（North Carolinadesign Ⅱ）。配合力试验，即便设计参数不同，也大致都是一组母本和另一组父本杂交，有的试验设计含有正反交，测量后代F1的产量（或其他性状），用后代表现来评价亲本育种价值，选择亲本。 在一般配合力Σ效应=0的条件约束下，一个配合力试验中获得的效应值，只相对于该配合力试验群体才有意义。 从另一角度来说，假设有两个独立的配合力试验，母本都采用相同的一组材料（M群体），采用不同的两组材料做父本（A群体、B群体），分别进行配合力试验，两组试验都对母本材料进行一般配合力效应分析，结果一定不同，甚至两个试验分别得到的母本（M群体）一般配合力效应大小排序都不同。 如果A群体、B群体是测验种，或是骨干亲本自交系，就意味着育种者在设计配合力试验之前，已经进行了育种选择，是测验种决定了选择结果，接下来的选择工作更多的是沿着测验种决定的选择方向，进行积累和提高，进行差值选择育种。 有的育种者会将上面试验中的父本（A群体、B群体）干脆合为一个父本群体，只设计一个配合力试验，岂不更好，这样对母本（M群体）的评价一定会更可靠更全面。但受实际工作量，经营成本制约，父本群体一定是有限的。 配合力方法的效应（离差）决定了每一步的选择方向，而配合力试验的效应直接受试验群体父母本影响和左右，进一步说，这其中常用作父本的测验种，可以说更多决定了一家育种单位育种工作的未来。如果两家育种单位都使用同一材料做为测验种，而且都依据配合力方法进行育种，在技术路线一直保持不变的情况下，理论上，若干年后，这两家育种单位的品种会趋于同质化。这里的同质化跟套牌导致的同质化可不一样。如果这样的选择积累确实体现了当下育种的最佳基因组合，那就在阶段性平台上徘徊，期待上新的台阶，如果不是这样，那育种者**为避免这样的情况出现做好方法和技术准备，采用比一般配合力更有效的选择策略----
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对不完全区组试验设计的解读
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
一、完全区组设计和不完全区组设计的比较（简单格子设计） 完全区组和不完全区组是两大类试验设计，无法都比较，选了完全区组设计的单因素随机完全区组和不完全区组设计的简单格子设计做一比较。 两种试验设计在使用相同土地面积的情况下，试验Ⅱ区组数更多，意味着试验Ⅱ的地块误差影响控制的更好，试验数据的准确性更高。 格子设计数据分析结果中，有的会给出相比单因素随机完全区组试验设计相对效率提升了多少的数值，为什么会有提升，从上面两个试验可以看出，简单格子设计等同于在单因素随机完全区组的区组内部又划分了3个区组出来，因而，简单格子设计相比单因素随机完全区组，误差更准确。 相对效率 = 单因素随机完全区组误差均方 / 格子设计有效误差均方 格子设计的这种误差准确性的提升，从另一角度解读，就是随着单因素随机完全区组试验规模的扩大，一个区组占地越来越大，这样地块差异导致的区组内的差异，就系统性的增大了，而如果将区组分拆为小区组，自然可以更好的满足地块一致性的试验设计要求。 因此在品种数量较多的情况下，应该选择格子设计，而不是单因素随机完全区组。 二、完全区组设计和不完全区组设计的比较（BIB设计） 平衡不完全区组设计（Balanced Incomplete Block Design），简称BIB设计。 将v个处理安排到b个区组： 1．每个区组都含k个不同处理，k称为区组容量。 2．每个处理都在r个不同区组中出现，r称为处理重复数。 3．任一对处理在λ个不同区组中相遇，λ称为相遇数。 一个BIB设计中的v个处理可以得到公平的比较。 在这组对比中，可以看到，BIB设计，可以巧妙的节省试验成本，上方表格中灰色空白表格区域就是“节省”的小区。由于BIB设计对试验参数要求严格，因此实际使用存在是否合乎试验要求的限制，但是，一个试验，如果能用BIB设计实现，无疑是很划算的。 三、不完全区组试验设计为什么使用的少？ 格子设计无疑会提升试验准确性，BIB设计也有希望完成试验目的
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乐研化学薄层层析硅胶板使用说明
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
