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新的基因编辑领域突破口—表观遗传调控
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
几十年来，DNA一直被认为是决定生命遗传信息的核心物质，但是近些年不断的研究表明，生命遗传信息从来就不是基因所能完全决定的，比如科学家们发现，可以在不影响DNA序列的情况下改变基因组的修饰，这种改变不仅影响个体的发育，而且还可遗传给后代。如肿瘤等多种疾病并非仅由基因突变而引起，且与DNA和组蛋白修饰等改变而引起的基因异常表达密切相关，这就是我们今天要分享的一个新领域——表观遗传学。随着基因编辑技术的快速发展，目前不仅可以在DNA水平高效编辑校对，同时也可在不改变基因序列的情况下对基因进行操纵，进一步达到相应基因转录调控目的，成为了精准医疗的研究热点。 何为表观遗传学？ 遗传学是指基于基因序列改变所致基因表达水平变化，如基因突变、基因丢失等；而表观遗传学则是指基于非基因序列改变所致基因表达水平变化，如DNA甲基化和染色质构象变化等。2018年发表在国际知名期刊NEJM（The new England journal of medicine）重磅综述中提到，表观遗传学主要包括四大类[1]： ▼ DNA甲基化：它是5'端核苷酸胞嘧啶的共价修饰，通常与基因沉默有关，是表观遗传信息的最清晰的例子； ▼ 核心组蛋白翻译后修饰：如乙酰化，甲基化，磷酸化，泛素化等。每种修饰都与基因活性、基因沉默或活性与非活性基因区域之间的绝缘有关； ▼ 高阶染色质结构：包括通过染色体构象捕获方法揭示的环组织（即用于分析细胞中染色质的高阶组织的技术）；有组织的染色质赖氨酸（K）修饰（LOCKs），和涉及多基因区域的核区域的核层结构域（LAD）。 ▼ 非编码RNA：如常见的siRNA,piRNA,miRNA及长非编码RNA都属于表观遗传的范畴。 大量研究表明疾病的发生与表观遗传学密切相关，癌症是常见表观遗传疾病的范例。例如甲基化变异性的增加，与白血病和淋巴瘤中侵袭性更强有关，在造血系统肿瘤的结局预测中也有类似的观察结果，慢性淋巴细胞白血病显示出更高的内部甲基化变异性。这种表观遗传变化，特别是表观遗传标记的变异性
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水分活度的两种主流测量方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
目前没有一种仪器可以放入食品中直接测量出水分活度的多少。相反，水分活度都是用一种间接的方法得到的。通过使样品里液体状态的水和密闭仓内样品顶部气体状态的水达到动态平衡，并测量密闭仓内样品顶部气体的相对湿度，来测量水分活度的值。AOAC1995分析方法有关于水分活度测量的的详细方法介绍。随着仪器技术的发展，水分活度的测量的速度、精确性和可重复性已经大大提高。为了保证产品的安全并执行政府的规定，值得信赖的实验室仪器是必不可少的。目前市场上有两种水分活度测量仪器，一种是利用镜面冷凝露点技术（主要方法），还有一种是利用测量相对湿度传感器来测量，这种方法是通过改变电阻或电容来测量水分活度。两类仪器各有利弊。两种方法的差别性主要体现在精确度、可重复性、测量速度，校准的稳定性、线性及使用的方便程度。 1、 镜面冷凝露点 在镜面冷凝露点系统里，样品被放置在一个样品杯内，该样品杯密封在一个有传感器的仓内，在这个传感器仓里是一个镜面冷凝露点传感器和一个红外温度传感器（见图1）。露点传感器测量空气的露点温度，红外传感器测量样品的温度。当样品的水分活度和空气的相对湿度达到平衡时，气体中的水蒸气随着镜面的温度逐渐降低而达到饱和时，开始析出凝析物，此时所测量到的镜面温度即为该压力下气体的露点，通过露点温度和样品温度计算水分活度。仓内有一个风扇，帮助加速达到平衡，并控制露点传感器的边界层阻力。 图1 镜面冷凝露点法示意图 镜面冷凝露点方法的最大优势在于速度和准确性。镜面冷凝露点方法是基于基础热力学原则测量相对湿度的主要方法。镜面冷凝水分活度仪在不到五分钟之内测量精度达到（+0.003Aw），这种测量方法无需校准。如果有问题，可以很容易地接触到镜面并在几分钟内对镜面进行清洁。对一些应用而言，快速读数允许厂商进行在线监测水分活度。Decagon公司 AquaLab 系列是唯一采用镜面冷凝露点方法进行测量的水分活度仪。 2、电子湿度计 其它的水分活度
