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戊巴比妥钠半数有效量（ED50）的测定
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
一、 实验目的和原理 测定戊巴比妥钠（ 57-33-0） 腹腔注射对小鼠催眠作用的 ED50值。 戊巴比妥钠为巴比妥类镇静催眠药，用适当剂量给小鼠腹腔注射后产生的催眠效应， 常用翻正反射的消失来判断， 该指标仅有阳性（ 睡眠） 和阴性（ 不睡眠） 两种现象， 属于质反应。 质反应量效曲线的横坐标为对数剂量， 而纵坐标采用阳性反应发生的频数时， 一般为常态分布曲线。 如改用累加阳性频数为纵坐标时， 可以得到标准的 S 型曲线。 该曲线的中央部分（ 50%反应处） 接近一条直线， 斜度最大， 其相应的剂量也就是能使群体中半数个体出现某一效应的剂量， 通常称为半数效应量。 如效应为疗效， 则称半数有效量（ ED50） ； 如效应为死亡， 则称半数致死量（ LD50） 。 这些数值是评价药物作用强度和药物安全性的重要参数。 021-51602548 孙氏改进的 Kaerber 法的设计条件是： 各组实验动物数相等， 各组剂量呈等比数列， 各组动物的反应率大致符合常态分布。 若以 Xm 为最大反应率组剂量的对数， i 为组间剂量比的对数， p 为各组反应率， Pm 为最高反应率， Pn 为最低反应率， n 为实验组数， 则：ED50＝ lg-1[Xm－ i（ ∑ P－ 0.5） ＋ i/4（ 1－ Pm－ Pn） ]含 0%及 100%反应率时，ED50＝ lg-1[Xm－ i（ ∑ P－ 0.5） ]ED50的 95％ 可信限＝ lg-1（ lgED50± 1.96· S）其中 S＝ i 二、 实验材料 小鼠 50 只， 1% 戊巴比妥钠（ sodium pentobarbital solution） 小鼠笼， 天平， 0.5ml 或 0.25ml 注射器。 三、 实验步骤 1、确定给药剂量：先以少量动物做预实验，以获得小鼠对戊巴比妥钠催眠反应率为 100％ 的最小剂量（ ED100） 和反应率为 0％ 的最大剂量（ ED0） 。 然后在此剂量范围内， 按等比数列分成几个剂量组（ 一般 4～ 8 组） ， 各组剂量的公比（ r） 为 r＝ n-1√ ED100/ED0 求得 r 后， 自第一剂量组（ ED0） 开始乘以 r， 可得相邻的下一个组的剂量。 若共分为 5 个组， 各组剂量分 别为 ED0、
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细胞消化知识你知道多少？
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
无论是原代细胞还是细胞系或癌细胞，细胞长满瓶后，需要对细胞进行传代或将细胞收集起来用作其他实验。贴壁生长的细胞必须要做的一步便是消化过程，下面便对细胞消化、中和、洗涤等过程做个简单介绍。 1、绝大部分细胞消化的时候是只需用胰酶润洗一遍即可，吸去胰酶后，残留胰酶附着在细胞表面在37度一般不到2min足够消化细胞（绝大部分1min不到）。对于这些细胞原则上不要用胰酶孵育细胞，这样连续传代，对细胞伤害很大。简单的程序是PBS润洗吸去，胰酶润洗吸去，然后37度消化。 2、什么算是消化好了呢？ 不是细胞全部成间隔分布很离散的单个圆形才算消化好了，一般肉眼观察贴壁细胞层，只要能移动了，多半呈沙状移动，其实已经可以了，很多人喜欢把细胞消化或者吹打成完全分离细胞，这是没有必要的。一般能移动了，就应该停止消化，不要等到看到镜下所有细胞都分离得非常好，间隙很大，才停止。细胞就是完全成单个细胞悬液，之后在贴壁的过程中仍然会聚集，这个是贴壁培养的细胞，尤其是肿瘤细胞的一个特性。细胞只要能从基质上脱离下来，这个时候即使是成片的，吹打不超过20次后（一般10次即可），成小规模聚集（10个细胞左右），是正常的，不要试图再去延长消化时间。 3、EDTA的作用。 许多人不用胰酶，只用EDTA，或者用trypsin/EDTA联合作用。这里要明白，trypsin切割细胞外基质的一些负责粘连和附着的蛋白，而EDTA通过螯合Ca2+，作用于Integrin的活性，所以EDTA的作用更加温和。有的人在trypsin里添加一些EDTA，或者对付特别难消化的细胞，添加多一些EDTA，就是这个道理。一般不要试图延长消化时间（如果10min还消化不彻底的话），而应该想其它办法。针对如上情况，美国ScienCell公司专门配制了胰酶浓度为0.25%的trypsin/EDTA消化液（T/E，货号# 0103）和胰酶浓度为0.05%的trypsin/EDTA消化液（T/E，货号# 0183） 4、PBS洗涤。 消化之前用PBS洗涤，是常见的操作，因为Serum含有抑制trypsin的