乐研化学薄层层析硅胶板涂层的主要成分为SiO2.nH2O，化学性质稳定，除强碱和氢氟酸外，不与其他酸碱反应。具有分离效果好，塔板数高，点样斑点小，分离时间短，灵敏度高，斑点清晰，不扩散等特点；适用于医药，化工，生化，环保等系统的科研和检测；对于某些微量以及成分复杂的化合物有很好的分离效果，适用于定性和半定量分析。 经典操作和注意事项： 1、点样 分析板： 点样一般为圆点（不能太大），点样基线距底边0.5~1.0 cm，点样直径为1~2 mm，点间距离约为0.5~1.0 cm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜； 注意事项： （1）配制样品溶液时应选用对组分溶解度较好的溶剂；溶剂的粘度不宜过高，以便于点样；溶剂的沸点要适中，沸点过低，样品溶液中溶剂易挥发，会改变溶液浓度导致较大误差。沸点过高，会使样品溶液的溶剂残留于原点，导致展开剂极性异常变化，最常用的溶剂为甲醇； （2）点样时要控制力度，避免损伤涂层表面； （3）点样后必须待溶剂挥发完全后，再进行展开，但要避免长时间高温加热，以免改变待测组分的性质。 制备板： 取一块制备板，在距离底部2~3 cm处用铅笔画一条直线；取一次性滴管，在吸管口处嵌入适量脱脂棉后吸入待分离样品溶液，沿着制备板上的基线均匀移动，然后用吹风机吹干，反复操作，直至上样完成；将制备板置于展开缸中，硅胶面背对展缸玻璃面；展开结束后，取出、晾干，在紫外灯下面用铅笔标出所需的色带，用刮刀刮下，选择大极性溶剂，浸泡搅拌1~2小时，过滤、洗涤、旋干即可。 注意事项： （1） 待分离的样品必须在硅胶中稳定；且难溶性样品不适合此方法； （2）上样量的计算方法：1 mm厚的硅胶板的负载量不要超过5 mg/cm3。以20*20 cm，厚度为1 mm厚硅胶板为例：若上样带宽是0.5 cm，板子两边空出0.5 cm边际，上样量约为0.5*19*5=47.5 mg，以此类推； （3）基线必须保持在展开剂的液面以上，防止待分离样品溶于展开剂； （4）为保证溶出效率，需将刮下的硅胶碾碎。安
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利用高通量3D模型分析叶片伸长的遗传控制
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
谷物是世界大多数人口的主食，仅在2016年，水稻、小麦和大麦的总产量就达16亿吨（http://www.fao.org/faostat/）。为满足人口增长导致的粮食需求，目前谷物产量增长率必须超过35%（Tester和Langridge，2010年）。未来谷物产量稳定性和产量潜力的提高将依赖于资源利用效率的提高和幼苗生长的优化（ Sheehy和Mitchell，2015）。为了优化谷物的幼苗生长和结构，我们需要了解相关的生理过程、环境影响和潜在的遗传控制。虽然使用二维成像高通量测量幼苗的生长已经取得了进展，但大规模谷物幼苗三维结构的重构仍然具有挑战性。 本文中，Ward B提出了一种利用少量图像测量谷物（如小麦、大麦）单叶的方法。为了证明该方法在高通量研究中的适用性，Ward B等对一个作图群体的大麦幼苗进行了结构分析，以测量叶片随时间的萌生和伸长。此外，Ward B等还研究了盐胁迫对幼苗生长和叶片伸长影响的遗传机制。本研究中，RGB图像捕获由LemnaTec 3D Scanalyzer表型系统完成，二维图像分析由LemnaGrid软件执行。 幼苗三维建模的图像处理步骤 二维成像与三维建模特征比较 试验结果表明，对于小麦和大麦，叶长的手动和数字测量之间高度相关（R2在0.97和0.99之间）。此外，Ward B等还检测到了特定于叶片伸长的QTL位点，而不是幼苗生长的QTL位点。尤其重要的是，在3H染色体上检测到一个特定于叶片伸长对盐胁迫早期反应的QTL位点，这是一个使用本研究开发的计算机视觉工具才检测到的位点。 盐胁迫对幼苗生长的影响 盐胁迫单叶萌生和叶片伸长的影响 二维和三维成像特征QTL图谱 绿色代表对照条件下检测到的QTL位点，红色代表盐胁迫下检测到的QTL位点 全文阅读 Ward B, Brien C, Oakey H, et al. High‐throughput 3D modelling to dissect the genetic control of leaf elongation in barley (Hordeum vulgare). The Plant Journal, 2019, 98(3): 555-570.
