-
3种常用基因功能验正方法简述
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
科研人员在分析项目的过程中，碰到这样的问题：通过各种手段（选择清除分析、比较基因组学分析、转录组分析）获得的行驶某种功能的某基因，如果进行实验的验正呢？一般分为：基因上调（基因转染法）、基因下调（基因干扰法）后看蛋白表达水平、细胞功能改变、在体动物模型中相关功能的变化等。 相信大家也有人有这样的疑惑，辉骏生物就以上问题进行有针对性的收集了如下的资料，希望可以帮助到您。 1、 RNA 干扰技术 RNA干扰（RNA interference, RNAi）是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA（double-stranded RNA，dsRNA）诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。由于使用RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达，所以该技术已被广泛用于探索基因功能和传染性疾病及恶性肿瘤的**领域。 简单的说如果某基因行驶控制花色为红的功能（举例），我们利用RNA干扰技术将这个基因转录的mRNA 降解掉，然后看花色的变化，如果不为红，说明这个基因的确有这个作用。 2、 基因敲除技术 基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术，是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA同源重组原理，用设计的同源片段替代靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。随着基因敲除技术的发展，除了同源重组外，新的原理和技术也逐渐被应用，比较成功的有基因的插入突变和iRNA，它们同样可以达到基因敲除的目的。 3、 酵母双杂交 酵母双杂交系统是将待研究的两种蛋白质的基因分别克隆到酵母表达质粒的转录激活因子（如GAL4等）的DNA结合结构域基因和转录激活因子（如GAL4等）激活结构域基因，构建成融合表达载体，从表达产物分析两种蛋白质相互作用的系统。 由于蛋白质直接互作是蛋白质发挥调控作用的重要方式，如果要研究某个基因行驶某功能，可以将这个基因和靶基因都整合到酵母中进行互作研究，从而分析其功能。 更多实验项目请联系辉骏生物： 企业
-
如何减少western blot非特异性条带的产生
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
非特异性条带？ 没有什么比以多个条带结束你的western blot实验更令人沮丧。 这是我的样品吗？ 封闭液的问题？ 抗体的问题？ 如果您正在使用新的样本或抗体，答案可能是，也不确定。 通过一次更改一个变量，对Western进行故障排除是一个痛苦的过程。 我们不能完全地让你所有的问题都消失，但这里有一些提示可以帮助你提高你的印迹质量。 样品的问题？ 样品质量差是多个条带的主要来源。 以下是蛋白样本可能出现的一些常见问题。 如果您观察到多个条带在预期分子量下，您的蛋白质很可能已经降解。 确保在蛋白质提取过程中添加蛋白酶抑制剂并保持样品低温状态。 如果条带大于预期分子量，请检查文献中的磷酸化，糖基化，乙酰化或甲基化等修饰，将蛋白放在更大尺寸的胶中进行跑胶。 如果到处都有条带，您可能加载了过多的样品，这些样品会导致对无关的裂解蛋白非特异性吸附。 在样品制备方面，不要忘记在上样前加热到至少60°C使样品变性。 您的目的蛋白可能与其他蛋白共享表位。 要进行检查，请运行BLAST搜索以查看目的蛋白的唯一性。 