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微生物实验室消毒处理方法！
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
微生物实验室消毒处理方法！ 一、无菌室 1.紫外线消毒 ①在室温20℃~25℃时,220V 30W紫外灯下方垂直位置1.0m处的253.7mm紫外线辐射强度应≥70uW/cm2,低于此值时应更换。适当数量的紫外灯,确保平均每立方米应不少于1.5W。 ②紫外线消毒时,无菌室内应保持清洁干燥。 ③在无人条件下,可采取紫外线消毒,作用时间应≥30min。室内温度40℃、相对湿度大于60%时,应适当延长照射时间。 ④用紫外线消毒物品表面时,应使照射表面受到紫外线的直接照射,且应达到足够的照射剂量。 ⑤人员在关闭紫外灯至少30min后方可入内作业。 ⑥按照GB15981的规定,评价紫外线的消毒与杀菌效果。 2.臭氧消毒 ①封闭无菌室内,无人条件下,采用20mg/m3浓度的臭氧,作用时间应≥30min。消毒后室内臭氧浓度≤0.2mg/m3时方可入内作业。 ②按照GB/T18202的规定,检测室内臭氧的浓度。 3.无菌室空气灭菌效果验证方法(沉降法) ①在消毒处理后与开展检验活动之前期间采样。 ②取样位点的选择应基于人员流量情况和做试验的频率。一般情况下,无菌室面积≤30m2时,从所设定的一条对角线上选取3点,即中心1点、两端各距墙1m处各取1点；无菌室面积≥30m2时,选取东、南、西、北、中5点,其中东点、南点、西点、北点均距端1m。 ③在所选位点,将平板计数琼脂平板(90mm)或水化3 M Petrifilm菌落总数测试片置于距地面80cm处,开盖暴露15min,然后,置于36℃士1℃恒温箱培养48h土1h。如果侦查某目标细菌,则可用选择性琼脂平板(如PDA平板)或微生物测试片(如3 M Petrifilm环境李斯特氏菌测试片)。 ④确认平板上的菌落数,如大于所设定的风险值,应分析原因,并采取适当措施。 二、培养基和试剂 1.培养基通常应采用高压湿热灭菌法,121℃灭15min，特殊培养基按使用者的特殊要求进行灭菌(如含糖培养基,115℃灭菌20min)。 2.部分培养基(如嗜盐琼脂培养基、胆硫乳培养基等),只能煮沸灭菌。 3.对热敏感的培养基或添加物质,应采用膜过滤方法进行过滤除菌。 4.即用型试剂不需灭菌,应参见相关国际标准或供应商使
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外泌体速通手册（上篇）
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
外泌体速通手册（上篇） 01 概念 Exosome，中文名外泌体，是一种能被大多数细胞分泌的微小膜泡，具有脂质双层膜结构，直径大约40-120 nm。尽管外泌体最初在1983年就被发现，但人们一直认为它只是一种细胞的废弃物。然而最近几年，人们发现这种微小膜泡中含有细胞特异的蛋白、脂质和核酸，能作为信号分子传递给其他细胞从而改变其他细胞的功能。这些发现点燃了人们对细胞分泌膜泡的兴趣。最近的研究发现外泌体在很多生理病理上起着重要的作用，如免疫中抗原呈递、肿瘤的生长与迁移、组织损伤的修复等。不同细胞分泌的外泌体具有不用的组成成分和功能，可作为疾病诊断的生物标志物。外泌体具有脂质双层膜结构，能很好的保护其包被的物质，且能靶向特定细胞或组织，因此又是一种很好靶向给药系统（targeted delivery system）。 外泌体可大致分为3大类：（a）由质膜分裂产生的微囊泡；（b）在内质网内形成并在多囊泡体与质膜融合后释放的外体；（c）凋亡体a作为细胞凋亡过程中的囊泡重新释放。低等生物，如细菌和寄生虫，也能分泌外囊泡。 02 作用 外泌体的产生及其与受体细胞的相互作用 外泌体被认为是由多泡体（MVB）膜向内出芽形成的内吞的囊泡同质群体，涉及转运所需的内复合物（ESCRT）和其他相关蛋白被分选到外泌体中，例如程序性细胞死亡6蛋白（PDCD6IP;也称为ALIX）和肿瘤易感基因101蛋白（TSG101）。除了识别泛素化蛋白质的ESCRT之外，其他ESCRT非依赖性机制也可用于产生某些生化组合物的外泌体。例如，在一些细胞中，外泌体产生需要脂质神经酰胺和中性磷脂酶，将神经-髓磷脂转化为神经酰胺酶。 外泌体在正常体环境和疾病发病机制中的作用 外泌体可以被认为是生物反应过程中的重要信号体。例如，外泌体可以激活免疫应答或抑制炎症，从而参与免疫监视。在血液循环中，外泌体通过提供用于组装凝血因子的场所而参与血凝反应。在大脑中，神经元可以通过外泌体的分泌进行交流，这有助于近