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小鼠饲养科普：小鼠的一生和关于生命的延续
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
世界上生命都是有周期的，有的能活上百年，有的只能按天来计算，死亡是多细胞生物不可逾越的鸿沟。《淮南子.说林》：鹤寿千岁，以极其游；蜉蝣朝生而暮死，而尽其乐。如果不去思虑死亡，不去担忧恐惧，一直活在当下，其实120岁与120秒并没有什么区别。 今天我们本文的主角--小鼠，它的生命周期大约只有18-24个月，也就是1-2年左右，与我们人类相比，生命很短暂，但从出生到生长再到衰老的每个阶段都是精彩而辉煌的！ 小鼠的一生一世 首先一起看看小鼠从出生到老去，这组萌萌哒的照片。如下图为最常见到的小黑鼠C57BL/6的一生。 新生的C57小鼠：赤裸裸的无毛发，皮肤肉红色，双眼未睁开，还是个小肉球 3天后：它的皮肤由红变为白色，耳朵也立起来了 一周后，四肢发育可以自由爬行，皮肤变黑色，不过还没长毛 2周啦，眼睛终于睁开了，乳牙也出来啦，开始采食及饮水，慢慢地可以告别母乳了 4-6周，身体各个器官逐渐成熟，3-6月小鼠步入成年期 10月大了，可怜的小鼠就进入中老年，身体机能逐渐下降，行动迟缓，如图毛发也稀疏了 下面再结合人类年纪与小鼠年纪对比，我们就会有更加直观的体会了！ 原来当我们自呱呱坠地，才开始蹒跚学步，牙牙学语时，此时小鼠的寿命已接近尾声，它们真正的黄金时期即成年时期仅仅3个月，非常短暂。而被我们用于实验的近交系小鼠寿命更短。 纵观了小鼠的一辈子的生命线，那小鼠是如何来到这个世界的呢，它们的生命如何进行延续呢？下面就一起看看实验室的小鼠繁殖过程。 小鼠繁育过程 主要包括选择种鼠，合笼，受孕检测和孕鼠饲养等几个阶段。 第一步：选择最佳年龄的小鼠进行繁殖 随着年龄的变化，小鼠的身体机能和繁殖能力一直在变化，如雄性小鼠的精液质量、数量和交配母鼠的受胎率，母鼠亦是如此。了解到小鼠的各年龄段的生长状况，因此选择合适年纪的小鼠就变得非常简单了。 1. 性成熟小鼠：6~8周的成年小鼠（雌鼠5~7周，20±1.5克；雄鼠较晚，9周，25±1.5
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单细胞检测技术在肿瘤研究中的新挑战和新方向
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
单细胞转录组研究是近期生命科学领域运用最火的组学检测技术之一，来自麻省总医院和哈佛医学院的研究人员在《Molecular Cell》(Suva and Tirosh 2019)上讨论了单细胞转录组测序技术在肿瘤研究中的经验与未来挑战。在此，我们对该review中的部分内容进行解读和分享。 作者认为，在接下来的几年中，通过单细胞RNA-seq研究肿瘤的方法将进一步整合到癌症研究中，并将用于解决越来越多关于肿瘤生物学的问题。在这里，作者简要介绍一些可能解决的主要问题和scRNA-seq及其相关新兴技术在其中的作用。 一. 区分遗传与非遗传机制：单细胞多组学分析 遗传异质性是在肿瘤之间和肿瘤内产生多样性的重要原因。然而，越来越多的证据表明非遗传机制在其中的重要性。因此，在同一个细胞中映射细胞状态和遗传状态就是一个重要的挑战了。但是，现有大多数的scRNA-seq数据，基本忽略了细胞的遗传状态，或者只具有部分评估遗传状态的能力：（1）检测灵敏度有限的RNA突变；（2）个体突变的靶向测序；（3）CNAs推测。因此，正在开发和改进的多组学技术来实现细胞状态和遗传学的联合分析，有望对这些问题提出解决方案，比如，将mRNA检测和蛋白，DNA甲基化，染色质可及性，克隆扩增等同时进行检测的多组学方式。 来源：van Galen et al., 2019 二．细胞-细胞相互作用和空间位置：空间分辨率的单细胞技术 每个肿瘤类似于生态系统，因此，每个细胞的状态可能高度依赖于其精确的空间位置和与相邻细胞的相互作用。 这些复杂的相互作用及其对癌细胞生物学的影响现阶段仍然知之甚少。 将转录组与空间信息偶联将显著提高预测和进一步表征此类相互作用的能力。迄今为止，大多数scRNA-seq研究已经检测了细胞状态但没法还原其位置的任何信息。大多数情况下，只能根据数据特征来推断出可能的组织位置信息。因此，用于肿瘤分析的空间分辨技术的不断改进，以及来自不同技术的数据整合，将在未来几年内显著推进这些方向，并提高我们对细胞-细
