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控制微环境氧含量是研究干细胞的一个重要基础
作者：德尔塔 日期：2022-04-20
2017年12月巴黎七大的Adrien Moya 博士在Stem Cell上发表文章研究人源骨髓间充质干细胞的糖代谢研究，来分析在组织工程中应用MSCs从体外移植入人体内的存活率极低的情况。 文章中指出，人骨髓间充质干细胞（MSCs）是组织工程中很理想的选择。然而，因为它的存活率很低，限制了在**上的效果。研究者发现，hMSCs在体内真实环境更接近于缺氧（0.1%O2）而不是体外的低氧环境（1%-5% O2）。在这种缺氧的环境下，hMSCs无法适应在没有外源葡萄糖存在的情况下，只能控制很有限的内部葡萄糖储备和基本为零的ATP储量。在这种外源葡萄糖水平极低的情况下，因为缺乏下调能量翻转的机制导致hMSCs能量储量的快速耗尽，直接导致其极低的存活率。 低于0.1%的氧气条件呈现了体内移植后的环境 哺乳组织行使功能的氧气浓度是2%-10%左右。比如在骨髓中MSC（间充质干细胞）微环境（niche）中的氧气浓度是2%-8%。氧气含量在提供人骨髓间充质干细胞（hMSCs）稳态的能量需求，存活以及移植之后最终行驶功能的过程中，扮演着极其重要的角色。但是， hMSCs在组织工程中的应用，特别是移植后早期在体内的氧气浓度需求还不清楚。 本研究中，首次将hMSCs种在组织工程的载体上面，并保持氧气含量在0.13%±0.06% 长达24h。该氧气浓度比小鼠在体的软组织局部缺血的浓度更低，人类肿瘤的微环境的氧气浓度是0.3%至4.2%。对于这种极低浓度的耗氧量的解释，是在移植后早期阶段，hMSCs微环境基本没有血液供给氧气。 想精确地研究细胞在活体内的氧气浓度，是非常具有挑战性的。本文作者尝试通过建立一种缺氧生物标记的表达，研究氧气浓度在21%至0.1%的范围内，hMSCs的生长情况。发现0.1%的氧气含量最能反映hMSCs在活体内的真实状态。在这种条件下，移植之后的细胞，显现出线粒体活性的高度抑制。在体外实验中，0.1%的氧气浓度是唯一可以诱导缺氧标记物表达，并显著下调线粒体活性。研究结果表明，0.1%的氧气含量**地反应出hMSCs在活体状态下在组织工程构建
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ThermoInspector红外热成像监测方案
作者：德尔塔 日期：2022-04-20
1 方案简介 ThermoInspector是用于热监控、分析和评估的自动化检测系统。可用于材料（如塑料、金属等）、生物、化学过程等及相应制造业等领域的工控、安防、质量控制监测和过程监测控制，如焊接、加热、冷却、锻接、生物发酵等，可实时测量，记录和评估热信息，并与现有的机器控制系统和PLC配合使用。 ThermoInspector系统包含一个中央处理单元，同时可支持多达4台热像仪。所有热像仪均采用高灵敏度（优于0.03℃）红外热传感器，温度测量范围可达﹢2000℃。正由于这些非凡的特性，它可以连续测量和评估被测产品表面的热场，无论是塑料、金属还是生物材料。因此，本系统可以检查热特性，例如热梯度，最高或最低温度，以及评估温度沿热断面的分散情况，检查所选区域中温度上升的速度。 每个ThermoInspector系统均支持多相机热辐射测量、相机控制、调色板设置、温度范围设置，和定义其他更多功能。用户可选择不同分辨率相机：640×512、336×256、160×128，也可选择不同焦距镜头。 2 主要技术特点 n 全套完整红外热成像视觉方案 n LWIR640px、336px、160px分辨率可选 n 即插即用式安装和简易设置 n 强大的全屏可视化操作 n 图形、表格、统计数据、OK/NOK指示灯 n 8x数字输入输出接口，4x以太网端口 n 通过以太网线和24V直流电供电 n IP65防护等级和触摸屏保护 n 温度范围-25°C～150°C, -40°C °C～550°C，最高可选2000°C 3 两种强大的中央处理单元 3.1 触摸屏中央控制单元 n 工业化一体机解决方案 n 前面板IP65防护等级 n 快速简易安装 n VESA接口 n 全HD触摸屏显 n 4路PoE以太网端口 n 报警数字输出 n 独立输入触发器 n 24V DC输入电源 n 为PLC额外提供2路以太网口 n 串行通信 3.2 无源中央控制器 ThermoInspector中央控制器使用无源控制器版本节省尺寸和成本，并采用与触摸屏类型相同的性能和接口。用户可以使用带键盘的全高清液晶显示器进行系统配置集成。尺寸仅有26×22×8