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细胞株培养过程中常见的问题有哪些呢？
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
细胞株是用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。然而，细胞株在体外培养的过程中会出现一些问题，比如：细胞株无法在培养皿上贴壁生长，细胞株生长缓慢，细胞株死亡等。 那么该如何解决呢？ 一、细胞株无法在培养器皿上贴壁生长 1.细胞株胰酶消化过度：缩短胰酶消化时间或减少胰酶用量。 2.支原体污染：隔离细胞株，检测是否感染支原体；清洗通风厨和培养箱，如细胞株被污染，灭菌处理后丢弃。 3.培养基中无附着因子：如果使用的是无血清配方，应确保含有附着因子或者使用经过包被的培养板。 二、细胞株生长缓慢 1.培养基或血清改变：比较不同培养基配方中葡萄糖、氨基酸及其他成分有无差异；通过生长实验比较新老批次血清有无差异；增大细胞株初始接种密度；使细胞株逐步适应新的培养基。 2.必需生长促进成分（如L-谷氨酰胺或生长因子）耗竭、缺乏或分解：去除原培养基，加入新鲜培养基；向培养基中添加生长促进成分（如L-谷氨酰胺）。 3.轻度细菌或真菌污染：在不添加抗生素的条件下进行培养，如细胞被污染，灭菌处理后丢弃。 4.时间存储不当：血清应于-5℃至-20℃下储存；培养基应于2℃~8℃下避光储存；尽量减少血清和培养基见光时间。 5.细胞株初始接种密度低：增大活细胞接种密度。 6.细胞株衰老、老化：将老化细胞丢弃，取用代数较少的细胞。 7.支原体污染：隔离细胞株，检测是否感染支原体；清洗通风厨和培养箱，如细胞被污染，灭菌处理后丢弃。 三、培养基pH值变化迅速 1. 培养箱CO2分压设置错误：根据培养基中NaHCO3的浓度增大或降低培养箱CO2的分压，NaHCO3浓度为2.0-3.7g/L时，应相应地使用5%-10%的CO2分压。 2.细胞培养瓶瓶盖过紧：将瓶盖旋松1/4圈。 3.碳酸氢盐缓存系统缓冲能力不足：加入HEPES缓冲液，使其终浓度为10-25mM。 4.培养基中盐含量不正确：CO2平衡环境中使用以Earle平衡盐为基础的培养基，大气条件下
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一种新型可视细胞趋化实验方法及系统搭建的介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
一种新型可视细胞趋化实验方法及系统搭建的介绍 广州科适特科学仪器有限公司 一.细胞趋化实验原理 定义：趋化性（Chemotaxis，亦被称为化学趋向性）是趋向性的一种，指身体细胞、细菌及其他单细胞、多细胞生物依据环境中某些化学物质而趋向的运动。这对细菌寻找食物(如葡萄糖)十分重要，细菌以此趋进有较高食物分子浓度的地方，或远离有毒(如苯酚)的地方。在多细胞生物中，趋化性对其发展和其他正常功能一样不可或缺。正趋化性指趋向较高化学物质浓度的运动，而负趋化性则相反。 二.目前细胞趋化实验方法的主要问题 目前一般做这个实验的方法：用transwell做，如下图，下部空间放诱导剂，上部空间放细胞，经过一定时间，数细胞穿到下部空间的数量（细胞染色或者把细胞擦下来再数），穿到下部的细胞越多，说明趋向性越强，进而得出细胞的趋化性结果。 主要问题： （1）由于显微镜工作距离的限制，无法使用显微镜进行实时观察，无法记录细胞趋化过程，如果能够实时拍摄记录细胞趋化的过程，实验结果更直观。 （2）采用末端点测量方式，transwell只能数最终穿到下室的细胞数量，细胞运动速度是没办法考察的。 （3）不稳定的浓度梯度，transwell要做一系列的孔才能完成浓度梯度的趋化实验，因为transwell每孔只能在下室放一个定值的浓度，所以要做出一系列浓度梯度，就要做好几孔（比如每孔分别设置2，4，6，8单位浓度，这2，4，6，8就是个梯度）；这个实验做浓度梯度的目的是看细胞是不是确实在诱导剂越浓的情况下有更强或更弱的趋向性（或根据诱导剂浓度的升高有个趋向性的高低变化）。 （4）非生理实验环境，生理状态下需要控制温度，湿度，CO2浓度，O2浓度，流体环境的。 三．可视化细胞趋化实验工作原理和流程 基本原理：在两个大的蓄液池中通过一个大概60ul的狭窄观察区域相连，细胞注入通道内的基质胶中，在其上方形成线性和时间稳定的浓度梯度， 线性浓度梯度(维持48小时以上)。 主要工作流程 1.细胞接
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浅谈人因工程及Noldus与人因工程
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
提及“人因工程”，想必大家并不陌生并且早已耳熟能详。随着科技进步与工业化水平的提升，人因工程在近年来也得到了飞速发展，同时也一直备受关注。回顾以往，从2016年至2018年，已分别在深圳、杭州、长沙召开了首届、第二届和第三届人因工程高峰论坛，由此也可看出人因工程的重要性日益增加。 那么人因工程究竟是什么？主要应用在哪些领域？为何要大力发展人因工程？促进人因工程的发展又该从哪些方面着手？本文将带着这些问题为大家进行阐述，浅谈人因工程。同时也穿插了刚刚圆满落幕的第三届人因工程高峰论坛回顾内容，旨在让大家感受一下会议现场的氛围，了解政府、学者专家们对人因工程的高度重视及独到见解。 点击此处，阅读全文。
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测定土壤微生物的实验原理和方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
一、实验原理 测定微生物细胞数量的方法很多，通常采用的有显微直接计数法和平板计数法。 显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如有杂菌或杂质，常不易分辨。菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板，一般细菌则采用彼得罗夫· 霍泽（Petrof Hausser）细菌计数板。两种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。而血球计数板较厚，不能使用油镜，计数板下部的细菌不易看清。 血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区，计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。计数区边长为1mm，则计数区的面积为l mm2，每个小方格的面积为1/400mm2。盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为1 /4000mm3。 使用血球计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每毫升菌液（或每克样品）中微生物细胞的数量。 已知：1mm3体积=10 mm×10 mm×10 mm= 1000mm3 所以：1mm3体积应含有小方格数为1000mm3/1/4000mm3=4×106个小方格，即系数K=4×106 。 因此：每ml菌悬液中含有细胞数= 每个小格中细胞平均数（N）×系数（K）×菌液稀释倍数（d） 二、实验方法 1．对于出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。每个样品重复计数2—3次（每次数值不应相差过大，否则应重新操作），求出每一个小格中细胞平均数（N），按公式计算出每ml（g）菌悬液所含酵母菌细胞数量。 2．测数完毕，取下盖玻片，用水将血球计数板冲洗干净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻
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制备培养基的操作要点
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
一、玻璃器皿的清洗 在制备培养基的过程中，首先要使用一些玻璃器皿，如试管、三角瓶、培养皿、烧杯和吸管等。这些器皿在使用前都要根据不同的情况，经过一定的处理，洗刷干净。有的还要进行包装，经过灭菌等准备就绪后，才能使用。 1、新购的玻璃器皿 除去包装沾染的污垢后，先用热肥皂水刷洗，流水冲净，再浸泡于１～２％的工业盐酸中数小时，使游离的碱性物质除去，再以流水冲净。对容量较大的器皿，如大烧瓶、量筒等，洗净后注入浓盐酸少许，转动容器使其内部表面均沾有盐酸，数分钟后倾去盐酸，再以流水冲净，倒置于洗涤架上将水空干，即可使用。 2、用过的玻璃器皿 凡确无病原菌或未被带菌物污染的器皿，使用后可随时冲洗，吸取过化学试剂的吸管，可先浸泡于清水中，待到一定数量后再集中进行清洗。有可能被病原菌污染的器皿，必须经过适当消毒后，将污垢除去，用皂液洗刷，再用流水冲洗干净。若用皂液未能洗净的器皿，可用洗液浸泡适当时间后再用清水洗净。洗液的主要成份是重铬酸钾和浓流酸，其作用是将有机物氧化成可溶性物质，以便冲洗。洗液有很强的腐蚀作用，使用时应特别小心，避免溅到衣服、身体和其他物品上。 二、培养基的类型 在实验室中配制的适合微生物生长繁殖或累积代谢产物的任何营养基质，都叫做培养基(Media)。由于各类微生物对营养的要求不同，培养目的和检测需要不同，因而培养基的种类很多。我们可根据某种标准，将种类繁多的培养基划分为若干类型。 1、根据对培养基组成物质的化学成分是否完全了解来区分，可以将培养基分为天然培养基、合成培养基和半合成培养基。 a.天然培养基天然培养基是指利用各种动、植物或微生物的原料，其成分难以确切知道。用作这种培养基的主要原料有：牛肉膏、麦芽汁、蛋白胨、酵母膏、玉米粉、麸皮、各种饼粉、马铃薯、牛奶、血清等。用这些物质配成的培养基虽然不能确切知道它的化学成分，但一般来讲，营养是比较丰富的，微生物生长旺盛
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细菌数量的测定方法汇总
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
1、颜色改变单位法（colour change unit,简称CCU） 这种方法通常用于很小，用一般的比浊法无法计数的微生物，比如支原体等，因为支原体的液体培养物是完全透明的，呈现为清亮透明红色，因此无法用比浊法来计数，由于支原体固体培养很困难，用cfu法也不容易计数，因此需要用特殊的计数方法，即CCU法。它是以微生物在培养基中的代谢活力为指标，来计数微生物的相对含量的，下面以解脲脲原体为例，简单介绍其操作： （1）取12只无菌试管，每一管装1.8ml解脲脲原体培养基。 （2）在第一管加入0.2ml待测解脲脲原体菌液，充分混匀，从中吸取0.2ml加入第二管，依次类推，10倍梯度稀释，一直到最末一管 （3）于37度培养，以培养基颜色改变的最末一管作为待测菌液的CCU，也就是支原体的最大代谢活力，比如第六管出现颜色改变，他的相对浓度就是10的6次方CCU/ml. 一般来说，比浊法和菌落计数法就可以满足绝大多数细菌的计数，但是对支原体这样比较特殊的微生物，用CCU法比较合适。 测定微生物生长的方法很多，各种方法均有其优缺点，也不是在任何情况下都适用。在微生物学工作中一般常用的是平皿菌落计数法、计数器法和比浊法。至于哪种方法比较适合你，得根据你的具体条件而定。 2、计数器测定法： 即用血细胞计数器进行计数。取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室内，用显微镜观察计数。由于计数室的容积是一定的(O.1mm3)，因而根据计数器刻度内的细菌数，可计算样品中的含菌数。本法简便易行，可立即得出结果。 本法不仅适于细菌计数，也适用于酵母菌及霉菌孢子计数。 3、电子计数器计数法: 电子计数器的工作原理是测定小孔中液体的电阻变化，小孔仅能通过一个细胞，当一个细胞通过这个小孔时，电阻明显增加，形成一个脉冲，自动记录在电子记录装置上。 该法测定结果较准确，但它只识别颗粒大小，而不能区分是否为细菌。因此，要求菌悬液中不含任何碎片。 4、活细胞计数法 常用的有平板菌落计