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关于色谱柱、色谱填料、国产替代的常见问题的解答
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
目前纳微的色谱填料和色谱柱种类越来越多，合作伙伴也越来越多，所以对纳微的产品和技术的咨询也日益增多，今天我们将一些大家经常咨询的问题和解答提供如下便于大家的理解和更好地在以后的工作中使用。 Q1: 硅胶填料的机械强度如何以及不同粒径的硅胶填料的操作压力各是多少？ A1: 高机械强度是硅胶的特点之一。对于粒径10μm 的硅胶填料我们推荐设定80-100Bar 的压力，对于20-40μm 的硅胶填料我们推荐设定40-70Bar 的压力，来装填动态轴向压缩柱。 硅胶填料的机械强度会影响装柱及使用寿命。纳微的硅胶填料拥有卓越的机械强度，通过在DAC柱上反复装填20次，观察纳微UniSil®10-100 C8与进口同类型的色谱填料的柱压力变化（图1），可以看出UniSil®柱压基本稳定，而进口填料的柱压不断升高，显然UniSil®的机械强度优于进口填料。另外通过电镜对其形貌观察发现（图2），进口填料经装柱后出现部分破碎的情况（图2右），UniSil®填料基本无变化（图2左）。 Q2:填料中孔径的概念？ A2：我们通常所说的孔径实际上是个统计的、平均的概念，即平均孔径，它是指累积孔径分布曲线50%处的平均孔径，或是与孔径分布曲线的最高频度相对应的平均孔径。通过测试纳微UnSil5-1000与进口同类型的色谱填料的孔径分布，得出孔径分布曲线（图3），可以看出UnSil的孔径分布较窄，而进口填料的孔径分布较宽，因而UnSil的硅胶填料孔径的控制更加精准。 以下是纳微科技不同孔径的微球在扫描电镜下的图片（图4）。纳微可以定制最大4000Å孔径的微球。 Q3:为什么要做封端处理？ A3:一般常见的硅胶填料（没有经过封端处理），pH耐受性都在2-8之间，在碱性环境下，硅胶的Si-O-Si-O结构会被破坏而溶解。即使在pH5-7的环境中，硅胶表面的Si-OH也会电离。使得碱性化合物产生拖尾，严重影响分离效果。封端处理以后可以减少待测组分与硅胶表面残留的酸性硅羟基反应，改善和保持较好的峰形，这对于碱性化合物的分离尤其重要。而不同的封端技
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抗体介导的ADCC和CDC作用
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
在人们与疾病抗争的过程中，有两种免疫作用像冉冉的新星一样照亮了人们前进的道路。这两种功不可没的免疫作用是： 1. 抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用（antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity, ADCC） 2. 补体依赖的细胞毒性作用（complement dependent cytotoxicity, CDC）。 前者是指抗体的Fab段与感染或肿瘤细胞的抗原表位结合，Fc段与杀伤细胞（NK细胞、巨噬细胞等）表面的FcR结合，介导杀伤细胞直接杀伤靶细胞的作用。后者指的是补体通过特异性抗体与细胞膜表面相应抗原结合，激活补体经典途径，形成的攻膜复合物裂解靶细胞的作用。 说到这两种作用我们就不得不提到一种历史悠久的肿瘤药物——利妥昔单抗(retuximab)。利妥昔单抗是一种CD20特异性抗体，非霍奇金淋巴瘤的特效药物，它就是通过ADCC和CDC作用杀伤肿瘤细胞的。今天我们就以利妥昔单抗为例和大家聊聊ADCC和CDC作用。 图1. 罗氏制药利妥昔单抗 作为一种典型的IgG抗体，利妥昔单抗从作用机制方面来看拥有抗体-抗原结合部位Fab段和与Fc受体、补体结合的部位Fc段。利妥昔单抗的Fab段能够与人CD20蛋白紧密结合。而Fc段决定了利妥昔单抗的效应功能，包括ADCC作用和CDC作用，其作用机制见图2。 图2 由Fc段驱动的ADCC和CDC作用机制[1] 一、抗体依赖的细胞毒性作用（ADCC） 当利妥昔抗体结合肿瘤细胞表面抗原以及免疫效应细胞表面Fc受体时，ADCC作用便登上舞台，激活免疫效应细胞，如NK细胞、巨噬细胞、中性粒细胞等。这些细胞被激活后，就向近在咫尺的肿瘤细胞或感染细胞释放诸如穿孔素、颗粒酶等细胞毒性物质。后续工作就由这些毒性物质完成，破坏肿瘤细胞膜，使水和电解质迅速进入胞内，导致细胞崩解破坏，诱导细胞凋亡，最终杀死肿瘤细胞。或是通过Fas与FasL途径与TNF-α与TNFR-I途径最终导致靶细胞死亡，此处不再赘述。已知的Fc受体有多种，不过引发ADCC作用最关键的要数FcγRIIIa受体，而这种受体特异性表达在NK细胞中。因此，虽然巨噬细