另一种可能性是，细胞系中的蛋白质表达随着时间的推移而逐渐消失。 如果可以的话，重新开始使用新的非传代细胞。 封闭液的问题？ 使用错误的封闭缓冲液会给你的印迹带来灾难。 许多常用的封闭缓冲液可以掩盖目标上的表位，使其难以检测。 或者是封闭无效产生非特异性结合。 一抗和二抗的问题？ 一抗和二抗也会产生麻烦。 在选择一抗时，通常有很多选择。 为获得最佳结果，请选择经过亲和纯化并根据您的应用进行验证的抗体。 亲和纯化从制剂中消除了大量非特异性免疫球蛋白，产生更干净的印迹。 验证您所选择的抗体是否已被您的同伴成功使用可查询抗体搜索引擎，例如CiteAb：https：//www.citeab.com/
-
三种长肽合成技术简述
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
蛋白质化学合成研究中,固相合成方法是最常用也是最简便的合成方法。该方法在合成长链多肽时同样效果显著，但是随着肽链的延长，反应会逐渐变得更难进行（比如大于150个氨基酸），一些缺残基的目标肽就随之产生。这些缺残基的肽链也是长肽合成过程中所产生的主要杂质。因此，长肽的合成过程中，我们需要克服的主要困难是探索更优质的反应条件和反应方法，从而使氨基酸缩合反应进行的更充分更彻底。同时缩短反应时间，因为反应时间越长，不可控的副反应相对的就越多，副产物就越复杂，这些副产物同样是整个反应所产生杂质的重要组成部分。 为了解决长肽合成过程中存在的诸多问题，我们国肽生物采取了一系列效果显著的措施和方法： （1）微波合成法：对于合成过程中出现的一些难以缩合的氨基酸，我们采用微波法进行合成，该方法效果显著，并且大大缩短了反应时间，同时减少了两种主要副产物的产生。 （2）片段合成法：当某些多肽用常规合成方法合成困难，并且难以纯化时，我们也会采用将多肽中某一段的某几个氨基酸缩合之后作为一个整体缩合到肽链上去，这种方法也能够解决许多合成中存在的问题。 （3）酰肼合成法：酰肼法合成多肽的方法是固相合成的N末端Cys多肽和C末端多肽酰肼之间的化学选择性反应形成酰胺键而实现多肽连接的方法。该方法根据肽链中Cys的位置，将整条肽链分成多条序列分别合成，最终经过液相合缩反应得到目标肽，该方法不仅大大缩短了长肽合成时间，而且显著地提高了最终产物纯度，因此广泛适用于含有Cys的长链多肽的合成。 国肽生物一直以解决客户需求为己任，我们发展的三种长肽合成方法，很好的解决了长肽合成过程中存在的缩合纯化困难、杂质多、纯度低等问题，而且对于含有困难序列，HPLC峰型异常的多肽同样效果显著，国肽生物已经掌握了成熟的长肽合成技术。 成功案例： 我们成功合成序列为 GHMDIKKEIEAIKKEQEAIKKKIEAIEKELRQLANETTQDLQLFLRDTTELRTFSILNRKDIDFLLQRMKQIEDKIEEIESKQKKIENEIARIKKLIGER
-
超纯水中的锂含量超标解决方案：EDI模块处理进水系统
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
最近，有个用户碰到了一个工作中的难题 - 他们通过岛津ICP-MS测试后发现，使用纯水中的锂离子含量偏高，达不到要求的ppt级别。尝试了很多解决办法，始终无法解决纯水中锂超标的问题！ 使用过进口高端品牌的实验室超纯水设备； 换过厂里自备的注射用水做为进水； 换过不同品牌的RO膜； 换过离子交换树脂纯化柱； 试用过乐枫的超纯水设备； …… 客户工厂所在的地区内有公司从事锂电池的研发和生产。很有可能是当地的自来水水中的锂离子含量过高，导致纯水产水中锂含量超标。 ICP-MS的检测证实了这一点，他们使用的自来水中，锂离子含量明显高于其他地区。 所以，用户碰到的超纯水锂离子含量超标，问题出在进水！ 锂（Li）是原子量最小的金属，而且低价的锂离子（Li+）是已知金属离子中活动性最强的离子。