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糖基化多肽合成过程
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
糖基化 糖基化是在酶的控制下，蛋白质或脂质附加上糖类的过程，发生于内质网。在糖基转移酶作用下将糖转移至蛋白质，和蛋白质上的氨基酸残基形成糖苷键。蛋白质经过糖基化作用，形成糖蛋白。糖基化是对蛋白的重要的修饰作用，有调节蛋白质功能作用。 过程 N-连接的糖链合成起始于内质网，完成于高尔基体。在内质网形成的糖蛋白具有相似的糖链，由Cis面进入高尔基体后，在各膜囊之间的转运过程中，发生了一系列有序的加工和修饰，原来糖链中的大部分甘露糖被切除，但又被多种糖基转移酶依次加上了不同类型的糖分子，形成了结构各异的寡糖链。糖蛋白的空间结构决定了它可以和那一种糖基转移酶结合，发生特定的糖基化修饰。 许多糖蛋白同时具有N-连接的糖链和O-连接的糖链。O-连接的糖基化在高尔基体中进行，通常第一个连接上去的糖单元是N-乙酰半乳糖，连接的部位为Ser、Thr和Hyp的羟基，然后逐次将糖基转移到上去形成寡糖链，糖的供体同样为核苷糖，如UDP-半乳糖。糖基化的结果使不同的蛋白质打上不同的标记，改变多肽的构象和增加蛋白质的稳定性。 在高尔基体上还可以将一至多个氨基聚糖链通过木糖安装在核心蛋白的丝氨酸残基上，形成蛋白聚糖。这类蛋白有些被分泌到细胞外形成细胞外基质或粘液层，有些锚定在膜上。 分类 根据糖苷链类型，蛋白质糖基化可以分为四类，即以丝氨酸、苏氨酸、羟赖氨酸和羟脯氨酸的羟基为连接点，形成-0-糖苷键型。以天冬酰胺的酰胺基、N一末端氨基酸的 α - 氨基以及赖氨酸或精氨酸的ω - 氨基为连接点，形成-N-糖苷键型;以天冬氨酸或谷氨酸的游离羧基为连接点，形成脂糖苷键型以及以半胱氨酸为连接点的糖肽键。 多肽 多肽是α－氨基酸以肽键连接在一起而形成的化合物，它也是蛋白质水解的中间产物。 一般肽中含有的氨基酸的数目为二到九,根据肽中氨基酸的数量的不同,肽有多种不同的称呼：由两个氨基酸分子脱水缩合而成的化合物叫做二肽，同理类推还有三肽、四肽、五肽等，一直到九肽。
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如何做到快速同时检测各类癌症当中RNA甲基化相关酶&RNA甲基化水平
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
占领C位！云序生物解析如何做到快速同时检测各类癌症当中RNA甲基化相关酶&RNA甲基化水平 RNA甲基化作为云序生物的主打科研产品，已经帮助多个研究团队展开了RNA甲基化研究。作为国内RNA甲基化研究的领跑者，云序生物是国内RNA甲基化10分文章发表的成熟服务商，首发推出了非编码RNA甲基化测序研究，首发推出了超微量RNA甲基化测序技术，首发推出RNA甲基化研究一站式系统性解决方案，云序在公众号新年开篇当中结合18年的综述文章（Multiple functions of m6A RNA methylation in cancer）为广大研究者带来最新RNA甲基化相关酶在癌症当中的研究汇总。此次文章意在为大家强调RNA甲基化酶研究的重要性的同时，为大家提供成熟的RNA甲基化研究思路，如何研究，怎样研究才是云序长期以来想为大家回答的问题。 众所周知，RNA甲基化相关酶功能全面，在多种癌症疾病的发生发展当中都起到了关键作用。同一种酶在不同癌症中作用竟截然相反！例如，METTL14在胶质瘤GBM和肝癌HCC当中是抗癌卫士，可到了急性白血病AML当中摇身一变成了原癌基因，变化之大令人感叹。虽然甲基化修饰位点各种各样，功能各有不同，但最终都引起了癌细胞表型的改变，相信在接下来的基础研究中RNA甲基化酶Writer、去甲基化酶Eraser、识别蛋白Reader仍然是重中之重。 1.m6A相关酶在癌症中的功能 甲基化转移酶（METTL3和METTL14），去甲基化酶（NSun2，FTO和ALKBH5）和阅读酶（YTHDF2）在各个癌症中的功能总结如下。 