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定量western blot疑问解答-为什么需要验证抗体
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
验证抗体对于结果的一致性和重复性是至关重要的，即确认抗体能特异性识别感兴趣的蛋白，抗体与其他蛋白的交叉反应性情况。在您的论文提交给期刊发表之前，经常需要验证抗体的特异性，但并非所有人都花时间进行验证。或者很多人都认为他们使用抗体进行了免疫共沉淀验证，因而不需要再通过蛋白质印迹进行验证。然而，抗体与抗原的亲和性高度依赖于实验条件，因此，验证您的试验方法中的条件适用于抗体与抗原的结合是十分重要的。 定量western blot尤其适用于确认获得的信号仅来自感兴趣的蛋白。如果没有进行抗体验证（并且验证荧光信号与蛋白质的量呈线性关系），将无法获得下游定量分析所需的准确度和精确度。 为确保实验质量，国际抗体验证工作组提供了五种不同的抗体验证方法，其中四种方法适用于western blot，他们建议至少使用其中两种方法进行抗体验证。 遗传策略 尽管这些方法已经被更新了，但在科研领域中的生物化学家对他们应该都很熟悉。即用CRISPR-Cas9或RNA干扰（RNAi）在实验组和对照组中进行敲除或敲低实验，然后使用特异性抗体测定目标蛋白的荧光信号。处理后的目标蛋白质的表达很少甚至没有，所以观察到的任何信号都表明抗体存在交叉反应性。 如左图所示，将具有特定蛋白质的细胞裂解物进行western blot，分别使用两种不同siRNA分子敲低目的蛋白的表达，如泳道1和泳道2，与泳道C的对照组相比，我们可以看出siRNA脱靶带来的影响。 正交策略 这种方法的技术含量较低，它使用不依赖于抗体的方法（质谱法）来量化几个蛋白样品的靶信号，然后使用基于抗体的方法（western blot）同样量化相同蛋白样品的靶信号，最后将他们的信号值进行比较。例如，有几种靶向蛋白质组学方法可以量化不同样品中的蛋白质表达。当对抗体进行标记时应参考这些相关的定量数据。 下图比较了蛋白质印迹和质谱法测定蛋白表达量的相关性。通过对八种细胞系中蛋白表达量的测定，我们可以看到他们的相关性高达0.97，表明该抗体对于蛋白
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如何选择适合自己实验细胞的培养基
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
小鼠繁育是动物实验中十分重要的环节，如制备基因工程小鼠时常常需要几代繁育才可以得到阳性小鼠，然而不幸的是，好不容易等到孕鼠生产，此时鼠仔竟然被吃掉了。经一番调查发现，吃掉鼠仔的居然是它们的妈妈！本期带大家看看孕鼠食仔的真相，及我们该如何避免鼠仔被吃掉！ 鼠宝宝的尸骸 富有经验的小鼠饲养员，根据平时阅历总结，发现原来鼠仔被吃掉主要有这些原因：鼠妈妈误食，营养不够，饲养密度过高，受到惊吓等！下面就具体看看，各种原因分析及如何应对！ 原因一、物竞天择，优胜劣汰 产生原因：我们知道小鼠有5对乳腺，也就是说每只鼠妈妈最多能哺乳10只小鼠仔（前提是每个乳头都有乳汁），而小鼠每窝可产仔5-15只不等，因此，若产仔数量超出10只时，那么先天体弱的鼠仔就会被吃掉，进而保证其他宝宝的茁壮成长。