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定量western：最佳的蛋白印迹标准化方法是什么？
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
现代数字检测仪器对于western blotting不仅仅是检测“有或没有”的技术，还可以进行western blotting重复性和定量的检测。 在检测方法的线性动态范围，对数据进行标准化以控制蛋白上样量和膜转印带来的变化，可以获得真正的定量结果。 但是，对蛋白印迹进行标准化的最佳方法是什么？ 过去，金标准标准化方法是使用看家蛋白，基于这些蛋白在不同实验条件下和细胞系中表达一致的假设。 然而，最近的研究表明，这种假设并不总是正确的，导致相对蛋白丰度的测量结果不准确。 相反，定量Western blotting专家和他们发表的期刊正在推荐一种新的金标准用于标准化 - 通过在膜上染色，检测每个泳道的总蛋白进行标准化分析。 Western blot标准化：看家蛋白和总蛋白 使用看家蛋白进行标准化 使用看家蛋白最大缺点是在样品间和不同条件下表达水平可能不一致。如使用看家蛋白进行标准化，必须先花费时间和精力来验证蛋白的选择，并且可能需要检查多种潜在的标准品，然后才能找到一种在所有样品中真正表达同一水平，并且在不同实验条件下不会发生变化的标准品。 使用看家蛋白的第二个重大挑战是它们的表达丰度很高，如果样品中的看家蛋白表达非常高，这会限制在凝胶上加载的样品量，因为需要保留看家蛋白在线性检测范围内并且不会使看家蛋白的信号饱和。 如果感兴趣的蛋白不是同样高度表达，这两种蛋白质不在同一线性检测范围内。 如果您正在进行多重蛋白印迹，例如比较同一蛋白质的磷酸化和非磷酸化形式，则需要考虑的第三个挑战是从不同物种中产生一抗和二抗的复杂性。 最后，检测的看家蛋白可能干扰感兴趣蛋白的检测。理想情况下，看家蛋白应该与感兴趣蛋白的大小不同，因此这两种蛋白可在印迹上空间分辨。 当实验在同一印迹上检查多种目的蛋白时，这变得越来越困难。 图1.与常见的看家蛋白相比，AzureRed具有更宽的线性动态范围 单色通道图像A）AureRed染色总蛋白B）Tubulin C）β-action和D）GAPDH。 A
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琼脂扩散试验的分类和试验方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
利用可溶性抗原与抗体在半固体琼脂内进行扩散，若抗原与抗体对应，并且比例适当，就会出现白色沉淀线，此为阳性反应。琼脂扩散试验可在试管内、平皿中以及玻片上的琼脂中进行。又可分为双向琼脂扩散试验和单向琼脂扩散试验两类。 1、双向琼脂扩散试验 双向琼脂扩散试验是将半固体琼脂倾注于平皿内或玻片上，待其凝固后，在琼脂板上打孔，将抗原、抗体分别注入小孔内，使两者相互扩散。如果抗原、抗体相互对应，浓度、比例适当，则一定时间后，在抗原、抗体孔之间出现清晰可见的沉淀线。双向琼脂扩散法可用来分析溶液中的多种抗原。一对抗原、抗体系统只能形成一条沉淀线，不同的抗原抗体系统在琼脂中扩散的速度不同，可在琼脂中形成不同的沉淀线。本法主要是用于检测血清中各种免疫球蛋白、甲胎蛋白、乙肝表面抗原等。缺点是需要时间过长，灵敏度不高。 2、单向琼脂扩散试验 单向琼脂扩散试验是一种常用的定量检测抗原的方法。将适量抗体与琼脂混匀，浇注成板，凝固后，在板上打孔，孔中加入抗原，抗原就会向孔的四周扩散，边扩散边与琼脂中的抗体结合。一定时间后，在两者比例适当处形成白色沉淀环。沉淀环的直径与抗原的浓度成正比。如事先用不同浓度的标准抗原制成标准曲线，则从曲线中可求出标本中抗原的含量。单向琼脂扩散试验主要用于检测标本中各种免疫球蛋白和血清中各种补体成分的含量，敏感性很高。 琼脂扩散试验方法 材料与试剂 1、琼脂粉 2、平皿 3、打孔器 4、生理盐水或其他缓冲液，可加1/万的硫柳汞或叠氮钠防腐。 操作方法 1、称取一定量的琼脂粉，按1%左右（0.8%～1.5%）的比例加入生理盐水或缓冲液，水浴煮沸融化20min。 2、将融化的琼脂倒入平皿内，使厚度2mm～3mm。自然冷却。 3、根据要求（孔径即孔的直径，孔距即两孔圆心之间的距离，包括两孔的半径）按模板打孔。也可直接用组合打孔器打孔。现在一般多打成梅花形孔图。 4、挑出孔内琼脂，注意不要挑破孔缘。 5、在火焰上缓