表1. m6A RNA 甲基化修饰在各个癌症中功能 2. m6A在癌症中的分子机制 接下来我们将一一介绍m6A RNA 甲基化在调控肿瘤干细胞CSC分化、增殖、迁移和免疫过程中发挥的重要功能。 2.1 RNA甲基化酶与癌症干细胞（CSC）多能性与细胞分化相关 1）造血干细胞（HSCs）因为分化状态易于检测往往作为研究细胞分化过程的理想模型，髓系血液恶性肿瘤最显著的特点就是展现出异常的分化状态。最新的研究表明，相比于正常的造血干细胞，白血
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多肽化学合成中液相和固相两种方法的比较
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
多肽化学合成的基本介绍 多肽化学合成方法，包括液相和固相两种方法。液相合成方法现在主要采用BOC和Z两种保护方法，现在主要应用在短肽合成，如阿斯巴甜，力肽，催产素等，其相对与固相合成，具有保护基选择多，成本低廉，合成规模容易放大的许多优点。与固相合成比较，液相合成主要缺点是，合成范围小，一般都集中在10个氨基酸以内的多肽合成，还有合成中需要对中间体进行提纯，时间长，工作量大。固相合成方法现在主要采用FMOC和BOC两种方法，它具有合成方便，迅速，容易实现自动化，而且可以比较容易的合成到30个氨基酸左右多肽。 1.氨基酸保护基 20种常见氨基酸，根据侧链可以分为几类：脂肪族氨基酸（Ala，Gly，Val，Leu，Ile，），芳香族氨基酸（Phe，Tyr，Trp，His），酰胺或羧基侧链氨基酸（Asp，Glu，Asn，Gln），碱性侧链氨基酸（Lys，Arg），含硫氨基酸（Cys，Met），含醇氨基酸（Ser，Thr），亚氨型基酸（Pro）。多肽化学合成中氨基酸的保护非常关键，直接决定了合成能够成功的关键。因为常见的20中氨基酸中有很多都是带有活性侧链的，需要进行保护，一般要求，这些保护基在合成过程中稳定，无副反应，合成结束后可以完全定量的脱除。合成中需要进行保护的氨基酸包括：Cys，Asp，Glu，His，Lys，Asn，Gln，Arg，Ser，Thr，Trp，Tyr。需要进行保护的基团：羟基，羧基，巯基，氨基，酰胺基，胍基，吲哚，咪唑等。其中Trp也可以不保护，因为吲哚性质比较稳定。当然在特殊的情况下，有些氨基酸也可以不保护，象，Asn，Gln ，Thr，Tyr。 氨基酸侧链保护基团非常多，同一个侧链有多种不同的保护基，可以在不同的条件下选择性的脱除，这点在环肽以及多肽修饰上具有很重要的意义。而且侧链保护基和选择的合成方法有密切的关系，液相和固相不一样，固相中BOC和FMOC策略也不一样，从某种意义上看，多肽化学就是氨基酸保护基的灵活运用与搭配。关于侧链保护基的使用，请参考王德心的《固相有机合成——原理及应用指南》
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Nature子刊：骨关节炎的发展与蛋白HPIP相关
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
骨关节炎（Osteoarthritis，简称OA）是中老年人中常见的一种退行性关节疾病。根据美国疾控中心的统计，在美国65岁以上的人群中，大约80%患有关节炎。软骨退化影响了骨关节炎的**。 近日，中国人民解放军总医院王岩教授和军事医学科学院北京生物工程研究所叶棋浓教授等人领导的研究团队对骨关节炎背后的分子机制进行了深入剖析。他们发现，HPIP（全名为造血前B细胞白血病转录因子相互作用蛋白）在骨关节炎的发展中起到重要作用。 这项成果于1月中旬发表在《Nature Communications》杂志上。“我们发现，HPIP通过Wnt信号通路的转录激活以及转录程序的表观遗传调控来调控软骨退化，表明HPIP有望带来骨关节炎**的新办法，”作者在文中写道。 