用离子交换树脂很难去除水中的锂离子，因为活跃度太高的锂离子被交换树脂吸附的同时也很容易解离，进入到产水中；如果原水中锂含量比较高，仅使用反渗透，离子交换的纯化方法，不容易达到一个理想的去除的效果。 那么应该如何去除掉水中的锂离子呢？ 经过仔细地了解和分析，给用户提出了一个解决方案- 使用装有EDI模块（连续电流去离子技术）的实验室纯水系统处理进水，然后再制备超纯水。 用户试用了乐枫的Direct-Pure EDI水机。果然，问题解决了！ 为什么装有EDI模块的实验室纯水机对低价锂离子有这么好的去除效果呢？ EDI是包含了多级离子去除机制的技术集合体，是一个融合了离子交换技术、过滤膜，电化学等技术的升级版电渗析过程，在电场的作用下，利用离子选择性半透膜，达到水纯化分离的目的。下图很好的阐述了EDI工作的原理。 EDI对水中离子的去除基于三个过程-电渗析过程，离子交换过程和树脂的电化学再生过程。相比一般的离子交换，EDI通过电场，可以让活跃的锂离子快速定向迁移，通过弃水排放，锂离子与交换树脂之间吸附
-
常见小鼠肿瘤模型特点概述
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
【干货】小鼠肿瘤模型那些事儿 嗨，小伙伴们晚上好啊！首先呢，小编想问大家一个问题，咱们天天挂在嘴边的小鼠肿瘤模型到底是怎么构建的呢？每种模型的特点是什么？最优秀的模型又属哪一个？.....其实吧，要说模型佼佼者，当然是越能体现人类疾病的发生和发展就越好，毕竟，“坚持以人为本”才是我们的最终目的！ 但话说回来，每种模型都有其优劣，没有哪种模型能为我们解答所有问题， 因此，了解各类模型的特点，就变得尤为重要。以下，小编就几类比较普遍使用的小鼠肿瘤模型做一简单概况。 致癌物诱导的肿瘤模型 1915年，日本病理学家Katsusaburo Yamagiwa和其助理Koichi Ichikawa通过把煤焦油涂于兔子的耳朵（150天）上，最后，他们发现兔子罹患了肿瘤。Yamagiwa的兔子模型也被认为是首例用于癌症研究的动物模型[2]。 加利福尼亚大学旧金山分校（University of California, San Francisco）的肿瘤生物学家Melissa Reeves等人采用这种方法，在小鼠皮肤局部涂抹名为DMBA和TPA的已知致癌物，诱导小鼠发生皮肤癌，进而研究肿瘤如何从原发部位转移至继发部位。她的研究结果表明，皮肤癌不会按顺序从一个位置迁移到另一个位置——例如，从皮肤到淋巴结再到肺，而是“通过平行传播，同时进入淋巴结和肺部”[2]。 化学致癌物质可能会在数百个位点破坏DNA，而这种模型模拟了由广泛基因损伤引起的肿瘤的自然演变，这对于模拟因重复暴露于特定环境（如持续紫外照射）的人类肿瘤具有非常重要的借鉴意义，但该类模型费时较长，肿瘤的连续监测困难，高异质性可能会造成数据的处理难度增加，缺乏明确的基因操作等[2]。 图1 论防晒的重要性[1] 基因工程小鼠模型（GEMM） 顾名思义，GEMM（Genetically engineered mouse model）是通过对小鼠基因进行改造而构建的肿瘤模型，改造手段包括转座子技术，基于同源重组（或非同源末端连接）的胚胎干细胞和CRISPR-Cas9技术等。 如敲除小鼠抑癌基因p53，其罹
-
相关探针和电子显微镜™（CPEM）的关联成像技术简介
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