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FAO通路通过抑制失巢凋亡促进结肠直肠癌细胞远端转移
作者：德尔塔 日期：2022-04-20
中山大学附属肿瘤医院肿瘤研究所徐瑞华教授长期从事消化道肿瘤个体化**及抗癌药物研究。该课题组利用NuRNA™ Human Central Metabolism PCR Array研究发现在非贴壁的结直肠癌细胞中，脂肪酸氧化（FAO）通路被激活。而在转移的肿瘤中，CPT1A表达上调，由CPT1A介导的FAO通路激活，通过调控氧化还原稳态抑制其失巢凋亡，促进非粘附的CRC细胞增殖存活。该研究成果发表在学术期刊Oncogene（IF:6.854）。 研究背景 结直肠癌（CRC）是最常见的肠胃肿瘤，由于其容易发生远端转移，使之成为肿瘤相关死亡的主要原因。远端转移是一个复杂的过程，具有侵袭性的癌细胞从原发肿瘤中脱离，进入血液和淋巴管，只有其中一些细胞可以从血管渗出，并定居在新的器官，形成远端转移。转移过程中大部分细胞，由于脱离原发灶，失去与胞外基质的粘附，导致细胞失巢凋亡。 FAO也称为β-氧化，是脂肪酸分解产生乙酰辅酶A的过程，同时生成ATP，NADPH，MADH和FADH2。肉毒碱棕榈酰转移酶1A（CPT1A）定位在线粒体膜上，是FAO中最主要的限速酶。已有文章报道，CPT1A与多种肿瘤进程相关。考虑到FAO参与了非粘附肿瘤细胞的代谢过程，作者猜测CPT1A在肿瘤细胞能量代谢调节和转移抑制中会是好的靶标。 研究思路： 该研究着重于CPT1A介导的FAO通路激活，通过维持氧化还原稳态，保护结直肠癌细胞免受失巢凋亡的影响。作者运用NuRNA™ Human Central Metabolism PCR Array分析了超低粘附生长的及正常贴壁生长的HCT15和HCT116两种细胞中代谢相关基因的表达。基因富集分析结果显示，两种细胞中FAO通路被明显激活。由于CPT1A是FAO通路的关键基因，作者因此集中于研究CPT1A在CRC转移中的作用。qRT-PCR结果显示，在悬浮的CRC细胞中，FAO通路中的关键基因明显上调。其后作者分析了临床病人中原位肿瘤和转移灶的样本，发现CPT1A在转移灶中表达上调。 为了进一步研究CPT1A在非粘附CRC细胞中的功能，作者建立了CPT1A敲低的稳定株，发现在细胞非粘附生长
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老药新用研发思路与高内涵成像应用于中药筛选
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
老药新用或将迎来传统中药的春天 中药在我国的应用已有两千多年的历史，在人们防病治病过程中发挥了非常重要的作用。几千年来传统中药主要是直接用原药材或饮片配成复方，由病人自己制备汤剂服用，且此法目前仍在广泛应用。这种传统用药方法的缺点是显而易见的，如服用不方便、疗效不稳定、质量无法控制等。 随着提取技术的发展，出现了一系列的方法可以将中药组份提取出来，检测其功效，并进行纯化，用于治病机理的研究。最成功的例子就是青蒿素，这个被全世界关注的中药提取物，也因此，又一次将中国传统中药推向了世界的舞台，也为药物研究人员另辟蹊径，找到了一条新的药物研发思路⸺老药新用：针对已有中药的药效，研究其组份对**其他疾病的疗效。 灵芝可调节免疫系统，是肿APPLICATION NOTE瘤靶向佐剂；黄芪可**创伤、糖尿病、慢性疲劳；麦冬可滋阴养肺，**呼吸系统疾病。而研究表明从黄芪、灵芝、麦冬等中提取的多糖可诱导巨噬细胞像树突细胞分化，从而达到增强免疫力的功效。巨噬细胞是先天免疫系统中抗原呈递细胞的主要类型之一。作为一种特殊的噬菌细胞，它通过吞噬、抗原提呈、细胞因子分离、激活T、B细胞的适应性免疫应答发挥着重要的宿主防御作用。能够增强免疫力的中药植物有很多，但他们的治病机理却不完全相同，甚至有些有着其他功能，如降糖、降脂等，该如何从大量的天然药物提取物中得到有效成分，并探明机理呢？ 传统的药物研发方法由于速度慢、成本高，很难满足现代药物研究的需要，因此，药物研发的策略变为了对药物库进行全面、系统筛选的研究方式。当然，有一部分原因也是因为技术的进步让大规模的药物筛查成为了可能。这其中就包括能够分辨出各种疾病之间是否存在相似分子作用机制的大数据分析技术，能够据此预测出候选药物分子的计算机模型，以及能够利用各种细胞系进行大规模、高通量药物筛选的新型药筛系统，如高内涵成像分析系统。 图1 利用高内涵成像系统的活细胞追踪功
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原代细胞传代培养
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