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检测肝癌细胞基因表达的实验方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
检测肝癌细胞基因表达的实验方法！ 材料与方法 ⒈材料 人肝癌细胞系HepG2由中国医科大学科学实验中心保存。DMEM培养基和胎牛血清购自BioInd公司。细胞转染试剂Lipofectamine 3000和Trizol购自Invitrogen公司。BDNF AS质粒、BDNF AS与BDNF基因完全互补序列缺失突变质粒以及空载体质粒购自上海和元生物公司。无内毒素质粒中提试剂盒购自天根生化科技公司。GoScript TM Reverse Transcription System反转录试剂盒和GoTaq ® qPCR Master Mix试剂盒购自Promega公司。BDNF AS和BDNF引物购自Origene公司。BDNF兔抗人一抗和GAPDH引物购自生工生物工程(上海)股份有限公司。β-actin小鼠抗人一抗和羊抗兔IgG、羊抗小鼠IgG购自北京中杉金桥生物技术公司。BCA蛋白质含量检测试剂盒购自南京凯基生物技术有限公司。 Alexa Fluor ® 594驴抗兔荧光二抗购自Thermo Fisher Scientific公司。Quantikine ® ELISA Human BDNF Immunoassay试剂盒购自R&D Systems公司。FISH试剂盒以及Cy5标记的lncRNA BDNF AS探针和Cy3标记的BDNF mRNA探针由Creative Bioarray公司设计并合成, 其中, BDNF AS探针既能检测内源也能检测外源转入的lncRNA BDNF AS。 ⒉实验方法 ⑴细胞培养和转染 肝癌细胞HepG2使用含有10%胎牛血清的DMEM培养基, 37 °C、5% CO2条件培养。采用细胞转染试剂Lipofectamin 3000转染, 将BDNF AS质粒、BDNF AS与BDNF基因完全互补序列缺失突变质粒以及空载体质粒分别瞬时转染HepG2细胞, 转染过程按试剂说明书进行, 简述如下。转染前24 h给细胞传代, 保证转染时细胞达到90%融合。用Opti-MEM稀释Lipofectamine 3000, 同时, 用Opti-MEM稀释质粒DNA后加入P3000混匀。 将稀释好的DNA和Lipofectamin 3000混合, 室温孵育5 min后加入细胞, 继续培养48 h用于下述实验。细胞实验至少重复3次。 ⑵qPCR方法检测lncRNA BDNF AS和BDNF mRNA水平 Trizol提取细胞总RNA, 紫外分光光度计测定RNA浓度和纯度, 取5 μg总RNA反转录成cDNA。qPCR应用R
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细胞消化的小技巧你知道多少呢
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