之前的研究表明，HPIP蛋白主要在癌症发生和发展中起到调节作用。例如，乳腺癌中HPIP-ER组成的复合物网络在体内和内外促进了细胞增殖和迁移。此外，HPIP的沉默抑制了TGF-β诱导的上皮间充质转化。TGF-β是一种内源性的细胞因子，在维持软骨稳态上发挥调节作用。然而，HPIP在骨关节炎中的作用仍然未知。 HPIP敲除可防止骨关节炎发展 为了确定HPIP在骨关节炎中的作用，研究人员首先分析了118对骨关节炎软骨组织及相应非病变样本中HPIP的表达水平。通过免疫组化染色和qRT-PCR分析，他们发现骨关节炎软骨中HPIP的表达明显高于非病变组织。而且，HPIP的表达随着骨关节炎的发展而逐渐增加，而细胞外基质（ECM）组分COL2A1和ACAN的表达逐渐减少，表明它可能参与关节软骨退化中的ECM降解。 接下来，研究人员又分析了软骨细胞特异性HPIP敲除小鼠的表型。他们委托赛业生物（Cyagen）制备了HPIPf/f小鼠，又购买了Col2a1-CreERT2小鼠，从而制备出Col2a1-CreERT2/HPIPf/f小鼠。多个染色结果表明，与同窝的HPIPf/f小鼠相比，Col2a1-CreERT2/HPIPf/f小鼠表现出明显的骨骼异常。它们的肱骨、股骨、胫骨和椎骨等骨骼的长度比对照小鼠短10-2
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蛋白质技术专题：凝胶过滤层析实验
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
凝胶过滤层析（gel filtration chromatography）法又称排阻层析或分子筛方法，主要是根据蛋白质的大小和形状，即蛋白质的质量进行分离和纯化。层析柱中的填料是某些惰性的多孔网状结构物质，多是交联的聚糖类物质，使蛋白质混合物中的物质按分子大小的不同进行分离。 实验方法 蛋白质的凝胶过滤分离 实验材料 蛋白质 试剂、试剂盒 凝胶过滤缓冲液 仪器、耗材 布氏漏斗 凝胶过滤层析柱 分光光度计 实验步骤 1. 如果凝胶过滤的介质是干粉，则需在凝胶过滤缓冲液中完全溶胀。 2. 在远离过往通道及直接光照的恒温环境，将层折柱垂直安装在稳固的实验室支架上。 3. 用一注射器将凝胶过滤缓冲液从柱子的输出管注入柱子，至缓冲液达到柱子支持体平面之上，注射器留在输出端以堵住柱子。 4. 沿着一根顺柱子内壁而放的玻璃棒将凝胶混悬物倒入柱子至所设高度，再小心往凝胶顶部加入1 cm 高的一层缓冲液，并连接缓冲液贮存容器，取去堵着柱子输出管的注射器，用2~3倍柱床体积的缓冲液请洗柱子。 5. 流尽柱子凝胶顶部上面的缓冲液、关闭其输出管。 6. 加入相当于柱床体积1%~5%的蛋白质样品。开放输出管，让样品流进柱床，凝胶上面的柱子内壁以缓冲液冲洗。 7. 在凝胶顶上用吸管加入1 cm 高的缓冲液层，重新与缓冲液贮存容器连接，开始洗脱。 8. 分部收集流出液。每分部相当于1%总柱床体积，分别测每个分部的A280，并各取小份样品测生物活性，选出有活性的分部用SDS-PAGE检测所含蛋白质的数量和质量，合并含目标蛋白的分部。 9. 用2~3个柱床体积的凝胶过滤缓冲液洗柱，柱子保存在含0.02%叠氮钠的缓冲液中，柱于可无限次地使用。 收起 注意事项 切勿用磁力搅拌器搅拌，让凝胶颗粒自然沉降，吸去或倾去不沉降的细小颗粒，或者根据厂商的使用指南进行处理，对预溶胀的凝胶，在布氏漏斗或玻璃烧结漏斗中用大量缓冲液冼去防腐剂，重悬于等体积的凝胶过滤缓冲液，倾入细颈过滤瓶中，在使用前进行脱气。
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多肽、蛋白质药物缓释制剂的主要类型
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