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食品中溶血性链球菌的检验方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
1、范围 本标准规定了食品中溶血性链球菌的检验方法。 本标准适用于各类食品和食物中毒样品中溶血性链球菌的检验， 2、规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单〔不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准．GB/T4789.28一2003食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂 3、设备和材料 3.1冰箱：O℃——4℃。 3.2恒温培养箱：36℃士1℃。 3.3恒温水浴锅：36℃土1℃。 3.4显微镜：10*～l00*。 3.5均质器或灭菌乳钵。 3.6离心机：4000r/min。 3.7架盘药物天平：0g——5009，精确至0.5g。 3.8灭菌试管：10mm*100mm、l6mm*160mm。 3.9灭菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、5mL、10mL（具0.1mL刻度）。 3.10灭菌锥形瓶：100mL。 3.11灭菌培养皿：直径90mm。 3.12灭菌棉签、镊子等。 4、培养基和试剂 4.1葡萄糖肉浸液肉汤：按GB/T4789.28一2003中4.1规定。在肉浸液肉汤内加人1％葡萄糖。 4.2肉浸液肉汤：按GB/T4789.28一2003中4.1规定。 4.3匹克氏肉汤：按GB/T4789.28一2003中4.62规定。 4.4血琼脂平板：按GB/T4789.28一2003中4.6规定。 4.5人血浆。4.6 0.25%氯化钙。 4.7 0.85％灭菌生理盐水。 4.8杆菌肤药敏纸片（含0.04单位）。 5、操作步骤 5.1样品处理按无菌操作称取食品检样25g（ml)，加人225mL灭菌生理盐水，研成匀浆制成混悬液。 5.2培养将上述混悬液吸取5ml，接种于50ml工葡萄糖肉浸液肉汤，或直接划线接种于血平板。如检样污染严重，可同时按上述量接种匹克氏肉汤，经36℃ 土l℃ 培养24h接种血平板，置36℃ 士1℃ 培养24h,挑起乙型血圆形突起的细小菌落，在血平板上分纯，然后观察溶血情况及革兰氏染色，并进行链激酶试验及杆菌肤敏感试验。 5.3形态与染色本菌里球形或卵圆形，直径0.5um ——1um链排列，链长短不一，颊者4个～8个细胞组成
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改变菌种生理状况的原因分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
菌种的遗传特性需要在一定条件下才能表现出来。由于培养条件不适当，使菌种处于不利于发酵生产的生理状况，其结果也表现为菌种衰退。菌种处于不利于发酵的生理状况有以下三个方面的原因。 1、一个菌种不是纯的群体，而是由一些变异株混合组成，这些变异株所占的比例决定该菌种的特性。一个由单菌落发育而来的菌种在固体培养基上分离，可以长出许多种形态培养特征的菌落。这些不同的菌落类型在代谢和生长繁殖速度等方面有一定差异。培养条件可以影响各变异株在培养物中的比例而改变该菌种的特性。同一个菌种的单孢子分离在不同的培养基上，所生长出的单菌落，其形态培养特征有显著差异，各种类型菌落所占的比例也不同。如灰色链霉菌(Streptomycesgriseus)在豌豆琼脂培养基上，单孢子分离呈现出3～4种菌落类型，而在黄豆粉培养基上仅出现两种菌落类型。在开始菌种选育工作时，要研究单菌落的分离培养基，找出能呈现较多菌落类型的分离培养基。