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测定细菌的大小实验操作步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
测定细菌的大小实验操作步骤 1．测微尺的构造 显微镜测微尺是由目镜测微尺和镜台接物测微尺组成，目镜测微尺是一块圆形玻璃片，其中有精确的等分刻度，在5mm刻尺上分50份(图14一lC)。目镜测微尺每格实际代表的长度随使用接目镜和接物镜的放大倍数而改变，因此在使用前必须用镜台测微尺进行标定。 镜台测微尺为一专用中央有精确等分线的载玻片(图14—1A)，一般将长为1mm的直线等分成100个小格，每格长0.0lmm即10μm，是专用于校正目镜测微尺每格长度的。 2．目镜测微尺的标定 把目镜的上透镜旋开，将目镜测微尺轻轻放在目镜的隔板上，使有刻度的一面朝下。将镜台测微尺放在显微镜的载物台上，使有刻度的一面朝上。先用低倍镜观察，调焦距，待看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度相平行，并使两尺左边的一条线重合，向右寻找另外一条两尺相重合的直线(图15—lB)。 3．计算方法 标定公式：目镜测微尺每格长度（μm）=两条重合线间镜台测微尺的格数×10÷两条重合线间目镜测微尺的格数 例如，目镜测微尺20个小格等于镜台测微尺3小格，已知镜台测微尺每格为10μm，则3小格的长度为3×10=30μm，那么相应地在目镜测微尺上每小格长度为3×10÷20=1.5μm。用以上计算方法分别校正低倍镜、高倍镜及油镜下目镜测微尺每格实际长度。 4．菌体大小的测定 将镜台测微尺取下，分别换上大肠杆菌及金黄色葡萄球菌玻片标本，先在低倍镜和高倍镜下找到目的物，然后在油镜下用目镜测微尺测量菌体的大小。先量出菌体的长和宽占目镜测微尺的格数，再以目镜测微尺每格的长度计算出菌体的长和宽。并详细记录于表15—1中。 例如，目镜测微尺在这架显微镜下，每格相当于1.5μm，测量的结果，若菌体的平均长度相当于目镜测微尺的2格，则菌体长应为3×1.5μm=3.0μm。 一般测量菌体的大小，应测定10～20个菌体，求出平均值，才能代表该菌的大小。
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ibl ELISA 试剂盒说明书
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
产品名称：ibl试剂盒免费代测 特色服务：提供免费代测，技术一对一指导。 规格：48T/96T 价格：请客服 样本：血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等。 保存条件：2~8℃，温度6摄氏度，有效期6个月。 检测波长：450nm 研究领域：炎症研究、神经生物学、新陈代谢、信号通路、免疫学、传染病、其他研究。 货期：ELISA试剂盒现货供应 提示：我司ELISA检测试剂盒仅供科研实验，不得用于其他用途；使用前仔细阅读ELISA试剂盒说明书。 