Hello, 小伙伴们大家下午好啊~又到了一周一度涨知识时间了哈~ 要说目前最火热的细胞疗法，都知道非CAR-T莫属，而这个T，指的是αβ T细胞，那么问题来了，另一类T细胞-γδ T作何用处呢？今天呢，咱们就来好好扒一扒这类不太热门的T细胞。 γδ T细胞简介 T细胞根据TCR不同而分为αβ T细胞（如CD4、CD8等）和γδ T细胞两大类。人外周血淋巴细胞以αβ T细胞为主，γδ T细胞一般只占1%-5%. 虽说其数量少得可怜，但实力可不容小觑，仅凭一己之力，便几乎可以调动整个免疫系统，实可谓T细胞中的“特种部队”[1]。怎么做到的呢？主要有2个办法： 方式一：亲身上阵，简单粗暴 γδ T细胞可以通过其细胞表面的NK细胞受体，ADCC效应及其分泌的细胞因子（IFN-γ，TNF-α）等方式直接杀伤肿瘤细胞（Fig.1）； 方式2：呼朋唤友，一哄而上 除了直接上阵杀敌外，γδ T细胞还可以通过各种力所能及的方式激活B/DC/αβ T/NK细胞（如：充当抗原提呈细胞激活αβ T 细胞，或由4-1BB共刺激途径诱导NK 介导的抗肿瘤细胞毒性等），进而实现对肿瘤的间接杀伤。 Fig 1. Antitumour γδ T cell functions and their regulation【2】 γδ T细胞疗法优势及进展 既然有如此高效的杀伤功能，是否可以将其进行体外扩增改善其数量劣势，再回输体内进行临床肿瘤**呢？ 小编觉得，当然可以.........尝试一下。好吧，还是先来看看科学家们怎么夸的[3]： 1）γδT细胞浸润肿瘤相对于其他免疫细胞浸润肿瘤的患者，预后**。并且，与常规的癌症疗法（如化疗、放疗）不同，迄今为止，尚没有与γδT细胞疗法相关的严重的不良反应; 2） 对于血液瘤和实体瘤都有良好的**效果 ； 3）通过感应癌细胞特异性表达的应激信号，γδ TCR可以将癌细胞与健康细胞区分开。就是说，它对于健康细胞完全安全； 4）无需基因改造即有强大的杀伤能力 ； 5）更重要的一点是：γδ TCR天生不受MHC(组织相容性复合物)限制，这意味着如果供体的γδ T细胞转
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培养细胞为啥总是一言不合就抱团
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
Hello, 小伙伴们大家下午好啊~又到了一周一度涨知识时间了哈~ 要说目前最火热的细胞疗法，都知道非CAR-T莫属，而这个T，指的是αβ T细胞，那么问题来了，另一类T细胞-γδ T作何用处呢？今天呢，咱们就来好好扒一扒这类不太热门的T细胞。 γδ T细胞简介 T细胞根据TCR不同而分为αβ T细胞（如CD4、CD8等）和γδ T细胞两大类。人外周血淋巴细胞以αβ T细胞为主，γδ T细胞一般只占1%-5%. 虽说其数量少得可怜，但实力可不容小觑，仅凭一己之力，便几乎可以调动整个免疫系统，实可谓T细胞中的“特种部队”[1]。怎么做到的呢？主要有2个办法： 方式一：亲身上阵，简单粗暴 γδ T细胞可以通过其细胞表面的NK细胞受体，ADCC效应及其分泌的细胞因子（IFN-γ，TNF-α）等方式直接杀伤肿瘤细胞（Fig.1）； 方式2：呼朋唤友，一哄而上 除了直接上阵杀敌外，γδ T细胞还可以通过各种力所能及的方式激活B/DC/αβ T/NK细胞（如：充当抗原提呈细胞激活αβ T 细胞，或由4-1BB共刺激途径诱导NK 介导的抗肿瘤细胞毒性等），进而实现对肿瘤的间接杀伤。 Fig 1. Antitumour γδ T cell functions and their regulation【2】 γδ T细胞疗法优势及进展 既然有如此高效的杀伤功能，是否可以将其进行体外扩增改善其数量劣势，再回输体内进行临床肿瘤**呢？ 小编觉得，当然可以.........尝试一下。好吧，还是先来看看科学家们怎么夸的[3]： 1）γδT细胞浸润肿瘤相对于其他免疫细胞浸润肿瘤的患者，预后**。并且，与常规的癌症疗法（如化疗、放疗）不同，迄今为止，尚没有与γδT细胞疗法相关的严重的不良反应; 2） 对于血液瘤和实体瘤都有良好的**效果 ； 3）通过感应癌细胞特异性表达的应激信号，γδ TCR可以将癌细胞与健康细胞区分开。就是说，它对于健康细胞完全安全； 4）无需基因改造即有强大的杀伤能力 ； 5）更重要的一点是：γδ TCR天生不受MHC(组织相容性复合物)限制，这意味着如果供体的γδ T细胞转
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浅析 γδ T 细胞——T细胞中的“特种部队”
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