随着生物技术的高速发展，多肽、蛋白质类药物不断涌现。目前已有35种重要**药物上市，生物技术与生物制药企业的发展也日益全球化。生物技术药物研究的重点是应用DNA重组技术开发可应用于临床的多肽、蛋白、酶、激素、疫苗、细胞生长因子及单克隆抗体等。据Parexl's Pharmaceutical R&D Statistical Source Book报道，目前已有723种生物技术药物正在接受FDA审评(包括Ⅰ～Ⅲ期临床及FDA评估)，700种药物处于早期研究阶段(研究与临床前)，还有200种以上药物已进入最后批准阶段(Ⅲ期临床与FDA评估)。 剂型介绍 生物技术药物的基本剂型是冻干剂。常规制剂尽管其疗效早为临床所证实，但由于半衰期短，需要长期频繁注射给药，从患者的心理与经济负担角度看，这些都是难以接受的问题。 为此，各国学者主要从两方面着手研究开发方便合理的给药途径和新制剂：①埋植剂和缓释注射剂。②非注射剂型，如呼吸道吸入、直肠给药、鼻腔、口服和透皮给药等。缓释生物技术药物的注射制剂，是很有应用前景的新剂型，有一些品种如能缓释1至3个月的黄体生成素释放激素(LHRH)类似物微球注射剂已经上市，本文着重介绍这类制剂。 多肽、蛋白质药物缓释制剂的主要类型 多肽、蛋白质药物缓释制剂的研究与开发，从发展过程及剂型看，主要分埋植剂和微球注射剂两类： 埋植剂(implant)、细棒型埋植剂 埋植剂外形为一空心微型细棒，一头封闭，另一头开口，棒材为聚四氟乙烯等非生物降解聚合物。腔内灌入药物与硅胶(silastic,聚二甲基硅氧烷)混合物。 埋植剂埋入人体皮下，药物通过硅胶基质开口处缓慢释放。美国内科医生手册(PDR)上收载了商品名为Norplant?的埋植剂，药物为左旋-18乙基炔诺酮，用于计划生育。 该制剂每根直径2.4 mm，长34 mm，医生通过手术将6根细棒状物埋植在患者上臂内侧，药物可在体内按零级模式释药达5年，药物释完后再经手术取出。 微型渗透泵埋植剂 美国Alza公司20世纪70年代开发了外形像胶囊的埋植剂，该制剂埋植于皮下或其它部分
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无尘车间需要具备哪些条件？
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
随着科学技术的进步，各种产品的研制对洁净系统洁净度的要求日益提高。针对现代无尘车间的品质，净化设备方面也在不断创新，以满足技术发展的需求。为此，专门对这些问题进行过研究和探讨。 **技术人员在设计无尘车间需采取以下措施： 1.设计方案应具有较好的适应性(灵活性)，它是实验性车间必须考虑的问题(如单向流/非单向流的转换、分区转换等)。 2.厂址选择、建筑布局与工艺设置的合理性，可以从根本上降低初投资及运行费用。 3.正确确定生产设备的热负荷对选定空调制冷设备有直接关系。 4.室内换气次数和末级过滤器效率之间的组合(达到相同级别)需进行经济比较。 5.新风集中处理有利于应用地下水预冷、除尘和加湿。 6.空调和净化功能的分离有利于发挥各自的技术经济合理性。 7.工艺过程中和空调系统的热回收是可以直接获益的措施，因此应充分利用这部分热量，使之达到物尽其用的目的。 其次对于各种净化设备方面的需求也需要做到以下几点： 1.工艺设备的设计和排热措施应密切结合，排热以发展水冷为主。 2.对各种净化单元结构(布置和尺寸)应加以改进，使之向有利于减小体积，提高分配均匀性，而又不增加阻力的方向发展。 3.在不影响噪声限度的前提下，提高风机压头有利于延长过滤器的使用寿命，此外风机应能够变速运行。 4.无隔板过滤器和新型空气分配装置可构成即节能又灵活的无尘车间系统。 5.改进排风柜的构造，既便于随时调节风量，又要方便操作。 伴随着我国经济高速发展，无尘车间净化行业的企业也如雨后春笋一般迅速的成长起来，正因为无尘车间净化工程就是环保行业，所以更加相信该行业是一个未来行业发展的趋势。 上海天翎净化工程是集各类实验室与净化室设计、施工、维护为一体的专业型技术企业。立足于专业的净化领域（实验室工程、净化工程、洁净工程、废气处理系统工程等）为客户提供设计、施工、检测、维护、售后等一站式服务.