ibl试剂盒免费代测实验原理： 将目标抗体包被于微孔板中，制成固相载体，向微孔中分别加入标准品或标本，其中的目标连接于固相载体上的抗体结合，然后加入微生物化的目标抗体，将未结合的生物素抗体洗净后，加入HRP标记和亲和素，再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的目标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（O.D.值），计算样品浓度。 ibl试剂盒免费代测组成及试剂配制 1、微孔酶标板（Micropore plate）:一块(96孔/48孔） 2、标准品(Standard):六瓶 3、样本稀释液(Sample dilution):一瓶 4、检测抗体-HRP(Detection of antibodies-HRP):一瓶 5、20×洗涤缓冲液(20×Washing buffer)：一瓶 6、底物A(Substrate A)：一瓶 7、底物B(Substrate B)：一瓶 8、终止液(Termination liquid)：一瓶 9、封板膜(Sealing film)：二张 ibl试剂盒免费代测的服务承诺： 一、产品质量保证,有问题免费包换； 二、提供免费代测服务（为客户提供来样检测服务,最大限度实验结果的有效性）； 三、提供全程技术指导。
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中国微生物菌种查询网微生物医药学中细胞冻存和复苏实验！
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
微生物医药学中细胞冻存和复苏实验！-中国微生物菌种查询网 细胞冻存和复苏应用领域 (1)用于生物学保种; (2)用于医学上干细胞研究; (3)用于传代培养。 细胞冻存和复苏原理 细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以最大限度的保存细胞活力。目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。复苏细胞应采用快速融化的方法，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。 主要材料 细胞 试剂、试剂盒：D-Hanks液 小牛血清 培养液 青霉素 链霉素 胰蛋白酶 HCl NaHCO3 DMSO 甘油 耗材设备：微量加样枪 吸头 离心管 冻存管 枪头 胶塞 移液管玻璃瓶 红血球计数板 记号笔 医用橡皮膏 移液枪 超净工作台 离心机 恒温水浴箱 冰箱 倒置相差显微镜 培养箱 液氮冰箱 步骤说明： 一、材料准备 1. 仪器：净化工作台、 离心机、恒温水浴箱、冰箱(4℃、-20℃、-70℃)、倒置相差显微镜、培养箱、液氮冰箱。 2. 玻璃器皿：吸管(弯头、直头)、 培养瓶、玻璃瓶(250ml、100ml)、废液缸。 3. 塑料器皿： 吸头、枪头、胶塞、移液管(10ml)、15ml离心管、冻存管(1～2ml)。 注意事项 1. 从增殖期到形成致密的单层细胞以前的培养细胞都可以用于冻存，但**为对数生长期细胞。在冻存前一天**换一次培养液。 2. 将冻存管放入液氮容器或从中取出时，要做好防护工作，以免冻伤。 3. 冻存和复苏**用新配制的培养液。 细胞冻存和复苏其他说明 一、冻存和复苏的原则：慢冻快融 当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。 如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶;相反，结晶就大，大结晶会造成细胞膜、纲胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融，目的是防止小冰
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微生物常用染色法及染色程序！
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