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Cell子刊 | 蛋白质组标杆大牛： 揭示糖尿病新机制还得从这类修饰入手
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
关键词：磷酸化蛋白质组、蛋白质组、II型糖尿病、胰岛β细胞 原文： Phosphoproteomics Reveals the GSK3-PDX1 Axis as a Key Pathogenic Signaling Node in Diabetic Islets 原文链接： https://doi.org/10.1016/j.cmet.2019.02.012 不知大家还记得否？去年小编曾报道了一篇Science的重磅文章，由来自德国马普生物化学研究所Matthias Mann团队，利用磷酸化组发现了阿片类药物副作用机制（最新Science重磅：磷酸化组学揭秘阿片类药物副作用潜在机制）。 仅过半年多时间，该研究团队马不停蹄地又发表了一篇力作。最近，该团队在Cell Metabolism期刊上发表了题为“Phosphoproteomics Reveals the GSK3-PDX1 Axis as a Key Pathogenic Signaling Node in Diabetic Islets”的研究，通过磷酸化蛋白质组、蛋白质组学技术，揭示GSK3-PDX1轴是胰岛糖尿病致病关键信号节点。 可见，磷酸化修饰组已成为寻找医药研究领域机制探索的重要技术手段。 研究背景 糖尿病(diabetes mellitus, DM)是一组以长期高血糖为主要特征的代谢综合征,伴随很多合并症和并发症，其中90%是2型糖尿病(Type2 diabetes mellitus，T2DM)。2型糖尿病是由遗传和环境因素相互作用而引起的临床综合症，其发病机理为胰岛素抵抗为主伴有胰岛素分泌缺陷，或胰岛素分泌缺陷为主伴胰岛素抵抗和肝脏葡萄糖产生增加。 越来越多的研究表明，胰岛β细胞功能受损是2型糖尿病发病的中心环节。然而目前胰岛β细胞功能紊乱具体分子机制仍不完全清楚。因此，系统性了解β细胞功能紊乱机制将有助于对于糖尿病的**和预防。 此前，利用转录组、蛋白组研究2型糖尿病发病机制已有诸多报道，但是从磷酸化角度发现关键调控信号通路的报道却不多。磷酸化是调控胰岛分泌重要机制，因此，从整体磷酸化水平研究胰岛素分泌的调节机制有着十分重要的意义。 研究材料 正常小鼠（C57BLKS-Leprdb/+）和糖尿病小鼠（C57BLKS-Leprdb）胰岛组织； 研究结果 01、磷酸化组、蛋白质组 分
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自身免疫药检员 B-hIL17A小鼠构建EAE模型的实验流程
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
研究表明Th17细胞以及相关的IL17、IL22 、IL23 等细胞因子参与到多种自身免疫疾病发展过程中[1]。其中IL17家族细胞因子可以动员、募集及活化中性粒细胞，从而介导炎症反应的产生，并参与到自身免疫疾病的发病过程中（如图1）。所以针对于IL17靶点相关的抗自身免疫药物一直是研发的热点。目前IL17抗体药物已经应用在银屑病、类风湿性关节炎等自身免疫疾病的**中。而IL17抗体药物针对于多发性硬化症的研究也处于临床研究阶段。 图1. IL17家族细胞因子信号通路 多发性硬化症（multiple sclerosis，MS）是以中枢神经系统白质炎性脱髓鞘病变为主要特点的自身免疫病，IL17、IL22、IL23等细胞因子在发病过程中起重要作用。 目前使用的疾病模型是通过药物诱导使小鼠产生针对神经系统的自身免疫疾病（EAE），从而模拟人多发性硬化症发病症状。 在小鼠EAE 模型中，其免疫系统受到MOG诱导，攻击中枢神经系统髓鞘蛋白，导致小鼠产生不同程度的运动障碍、瘫痪等症状。是目前研究多发性硬化症的常用模型和药效评价工具。百奥赛图利用B-hIL17A小鼠构建的EAE模型，可以检测IL17相关的人源化抗体药效，助力药物的临床前研究。 EAE模型构建的实验流程 MOG诱导后EAE小鼠出现脱髓鞘、行动障碍等症状。 EAE模型临床评分及体重曲线 基于B-hIL17A小鼠构建的EAE模型临床评分及体重检测。A. EAE模型临床评分；B. EAE模型小鼠体重。 EAE模型中枢神经细胞流式检测 基于B-hIL17A小鼠构建的EAE模型中枢神经细胞流式检测结果显示Treg细胞显著增多。 EAE模型淋巴结细胞因子流式检测 取EAE小鼠模型淋巴结检测hIL17A、mIFN-γ等细胞因子，结果显示MOG诱导EAE模型的淋巴结CD4+细胞能够表达hIL17。 EAE模型脊髓髓鞘蛋白荧光检测 实验终点取小鼠脊髓样本对髓鞘蛋白进行免疫荧光染色（绿色荧光部分），结果显示EAE模型组具有明显的脱髓鞘表型。 综上所述，B-hIL17A是一种理想的MS/EAE模型小鼠。百奥赛图已经建立了稳定的EAE模型，