菌落类型和发酵产量之间存在着某种程度的相关性。在选种实践中，人们经过对菌落形态的考察，有意识地丢弃一些被认为是低产的菌落，挑选那些可能是高产的菌落。 2、菌种培养基可通过影响菌种的生理状况而影响发酵产量。菌种培养基营养过于丰富不利于孢子形成，因而影响发酵。菌种培养基营养贫乏也同样不利于发酵。因为菌种在营养贫乏的培养基中多次传代，会使菌体细胞内缺乏某些生长因子而衰老甚至死亡。因此，自然选育或菌种培养所用的培养基应选择具有菌种传代后生产能力下降不明显、菌体不易衰老和自溶的正常形态菌落、孢子丰富的培养基。 3、在某些培养条件下，菌体的某些基因处于活化状态或阻遏状态，而使菌种的生理状态改变。这种改变可能以类似于生理性迟延或细胞分化的机制保持较长一段时间。 由于菌种的衰退将会引起发酵过程的产量急剧下降，一旦发生菌种衰退，就必须采取有效的预防和防治措施，防止菌种的优良性状发生退化。同时若发现某些优良性状退
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培养基的制备及储存！
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
1、常用玻璃仪器的准备 制备培养基所用的吸管、锥形瓶、毛细吸管、平皿等玻璃仪器用前要用肥皂水洗刷后用清水冲洗干净，晾干后备用。 （1）试管管口用棉花塞或硅氟塑料试管塞塞好，再用布或报纸包扎好，121℃高压蒸汽灭菌20℃后烘干，备用。 （2）吸管及滴管先用少许棉花塞于吸口端（防止污染物吸出，或橡皮帽内的气体污染），然后用纸包后或装入金属吸管筒内，于121℃高压蒸汽灭菌20min后烘干，备用。其他玻璃器皿均应按上法处理，也应装金属筒内160℃干热灭菌2h后，备用。 （3）平皿用纸或布包好，或装在金属盒内，于121℃高压蒸汽菌3min后烘干，备用。 2、培养基的制备及储存 （1）溶化：一般应放在玻璃器皿或搪瓷齐内。加入蒸馏水，隔水加热以促其溶解，加热时应经常搅拌，防止焦结，待其溶解后补足水分。 在使用干燥培养基时，先将蒸馏水按定量加入容器中，然后称取一定量培养基干粉放入水中，静置10—15min，搅拌，振荡，或延长时间以促进溶解，一般不要热，必要时加热，但时间不宜过长，温度不宜过高，避免某些营养成分被破坏。 （2）校正酸碱度（调节pH）：培养基必须有适当的pH。因此测定pH是培养基配制过程中的重要步骤之一，测定pH的标准温度为25士2℃。调节pH可用无菌的1mol/l氢氧化钠溶液或10%碳酸钠溶液、1mol/l盐酸溶液。当调节缓冲液的pH时，宜用6mol/l磷酸或10mol/l氢氧化钾溶液。灭菌后的pH会比灭菌前的pH升高或降低，一般高压灭菌前培养基的pH会比最终pH调高0.2左右，灭菌后基本合适。因此对培养基、缓冲液、试剂在灭菌前后的pH均进行测定，并记下每次pH的测定结果，有助于积累数据考察每种培养基、缓冲液、试剂对灭菌程序的耐受性，从而指导灭菌前pH的调节。干燥培养基一般已校正过pH，用时也必须再验证。测定时，一般用指示剂滴入培养基观察其颜色的变化，或用pH计校正，如与所需pH不符，可用以上的酸或碱液加以校正。调整pH后要加热过滤，使培养基澄清。 （3）培养基的分装：大
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侵袭美国及欧洲的西尼罗河病毒检测方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
侵袭美国及欧洲的西尼罗河病毒是什么？ 1. 西尼罗河病毒简介 西尼罗病毒 (West Nile Virus， WNV)于 1937年在非洲的乌干达首次被发现 ， 从West Nile地区的一位发热的成年妇女血液中分离到， 因此得名 West Nile Virus。西尼罗病毒属于黄病毒科黄病毒属。黄病毒科成员还有登革热病病毒、日本脑炎病毒以及黄热病病毒等70 余种 ， 多属于虫媒病毒。西尼罗病毒广泛分布于非洲、中东和西亚 ， 主要引起西尼罗河热 (W est Nile Fever) ， 所致疾病大多为人畜共患病，引起严重的公共卫生问题且多缺乏有效的** 、预防和控制措施 ，给疾病控制提出了严峻的挑战。 2. 