Hello, 小伙伴们大家下午好啊~又到了一周一度涨知识时间了哈~ 要说目前最火热的细胞疗法，都知道非CAR-T莫属，而这个T，指的是αβ T细胞，那么问题来了，另一类T细胞-γδ T作何用处呢？今天呢，咱们就来好好扒一扒这类不太热门的T细胞。 γδ T细胞简介 T细胞根据TCR不同而分为αβ T细胞（如CD4、CD8等）和γδ T细胞两大类。人外周血淋巴细胞以αβ T细胞为主，γδ T细胞一般只占1%-5%. 虽说其数量少得可怜，但实力可不容小觑，仅凭一己之力，便几乎可以调动整个免疫系统，实可谓T细胞中的“特种部队”[1]。怎么做到的呢？主要有2个办法： 方式一：亲身上阵，简单粗暴 γδ T细胞可以通过其细胞表面的NK细胞受体，ADCC效应及其分泌的细胞因子（IFN-γ，TNF-α）等方式直接杀伤肿瘤细胞（Fig.1）； 方式2：呼朋唤友，一哄而上 除了直接上阵杀敌外，γδ T细胞还可以通过各种力所能及的方式激活B/DC/αβ T/NK细胞（如：充当抗原提呈细胞激活αβ T 细胞，或由4-1BB共刺激途径诱导NK 介导的抗肿瘤细胞毒性等），进而实现对肿瘤的间接杀伤。 Fig 1. Antitumour γδ T cell functions and their regulation【2】 γδ T细胞疗法优势及进展 既然有如此高效的杀伤功能，是否可以将其进行体外扩增改善其数量劣势，再回输体内进行临床肿瘤**呢？ 小编觉得，当然可以.........尝试一下。好吧，还是先来看看科学家们怎么夸的[3]： 1）γδT细胞浸润肿瘤相对于其他免疫细胞浸润肿瘤的患者，预后**。并且，与常规的癌症疗法（如化疗、放疗）不同，迄今为止，尚没有与γδT细胞疗法相关的严重的不良反应; 2） 对于血液瘤和实体瘤都有良好的**效果 ； 3）通过感应癌细胞特异性表达的应激信号，γδ TCR可以将癌细胞与健康细胞区分开。就是说，它对于健康细胞完全安全； 4）无需基因改造即有强大的杀伤能力 ； 5）更重要的一点是：γδ TCR天生不受MHC(组织相容性复合物)限制，这意味着如果供体的γδ T细胞转
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行为学的物体认识实验方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
行为学-物体认识实验方法 一．实验简介 物体认知实验方法是 1988 年由 Ennaceur 提出，它是基于啮齿类动物天生具有的新奇偏爱性，用于检测动物的学习记忆能力，其与传统的检测方法相比，不需给予正向( 奖赏) 或反向( 惩罚) 的刺激，也不需冗长的训练，动物分别根据“新旧物体”特征、位置、出现的顺序和所处的背景对“新旧物体”进行辨别，能够检测从简单的物体识别记忆到复杂的空间、时序和情景记忆，对动物学习记忆行为实现精细化区分，实验简单易操作。在学习记忆发生发展机制、认知障碍防护药物和保健品研发等方面具有重要应用价值。 研究物体认知实验方法有四种：新物体识别实验、物体位置识别实验、时序记忆实验和情景记忆实验。这四种实验的实验步骤和评价指标为学习记忆研究提供一种基于动物自发行为，多模式、精细敏感的行为实验方法。 二．实验方法 1.新物体识别实验： 适应期：实验中将动物放入没有任何物体的实验箱中，每只每天 10 min，每天 1 次，连续 3 d。 熟悉期：第 4天进行熟悉期实验，开始时箱中不放入任何物体，将动物放入再次适应 2 min，动物取出后，放入两个完全相同的物体，分别记录每只动物 5 min 内对左侧物体的探索时间( exploration time for left object，Tl) 和对右侧物体的探索时间( exploration time for right object，Tr) 。 测试期：熟悉期后将动物放回饲养笼中，10 min 后开始测试期实验。测试期时放入两个不同的物体，其中一个物体与熟悉期的物体完全相同，另外一个是新奇物体（与熟悉期物体匹配），动物放入后计时 5min，分别记录动物在不同时间段对熟悉物体的探索时( exploration time for familiar object，Tf) 和对新奇物体的探索时间( exploration time for novel object，Tn)。探索活动定义为: 小鼠的鼻子近距离指向物体或者直接嗅、舔物体。当其他部位接触物体而鼻子没有指向物体或站在物体上时非对物体的探索活动。 2.物体位置识别实验： 适应期与熟悉期实验过程同新物体识别