新型扫描探针显微镜（SPM）和扫描电子显微镜（SEM）关联成像技术简介 LiteScope™是一种独特的扫描探针显微镜（SPM）。 它设计用于轻松集成到各种扫描电子显微镜（SEM）中。 组合互补的SPM和SEM技术使其能够利用两者的优势。使用LiteScope™及其可更换探针系列，可以轻松进行复杂的样品分析，包括表面形貌，机械性能，电性能，化学成分，磁性能等的表征。 相关探针和电子显微镜™（CPEM）结合了SPM和SEM技术。 CPEM可以同时在同一协调系统中同时获取同一区域的SPM和SEM图像。 结合SPM和SEM成像方法可以得到分析区域的更广泛的信息光谱，从而揭示两种图像中可能存在的等同性和不一致性。 工作原理 将样品连接到压电扫描仪。 电子束焦点和SPM探针在CPEM图像采集期间可以对感兴趣的区域由压电扫描器逐点扫描并发出信号，同时对SEM检测器和SPM探针进行采样，以便进行测量放在同一个协调系统中。 在SPM尖端和该范围内的聚焦电子束之间存在恒定的尖端/点偏移数百纳米。 如果减去这样的尖端/点偏移，则SEM和SPM图像具有完美匹配和优异的相关性- 可以获取CPEM图像。 CPEM技术的优点 1. CPEM提供多维相关成像 - 来自扫描电子显微镜的图像被扩展为3D。 2. 使用CPEM，可以快速准确地区分SEM图像中的地形和材料对比度。 3. CPEM以适当的方式将两个或多个SEM信号与测量的地形相关联，例如SE，BSE，EBIC等。 4. CPEM可以在相同的条件下同时测量AFM和SEM试样条件，相同的测量速度等 5. 组合的AFM和SEM扫描系统可实现精确的图像相关，消除漂移和其他不准确性。
-
Mettl3介导的m6A RNA甲基化调控骨髓间充质干细胞和骨质疏松症的命运
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
Nat. commun | Mettl3介导的m6A RNA甲基化调控骨髓间充质干细胞和骨质疏松症的命运 文章导读： 近日，四川大学华西医院的周学东和袁泉研究组，联合中山大学第一附属医院的林水宾团队合作研究共同揭示了Mettl3介导m6A RNA甲基化调控骨髓间充质干细胞和骨质疏松症命运的新机制。该研究成果以Mettl3-mediated m6A RNA methylation regulates the fate of bone marrow mesenchymal stem cells and osteoporosis为题，于11月14日在《Nature communications》(IF:12.353)杂志在线发表。 研究思路 研究团队首先利用CRISPR-Cas9技术构建了MSCs有条件的敲除和敲入Mettl3的模型小鼠，然后微型CT和染色显示敲除后导致低骨量和高骨髓脂肪，并且MSCs中m6A整体甲基化水平也有所降低；同时，与执行了卵巢切除术的模型鼠相比，Mettl3过表达可预防雌激素不足引起的骨质疏松；接下来通过m6A MeRIP-seq和RNA-seq技术发现Mettl3缺失的MSCs存在PTH调控基因表达的全局下调，提示PTH/Pth1r信号轴可能是Mettl3介导的m6A甲基化对MSCs命运的影响通路。PTH间歇性注射实验也是印证了m6A通过调节PTH/Pth1r信号轴影响MSCs的成骨和脂肪分化的结论。另外，Pth1r的过表达可以在很大程度上逆转MSCs向脂肪细胞的倾斜分化，改善成骨，进一步证实了PTH/Pth1r信号通路是mettl3介导的m6A修饰控制MSCs谱系分配的新机制。 研究内容 1. MSCs 中Mettl3的敲除可导致低骨量、高骨髓脂肪 利用CRISPR-Cas9技术构建了MSCs有条件的敲除Mettl3的模型小鼠，股骨石蜡切片免疫染色和WB验证了Mettl3的敲除是的成功的。结果显示Mettl3敲除小鼠与对照组相比，骨质量损失且骨髓脂肪组织积聚显著，其骨骼特征与骨质疏松症的病理表型相似。同时LC-MS/MS检测发现MSCs中m6A甲基化整体水平下降。 2. MSCs中Mettl3的缺失导致成骨潜能降低和脂肪分化增加 接下来，从Mettl3敲除的小鼠中分离出MSCs以验证其体外成骨和成脂潜能。碱性磷酸酶染色活性减弱，钙化减少，并且成