西尼罗河病毒病原学 西尼罗河病毒为RNA病毒，属于黄病毒科，黄病毒鼠，病毒呈球形，有囊膜。其病毒离子大约为40nm，病毒的核酸为不分节段的单股正链RNA，约10000-11000个碱基。编码3种结构蛋白:病毒壳蛋白(C)、前膜蛋白(preM)、包膜蛋白(E)和七种非结构蛋白 :NS1 、 NS2a 、NS2b 、 NS3 、 NS4a 、 NS4b 和NS5。E蛋白为西尼罗病毒最重要的抗原结构蛋白，介导病毒与宿主结合， 能刺激机体产生相应抗体，是决定病毒毒力的决定性蛋白，为病毒红血球凝集素并介导病毒 -宿主的结合。 3. 流行病学及传播 西尼罗病毒主要通过鸟—蚊—鸟 、人和动物途径传播。该病毒可感染人、鸟类、多种哺乳动物、两栖类及爬行类动物，人和鸟类最为易感，其所致疾病主要分布在沿鸟类迁移飞行路线所连接的欧洲 、非洲以及中东国家。 它的主要传染源为处于病毒血症期的带毒动物 ，和该病毒的自然储存宿主-野鸟 ，传播该病毒的蚊子主要包括库蚊、伊蚊和曼蚊，特别是尖音库蚊将病毒传播给人 。蚊子因叮咬感染 WNV 的鸟类而带毒，然后带毒的蚊子通过叮咬将西尼罗病毒传播给人和其他物 。西尼罗病毒能穿过血脑屏障，干扰正常的中枢神经系统功能， 临床上主要表现为脑炎或脑膜脑炎。西尼罗病毒病主要发生在晚夏或早秋，气候常年温暖地区四季均可发生WNV。 器官移植和输血也可能是传播的
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制备牛肉膏蛋白胨培养基的方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
实验材料 器材：试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅等。 试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂等 实验内容 1.牛肉膏蛋白胨培养基的制备 （1）计算 根据配方计算出实验中各种药品所需要的量，然后再分别称量。 （2）称量 准确称取各种成分。一些不易称量的成分如牛肉膏，可用玻璃棒取出放硫酸纸上称量，然后连同硫酸纸一起放入烧杯中。 （3）溶解 向烧杯内加入所需的水量，将牛肉膏用水洗下后，取出硫酸纸弃去。加热搅拌全溶后稍放冷。 （4）调pH值 用酸度计或精密pH试纸测定其pH值，并用10％NaOH调至所需pH值，必要时用滤纸或脱脂棉过滤。一般比要求的pH高出0.2，因为高压蒸汽灭菌后，pH常降低。 （5）分装 根据不同需要，可将配好的培养基分装入配有棉塞的试管或三角瓶内（附图1-1）。注意分装时避免培养基挂在瓶口或管口上引起杂菌污染。如液体培养基，应装试管高度的1/4左右；固体培养基装试管高度的1/5左右；装入三角瓶的量以三角瓶容量的一半为限。 （6）包扎 试管扎成捆。试管和三角瓶的棉塞外用硫酸纸和牛皮纸包扎，纸上表明培养基的名称、配制日期等。 （7）灭菌 培养基用0.1Mpa（15lb/in2）高压蒸汽灭菌15~20min， 2.培养基的高压蒸汽灭菌 灭菌原理：水的沸点可随压力的增加而提高，当高压蒸汽灭菌锅中水煮沸时，因锅是密闭的，蒸汽不能溢出，而使压力增加，水的沸点和温度也随之增加。因此，高压蒸汽灭菌是利用高压蒸汽产生的高温，以及热蒸汽的穿透能力来达到灭菌的目的。一般在0.1Mpa（15lb/in2）的压力时，温度可达121℃只要维持15~20min，就可杀死一切微生物的营养体和它们的各种孢子。 灭菌方法： (1) 加水于灭菌器内到规定的水平面。 (2) 需灭菌的物品（分装在试管、三角烧瓶中的固、液体培养基），棉塞、硅胶泡沫塞等用防潮纸包好（防止锅内水汽把棉塞淋湿），放入灭菌锅内的套筒中。摆放要疏松，不可太挤，否则阻碍蒸汽流通，影响灭菌效果。 (3) 将
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土壤微生物接种实验流程
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