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做标准曲线样品检测时需要注意的问题
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
目前国际上zui流行的免疫检测拟合方式是“四参数逻辑拟合"，用这种拟合方式往往能够比较的反映浓度和吸光度的曲线关系，从而进一步比较正确的获得样品中待测物质的浓度值。 其实，在一个长的区间内，Logistic应该都能拟合得较为理想。但并不是说它就是的。事实上不仅是ELISA，其它很多生物学反应都是S形曲 线，也都可以用Logistic曲线拟合。但建模型是一回事，而用它来定量是另一回事。如果用来定量，S形曲线的中间段（较陡处）是比较好的，而两端的平 坦部分计算误差会大，有时甚至会很大。 做标准曲线样品检测时有几个问题需要注意： 1、样品的浓度等指标是根据标准曲线计算出来的，所以首先要把做标准曲线看作是比做正式实验还要重要的一件事，否则后面的实验结果无从谈起。 2、设置标准曲线样品的标准浓度范围要有一个比较大的跨度，并且要能涵盖你所要检测实验样品的浓度，即样品的浓度要在标准曲线浓度范围之内，包括上限和下限。而对于呈S型的标准曲线，尽量要使实验样品的浓度在中间坡度zui陡段，即曲线几乎成直线的范围内。 3、zui好采用倍比稀释法配制标准曲线中的标准样品浓度，这样就能够保证标准样品的浓度不会出现较大的偏离。 4、检测标准样品时，应按浓度递增顺序进行，以减少高浓度对低浓度的影响，提高准确性。 5、标准曲线的样品数一般为7个点，但至少要保证有5个点。 6、做出的标准曲线相关系数因实验要求不同而有所变动，但一般来说，相关系数R至少要大于0.98，对于有些实验，至少要0.99甚至是0.999.
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PCR实验的准备工作及步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
步骤构成： ①模板DNA的变性：模板DNA经加热至94℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应做准备; ②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合; ③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在酶的作用下，以P为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链。 重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟， 2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。 实验试剂与器材： 模板DNA、2.5mmol/L q DNA聚合酶(5U/SSR引物 10 ×buffer、15mmol/L Mg2+、ddH2O PCR仪、移液枪、PCR板 实验步骤： 一、实验器具与材料： 1、移液枪：1ml、200μl、20μl、10μl、2μl 2、吸头：1ml、200μl、20μl 3、匀浆管：5ml 4、吸头台：放置1ml吸头的一个，放置20μl吸头的一个 5、EP管：1.5ml、0.2ml、100μl 6、试剂瓶：2个60ml的棕色试剂瓶(广口，带盖) 1个125ml的白色试剂瓶(放无水乙醇) 7、量筒：50ml、250ml、500ml 8、容量瓶：250ml、500ml、1000ml 9、试管架：5ml、1.5ml、20μl 10、盐水瓶：250ml、500ml各2个备用，一个装无水乙醇，另一个装DEPC水 11、铝制饭盒：4个 12、塑料小饭盒：1个 13、大瓷缸：2个 14、锡泊纸：一卷 15、卷纸：2卷 16、三角烧瓶：带盖，稍大 实验器具的处理与准备： 1、塑料制品：(包括枪头、EP管、匀浆管等) 先将DEPC水从容量瓶中倒入瓷缸中，将塑料制品逐个浸泡其中，其中小枪头需要吸管打入DEPC水，过夜，然后高压，再烤干备用，实验前将枪头等放入吸头台，再高压一次(EP管) 2、玻璃制品：泡酸过夜，冲洗干