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PNAS | 脂质组学揭示病毒感染引起的脂代谢异常及潜在**靶点
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
关键词：埃博拉病毒，脂质组学，**靶点，脂质代谢 2014年，非洲爆发了有史以来最凶猛的一次埃博拉病毒疫情，震动全球。直到年底，疫情才终于得到控制。根据世卫组织的统计数字，截至2014年12月14日，全球范围内已有超过1.8万例感染者，近7000人死亡。因为疫情影响农业生产和贸易，西非疫区国家将有百万人面临饥荒威胁。 埃博拉病毒通常通过血液和其他体液等途径传播，感染潜伏期从2天到21天不等。患者的最初症状是突然发烧、头痛，随后是呕吐、腹泻和肾 功能障碍，最后是体内外大出血，死亡。 今天小编要跟各位老师来聊一聊一篇研究埃博拉病毒的文章。 Plasma lipidome reveals critical illness and recovery from human Ebola virus disease 2019 IF=9.504 原文链接：https://www.pnas.org/content/116/9/3919 样本： 45例血浆样本──11 EVD幸存者（29例血浆样本），9例死亡者 (9例血浆样本)和7 例健康志愿者(7例血浆样本) 技术： 脂质组学技术 基于脂质组学技术，对2015年采集到的7例塞拉利昂健康志愿者和确诊为EVD患者(11幸存者和9死亡者)及其康复过程中的一系列血浆样本(s1,s2,s3)进行分析。一共45例血浆样本，检测到包含19种亚类的423种脂质分子。 与健康志愿者或死亡者相比，EVD患者的脂质代谢发生了强烈的改变。幸存者与死亡者相比，差异的脂质分子逐渐增多，与健康志愿者相比，差异的脂质分子逐渐减少，这相反的变化趋势，暗示幸存者的康复。 脂质亚类水平上也存在显著差异，同时脂肪酸碳总数、不饱和键及单个脂肪酸的表达量上也发生了变化。幸存者的PC亚类含有更长的多不饱和脂肪酸（平均含有38个碳和5个双键），而死亡者的TG亚类含有更长的不饱和脂肪酸(平均55个碳和5个双键) 。 与健康志愿者或死亡者对比，幸存者康复过程中，所有含有16:0 或 18:0的Cer亚类脂质分子发生显著下调（>4.5 log2 fold change (FC); P < 0.01），几乎所有的含有18:3 或20:3 脂肪酸的PI亚类上调。35%的Cer亚类
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2019年，大牛们都在研究什么？—m6A文章盘点
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
19年悄悄的已经将近过半，但RNA甲基化研究马不停歇。单单过去一个半月的时间里高分文章就有十多篇，Nature，Cell子刊均有相关文章发表；造血干细胞分化，癌细胞上皮间质转化，树突细胞活化，心肌细胞肥厚，内源性免疫应答调控都有它的身影。这里小编给大家列举展示几篇最新的m6A RNA甲基化研究成果，来看看这个科研热点是如何在几位大牛课题当中被精彩呈现的，给大家来个RNA m6A甲基化年中盘点。 您是否还在痴迷writer，eraser？是否还在寻求m6A介导降解mRNA？我们首先选择近期最有特色的两例研究和大家分享。发表在核酸研究上的文章“The m6A reader YTHDF1 regulates axon guidance through translational control of Robo3.1 expression”从另一角度揭示甲基化与蛋白翻译之间的关系，一篇Nature Communication上发表的“RNA m6A methylation regulates the epithelial mesenchymal transition of cancer cells and translation of Snail”则强调了不同以往的3’UTR，发生在CDS区的甲基化修饰同样有重要的调控意义。 