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最常见的载体蛋白及其偶联方式
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
载体蛋白KLH,BSA,OVA偶联-多肽修饰肽-载体蛋白偶联多用于制备抗多肽类抗体，单独的多肽通常太小不足以激起充分的免疫反应，而带有很多抗原表位的载体蛋白有利于刺激辅助性T细胞，进一步诱导B细胞免疫反应。 请记住，免疫系统是将肽-蛋白作为一个整体来激起免疫反应的，因而产生的抗体中有针对多肽的，有针对链接剂的，也有针对载体蛋白的。其中最常见的载体蛋白有如下几种: KLH(KeyholeLimpetHemocyanin)，即血蓝蛋白，是在某些软体动物、节肢动物(蜘蛛和甲壳虫)的血淋巴中发现的一种游离的蓝色呼吸色素。血蓝蛋白含两个直接连接多肽链的铜离子，与含铁的血红蛋白类似，它易于氧结合，也易与氧解离，是已知的惟一可与氧可逆结合的铜蛋白，氧化时呈青绿色，还原时呈白色。其分子量45００00～１30000。由于KLH比BSA有更高的免疫原性，因而是最常被选用的载体蛋白。 BSA(BovineSerumAlbumin)，即牛血清白蛋白，属于最稳定的和可溶的白蛋白。其分子量为67x103Da（含有59个Lys）。大约有30-35个主要氨基可用于与链接剂发生共轭反应,使得BSA成为一种很流行的弱抗原化合物载体蛋白。 BSA的不利之处在于在很多实验中，它被当作封闭剂使用，如果多肽-BSA偶联物的抗血清用于这样的检测分析中，通常会出现假阳性，因为这些血清含有抗BSA的抗体。 OVA(Ovalbumin)，即鸡卵白蛋白，分子量为45x103Da。它可作为第二载体蛋白去验证抗体是否特异性地只针对多肽而并非载体蛋白(如BSA)。 巯基修饰(通过Cys的侧链)用于与KLH、BSA或OVA发生共轭反应，所有携带巯基反应的功能基团经修饰都可被用来发生共轭反应。其中最常见的有以下几种: 碘乙酰胺（Iodoacetamide） 马来酰亚胺（Maleimide） 烷基卤（Alkylhalide） KLH/BSA/Ovalbumin etc 偶联 小肽/半抗原必须耦合到载体蛋白（KLH，BSA，Ova），才可以获得高效的抗体。一般来说，多肽可以与蛋白偶联的条件如下： 1.有一个自由的氨基或羧基。 2.半胱氨酸上的-ＳＨ也可以与载体蛋白偶联目前
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公安系统食品安全现场快速检测方案
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
一、 背景 近年来，随着食品药品产业的快速发展，食品药品与环境犯罪活动持续增多，严重危害人民群众的生命健康安全。为此各地公安机关相继组建了食品药品与环境犯罪侦查专业队伍，加大对食品药品与环境犯罪的打击力度。 食品药品与环境犯罪侦查机构主要职责为掌握管辖区域内食品药品和环境犯罪动态，与食品药品、环保部门建立联动执法机制，分析、研究犯罪信息和规律，拟定预防、打击对策；组织、指导、协调全区食品药品、环境领域犯罪案件的侦办，参与区域性的食品药品安全和环境保护集中专项整治行动。 二、对象 食品药品与环境犯罪侦查大队或支队对食品、保健食品、化妆品等造假、掺假等实施监督执法。 三、检测关注项目
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肉品质量安全专项检测解决方案
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