微生物染色的基本原理，是借助物理因素和化学因素的作用而进行的。物理因素如细胞及细胞物质对染料的毛细现象、渗透、吸附作用等。化学因素则是根据细胞物质和染料的不同性质而发生地各种化学反应。酸性物质对于碱性染料较易吸附，且吸附作用稳固；同样，碱性物质对酸性染料较易于吸附。如酸性物质细胞核对于碱性染料就有化学亲和力，易于吸附。但是，要使酸性物质染上酸性材料，必须把它们的物理形式加以改变（如改变pH值），才利于吸附作用的发生。相反，碱性物质（如细胞质）通常仅能染上酸性染料，若把它们变为适宜的物理形式，也同样能与碱性染料发生吸附作用。 常用染色法 1.单染色法 只用一种染料染色。由于大多数细菌胞浆内含有酸性物质，可与碱性染料结合，故常用吕氏美蓝、结晶紫和稀释石碳酸复红等染液。此法可观察细菌的大小、形态与排列，不能显示细菌的结构与染色特性。 2.复染色法 用两种或两种以上不同染料可将细菌染成不同的颜色，除可观察细菌的大小、形态与排列外，还反应出细菌染色特性，具有鉴别细菌种类的价值。常用的有革兰染色法和抗酸染色法。 (1)革兰染色：①细菌涂片经火焰固定，加结晶紫染液染1min，清水冲去染液。②加碘液媒染 1min，水洗，甩干。③用95%乙醇脱色，轻轻摇动约30s，至无紫色洗落为止，水洗，甩干。④加稀释石碳酸复红或沙黄染液数滴进行复染，约30s，水洗。⑤干后显微镜下镜检观察结果，革兰阳性菌染成紫色，革兰阴性菌为红色。 (2)抗酸染色：萋-尼 (Ziehl-Neelse)抗酸染色法： ①细菌涂片经火焰固定，加石炭酸复红溶液，徐徐加热至有蒸气出现，切不可沸腾。染液因蒸发减少时，应随时补充，防止染液蒸干。持续染5min(奴卡菌需要加长时间)，水洗，甩干。 ②滴加3%盐酸乙醇脱色，不时摇动玻片至无红色脱落为止，水洗，甩干。 ③加吕氏美蓝复染液数滴复染1min，水洗。 ④干后显微镜下镜检观察结果，抗酸杆菌染成红色，非抗酸杆菌为蓝色。 金胺O-罗丹明B染色法：①细菌涂片固定后加第1
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淋巴细胞转化试验方法介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
T细胞在体外培养时，受到非特异性有丝分裂原(如PHA、ConA)或特异性抗原刺激后，可出现代谢旺盛、蛋白质和核酸合成增加、细胞体积增大并能进行分裂的淋巴母细胞，此称为淋巴细胞转化现象。淋巴细胞转化率的高低，可以反映机体的细胞免疫水平，因此，可作为测定机体免疫功能的指标之一。 本实验采用形态学方法进行淋巴细胞转化试验。T淋巴细胞在体外培养过程中受有丝分裂原如植物血凝素刺激后，转化为体积较大的母细胞，胞浆增多而深染，核增大并可见核仁裂，计数转化细胞的百分率可反映机体的细胞免疫功能。 【材料】 1．RPMLl640培养液(用前调至含小牛血清10％、青霉素100u／m1、链霉素μg/m1，用NaHCO3调pH至7.2-7.4)。 2．PHA(用RPMIl 640基础培养液配成1000μg／m1)。 3．吉姆萨染液。 4．离心机、恒温箱、计数器及显微镜等。 【方法】 1. 取无菌肝素抗凝血0.1m1，加入1.8m1细胞培养液中，同时加入PHA0.1m1，对照管不加PHA，将细胞置37℃、5％CO2培养3天，每天摇动1次。 2. 2500r／min，离心10min后弃上清液，留0.2m1沉淀细胞制片，迅速吹干。 3. 吉姆萨染色10一20min，水洗，干燥。 4. 油镜计数200个淋巴细胞中转化的细胞数，计算转化率。 【结果观察】 1．淋巴母细胞的形态学标准是细胞核的大小、核与胞浆的比例、胞浆染色性及核的构造与 核仁的有无。可以见到以下几种类型细胞。 (1)成熟的小淋巴细胞：与未经培养的小淋巴细胞一样为6-8μm，核染色致密，无核仁，核与胞浆比例大，胞浆染色为轻度嗜碱性。 (2)过渡型淋巴细胞：比小淋巴细胞大，约l0-20μm，核染色致密，但出现核仁，此为与成熟小淋巴细胞鉴别要点。 (3)淋巴母细胞：细胞体积增大，约20-30μm，形态不整齐，常有小突出，核质染色疏松，有核仁l-2个，胞浆变宽，常出现胞浆空泡。 (4)其它细胞：如中性粒细胞在培养72h后，绝大部分衰变或死亡，呈碎片。 2．淋巴细胞转化率的计算：按上述分类检查推片头、体、尾三部分，计数200个淋巴细胞，计算过度型和淋