由于基因工程小鼠存在基因缺陷，因此这种情况在这类小鼠的繁殖中十分常见。 强壮鼠仔留下（ 箭头），虚弱鼠仔被吃（ 箭头） 问：当我们发现产仔数量较多时，怎么办？ 答：一般保证每窝数量在6-8只左右就可。当发现体弱仔鼠时，不用紧张，饲养人员也**不要插手干扰，遵循优胜劣汰的原则即可。 一窝小鼠6-8只比较合适 原因二、误食？ 产生原因：生仔过程十分耗费体力，生产中母鼠一般会通过吃胎盘胎膜来补充体力。刚出产道的鼠仔被包裹在胎膜中，需要靠母鼠撕破胎膜来呼吸第一口新鲜空气，母鼠一边舔舐鼠仔一边吞食胎盘胎膜，在此过程中可能会误伤到鼠仔，然后悲催的鼠仔可能就会被当成补品被一起吃掉了。 问：这种情况如何应对？ 答：这种误食属于意外事故，一般会发生在生产过程12h内，血腥味刺激到了母鼠或者同笼的成年鼠，鼠仔就有被误食的可能。一般可以不予插手，因为若惊动了生产中的鼠很可能会导致母鼠难产而死。 原因三、鼠宝宝竟成了营养品被吃掉！ 产生原因：对于孕产期的母鼠对日粮的要求比较高，若母鼠营养不足肯定会对鼠仔下狠手，这种情况下即便侥幸存活的鼠仔也是个
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实验小鼠繁育：孕鼠与仔鼠的日常照料问题解答汇总
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
小鼠繁育是动物实验中十分重要的环节，如制备基因工程小鼠时常常需要几代繁育才可以得到阳性小鼠，然而不幸的是，好不容易等到孕鼠生产，此时鼠仔竟然被吃掉了。经一番调查发现，吃掉鼠仔的居然是它们的妈妈！本期带大家看看孕鼠食仔的真相，及我们该如何避免鼠仔被吃掉！ 鼠宝宝的尸骸 富有经验的小鼠饲养员，根据平时阅历总结，发现原来鼠仔被吃掉主要有这些原因：鼠妈妈误食，营养不够，饲养密度过高，受到惊吓等！下面就具体看看，各种原因分析及如何应对！ 原因一、物竞天择，优胜劣汰 产生原因：我们知道小鼠有5对乳腺，也就是说每只鼠妈妈最多能哺乳10只小鼠仔（前提是每个乳头都有乳汁），而小鼠每窝可产仔5-15只不等，因此，若产仔数量超出10只时，那么先天体弱的鼠仔就会被吃掉，进而保证其他宝宝的茁壮成长。由于基因工程小鼠存在基因缺陷，因此这种情况在这类小鼠的繁殖中十分常见。 强壮鼠仔留下（ 箭头），虚弱鼠仔被吃（ 箭头） 问：当我们发现产仔数量较多时，怎么办？ 答：一般保证每窝数量在6-8只左右就可。当发现体弱仔鼠时，不用紧张，饲养人员也**不要插手干扰，遵循优胜劣汰的原则即可。 一窝小鼠6-8只比较合适 原因二、误食？ 产生原因：生仔过程十分耗费体力，生产中母鼠一般会通过吃胎盘胎膜来补充体力。刚出产道的鼠仔被包裹在胎膜中，需要靠母鼠撕破胎膜来呼吸第一口新鲜空气，母鼠一边舔舐鼠仔一边吞食胎盘胎膜，在此过程中可能会误伤到鼠仔，然后悲催的鼠仔可能就会被当成补品被一起吃掉了。 问：这种情况如何应对？ 答：这种误食属于意外事故，一般会发生在生产过程12h内，血腥味刺激到了母鼠或者同笼的成年鼠，鼠仔就有被误食的可能。一般可以不予插手，因为若惊动了生产中的鼠很可能会导致母鼠难产而死。 原因三、鼠宝宝竟成了营养品被吃掉！ 产生原因：对于孕产期的母鼠对日粮的要求比较高，若母鼠营养不足肯定会对鼠仔下狠手，这种情况下即便侥幸存活的鼠仔也是个
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小鼠饲养之脱毛问题解决汇总
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