一、 背景 近年来，猪、牛、羊屠宰与肉品生产经营秩序稳步向好，肉品质量安全水平持续提高。但猪、牛、羊屠宰与肉品生产经营违法违规行为仍屡禁不止，严重危害广大人民群众身体健康。为此，农业部与国家食品药品监督管理总局组织至12月底开展“严厉打击危害肉品质量安全违法违规行为“百日行动”，进一步加强肉品质量安全监管，严厉打击猪、牛、羊屠宰和肉品生产经营环节违法违规行为，切实保障肉品质量安全。我司专门推出肉品质量安全专项检测方案，助于开展监督检测工作，提升肉品质量安全水平，保障人民群众饮食安全。 二、 对象 肉品屠宰企业、肉食品加工企业及小作坊、肉品经营场所（批发市场、农贸（集贸〉市场、商场、超市等）、学校、建筑工地或机关单位食堂等。 肉及肉制品生产、加工企业中各类肉原料的肉类掺假、兽药残留、肉类变质等的检测。 三、 检测关注项目 1、 肉类掺假 肉类掺假是肉品质把控比较关键的一个环节，市面上一些不法商贩通过往肉里面注水来增加重量，或者用低廉价格或者品质不好的肉去冒充高品质的肉制品，以牟取暴利。 2、 兽药残留 针对猪肉、牛肉、羊肉等肉类中的瘦肉精、抗生素等药物残留的快速检测。 3、 肉类变质 动物性食品由于酶和细菌的作用，在腐败过程中，使蛋白质分解而产生氨以及胺类等碱性含氮物质。通过检测此类物质可以判断动物性食品是否变质。 四、检测项目设计及介绍 1、屠宰环节 2、生产及流通环节 五、配套仪器介绍 全国免费服务热线：400-696-6968
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NK细胞培养存在的问题与解决方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
NK细胞，您培养的怎么样 自然杀伤细胞(natural killer cell，NK)是机体重要的免疫细胞，不仅与抗肿瘤、 抗病毒感染和免疫调节有关，而且在某些情况下参与超敏反应和自身免疫性疾病的发生。 目前，NK细胞培养存在两种培养方式： 1、滋养层细胞（人肿瘤细胞，即人白血病K562细胞）培养方式。 首先获得具有不分裂不增殖但仍保持代谢活性的滋养层细胞。该细胞通过基因工程技术进行改造，再经过钴60辐照，细胞膜表面稳定表达多种细胞因子，在多种细胞因子协同作用下，外周血单个核细胞中的自然杀伤细胞得到定向激活和扩增。 该种培养方式的价格相对便宜，仅有3000元左右。从培养结果来看，细胞收获量可达到20亿/L的水平，NK表型阳性率达到80%-90%左右。 2、纯因子细胞培养方式。 顾名思义就是使用相应的细胞因子来刺激单个核细胞，向NK细胞方向诱导，并配合相应的细胞培养基，使NK细胞大量增殖。纯因子细胞培养技术以其安全性高而著称，其原因在于所使用的细胞因子，都是体内环境原本就存在的。培养过程相当于模拟体内环境，促进NK细胞的激活及大量增殖。 从培养结果来看，细胞收获量可达到15-25亿/L的水平，NK表型CD3-CD56+达到40%-90%左右。日本在该项技术上走在国际前列。由于日本老龄化严重，因此抗衰老研究较多。NK细胞在抗衰老研究中的应用符合其严格的风险管理原则。因此国内使用的纯因子试剂盒多进口自日本。但由于技术壁垒，纯因子试剂盒的价格一直居高不下，多在6000元以上。 但从培养结果来看，滋养层细胞培养方式性价比更高，但由于在培养过程中选用的滋养层细胞为肿瘤细胞，用户对此种培养方式实际是心存排斥的。尽管从理论上讲，经过相应处理的肿瘤细胞已经不再具备增殖的可能性，但其潜在风险难以证明可以完全排除。另外，就是伦理方面的问题，将正常细胞与肿瘤细胞共培养，然后将培养后的NK细胞回输体内，确实存在难以克服的伦理障碍。正如上述原因，确实制约了滋养层培养技术的推广。 2016年，某国产
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几种常用的灭菌方法汇总
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