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细胞常用固定剂和固定方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
培养细胞常用固定剂有4％多聚甲醛磷酸缓冲液、丙酮、甲醇和95％乙醇。在固定之前需用37℃预热的PBS轻洗细胞。 1．4％多聚甲醛磷酸缓冲液 固定10—20分钟，干燥。 2．甲醇 10‰甲醇固定5—20分钟，自然干燥。 3．丙酮 4℃冷丙酮固定组织穿透性和脱水性强，抗原保存好，很少用于组织切片，常用于培养细胞和细胞涂片的固定，平时丙酮4℃低温保存备用，临用时，将载玻片插入冷丙酮内5～10分钟，取出后自然于燥。 4．乙醇 95％乙醇脱水性强，易引起组织收缩、变硬，影响切片质量，因而固定时间不宜过长（2小时内）。乙醇使蛋白变性程度轻，固定后蛋白可再溶解，在染色中孵育时间长的情况下，抗原可流失，并减弱反应强度。 5．乙醚（或三氯甲烷） 与乙醇等量混合对组织穿透性极强，即使涂片上含较多的黏液，固定效果仍较好，是理想的细胞固定液。 培养细胞固定之后晾干可使细胞牢固地黏附在载玻片上，故对于容易脱落的细胞应延长晾干时间。晾干之后PBS漂洗3次，然后进行组织化学或免疫组织化学染色。
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实验室多联换膜过滤系统用途和组成介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
实验室多联换膜过滤系统是真空过滤装置的一个重要分支，不同于普通抽滤装置每套产品只能过滤一组样品，其最大特点在于同一时间，依靠一套装置、一台抽滤泵可以过滤多组样品。具体的样品过滤数量取决于不同型号，常规的主要有三联和六联两种产品，分别一次适合于过滤3组或6组样品。 多联式的过滤产品一般由1台抽滤泵连接1台由金属制作的过滤支架，支架上可以插入多个抽滤漏斗，支架和抽滤泵中间连接1个真空废液抽吸瓶，整套系统形成真空后，大气压推动滤液通过滤膜。对于诸如悬浮固形物检测、微生物检查的用户来说，由于每天或一次需要检测的样品数量非常多，一次过滤多组样品显著提升工作效率。 下面以BV-321-A实验室多联换膜过滤系统为例，来说明一套完整系统需要包括哪些组件，以及各个组件的功能。 a.无油抽滤泵：主要作用是为整套系统实现负压，从而实现系统内外的压差，是大气压推动滤液通过滤膜。配备的经典款R300无油抽滤泵带有真空泵和调节阀，可以通过表针观察系统工作状态，并调节真空度和滤速。 b.过滤支架：是系统最重要组成部分，连接了系统各个组成部分。支架上可以插入抽滤漏斗，是整套过滤系统的中心。目前支架主流市场采用较多的材质是不锈钢，相对自重重，且不锈钢细分材质规格较多，鱼龙混杂，价格和耐腐蚀性能差异极大。BV-321-A配备的采用阳极工艺处理的铝合金材质支架，重量轻便便于移动，耐腐蚀性能较好。对于微生物限度检测客户来说该材质也可以高温高压灭菌。 c.抽滤漏斗：安放滤膜和盛放待过滤的液体样品。根据过滤支架联数配备相应数量的FH-P3A抽滤漏斗，可以高温高压灭菌。滤杯和漏斗基座采用旋卡直连式，不需要借助卡箍或夹具等附属件来密封，轻轻旋转就可以卡紧或松开。 d.真空吸液瓶：盛放已经通过滤膜的滤液，标配3000ml，用户也可以根据实际情况来增加抽滤瓶的容量。采用的材质常规为塑料或者玻璃材质，此类透明的材料便于用户观察液位，避免液体吸入泵内损坏仪器。 e.