Article 1： Writer or Eraser？不，这次我们看Reader 是不是看厌了METTL14，METTL3，FTO或者ALKBH5？这次我们看看这篇文章怎么做Reader蛋白。Reader蛋白能够特异性的识别甲基化位点与之结合并发挥生物学功能，虽然对它的关注度远没有甲基化酶（Writer）或者去甲基化酶（Eraser）高，但其实Reader是甲基化位点的直接识别者，它的地位更重要。这篇Nucleic Acid刊登的文章当中明确指出了Reader能够结合一个发生了甲基化修饰的有关轴突导向（Axon Guidance）的重要基因Robo3.1。 1）说来有趣，Robo3.1是一个轴突导向受体，在脊髓联合轴突（spinal commissural axons）的中线交叉过程当中起重要作用。作者在研究轴突外植体生长过程中发现，Robo3.1在交叉后的联合轴突中的下降是依赖于底板（floor plate）进行的，而这种下降主要发生在蛋白水平。 2）为了研究这个蛋白调控背后的秘密，作者率先考虑了YTHDF
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布鲁氏菌的检测方法！
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
布鲁氏菌的检测方法！ 荧光偏振方法(Fluorescence polarisation assay， FPA)是以荧光素标记物作为示踪剂来检测抗原/抗体相互作用的一种简便技术，该方法属于同源性分析，分析物不需进行分离，因而该法简便快捷。FPA 诊断布鲁氏菌的特异性和敏感性几乎和竞争 ELISA (Competitive enzyme-linked immunosorbent assay，C-ELISA)相同，一次检测仅需15 min，即可完成上百份样品的检测，可应用于动物群体布鲁氏菌病的检疫、筛查和净化。FPA 检测方法在某些发达国家已经得到了大量应用，并经研制开发了商品化 FPA 检测试剂盒。 而我国对 FPA 检测方法的研究起步较晚，目前尚无商品化 FPA 检测试剂盒，进出口贸易中牛、羊布鲁氏菌病 FPA 检测方法均依赖于使用进口试剂盒，因此开发布鲁氏菌荧光偏振抗体检测方法有其现实意义。本研究使用异硫氰酸荧光素 (Fluorescein isothiocyanate，FITC)标记的布鲁氏菌光滑型 LPS 的小分子片段脂多糖-O-链(O-polysaccharide，OPS) 作为抗原，通过对标记抗原、反应条件、结果判断标准等多方面条件的优化，建立敏感性和特异性良好的布鲁氏菌荧光偏振方法，为多种动物布病检测提供快速高通量的新技术手段。 材料与方法 一、材料 ⒈菌种：猪布鲁氏菌 S2 菌株(CVCC 70502)由本实验室保存。 ⒉实验用血清：布鲁氏菌病阳性血清国家标准品由本实验保存，布鲁氏菌病阴、阳性血清样本由本实验采集并保存。 ⒊主要试剂和仪器： 布鲁氏菌荧光偏振试剂盒购自 Diachemix 公司；胰大豆肉汤(TSB)和胰大豆琼脂(TSA)购自美国BD公司；异硫氰酸荧光素(FITC)、表面活性剂脱氧胆酸钠(Sodium deoxycholate)、三乙胺购自 Sigma 公司；SDS-PAGE 凝胶制备试剂盒购自康为世纪公司。低温离心机购自 Sigma 公司；超声破碎仪购自新芝生物科技有限公司；Powerpac Universal 通用型电源购自美国 Bio-Rad 公司。 二、方法 ⒈OPS 的提取及标记：(1) OPS 提取。鉴定合格的 B. suis 2 株二级种子，大量培养并灭活，参
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小鼠ELISA试剂盒样本取血操作步骤及注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