-
为什么都选择牛血清做细胞培养实验
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物，血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。科研人员选择用牛血清做细胞实验的理由有如下几点： 1、牛血清是细胞培养基中的中药成份之一。在培养基中加入适量血清（10%），首先可以补充细胞生长所需的生长因子、激素、帖附因子等。 2、具有解毒作用，能解除脂肪酸、重金属和某些蛋白酶的毒性。 3、它还能中止胰酶的作用，并保护细胞免受机械损伤等。但是血清成分复杂，不同来源、不同批号生产的血清对细胞生长作用的差异较大。血清的保存期只有一年，不同存放时期的血清的效力也不同。所以，当新购得的血清或要在开始一个重大试验的时候，应首先进行牛血清的筛选。
-
有效增加难溶肽溶解度的3种方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
多肽广泛应用于医药，材料，染料等多种领域，多肽的溶解性也是关系实验室实验成功与否的重要因素。 一般来说，多肽的溶解性通常与整条肽链的氨基酸序列密切相关，通常整体显酸性的多肽溶解困难时可以加入适量的碱性溶液，而显碱性的多肽溶解困难时可以加入适量的酸性溶液，序列中含有大量疏水性氨基酸或中性氨基酸时，难于直接溶于水，通常需要先加入少量有机溶剂，溶解完全后用蒸馏水大量稀释，常用的有机溶剂有乙腈，DMSO，DMF，丙醇，异丙醇等。需要注意的是，当肽链中含有Met或者Cys时，不能用DMSO溶解，这很可能会导致肽链中含有的S被氧化。此外为了帮助客户设计的多肽达到良好的实验效果，针对肽链的物理性质，化学性质和分子结构，我们通常会对客户给出一些有效的建议。 针对客户的订单，我们通常会给出以下建议来增加难溶肽的溶解度： 1.对肽链中C端和N端进行修饰：对于酸性肽，我们推荐C端乙酰化修饰，对于碱性肽，我们推荐N端氨基化修饰。 2.修改肽链中的氨基酸序列：某些序列存在大量的连续的疏水性氨基酸，例如W,F,V,I,L,M,Y,这些疏水氨基酸在序列中大量或者连续重复出现时，整条肽链通常是难溶的，为了增强肽的极性和亲水性，我们也会建议客户在不影响实验结果的基础上，延长序列，或者通过减少疏水性氨基酸的个数来增加溶解性。 3.替换序列中疏水性氨基酸的残基：用可溶性的氨基酸替代序列中的疏水性氨基酸可以达到增加溶解度的效果。我们通常用Gly,Ala来替换疏水性氨基酸，一般都会取得比较好的溶解效果，这也是一种保守但有效的增强多肽溶解度的方法。 专业的技术团队，优良的仪器设备，纯熟的合成纯化工艺，使我们国肽生物充分具备提供各种难溶肽的的条件和能力。减少客户的实验周期，提高客户的实验效率，帮助客户的科研项目取得更好的成果，始终是我们公司服务的宗旨和目标。 成功案例： 难溶序列Biotin-GGGGGGGG HPLC分析： MS分析：
-
资深工程师分享仪器维修原理与技巧
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
随着科技的不断发展，电子测量仪器的使用也越来越广泛，那么随之就产生了一个新行业就是仪器维修行业，那么对于初入行的仪器维修工应该需要注意哪些问题呢？下面由南宁爱多普仪器设备维修有限公司维修资深工程师张工为大家分享一些自己的维修心得： 一、仪器维修工作是建立在仪器设备的故障理论基础上。 这种理论认为，一台仪器在整个使用期内，维修的变化发展过程形成三个时期：仪器维修初期、仪器维修中期、仪器维修保养期。 1、仪器维修初期：对仪器使用者来说，要认真地进行安装和调试，严格验收，通过试运转以降低故障率。重点是仔细研究操作方法，协助制造厂做好仪器故障分析，并将设备仪器维修反馈给制造厂。 