几种常用的灭菌方法汇总 物理灭菌法 （一）加热灭菌法 加热可破坏微生物中酶、蛋白质和核酸，导致微生物死亡。加热灭菌又分干热灭菌法和湿热灭菌法。在同一温度下，湿热灭菌的效果比干热灭菌好。主要是因湿热灭菌时，有水分存在，蛋白质容易变性。水分又易使微生物膜壁润湿，湿热的穿透力比干热大。 干热灭菌法 常用的有火焰灭菌法与干热空气灭菌法两种。 （二）紫外线灭菌法 是指用紫外线照射杀灭微生物的方法。一般用于灭菌的紫外线波长是200~300nm，灭菌力最强的波长是253.7nm。紫外线作用于核酸蛋白促使其变性，同时空气受紫外线照射后产生微量臭氧，从而起共同杀菌作用。紫外线进行直线传播，可被不同的表面反射，穿透力微弱，但较易穿透清洁空气及纯净的水。因此本法适用于照射物体表面之灭菌、无菌室的空气及水的灭菌；不适用于药液的灭菌、固体物质深部的灭菌；普通玻璃可吸收紫外线，因此装于玻璃容器中的药物不能用此法灭菌。紫外线对人体照射过久，会发生结膜炎，红斑及皮肤烧灼等现象，故一般在人入室前开启紫外线灯1~2小时，关闭后人才进入洁净室。如果必须在人进去后仍要开紫外线灭菌，则人的皮肤及眼睛应有有效的防护措施。一般在6~15m3的空间可装置30瓦紫外线灯一盏，离地面2.5~3m为宜。 用紫外线照射灭菌时要注意下列问题： 1、紫外线的杀菌力，随使用时间增加而减退，一般使用时间达到额定时间70%时应更换紫外线灯管，以保证杀菌效果。国产紫外线灯平均寿命一般为2000h。 2、紫外线的杀菌作用随菌种不同而不同，杀霉菌的照射量要比杀杆菌大40~50倍。 3、紫外线照射通常按相对湿度为60%的基础设计，室内湿度增加时，照射量应相应增加。 4、紫外线灭菌效果与照射的时间长短有关，这需要通过验证来确定照射时间。 5、紫外照射灯的安装形式及高度，应根据实际情况,参考使用说明决定。 灭菌方法的验证采用生物指示剂挑战试验，生物指示剂多用枯草芽孢杆菌。 （三）微波灭菌法 微波是指频率在30~3000MHz之间
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PEG修饰及其修饰GLP-1的意义
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
PEG修饰是一个使多肽或蛋白质在**或生物技术方面的效力得以提高的重要过程。当PEG以适当的方式连接在蛋白质或多肽上时，它能改变许多的特征，而主要的生物活性功能，如酶活性或特异结合位点，可以保留下来。 PEG修饰通过如下几种途径改善药物的性能。首先，PEG连接在蛋白质或多肽的表面上，提高了它的分子大小，并且它还能携带大量的水分子，一种PEG-蛋白质因而增大了5～10倍。其次，PEG修饰使得以前不溶的蛋白质不仅容易溶解，而且具有高度移动性。此外，PEG修饰可以减少肾脏对药物的滤过作用，降低它的致热原性，还可以减少蛋白酶对其的消解，通过保护分子免受人体免疫系统的攻击来改善了它的输送。同时，因为它逃避了人体防御机构，因而在作用部位停留的时间就长得多，并使局部药物浓度增高。 PEG修饰GLP-1的意义 GLP-1是一种30个氨基酸长度的肽类激素。通常情况下，这种长度的肽类激素口服无效，需要注射或其他适合肽类药物的给药方式（如，肺部或颊内给药）与胰高血糖素相似，GLP-1易形成原纤维，因此十分难溶于水。最近有许多文献报道GLP-1难于形成混合物，难于形成药物。GLP-1的药动学性质更加大了这一难题。二肽酶IV迅速降解GLP-1，其产物不仅没有活性，还可以充当GLP-1受体的拮抗剂，产生相反的作用。同时，肾小球对GLP-1的滤过十分迅速。由于以上原因，GLP-1在人体中的半衰期十分短，静脉注射只有1.5分钟，皮下注射有1.5小时，都不适合用作药物。针对以上不足，对GLP-1的修饰成为了研究的热点。现在正处于临床中的Novo Nordisk A/S公司开发的GLP-1都经过了脂肪酸修饰，活力保持良好，半衰期可达12小时以上，完全可以做到每日给药一到两次。采用PEG修饰，不仅可达到同样的效果，而且可以避免专利纠纷，且PEG修饰的技术更为成熟，修饰物的原料更易获得。 另外，从技术上讲，Lys是大多数PEG修饰选择的位点，有许多类型的PEG可选择。GLP-1具有两个Lys，且均处于非活力部位，因此为修饰提供了很大的灵活性。 PEG
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P2实验室建设要求细则
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