小鼠ELISA试剂盒样本中血浆的取血操作步骤 大鼠、小鼠ELISA试剂盒检测中，经常有客户采用鼠类的血清，血浆做检测样本，但是收集样本复杂，本章小编就根据大鼠，小鼠ELISA试剂盒样本取血及注意事项。 以小鼠为例： 1 剪尾采血 小鼠每次采血量0.1ml，大鼠每次采血量0.3-0.5ml 左手拇指和食指从背部抓住鼠颈部皮肤，将鼠头朝下，鼠保定后将其尾巴置于50℃热水中浸泡数分钟，使尾部血管充盈。擦干尾部，再用剪刀或刀片剪去尾尖1-2mm，用试管接流出的血液，同时自尾根部向尾尖anmo。取血后用棉球压迫止血并用6%液体火棉胶涂在伤口处止血。 2 摘除眼球采血小鼠采血量0.5-1ml 左手抓住小鼠颈部皮肤，轻压在实验台上，取侧卧位，左手食指尽量将小鼠眼周皮肤往颈后压，使眼球突出。用眼科弯镊迅速夹去眼球，将鼠倒立，用器皿接住流出的血液。采血完毕立即用纱布压迫止血。大鼠少用。 3 心脏采血 小鼠采血量0.5-0.6ml，大鼠采血量1-1.5ml 鼠仰卧位固定，剪去胸前区被毛，皮肤消毒后，用左手食指在左侧第3-4肋间触摸到心搏处，右手持带有4-5号针头的注射器，选择心搏zui强处穿刺，当刺中心脏时，血液会自动进入注射器。 4 断头采血 小鼠采血0.8-1.2ml，大鼠采血量5-10ml 左手拇指和食指从背部抓住鼠颈部皮肤，将鼠头朝下，右手用剪刀剪断鼠颈部约1/2-4/5，让血液流入试管。 5 眼眶静脉丛采血小鼠采血量为0.2-0.4ml，大鼠采血量为0.4-0.8ml 取内径为1.0-1.5mm的玻璃毛细管，临用前折断成1～1.5cm长的毛细管段，浸入1％肝素溶液中，干燥后用。取血时左手抓住鼠两耳之间的颈背部皮肤以固定头部，轻轻向下压迫颈部两侧，引起头部静脉血液回流困难使眼眶静脉丛充血，右手持毛细管由内眦部插入结膜，再轻轻向眼底部方向推进，轻轻旋转毛细管以划破静脉丛，让血液顺毛细管流出，接收入事先准备的容器中。采血后纱布轻压眼部止血。小鼠、大鼠、豚鼠及家兔均可采取此法取血。刺入深度小鼠为2-3mm，可采血0.2-0.3ml；大鼠为4-5mm，
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化合物虚拟筛选平台技术交流问答
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
以下内容来自殷赋学术交流群，由小殷收集整理，希望对大家有所帮助。 虚拟筛选相关 A:问一下，贵公司有没有关于虚拟筛选的在线培训课程? 小殷 :没有呢。不过今年平台会上线虚拟筛选功能，届时会针对此功能进行免费培训。 A :哦哦，之前看过公众号的教程，哈哈哈，但是想系统学一下如何选择和使用分子库。 殷赋科技 : 分子库大多使用商业库，主要看你们经费条件。尽量选择结构多样性良好的库。化合物库还需要经过一系列仔细的处理，包括：结构检查、加氢(质子化)、加电荷、能量优化。我们会在平台上提供这项功能。 如果有版权，可以用MOE来处理，先wash，再minimize。或者你手头有其他软件，也可以使用，Sybyl、DS这些软件都有完善的工具。我们是使用免费开源的编程库来编写程序的，这方面恐怕难以传授。**使用我们的平台，它是我们多年的技术经验的积累。 A :谢谢啊，我参考你们的教程和paper，可以做现有单个化合物模拟(模仿)，但是还不太懂选择库，好的 ，很期待。 殷赋科技 : 你说的是两件事吧，一个是使用分子对接预测结合模式，另一个是虚拟筛选。前者不用选库啊，而是你指定若干个化合物，**经过实验验证的。后者也是根据需要去挑选，比如想筛选有机小分子的，可以选Specs、ChemDiv、Enamine等库。 B:第一个是反向筛靶的是么?就是指定化合物筛选其靶标? 殷赋科技:不是啊，也不是正向筛选，就是对某些感兴趣的化合物进行分子对接，去了解他们在蛋白口袋中的结合模式(方式)和相互作用情况。 如果对编程感兴趣，我们也可以教授一些基础，用来处理日常工作。建议学习Linux和Python。 A:好的，我对编程感兴趣，但是它对我不感兴趣，我先等平台吧。 殷赋科技: Python很好学，当年我花了一个晚上就看完这篇《A byte of python》(建议学Python3)：https://python.swaroopch.com/，我能学会，大家都可以。 云计算平台 D:目前云平台可以进行什么分析，是免费的吗?还是如何收费的？ 小殷:目前可做分子对接的vina
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云序客户再发高分文章，教你如何玩转tRNA机制研究
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