2、仪器维修中期：这一时期故障率较高，故障发生经常是由于操作者疏忽和错误。因此，重点是正确仪器维修操作。 3、仪器维修保养期：这一时期，由于设备在使用过程中故障率逐渐上升。为了降低故障率，重点是进行预防维修和改善维修。在三个时期中，都可以实施提高设备可靠性、维修性方面的结构改进，这是降低所有故障的有效措施。 二、仪器维修原则 1、以预防为主，维护保养与计划检修并重。 维修保养与计划检修是相辅相成的。设备维护保养得好，能延长修理周期，减少修理工作量。计划检修得好，维护保养也就容易。其具体含义和主要活动是定期检查设备、及时维修，或者在上述情况处于轻微状态时，加以调整或修复。 2、以生产为主，维修为生产服务。 生产是企业的主要活动，维修要为生产服务，但也不能因此而忽视维修工作，不注意设备使用的科学性、规律性，一味拼设备。 3、仪器维修的专业化。操作工人是设备的直接使用者，它们是否严格执行操作规程，是否注意尽心维护保养设备对设备的状态起决定性作用。因此要求实行定人、定机、定岗位的方法，规定谁用谁保养的制度，并把维护保养设备的优劣作为职工考核的重要内容。 三、仪器维修的方法 1、日常维护 日常维护包括二级保养和三级保养。 2、
-
课堂 | 生物医学研究新工具：FLIM-FRET生物传感器
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
荧光寿命成像（FLIM）与Förster共振能量转移（FRET）相结合，已被证明非常有利于生物医学研究中各种结构和细胞动态变化的研究。因为FRET信号强烈依赖于FRET配体和受体的距离，所以FRET允许监测分子相互作用。这允许研究分子的相互作用，如配体-受体复合物，蛋白质-蛋白质相互作用、效应蛋白与DNA的相互作用等。 另一方面，随着对FRET理解的深入，科学家已经可以设计FRET探针，以便获得可控的供体-受体结合、释放效率。对于FRET探针，我们可以分为两种类型的分子相互作用：探针内的FRET供受体和探针与配体的相互作用。 今天小编将详细介绍什么是FLIM和FRET，以及FLIM-FRET的结合带来的几个应用实例。 “ 目前，大多数生物探针都是基于荧光。荧光探针亮度的增加或减少取决于其浓度。但是，荧光强度不仅受研究对象浓度的影响，还受照明强度、光漂白以及基质吸收和阴影效应等。为了尽量避免这些问题，科学家倾向于优先选择比率染料（ratio-dyes），因为其允许对背景的干扰进行校准。尽管如此，基于荧光强度的测量并不是非常可靠，因为即使采用精心设计的校准方法，重复性也还是不够理想。 FLIM提供了更好的方法，因为荧光寿命与染料浓度、照射强度以及荧光信号在样品中的吸收和散射无关，因此对分子间相互作用不会产生影响。另一方面，荧光寿命受环境的影响显著，这使得FLIM可用于测量环境参数的影响：在一些特殊的分子环境情况下，存在第二种染料，其可以吸收第一种染料发射的能量——FRET。该过程为寿命测量提供了一种灵敏的方法。对于这种组合技术，越来越多的探针被开发出来，并用于生物医学研究：FLIM-FRET生物传感器。” 什么是FLIM？ 荧光的激发发生在具有适当光子能量（激发光）的情况下。吸收光子后，分子内的原子释放少量热量）。因此，与激发光相比，发射光具有更长的波长。此外，能量释放还可以通过与低能光子的相互作用来触发，此种情况被称为受激发射，是STED超高分辨显微镜的基本原理。最后，能量也可以完全释
-
胰岛素合成技术的发展概述
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