一、P2实验室 P2实验室即二级生物安全实验室，相当于BSL-2实验室。 BLS-2 实验室主要用于初级卫生服务、诊断和研究，其实验对象的危害等级为Ⅱ级（中等个体危害，有限群体危害），具体定义为“能引起人类 或动物发病，但一般情况下对健康工作者、群体、家畜或环境不会引起严重危害的病源体。实验室感染不导致严重疾病，具备有效**和 预防措施，并且传播风险有限”。 BLS-2实验室规定了以下技术指标(静态)： 1、洁净度：无要求 2、最小换气次数：可开窗通风 3、与室外方向相邻相通房间的压差：无要求 4、温度℃：18~27 5、相对湿度％：30~70 6、噪声dB(A)：≤60 7、最低照度lx：300 二、建筑、结构和装修要求 BLS-2实验室大多数是在原有建筑物内进行改建，不同于新建的BLS-2实验室（国标中，要求新建BLS-2实验室宜离开公共场所一段距离），在与相邻其他房间之间，存在着一个相对隔离问题。 所以在原有建筑物中改建BLS-2实验室，应重点注意以下几个问题。 1、在共用建筑物中建BLS-2实验室，应设可自动关闭的带锁的门，必要时，可设立缓冲区域，如缓冲间等。 2 、如果没有机械通风系统，应有窗户进行自然通风，并应有防虫纱窗。（一般情况下，应有机械通风系统，否则，温湿度指标难以保证）。 3、应有防昆虫、鼠等动物进入和外逃的措施。 三、空调、通风和净化 为满足BLS-2 实验室温湿度要求，宜配备机械空调通风系统，有特殊要求的可增设设计要求，如增设净化要求并按净化要求进行送排风系统设计等。 1、可以采用带循环风的空调系统。如果涉及化学溶媒，感染性材料操作和动物实验，则应采用全排风系统。 2、生物安全柜与排风系统连接 I级排风比例100%，密闭连接。 II级 A型排风比例30%，可排到房间或设置局部排风罩。 B1型排风比例70%，密闭连接。 B2型排风比例100%，密闭连接。 3 、实验室内各种设备的位置应有利于气流由“清洁”空间向“污染”空间流动，最大限度减少室内回流与漏流（生物安全
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食品防腐剂的检测方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
食品防腐剂的检测方法 防腐剂作为食品添加剂的一种，一直是食品检测行业的重点关注对象，防腐剂种类繁多，检测方法也是多种多样，每种检测方法都有哪些优缺点呢?咱们就一起说说吧! 食品防腐剂是用于防止食品因微生物引起的变质，提高食品保存性能，延长食品保质期而使用的食品添加剂。由于防腐剂能延长食品保质期，我国《食品卫生法》规定，允许食品加入适量的防腐剂。 防腐剂种类 常用食品防腐剂种类繁多，可以分为化学防腐剂和天然防腐剂两大类。化学防腐剂又分为无机防腐剂和有机防腐剂。 有机化学防腐剂主要有苯甲酸(苯甲酸钠)、山梨酸(山梨酸钾)、对羟基苯甲酸脂类、脱氢醋酸、双乙酸钠、柠檬酸和乳酸等; 无机化学防腐剂主要包括亚硫酸(亚硫酸钠)、二氧化硫、硝酸盐及亚硝酸盐类、游离氯及次氯酸盐、磷酸盐等。 饮料中常见防腐剂 苯甲酸又名安息香酸，稍溶于水，溶于乙醇，酸性条件下对多种微生物(酵母、霉菌、细菌)有明显抑菌作用，对产酸菌作用较弱。在直接饮用的饮料内的最大使用量为0.2克/ 斤。因为苯甲酸溶解度低，使用不便，实际生产中大多是使用其钠盐，其钠盐的抗菌作用是转化为苯甲酸后起作用的。 山梨酸，又名花楸酸，微溶于水，易溶于乙醇。对光、对热稳定，长期放置易被氧化着色。对霉菌、酵母菌和好气性细菌均有抑菌作用。山梨酸是酸性防腐剂，适用范围在pH 值5.5以下，而毒性为苯甲酸的1/4，所以从国外发展动向看，有逐步取代苯甲酸及其钠盐的趋势。最大使用量:0.6克/公斤。 食品防腐剂的检测方法 目前使用的大多数防腐剂对人体都有一定的毒性，一旦过量会对健康产生危害。因此，各个国家对防腐剂的用量和残留量都有严格的规定，防腐剂的准确检测对食品卫生安全具有重要意义。 目前食品防腐剂的检测主要有高效液相色谱法、气相色谱法、紫外光分光光度法、薄层色谱法，滴定法等。其中气相色谱法、高效液相色谱法、紫外光分光光度法准确度高，分析快捷，是目前最常用的检测方法。 常用的检测方法 1.
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