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鱼类行为与能量代谢研究技术方案
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
研究案例——气候变化对鱼类行为与能量代谢的影响 当前气候变化问题是国际社会关注的热点，气候变化对地球生态的影响是全方位的，海洋是气候系统储存能量的主要载体，气候变化给生活于其中的鱼类带来的影响不可忽视。气候的变化影响着各大洋的气候变化模式以及海洋环境要素（海水升温，海水酸化、富营养化，海水含氧量变化，海洋环流变化等）的变化，这些变化通过对鱼类个体的直接作用或生态系统食物链传递的间接作用影响海洋鱼类，包括鱼类的生理（生长、繁殖、洄游）、物候、资源量以及分布等，并形成了对整个海洋生态系统的影响。 2018年的《Diversity》刊登了澳大利亚詹姆斯库克大学（James Cook University）的Taryn D. Laubenstein等的科研论文，该论文阐述了一种重要的海洋经济鱼类-黄尾鰤鱼（yellowtail kingfish，Seriola lalandi）在海水酸化、水温升高等环境变化情况下的代谢特征（耗氧率）和行为特征。 该实验采用实验室控制水温和水体CO2的方式，研究了鱼卵孵化、幼鱼成长过程，使用Lolitrack动物行为观测分析系统对鱼的行为进行观测与分析，使用RF-O2荧光光纤氧气测量系统测量鱼的耗氧率，数据进行汇总、统计、分析，研究数据表明：水温升高对幼鱼行为和生理特性的影响大于水体CO2浓度升高；CO2浓度升高确实增加了鱼的静息摄氧率（resting oxygen uptake rates），并且和水温变化有错综复杂的相互关系。他们的研究结果证实了大型中上层鱼类（large pelagic fish）对海洋酸化和变暖的反应，提供了新的行为和生理数据并且证实了这些特征之间的相关性，以及这些相关性和鱼类适应全球气候变化的关系。 澳大利亚珊瑚礁研究中心（ARC Centre of Excellence for Coral Reef Studies）的Adam Habary等在2016年的《Global Change Biology》发表了题为《Adapt, move or die – how will tropical coral reef fishes cope with ocean warming?》的论文，该论文
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Specim高光谱成像技术在植物研究中的应用
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
易科泰Specim高光谱成像技术 ——高光谱成像技术的领导者 Specim IQ手持式高光谱成像仪，集高光谱数据采集、数据处理和处理结果可视化呈现于一体，高光谱成像分析变得简单实用 FX10/FX17轻便型高光谱成像仪，世界上最轻便、成像速度最快的高通量高光谱分析仪器，400-1000nm/900-1700nm全面分析植物/作物光谱反射特性 SisuCHEMA高光谱扫描成像分析系统，高光谱化学组成分析工作站 高光谱成像分析全面解决方案，手持式、台式、样带扫描式、无人机遥感技术，与红外热成像、FluorCam叶绿素荧光成像技术集成方案 1 植物/作物高通量表型成像分析 2 植物/作物蛋白组学、代谢组学研究 3 植物/作物生理生态研究分析 4 种子质量与种子活力检测 5 种质资源筛选 6 作物根系成像分析 7 粮食、中草药品质品种检测 8 植物保护、作物胁迫生理响应研究分析 Specim IQ Specim FX10 Specim FX7 Specim PFD-V10E 波段范围 400-1000nm 400-1000nm 950-1700nm 400-1000nm 光谱分辨率 7nm 5.5nm 8nm 3nm 波段数量 204 224 224 768 空间分辨率 512像素 1024像素 640像素 1775像素 扫描速度(帧频) 330fps 330fps 670fps 100fps 信噪比 大于400:1 600:1 1000:1 680:1 重量 1.3kg 1.26kg 1.56kg 2.7kg 左图：Specim高光谱技术用于研究分析油菜对链格孢菌侵
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免疫组化的实验试剂及实验步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