文章导读： “忽如一夜春风来，千树万树梨花开！”自然界的花花草草在悄无声息的感受着大自然的变化。随着全球气候的变化，环境温度也在不断的变化，那么什么是温度感受器？AET1是tRNA上鸟苷转移酶，它是水稻高温条件下正常生长所必需的。本文研究结果表明，tRNAHis鸟苷转移酶AET1在植物应对高温环境中发挥着重要作用。 发表期刊：MOLECULAR PLANT 影响因子：10.12 实验方法：tRNA测序、RIP、RIP qPCR、RNA pull down 文章内容： 1. AET1突变水稻热敏性 AET1突变水稻在高温环境下生长时主要呈矮小株，叶片狭窄卷曲，无法产生种子，相反在相对温和环境下生长时没有展现其他异常性状。AET1基因的ORF区第1144个SNP（C突变为T）会引起第382个氨基酸从脯氨酸改变为丝氨酸。预测AET1基因编码tRNA鸟苷转移酶，多物种比对结果显示AET1基因在包含哺乳动物在内的多种真核生物当中都是高度保守的，而第382个氨基酸在大部分双子叶和单子叶植物中也是高度保守的。遗传互补分析（genetic complementation test）显示互补品系以及过表达水稻株都能够有效的逆转高温下AET1突变所造成的异常形状。CRISPR/Cas9的基因编辑水稻株也可以造成明显的生长缺陷。控制变量实验表明温度是造成这一现象的环境因素，并且AET1基因是水稻对非生物因素敏感的主要原因。进一步观察可以看到的是，尽管野生型和AET1突变水稻幼苗们没有明显的形态学改变，但是超微结构已经有巨大的改变，表明AET1基因对于高温条件下细胞的增值是必不可少的。所有的形态学观察和表型实验都说明AET1在水稻的生长、发育过程中对高温的应答过程种起到重要作用。 图1. AET1突变体是热敏性的 2.AET1对tRNAHis成熟和tRNA表达稳态起重要作用 体外酶活实验证明AET1编码的AET1His可以结合到pre-tRNA（tRNAHis前体）并在pre-tRNAHis 5’端添加鸟嘌呤，然而发生了突变的AET1P382S没有该功能，表明被突变的382位的脯氨酸对于tRNA的鸟嘌呤转移酶活性是必不可少的。tRNA测序（云序生物
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高效液相色谱法测定石杉碱甲的含量！
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
高效液相色谱法测定石杉碱甲的含量！ 昆明石杉HuperziakunmingensisChing.系石杉科石杉属植物，为我国特有种，主要分布于云南、贵州等地，生于灌木下、苔藓丛中。20世纪80年代，我国科学工作者从同属植物蛇足石杉中分离到石杉碱甲(Hup-A)，并阐明它是一种可逆性乙酰胆碱酯酶抑制剂，对**重症肌无力、记忆力减退和早老年痴呆具有较好的效果，现已被广泛应用于临床。为了科学、合理地利用石杉属植物资源，本实验首次采用HPLC法对昆明石杉中石杉碱甲的含量进行测定，为寻找和筛选石杉碱甲新的植物资源提供科学依据。 1、仪器与试药 Aigent1100型HPLC色谱仪(带四元泵，自动进样器，紫外检测器等);电子分析天平(日本岛津);KQ50B超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司);电热恒温水浴锅(上海医疗器械厂);石杉碱甲对照品(中国药品生物制品检定所，批号：100243-200401);乙腈(色谱纯);二次重蒸水;其他试剂均为分析纯。 实验药材采至贵州黔东南，由贵州科学院生物研究所王培善教授鉴定为昆明石杉H.kunmingensisChing.，标本存放于贵阳中医学院民族医药研究所，标本凭证(20056)。 2、方法与结果 2.1色谱条件ZORBAXSB-C18色谱柱(150mm×4.6mm，5μm)，流动相0.02mol·L-1磷酸二氢钾-乙腈(92∶8)，检测波长为310nm，流速1ml·min-1，柱温25℃，进样量为5μl。在此色谱条件下，样品中的石杉碱甲与其他峰能达到基线分离，其理论塔板数为4656，对称因子为0.92。石杉碱甲的保留时间为11.15min，对照品与样品的色谱图见图1。 2.2样品的制备 精密称取实验药材细粉2g于500ml的圆底烧瓶中，每次加入200ml石油醚提取3次，弃去滤液。滤渣再用95%的甲醇提取3次，合并滤液并回收溶剂，加入2%的酒石酸溶解，用氨水调节pH值至8.0，再用氯仿萃取至Dragendorffors反应呈阴性，挥干有机溶剂，用无水乙醇溶解并定容至25ml即得。 2.3线性关系的考察 精密称取石杉碱甲对照品2.40mg于25ml容量瓶中以无水乙醇溶解并定容，得浓度为0.096mg·ml-1对照