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天平怎么维护保养及注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
天平怎么维护保养及注意事项 维护保养方法： 将天平置于稳定的工作台上避免振动、气流及阳光照射。 在使用前调整水平仪气泡至中间位置。 电子精密天平应按说明书的要求进行预热。 称量易挥发和具有腐蚀性的物品时，要盛放在密闭的容器中，以免腐蚀和损坏电子天平。 经常对电子精密天平进行自校或定期外校，保证其处于最佳状态。 如果电子精密天平出现故障应及时检修，不可带“病”工作。 操作天平不可过载使用以免损坏天平。 若长期不用电子精密天平时应暂时收藏为好。 注意事项； 1.天平属于精密仪器，应安放位置在水平，紧固，稳定，无震动的台面，不受太阳直射，无强气流干扰，无强电磁干扰和热源。环境温度在10℃～30℃范围内，并且变化缓慢，湿度在50%～85%RH之间。 2.使用前应按规定通电预热。 3.容器和称物质量之和不得超过称量范围。 4.若称重不准确，需用标准砝码对天平校准。 5.如需取下天平上的秤盘，请将秤盘按顺时针方向转动后再取下，切勿将秤盘往上硬拔，以免损坏传感器。 6. 严禁用溶剂清洁外壳，应用软布清洁外壳。 *蚀气体的环境：根据天平的使用程度，应做周期性的检查校准。
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作物表型组学：现状与展望
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
到2050年，全球人口将达到97亿，预计作物产量翻一番才能满足全球人口的粮食需求。为了达到这一目标，作物产量需每年增长2.4%，但目前作物产量平均增长率仅为1.3%。作物生产性能的遗传改良仍然是提高作物生产力的关键因素，但当前的改善速度无法满足可持续性和粮食安全的需要。与广泛的遗传信息相比，表型分析已成为理解复杂性状遗传基础的瓶颈。为了打破这一瓶颈并提高分子育种的效率，迫切需要可靠、自动和高通量的表型技术，为育种学家提供新的见解，以选择适应资源短缺和全球气候变化的新品种。 表1 作物表型组学重要发展历程 随着高通量表型技术的迅速发展，该领域的研究正进入一个新的“表型组学”时代。作物表型组学研究集农学、生命科学、信息科学、数学和工程科学于一体，将高性能计算技术和人工智能技术相结合，探索复杂环境下作物生长的多种表型信息。作物表型组学研究的最终目标是构建有效的技术体系，能够以高通量、多维度、大数据、智能、自动测量的方式对作物进行表型分析，创造出一种多种形态、多尺度、表型+环境+基因型条件下获得大数据的工具。 G×P×E互作示意图 本文从表型数据收集、表型分析等方面概述了作物表型组学的研究现状，介绍了细胞、组织、器官、植株、田间群体等不同水平的作物表型分析方法，讨论了表型数据提取、分析和存储研究中的实际问题。Zhao C等认为表型组学正在进入具有多领域、多层次和多尺度特征的大数据时代，强调了建立多尺度、多维度和跨区域作物表型大数据库的必要性和重要性。最后，Zhao C等讨论了作物表型组学未来的挑战和前景，并为精确育种提出新的智能解决方案。 表2 作物微观尺度表型性状分析的常用方法和发展方向 表3 高通量植物表型平台成像技术综述 表4 可控环境下作物表型技术及平台设备一览表 表5 田间表型平台的特征和应用详表 全文阅读 Zhao C, Zhang Y, Du J, et al. Crop phenomics: current status and perspectives. Frontiers
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H7N9禽流感病毒适应宿主机制重要进展
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