免疫组化的实验试剂及实验步骤-中国微生物菌种查询网 一、试剂 （1）PBS缓冲液（pH7.2～7.4）：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L， KH2PO4 1.4mmol/L。 （2）0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液（CB，pH6.0，1000ml）：柠檬酸三钠 3g，柠檬酸 0.4g。 （3）0.5mol/L EDTA缓冲液（pH8.0）：700ml水中溶解186.1gEDTA·2H2O，用10 mmol/L NaOH调至pH8.0,加水至1000ml。 （4）1mol/L的TBS缓冲液（pH8.0）：在800ml水中溶解121gTris碱，用1N的HCl调至pH8.0,加水至1000ml。 （5）酶消化液： a、0.1%胰蛋白酶液：用0.1%CaCl2(pH7.8) 配制。 b、0.4%胃蛋白酶液：用0.1N的HCl配制。 （6）3%甲醇-H2O2溶液：用30%H2O2和80%甲醇溶液配制。 （7）封裱剂： a 甘油和0.5mmol/L碳酸盐缓冲液（pH9.0～9.5）等量混合； b 油和TBS(或PBS)配制。 （8）TBS/PBS pH9.0～9.5，适用于荧光显微镜标本；pH7.0～7.4适合于光学显微镜标本。 二、操作流程 （1）脱蜡和水化 脱蜡前，应将组织芯片在室温中放置60分钟或60℃恒温箱中烘烤20分钟。 1)组织芯片置于二甲苯中浸泡10分钟，更换二甲苯后再浸泡10分钟； 2)无水乙醇中浸泡5分钟； 3)95%乙醇中浸泡5分钟； 4)70%乙醇中浸泡5分钟； （2）抗原修复 用于福尔马林固定的石蜡包埋组织芯片。 1)抗原热修复 在沸水中加入EDTA（pH8.0）或0.01M枸橼酸钠缓冲溶液（pH6.0）。盖上不锈钢高压锅的盖子，但不进行锁定。将玻片置于金属染色架上，缓慢加压，使玻片在缓冲液中浸泡5分钟，然后将盖子锁定，小阀门将会升起来。10分钟后，去除热源，置入凉水中，当小阀门沉下去后打开盖子。本方法适用于较难检测或核抗原的抗原修复。 2)煮沸热修复 电炉或者水浴锅加热0.01M枸橼酸钠缓冲溶液（pH6.0）至95℃左右，放入组织芯片加热10~15分钟。 3)微波热修复 在微波炉里加热0.01M枸橼酸钠缓冲溶液（pH6.0）至沸腾后将组织芯片放入，断电，间隔5~10分钟，反复1-2次。适用的抗原有：AR，Bax，Bcl-2，C-fos，X-jun，C-kit
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微生物生长检测方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
微生物的生长不同于其他生物的生长，微生物的个体生长在科研上有一定困难，通常情况下也没有实际意义。微生物是以量取胜的，因此，微生物的生长通常指群体的扩增。微生物的生长繁殖是其在内外各种环境因素相互作用下的综合反映。因此生长繁殖情况就可作为研究各种生理生化和遗传等问题的重要指标，同时，微生物在生产实践上的各种应用或是对致病，霉腐微生物的防治都和他们的生长抑制紧密相关。所以有必要介绍一下微生物生长情况的检测方法。既然生长意味着原生质含量的增加，所以测定的方法也都直接或间接的以次为根据，而测定繁殖则都要建立在计数这一基础上。微生物生长的衡量，可以从其重量，体积，密度，浓度，做指标来进行衡量。 微生物生长检测方法-中国微生物菌种查询网 生长量测定法 体积测量法：又称测菌丝浓度法。 通过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。方法是，取一定量的待测培养液（如10毫升）放在有刻度的离心管中，设定一定的离心时间（如5分钟）和转速（如5000 rpm），离心后，倒出上清夜，测出上清夜体积为v，则菌丝浓度为（10-v）/10。菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。这种方法比较粗放，简便，快速，但需要设定一致的处理条件，否则偏差很大，由于离心沉淀物中夹杂有一些固体营养物，结果会有一定偏差。 称干重法： 可用离心或过滤法测定。一般干重为湿重的10-20%。在离心法中，将一定体积待测培养液倒入离心管中，设定一定的离心时间和转速，进行离心，并用清水离心洗涤1-5次，进行干燥。干燥可用烘箱在105℃或100℃下烘干，或采用红外线烘干，也可在80℃或40℃下真空干燥，干燥后称重。如用过滤法，丝状真菌可用滤纸过滤，细菌可用醋酸纤维膜等滤膜过滤，过滤后用少量水洗涤，在40℃下进行真空干燥。称干重发法较为烦琐，通常获取的微生物产品为菌体时，常采用这种方法，如活性干酵母（activity dry yeast, ADY）,一些以微生