在生物技术日新月异的今天，实验动物小鼠已成为不可替代的角色。然而，在日常饲养管理中我们经常发现有小鼠脱毛的现象，轻则毛发稀疏可见，重则大面积脱落。对于经验不足的饲养者，常常会不知所措，甚至因此不明就里地处死小鼠。那么，小鼠脱毛究竟是否会影响实验数据的正确性呢，我们又该如何辨别和应对呢？ 小鼠脱毛的原因有很多种，主要分为2大类： 生理因素：生活习性、营养不均衡、遗传缺陷、激素紊乱、机械损伤、环境因素等。 病理因素：寄生虫感染、真菌感染及肿瘤等疾病原因。 第一类：生理因素（常见案例） 1、生活习性（典型常见案例） 引起原因：小鼠群体间有严格的阶梯等级制度，笼养的雄性小鼠常通过激烈的打斗和撕咬来巩固自己的领头鼠地位，轻者仅见脱毛，皮肤无损伤；重则表皮损伤，甚至死亡。等级确立后，小鼠们还要通过咬毛和嚼须的行为来维持相互间的关系［1］。 咬毛位置根据小鼠品系又分为2种情况： 咬面毛和须毛：常见于C57BL/6和C3H小鼠及其杂交一代小鼠； 咬颈毛和背毛：颈毛和背毛被咬掉仅见于C57BL/6小鼠（下图）。 典型特点：地位高的小鼠被毛完好，地位低的背部和颈部出现脱毛；一般是背部毛发局部整块脱落，但是皮肤无损伤。 C57BL/6领头鼠咬伤颈部和背部毛发[1] 应对措施：一般对实验无太大影响，切记不可处死小鼠。多数情况下，失毛小鼠在几周内能够重新长出被毛，可提供适当的玩具和做窝材料，以减少打斗。 2、营养不均衡（典型常见案例） 引起原因：饲料营养物质或者微量元素达不到小鼠日常摄入的需要，就会引起小鼠出现消瘦，被毛干枯、脱落，免疫力下降，甚至会影响的小鼠的生殖繁育。如一些特殊品系或品种的小鼠：免疫缺陷小鼠（NOD），糖尿病模型小鼠，或是转基因小鼠等。 典型特点：大批小鼠出现毛色暗淡、脱落、甚至出现食仔现象。如下图所示： C57BL/6J 营养不良鼠（红色箭头）与健康鼠对比（来自网络） 应对措施：营养不良会严重影响实验
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敌我不分何缘由？自身免疫应答
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
免疫，是指机体免疫系统识别自身与异己物质，并通过免疫应答排除抗原性异物，以维持机体生理平衡的功能。但免疫系统对外来和自我的区分并不是绝对的，在某些情况下，可能会发生自身免疫（autoimmunity），即指机体免疫系统对自身免疫成分发生免疫应答的现象。机体免疫系统对自身抗原发生免疫应答而导致的疾病状态称之为自身免疫病（autoimmune disease, AID）。 近年来，自身免疫及其引起的疾病越来越受到人们的关注，全球有几亿人正遭受该病带来的痛苦，该病病程长，可致残，严重的可致死，由于此问题的广泛性及严重性，掀起了全球的自身免疫性疾病的研究热潮。 接下来，让我们一起来了解下自身免疫病的致病机制，小编将从以下几个方面进行解读： 自身抗原的出现 其一是一些隐蔽抗原的释放，如精子、眼内容物、脑等、一旦因手术、外伤、感染等原因破坏隔绝屏障，隐蔽抗原释放入血液或淋巴液，便与免疫系统接触，引发自身免疫应答，导致自身免疫病的发生；其二是自身成分的改变，当自身成分在受到外界因素刺激后，改变了的自身成分,刺激免疫系统引起自身免疫应答，导致自身免疫性疾病；其三是共同抗原引发的交叉反应(Fig 1)等均可导致自身免疫病[1]。 Fig 1 免疫调节异常 正常情况下，自身反应性T细胞和B细胞对自身抗原处于耐受状态，当受到来自其他细胞组织或各种因子的异常刺激时，会诱发对机体的自身免疫应答。比如淋巴细胞旁路活化，多克隆刺激剂的旁路活化，辅助刺激因子表达异常，MHC-Ⅱ类抗原表达异常等都会导致自身免疫调节的异常。 自身反应性T细胞和B细胞还有可能逃避“克隆丢失”，即本应清除或凋亡的T、B细胞，被异常释放至外周，在一定条件下可能导致自身免疫应答的发生[2](Fig 2)。 Fig 2 遗传因素 人类的自身免疫性疾病常有家族遗传倾向，很多自身免疫病如SLE、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性甲状腺炎等均具有家族史。 好了，以上小编从三个方面阐述了自身免疫病的
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