细胞培养过程中，传代是非常重要的环节，若操作不当会给细胞带来不可逆转的伤害，原代细胞因其培养难度高且传代次数有限，细胞消化的步骤需要格外细心与谨慎。美国ScienCell公司根据其丰富的原代细胞培养经验，总结出一套细胞消化的方法，有效降低了消化步骤对细胞的操作。现分享给大家： 1. 当细胞达到80-90%融合时需要传代培养。 2. 提前准备好多聚赖氨酸（PLL，货号0403）或纤维粘连蛋白（BPF，货号8248）包被好的培养瓶。 3. 将完全培养基，胰酶/EDTA消化液（T/E，货号0103），胰胰中和液（TNS，货号0113）和不含钙镁离子的DPBS（货号0303）加热至室温。我们不推荐用37度水浴加热试剂和培养基。 4. 用DPBS冲洗细胞。 5. 以T-75培养瓶为例，向培养瓶中加入8mlDPBS，然后加入2ml胰酶/EDTA消化液。轻轻摇动培养瓶保证细胞被胰酶/EDTA消化液完全覆盖。将培养瓶置于37度培养箱1-2分钟直到细胞变圆。在显微镜下观察细胞形态变化。 6. 在消化期间，准备一支50ml离心管加入5ml胎牛血清（FBS，货号0500）。 7. 将胰酶/EDTA消化液从培养瓶中吸出至50ml离心管中（一小部分细胞已消化下来），将培养瓶继续置于37度培养箱中1-2分钟（此时培养瓶中没有液体）。 8. 在孵化结束时，轻轻拍打培养瓶侧面使细胞脱离表面。在显微镜下检查以确保所有细胞已脱离。 9. 向培养瓶中加入5ml胰酶中和液，将消化后的细胞转移至50ml离心管中。再加入5ml胰酶中和液冲洗培养瓶，以保证所有细胞被收集。 10. 在显微镜下观察剩余细胞数量以确定是否收集成功，细胞数量应小于5%。 11. 以1000转/分离心收取的细胞悬液5分钟，然后在培养基中重悬细胞。 12. 细胞计数，然后将细胞以推荐的细胞密度接种在包被好的培养瓶中。 电话+微信13683626447
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小白必看！RNA甲基化整体水平鉴定的方法汇总
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
RNA甲基化（RNA methylation）是一类表观遗传修饰，在已经发现的超过100种不同的RNA化学修饰中，主要有6-甲基腺嘌呤（N6-methyladenosine, m6A）、5-甲基胞嘧啶（C5-methylcytidine, m5C）和1-甲基腺嘌呤（N1-methyladenosine, m1A）。RNA甲基化在调控基因表达、编辑、稳定性及降解等方面扮演重要角色。早在20世纪70年代，人们已经在真核生物的mRNA和lncRNA中发现了m6A修饰。但受制于技术的局限性，无法开展m6A检测尤其是m6A定量分析，甚至是单碱基水平m6A的鉴定。随着高通量测序技术（NGS）的发展以及液相色谱灵敏度的提高，RNA甲基化整体水平的鉴定方法得到了长足的发展。 目前RNA甲基化整体水平的鉴定所用的技术手段包括液相色谱联用（LC-MS）、比色法以及Dot blotting等。下面就分别来介绍目前较为流行的RNA甲基化整体水平的鉴定方法。 图1. RNA甲基化的主要类型 1. LC-MS/MS LC-MS/MS在液相质谱的基础上采用串联质谱，能够获得分子离子峰和碎片离子峰，可对碱基同时进行定性和定量分析。第一步使用TRIzol提取完Total RNA后，对mRNA进行富集并去除rRNA。第二步是在37℃条件下，将200-300 ng mRNA用含有25 mM NaCl和2.5 mM ZnCl2缓冲液的核酸酶P1（2 U）消化2 h，然后加入NH4HCO3（1 M，3 μl）和碱性磷酸酶（0.5 U），37℃再孵育2 h后，将RNA从单链消化成单个碱基。第三步将样品稀释至50 μl并过滤，并将5 μl溶液注入LC-MS/MS中，根据出峰的保留时间面积计算各个碱基的含量。第四步进入质谱串联分析，单个核糖核苷酸会被离子化，同时被打断成五碳糖和嘧啶或嘌呤，在C18柱上通过反相超高效液相色谱分离核苷，使用Agilent 6410 QQQ三重四极杆LC质谱仪以正电喷雾电离模式进行质谱检测，根据出峰的保留时间计算m6A的面积。最后根据m6A和总A的比例就能算出m6A在mRNA上整体的甲基化程度。 图2. LC-MS/MS检测RNA甲基化水平示意图 2.比色法 比色法RNA甲基化整体水平鉴定也是我们云序生物的一款产品。相对于LC-MS/MS较
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沃特世：隐藏在天然草本减肥药里的“非天然威胁”