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发酵液废水处理设备工艺
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
发酵液废水处理项目简介： 发酵工业是以粮食和农副产品为主要原料的加工行业，主要包括柠檬酸、乳酸、味精、白酒、淀粉糖等行业，在众多行业中占据重要地位。但发酵行业所排放的废水污染却制约着发酵行业的可持续发展。该废水主要含有大量有机物如乳酸、柠檬酸、糖类、蛋白质等，具有高浓度、高粘度、难降解、酸性强等特性。因此，开发高效、节能的发酵液废水处理工艺及设备是十分必要的。 发酵液废水处理工艺流程： 设备离心萃取机工作原理： 混合传质过程：轻重两相溶液按一定比例分别进入下部混合室,从转鼓中心入口处由轮式搅拌浆和分散浆混合分散,此时两相液体得到了充分混合,使溶质由一相液体中传递到另一相液体中,从而完成了混合传质过程。 分离过程： 混合液在下转鼓中由筋板带动很快与转鼓同步回转,经环形挡流板借助上转鼓的离心吸力进入上转鼓。在转鼓中由幅板继续带动混合液同步回转,在离心力场下,两相互相分离,比重大的重相液体在向上流动过程中逐步远离转鼓中心而靠向鼓壁;比重小的轻相液体逐步远离鼓壁靠向中心。最终两相液体分别通过各自堰板进入收集室由引管接出机外,完成两相分离过程。 发酵液废水处理工程案例： 所在地：河南 选用机型：CWL650-M型离心萃取机 萃取级数：33级 处理量：56m3/h
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Surfactin菌株产量的定向启动子改造技术应用
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
SrfA是surfactin合成的功能基因，是一个长达26.2 kb大小的基因簇，因此，通过过表达该基因来强化surfactin的合成途径在技术上存在较大难度。该功能基因受到启动子PsrfA的调控，而启动子的强弱可以在一定程度上决定菌株的生产能力，因此，启动子替换被认为是提高原始菌株产脂肽的合理手段。 启动子改造促进产量提升的典型成功案例来自于对天然高产菌株的改造结果。Sun等通过同源重组的方法将B. subtilis fmbR中的启动子PsrfA替换成一个来源于B. subtilis的强诱导型启动子Pspac，得到了重组菌株fmbR-1；在IPTG (300μmol/L)诱导下重组菌株fmbR-1的产量是野生型出发菌株的10倍，产量达到3.86g/L；在无IPTG添加条件下，fmbR-1的产量也可以高达5倍左右。除了替换一些天然强启动子外，还可以替换一些人工合成的启动子。清华大学于慧敏课题组在surfactin的启动子改造方面也获得了显著成果。Song等分析了surfactin高产野生菌株B. subtilis THY-7的转录组数据，发现该菌株控制surfactin合成的原始启动子PsfrA是一个弱启动子，同时也发现了菌株自身的一些强启动子(PgroE、PsacB、PsacP)；令人惊讶的是用强启动子PgroE替换原始启动子PsfrA后，重组菌株不能合成surfactin；随后人工构建了3个杂合型强启动子Pg1、Pg2和Pg3用于改造B. subtilis THY-7菌株。 杂合型启动子Pg1融合了启动子PgroE的–35到–10序列和PsacB的RAT诱导元件序列，重组菌株THY-7/Pg1的产量达到了1.44g/L。杂合型启动子Pg2是在Pg1的基础上，在PgroE的–35到–10序列中间融合了一段lacO操纵子序列，重组菌株THY-7/Pg2的产量为5.98g/L。杂合型启动子Pg3是根据枯草芽胞杆菌的sigma因子70(σA)的–35到–10的保守序列以及点突变Pg2的2个碱基的基础上设计而来的，最终重组菌株THY-7/Pg3在5L发酵罐上(具有泡沫回收装置)发酵32h的产量达到了9.74g/L，表明改造后的菌株具有高产、高生产速率等优良性状。该重组菌株的surfactin产量也是目前报道的最高产量。 但是
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