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海狸生物解读His-tag蛋白纯化技术
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
导读：在进行基因重组时，通常将目的蛋白和一个亲和纯化标签进行融合表达，然后借助亲和层析方法实现蛋白质的高效纯化。常见的标签有组氨酸标签（His-tag）、GST标签、Flag标签等。BeaverBeads™ IDA-Nickel具备高磁含量，可快速进行磁性分离，在一小时内就能获得高纯度的目的蛋白，且能轻松实现多样品平行处理，实现高通量蛋白纯化。 随着基因组学和基因工程技术的发展，快速获得目标蛋白的基因已相对容易。将目标基因构建到原核或真核细胞系统中进行蛋白质的重组表达是获得目的蛋白的有效方法。今天，小海狸就为大家来详细说一说。 His-tag蛋白纯化技术 在进行基因重组时，通常将目的蛋白和一个亲和纯化标签进行融合表达，然后借助亲和层析方法实现蛋白质的高效纯化。常见的标签有组氨酸标签（His-tag）、GST标签、Flag标签等。 BeaverBeads™ IDA-Nickel具备高磁含量，可快速进行磁性分离，在一小时内就能获得高纯度的目的蛋白，且能轻松实现多样品平行处理，实现高通量蛋白纯化。 产品性能 标技术图示&实验案例 图: BeaverBeads™ IDA-Nickel显微镜中形貌。该磁珠产品微观为球形，分散性良好。透明琼脂糖微球中均匀分散磁性颗粒。 可溶性蛋白纯化效果 图：BeaverBeads™ IDA-Nickel可纯化原核细胞胞内表达可溶性蛋白。纯度可达85%。 包涵体蛋白纯化效果 图：BeaverBeads™ IDA-Nickel 可纯化包涵体变性蛋白 图：BeaverBeads™ IDA-Nickel产品已在各大国际期刊中引用。以上为部分文献数据，目的蛋白纯度可到90%以上。 实验流程对比展示 通过实验流程的对比发现，可以看出BeaverBeads™与金属传统离子鳌和琼脂糖预装柱纯化组氨酸标签蛋白操作流程的优化与效率的提升。 产品展示 图：磁性分离器 图：BeaverBeads™ IDA-Nickel产品包装形式Cat. 70501-K10产品包含实验过程及磁珠再生所需要的各种试剂，更方便使用。 欲了解产品详情，欢迎联系我们！
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一级菌种培养基的制备实验！
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
一级菌种培养基的制备实验！ 一、实验目的 1．了解一级菌种培养基配制的原则； 2．掌握一级菌种培养基配制的工艺流程； 3．学会一级菌种培养基配制的具体方法步骤； 4．学会棉塞的制作方法和手提式高压蒸汽锅的使用方法。 二、实验设备、工具和材料 手提式高压锅、1000～1500W电炉、感量1／10g的粗天平、1000mL量杯、玻璃漏斗、漏斗架各一个，8～10cm长乳胶管一根，止流夹一个，20mm×200mm试管150支左右，铁丝筒两个，小刀和剪子一把，普通棉花250g，牛皮纸、马铃薯、琼脂和葡萄糖或蔗糖适量。 三、实验步骤 (1)取适量马铃薯，削去皮，挖去芽眼。称取200g，切成薄片或小块，用清水淘洗之后，放入锅内，加水1200mL，用文火煮沸20～30min，用四层纱布过滤，取滤液1000mL，如不足加水补足1000mL。 (2)称取琼脂20g，洗净剪碎，加入马铃薯煮出液中，用文火加热，边煮边搅拌，直至全部琼脂融化，再用四层纱布过滤，并用热水补足1000mL，加入预先溶解的葡萄糖水，搅拌之后煮2min后停火。 (3)分装试管。根据要求，用1%盐酸或1%氢氧化钠溶液调整酸碱度后，将培养基趁热分装在试管中。 先在玻璃漏斗嘴上套一段长8～10cm的乳胶管，卡上止流夹，将培养基倒入漏斗中（其余培养基要置电炉上保温）。左手握住3～5支试管，让乳胶管伸入试管中部，右手拇指和食指按下止流夹，逐一注入培养基，装入量以试管长度的1/5～1／4为宜。分装时不要让培养基沾在试管口上，若已沾上，要用干净纱布擦干净。 (4)塞棉塞。培养基分装试管后，要塞上棉塞。 制作棉塞的方法很多，这里介绍一种常用的方法。取适量棉片，在桌上铺成长12～15cm，宽12cm左右的薄棉垫，先将棉垫下部1／3向上折叠，再将上部1／3向下折叠，然后将长棉垫逆时针方向转90°，让光滑的一边向左用右手持棉垫并用拇指按住，左手拇指和食指向外旋卷，并将参差不齐的棉纤维缠住呈一圆柱形。用右手按顺时针方向将棉塞塞进管口内，塞入部分为棉塞长度的2/3。 (5)捆扎试管。塞好棉塞之后，应将