胰岛素是由胰脏内的胰岛β-细胞受内源性或外源性物质如葡萄糖、乳糖、核糖、精氨酸、胰高血糖素等物质刺激而分泌的一种蛋白质激素。胰岛素是机体内唯一降低血糖的激素，同时促进糖原、脂肪、蛋白质合成，因此，胰岛素在人体新陈代谢中起着重要作用。如果机体内胰岛素的量不足就会引发糖尿病，目前胰岛素依然是**糖尿病的特效药，因此胰岛素的人工合成技术一直是生物医药领域研究的热点。现在采用的基因工程技术有两种方法可以让微生物发酵产生胰岛素。一种就是先在大肠杆菌中分别合成胰岛素A链和B链，然后在体外用化学方法将两条链连接成胰岛素。而另一种是采用分泌型载体表达胰岛素原，然后将其转化为胰岛素。 近年来，重组人胰岛素已在临床上广泛应用，但是由于胰岛素分子非常容易聚合，在浓度较高的胰岛素注射液中主要以二体和六体的形式存在。为解决这个难题，通过蛋白质工程开发出的单体速效胰岛素也应运而生。 胰岛素的合成相较于普通含有多对二硫键的多肽，难点在于其结构中包含了分子间与分子内的两种二硫键，使得几对二硫键的特异性定点形成更加困难，产率低，纯度低等结果不可避免地出现了。 固相合成法合成胰岛素是我们国肽生物的代表性技术，我们所具有的成熟的胰岛素合成工艺已经得到了国内外客户的广泛认可和肯定。我们的胰岛素产品突破了以往的收率低，纯度不高等缺陷，能够进行大批量生产，并且产品纯度能够高达99%，国肽生物是值得客户信任的胰岛素供应品牌。
-
从样本制备和转印过程提高western blot的准确性
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
适当的样本准备 样品准备不当，会让你头疼不已，当准备裂解液时： 快速工作 保持低温环境 增加蛋白酶 进行分装，避免反复冻融 如果要分装样品，请确保等量分装，以便检查是否在此过程中丢失了目标。 如果您分离的样品浓度非常低，请记住，使用高灵敏度底物和较少的裂解液。 如果你的裂解液中含有大量的DNA，它就会变得粘稠。 大量的DNA会使样品难以移液，并且可能会在凝胶上产生条纹或污迹。 如果是这种情况，请确保在添加上样缓冲液之前将DNA酶添加到裂解液中。 对于变性凝胶，不要忘记在电泳前将样品在98°C加热5分钟。 这样可以使样品完全变性并确保得到干净锐利的条带。 一些技巧可供参考： 使用过滤后的缓冲液，在电泳前仔细检查缓冲液，以确保缓冲液不会随着时间的推移而沉淀。 当取下凝胶梳子时，请非常缓慢地进行，以免孔塌陷或扭曲。 使用上样器进行上样。 在上样时，确保将尖端尽可能靠近孔的底部，缓慢的加入样品，同时小心地将上样器取出。 在每个孔中加载相同的体积，不要空位。 低电压慢跑，特别是最初浓缩样品时。 · 电泳完成后，使用干净的刀片切除凝胶的孔和底部凝胶。 这些会导致轻微的高度差异，可能会干扰转印。 转印 转印是将蛋白从聚丙烯酰胺凝胶转移到膜上的过程。 确保“三明治”的所有材料尺寸相同。 滤纸，膜和凝胶都应该是完美的选择。 这样可以防止讨厌的气泡出现在你的膜上。 从胶板中取出凝胶时，不要拉伸凝胶。 用刀片从凝胶上取下底部和孔后，在凝胶上放置几片预先湿润的滤纸，轻轻地将其弄平。 滤纸将作为支撑，小心地剥离凝胶。 · 确保圆形工具驱赶气泡。 动作要轻柔，以免扭曲凝胶。 有很多事情可以在这里出错。 选择适当的标准化策略。 让我们面对现实，无论你多么小心，都可能会得到一个有缺陷的凝胶或膜，这将毁了你的一天实验。 但是，如果您使用总蛋白质染色或加载对照抗体来标准化您的数据，您可以挽救您的实验。例如使用AzureRed总蛋白染色剂，兼容下游wes
-
订书多肽合成技术原理概述
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