土壤微生物接种实验流程-中国微生物菌种查询网 相关知识点 接种方法：常用的有斜面接种法、平板接种法、液体接种法、试管深层固体培养基的穿刺接种法。 接种工具：常用的有接种针、接种环、接种钩、接种圈、接种铲或接种锄、玻璃涂棒等。 实验原理 土壤是微生物生活的大本营，为了获得某种微生物的纯培养，一般是根据该微生物对营养、酸碱度、氧等条件要求不同，而供给它适宜的培养条件，或加入某种抑制剂，淘汰其他一些不需要的微生物，再用各种方法分离、纯化该微生物，直至得到纯菌株。 仪器设备 样品：新鲜土壤。 其它：无菌培养皿、无菌吸管、无菌三角玻棒、电子天平、记号笔、接种环、酒精灯、火柴。 试剂：1万U/mL链霉素液、10％苯酚 培养基：灭菌的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、高氏一号培养基、马铃薯蔗糖培养基。 无菌水：带有玻璃珠装有45mL无菌水三角瓶、装有9mL无菌水的试管。 实验步骤 （一）实验程序1 制备土壤稀释液： 1、称取土壤5g，放入45mL无菌水的三角瓶中，振荡10min，即为稀释10－1的土壤悬液。 2、 另取装有9mL无菌水试管5支，用记号笔编上10－2、10－3、10－4、10－5、10－6。取已稀释成10－1的土壤液，振荡后静止0.5min，用无菌吸管吸取1mL土壤悬液加入10－2的无菌水的试管中，并在试管内轻轻吹吸数次，使之充分混匀，即成10－2土壤稀释液。同法依次连续稀释至10－4、10－5 、10－6土壤稀释液。 吸取稀释液 取一吸管，以无菌操作法分别吸取10－4、10－5、 10－6土壤稀释液0.1mL，加在已制好的平板培养基上。 涂板 用玻璃刮铲将稀释液在培养机上充分混匀铺平，倒置于恒温箱培养。 计算出每克土壤中细菌的数量。 即用某一培养皿内真菌的菌落数乘以该培养皿接种液的稀释倍数即得。 挑取单个菌落，进行划线分离。 （二）实验程序2 制平板 吸取稀释液 取一吸管，以无菌操作法分别吸取10－4、10－5 、 10－6土壤稀释
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环境样品中军团菌ISO的检测方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
本标准描述了一种用于军团菌分离和估计环境样品中军团菌数量的培养方法。 该方法适用于所有环境样本，包括饮用水、工业用水和天然水以及沉淀物、沉积物和粘土/软泥等相关样本。 一、培养基和试剂 GVPC培养基、BCYE培养基(也可用硝酸铁琼脂代替)、酸处理缓冲液、BCYE-Cys(不含L-半胱氨酸) 二、取样 1、取样容器 水样可采用玻璃、聚乙烯或类似容器。以前用过的容器应该清洗干净、扣干水分，121℃高压灭菌15min。如果容器不能经受高压灭菌，应在高于70℃的流动热水或流动蒸汽中处理至少5min。 2、含生物防腐剂的样品 如果水样中含有或被认为含有氧化型生物防腐剂，应在取样时或取样前加入非活性试剂加以中和。如果水样中含有消毒剂，需在采样前或采样后加入中和剂，含氯或氧化型消毒剂可用硫代硫酸钠或硫代硫酸钾作中和剂。 原则上讲，实验室接到水样后应尽快进行微生物学分析，**是取样当天，尤其对于已知含生物防腐剂的样品。因此，建议从样品采集到制备好浓缩样的间隔**为2d，不应超过5d，最长不超过14d。 3、样品运输 样品应在6-18℃条件下被运输，应避免热和光照，**在1d内，不超过2d将样品送到指定实验室。 三、制样 如果液体样品军团菌的数量估计超过105CFU/L，可以采用直接平板法，即直接涂布于GVPC平板。为了确保低于这个数量样品中军团菌的检测，需采用浓缩技术。为了浓缩水样，可采用膜过滤法或离心法。 1、膜过滤法 如果样品是浑浊的、乳浊的或有颜色的，应采用离心法。 采用膜过滤装置进行膜过滤，采用直径47-147mm，孔径0.22μm和0.45μm的膜。过滤后的膜应放置在带盖的无菌容器中，可用无菌剪刀剪碎，加5ml-25ml的无菌稀释液或无菌去离子水，不断摇动至少2min。也可将容器放入超声波中2-10min。 2、离心法 取200ml样品于300-500ml容积的离心瓶中，6000g离心10min或3000g离心30min，保持温度在15-25℃，弃去上清液，将沉淀物悬浮在2-20ml无菌稀释液或无菌去离子水中。 四、培养 1、将制备好的样
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