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气相色谱法分析野生菱角壳中多糖化合物
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
气相色谱法分析野生菱角壳中多糖化合物 1、引言 20世纪60年代以来，人们逐渐发现多糖具有复杂多样的生物活性和功能，如多糖有免疫调节功能可作为广谱免疫促进剂，作为药物可以**风湿病、慢性病毒性肝炎、癌症等；还具有抗感染、抗放射、抗凝血、降血糖、降血脂，促进核酸与蛋白质的生物合成等作用。菱，别名菱角、水菱角、风菱，为菱科菱属植物乌菱TrapabicomisOsbeck的种子，据文献记载，其果壳、果柄、果、茎及叶柄均可进药，有健胃止痢、抗癌等作用；还可用于**胃溃疡、痢疾、食道癌、子宫颈癌及乳腺癌等。 本研究首次从野生菱角壳中提取分离出多糖，并对多糖的单糖组成进行了深进的研究，为进一步开发和利用野生菱角资源提供了科学依据。 2、实验部分 2.1 样品、试剂与仪器市售的菱角往仁后，壳晒干，粉碎备用。单糖及双糖标准物质(半乳糖、阿拉伯糖、木糖、鼠李糖、甘露糖、葡萄糖、乳糖和蜜二糖)均购自ChemService，纯度大于98％。所用化学试剂除甲醇和乙醇为色谱纯外，其余均为分析纯。UV-2501PC紫外光谱仪(日本岛津公司)；NicoletMagna560傅里叶变换红外光谱仪(美国尼高力公司)；VarianUnityPlus600核磁共振波谱仪(美国瓦里安公司)；HP6890和HP5973气相色谱-质谱联用仪(美国安捷伦公司)。 2.2 实验方法 (1)多糖化合物的提取及纯化方法称取800g洗净晒干的菱角壳，加人1:1乙醇-乙醚混合液，65℃水浴回流1～3h往脂；残渣中加水，9O～100℃水浴提取4～6h，更换净水反复提取2～3次，合并深红色多糖提取液，过滤，浓缩。向提取液加人3／7倍体积的乙醇，离心分离沉淀，冻干得多糖粗品F1。向上清液中加人1.0倍体积的乙醇，离心分离沉淀，冻干得多糖粗品F2。依此方法，向上清液中先后加人1.5和4.0倍体积乙醇，分别得到多糖粗品F3和F4。。若直接向原多糖提取液中加人4倍体积的无水乙醇，则得到混合多糖粗品F5。用Sevag法除往多糖粗品中的蛋白质，H2O2法除往色素，透析72h后，浓缩，冻干，即得多糖纯品； (2)多糖
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关于Elisa试剂盒竞争法测抗原的原理与步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
关于Elisa试剂盒竞争法测抗原的原理与步骤 当抗原材料中的干扰物质不易除去，或不易得到足够的纯化抗原时，可用此法检测特异性抗体。其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。标本中抗体量越多，结合在固相上的酶标抗体愈少，因此阳性反应呈色浅于阴性反应。如抗原为高纯度的，可直接包被固相。如抗原中会有干扰物质，直接包被不易成功，可采用捕获包被法，即先包被与固相抗原相应的抗体，然后加入抗原，形成固相抗原。洗涤除去抗原中的杂质，然后再加标本和酶标抗体进行竞争结合反应。竞争法测抗体有多种模式，可将标本和酶标抗体与固相抗原竞争结合，抗HBc ELISA一般采用此法。另一种模式为将标本与抗原一起加入到固相抗体中进行竞争结合，洗涤后再加入酶标抗体，与结合在固相上的抗原反应。抗HBe的检测一般采用此法。 实验步骤 1. 以稀释液将待检标本做适当稀释（预试中确定）加入包被有已知抗原的酶标板中（50ul/孔），加封口胶带于37℃作用30min。 2. 弃反应液，以冲洗液连续洗板5次并于吸水纸上拍干。 3. 加入酶标抗体（浓度在预试中确定）。加封口胶带后于37℃作用30min。 4. 重复第2步。 5. 加底物（浓度在预试中确定），加封口胶带后于室温下避光作用5-60 min，其间不时观察，显色满意后加终止液50ul/孔。 6. 于酶标仪测定OD值，OPD用492nm测定，TMB用450nm测定。 注意事项 1. 每次实验均应做阴性对照、阳性对照及空白对照（以PBS代替标本），后者为本底值，在分析实验结果时应扣除本底值，阳性对照
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