生物体内的多种生命进程调节都是通过蛋白质与蛋白质之间的相互作用来实现的。例如病毒的自组装，细胞的生长，分裂，分化等过程。而通常蛋白-蛋白相互作用的界面太大，从而使小分子药物很难对其进行靶向定位，达到高效特异性地阻断这种相互作用，展现良好的**效果。蛋白类药物因为很难顺利通过细胞膜所以也达不到直接靶向细胞内相互作用的效果，因此，研究者们开始寻求一种能够克服这两种药物缺点的既能够进入细胞膜又能特异性靶向蛋白-蛋白相互作用的新的药物分子。 研究表明，具有α-螺旋结构和富含正电荷的多肽可以穿过细胞膜。但是一旦从母体分离就不能保持其原有的二级结构，构象的不稳定导致其与蛋白质的结合作用减弱，而普通的线性多肽不能穿过细胞膜且容易被水解。经过不断尝试，Verdine等发展了一种新型结构的多肽，这种多肽被称为订书肽，它是一种全碳支架的具有α-螺旋结构的多肽，全碳支架稳定α-螺旋结构，增强了多肽分子与蛋白质的相互作用，并且订书肽能够穿过细胞膜，不容易被水解，相比于之前的小分子药物和蛋白类药物，具有更高的药理活性。 订书肽的合成与普通多肽合成的区别在于在固相合成肽链过程中引入两个含有α-甲基，α-烯基的非天然氨基酸，然后两个非天然氨基酸之间发生烯烃复分解反应环化构成稳定α-螺旋结构构象的全碳支架，进而合成订书肽。 上图为两种不同构型的含有α-甲基，α-烯基的非天然氨基酸的一般结构。这种类型的氨基酸合成方法一般为： 订书肽的一般合成路线为： 国肽生物始终坚持客户至上的经营理念，通过长久的实验累积，不断优化合成条件和纯化工艺，已经具备了成熟的订书肽合成工艺，具有了向全球提供高品质的订书多肽的能力，能够充分满足客户的各种研发需要。 成功案例： 合成下列结构订书肽 HPLC分析： MS分析：
-
SMAD2/3与TGF-β通路协同影响转录因子发生m6A RNA甲基化调控干细胞发育
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
Nature | SMAD2/3与TGF-β通路协同影响转录因子发生m6A RNA甲基化调控干细胞发育 文章导读： 胚胎干细胞作为一种全能性细胞，通过增殖和分化，产生动物体所有组织和器官的细胞。已有研究表明，胚胎干细胞发生m6A RNA甲基化，大多与细胞增殖[1-2]，免疫应答[4]关系密切。然而，对于m6A修饰在胚胎干细胞向神经内胚层细胞分化过程中的分子机制目前并没有相关报道。今天，分享一篇英国剑桥大学研究团队于2018年8月发表在Nature（影响因子：40.14）文章，聊一聊RNA甲基化在调控胚胎干细胞分化过程中的作用机制。这篇文章的开头很直接，首先通过阅读文献确定了感兴趣的基因SMAD2/3，对其进行Co-IP和质谱后，结果显示其能够与甲基化转移酶METTL3，METTL14和WTAP直接互作。他们是明星，和他们结合的分子也是明星分子，这不，在胚胎干细胞当中有研究者就发现SMAD2/3就和METTL3，METTL14结合，不出所料，这一结合在胚胎干细胞当中起到了重要作用。 欲知详情，让我们接着往下看。 文章内容： 1.SMAD2/3蛋白与METTL3-METTL14-WTAP复合物结合 作者首先通过体外刺激，诱导人类胚胎干细胞分化为神经外胚层细胞，并通过Co-IP技术联合质谱（云序生物提供此项实验）技术，对比两种细胞中，能够与SMAD2/3抗体直接结合的蛋白。结果显示，一共找到89个蛋白，取交集后，得到78个共有蛋白，绘制成网络图，发现这些蛋白除参与TGF-β信号通路，mRNA生物学过程之外，还与国自然大热点RNA甲基化中的甲基化转移酶-------METTL3-METTL14-WTAP复合物直接互作。此结果与后期WB验证和抑制SMAD2/3磷酸化位点后Co-IP结果吻合。PLA实验证实两者间的结合主要发生在细胞核内，并且受Activin刺激后，影响核内转录因子NANOG表达。 2.Activin/Nodal影响SMAD2/3下游转录因子甲基化 作者以Activin/Nodal敲降组胚胎干细胞为实验组，未敲降组为对照，每组三个生物学重复，进行m6A RNA甲基化测序(云序生物提供此项实验）。结果显示，motif区域保守序列为G
咨询热线
18133906270
德尔塔官方微信