6月18日，美国微生物学会（ASM）旗下顶级刊物mBio 在线发表了中国农业科学院哈尔滨兽医研究所陈化兰院士团队的最新科研成果“Low polymerase activity attributed to PA drives the acquisition of the PB2 E627K mutation of H7N9 avian influenza virus in mammals”。该研究在H7N9禽流感病毒适应哺乳动物宿主机制研究方面取得重要进展。 南模生物为该研究构建了Anp32a-KO小鼠模型。 禽流感病毒需要发生突变以适应哺乳动物宿主，进而有效地复制和传播，其中血凝素蛋白HA和病毒聚合酶蛋白PB2的突变起到重要作用。 美国科学家于1993年就发现流感病毒在哺乳动物细胞中复制时PB2发生E627K突变，而本文的研究团队前期也发现PB2/E627K突变是H7N9流感病毒对人致病力增强的关键，同时该突变增加H7N9病毒在人之间的传播能力。但是该突变的产生机制一直是未解之谜。 该研究从病毒本身“内因”及宿主“外因”两方面进行探索。 首先研究H7N9流感病毒发生该突变的内在驱动。通过1株H7N9和5株H9N2对比发现，H7N9获得PB2/E627K突变的能力更强一些。因此将 H7N9 (PG/S1421)和H9N2 (CK/5)进行病毒重组，从而发现H7N9中PA蛋白是使其在小鼠体内复制过程中发生PB2/E627K突变的关键分子。 FIG 1. PA drives the emergence of the PB2 E627K mutation during the replication of PG/S1421(H7N9) virus in mice. 进一步通过将H7N9 的PA和H9N2 的PA重组，发现PA的低聚合酶活性是发生突变的内在驱动，并且N端的4个残基142K、147I、171I和182M是关键位点。 FIG 2. Four residues in the N-terminal PA domain mediate the acquisition of the H7N9 PB2 E627K mutation in mice. 另一方面，本研究还发现宿主中ANP32A蛋白是病毒获得PB2/E627K突变的关键。当Anp32a基因在小鼠体内被敲除后，H7N9病毒则在复制过程中失去了获得PB2/E627K突变的能力，而采取了另外一种适应哺乳动物宿主的方式，即获得PB2/D701N突变。 FIG 3. PG/S1421(H7N9)
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小鼠繁育之如何提前预防小鼠食仔
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
动物实验中小鼠繁育是十分重要的环节，尤其是基因修饰小鼠，需要繁育很多的后代才能获得足够的实验组。 可是好不容易等到孕鼠生产，小鼠仔竟然被它们的妈妈吃掉了，好崩溃，实验又要等等等。 为了避免以上情况发生，一定要提前预防小鼠食仔！下面让我们一起看看小鼠食仔有哪些常见因素以及如何预防： 小鼠居住环境 笼位密度 环境拥挤造成的一种压迫效应可导致动物吃仔，环境拥挤表现在饲养密度大、空间小、温度高。 预防： 对于怀孕母鼠，要提前考虑到鼠仔出生后的空间，饲养密度过大，后期鼠仔出生后除了会增加被吃的概率，还会增加被踩踏致死的概率。 因此当雌鼠腹部明显膨隆确定其受孕后，尽量把孕鼠独置一笼，以避免其他成年鼠对鼠仔的伤害，也为接下来的产仔和哺乳做好准备。注意动作需轻柔，以免孕期母鼠受惊而增加产后吃仔的可能性；并且建议给母鼠添加柔软的做窝材料如纸球，纸片等。 外界干扰 我们常说胆小如鼠，而孕期以及产后的小鼠则更加敏感，甚至有些神经质，外界干扰容易导致出现惊慌、烦躁等症状，引起母鼠咬食幼仔。因此要减少外界干扰，如光照、噪音、气味改变以及经常性观察。 预防： 光照条件：光照包括照度、光线波长及光照时间三个因素，光照时间过长或过短都对实验动物不利。一般，动物照度控制在15-20lx（勒克斯），工作照度不低于200lx较适宜，既适应动物需要，又方便工作人员观察和操作。 噪音预防：动物房室内噪音控制在60dB以下，在小鼠产仔后一周，尽量更加小心。 气味改变：母鼠对气味的变化非常敏感，若鼠笼混入陌生的味道，或者母鼠嗅到鼠仔身上有特殊气味，鼠仔就很可能被吃掉！因此在鼠仔刚出生的前几天，禁止用手去触摸，如实验必需，可以用镊子辅助翻动，翻动过后给鼠仔抹上母鼠的气味，比如粪便、尿液等，以便使母鼠能辨认出鼠仔。 还有就是产后一周内尽量不换笼盒，如果必须换，也建议保留部分脏垫料和粪便放在鼠仔周围，以免出现母鼠食仔
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