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
前言： “天然草本”一直是减肥保健食品或膳食补充剂（诸如减肥茶、减肥咖啡）常用的推广亮点，然而随着国家对于保健品产品安全的监管愈发严格，我们时而能看到新闻报道中某某保健品被查出违法添加合成药物的报道。这些案件中，西布曲明是经常出现的违规添加药物。 西布曲明是一种用于肥胖症**的药物，主要是通过降低食欲、诱导发热从而增加能量消耗来实现肥胖症的**。但其副作用较大，可能诱发心脏病，需要专业医生医嘱和指导才能使用。因此，违规将这种药物添加到保健食品中，不仅是一种商业欺诈行为，更会给消费者带来巨大的风险。无论是美国FDA还是中国食药监局，都将西布曲明添加列为天然减肥保健品的重点监测项目。 由于市场上减肥产品品种多、数量大，由此带来的巨大实验室检测量需要一种比传统质谱方法更简便易用的方法来应对。接下来，将介绍一种基于Waters ACQUITY QDa质谱检测器的解决方案。相较于传统仅适用UV检测，该检测器对复杂样品的选择性更高，并且可提高分析的可信度，尤其适合分析无紫外吸收能力或紫外吸收较弱的化合物，省去衍生化处理，直接进行测定。同时，相较于传统质谱系统，QDa检测器使用简便，易于操作，能满足大批量的检测需求。 解决方案： 薄层色谱(TLC)是一种分析级分离技术，其样品分离过程发生在位于载体(如玻璃或塑料)上的开放式固定相上。高性能TLC (HPTLC)是一种定量分析技术，能够以半自动或全自动方式进行点样、板展开和分析。我们将TLC板直接连接到质谱检测器离子源入口，以使用ACQUITY QDa对TLC分离的化合物进行确认。称取200 mg“生源坊”减肥产品(天然草本产品)的胶囊内容物并溶解于10 mL甲醇中。涡旋混合30 s使样品均质化，然后在室温下置于超声水浴中提取10 min。在25 °C下以2750 RCF离心10 min，收集上清液用作检测溶液。 用甲醇将购自Fluorochem(英国德比郡)的西布曲明参比物质配制成0.785 mg/mL 的溶液。利用TLC自动进样器4将5 µL样品和2 µL标准品点样到HPTLC Si 60
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离心机及其转子的种类，你了解多少
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
离心机是生物学实验中必不可少的仪器，看似通用的仪器，却是有许多学问的，实验操作中我们需要了解离心机知识，能够合理利用它而更稳定地为我们的实验服务。 离心机作为一种实验室通用仪器，几乎每个实验室都会配置一到两台甚至数台。大家对其并不陌生，我们整理了一些关于离心机及其转子种类的资料分享给大家。 一、离心技术的基本原理 1、离心力（force, F） F = m * a = m * ω2r2 a：粒子旋转的加速度 m：粒子的有效质量，g为单位 ω：粒子旋转的角速度，弧度/s为单位 r：粒子的旋转半径，cm为单位 2、相对离心力（relative centrifuge force, RCF） 通常离心力常用地球引力（g）的倍数来表示，因而称为相对离心力（RCF）。常用数字×g来表示，例如13000g表示相对离心力为13000。相对离心力指在离心场中，作用与颗粒的离心力相当于地球重力的倍数，单位是重力加速度g（980cm/s2）。 RCF = ma/mg = mω2r2/mg = ω2r2/g ∵ω = 2π× （rpm）/60 ∴RCF = 1.119 × 10-5 × （rpm）2r rpm：revolutions per minute为每分钟转数 由上式可知，只要给出旋转半径r，则RCF和rpm之间可以相互换算。 由于转头的形状及结构的差异，每台离心机的离心管从管口至管底的各点与旋转轴之间的距离是不一样的，所以在计算时规定旋转半径均用平均半径rav代替，即最大半径rmax和最小半径rmin的平均值。 一般，低速离心时常以转速rpm来表示，高速离心时则以g表示。报告离心条件时使用RCF比rpm要科学，因为它可以真实地反映颗粒在离心管内不同位置的离心力及其动态变化。 WIGGENS离心机均有RPM和RCF双显示功能，操作者可以一目了然的看到转速和离心力。 二、离心机的种类 离心机按用途分为工业用离心机和实验用离心机。后者根据功能又分为制备性离心机和分析性离心机。制备性离心机一般用来分离各种生物材料，分离的样品量比较大，也是大多数科研实验室配备的离心机种类。分析性离心机常用来研究纯的生物大分子和颗粒的理化性质，一般有光学
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DNA图谱中的峰信号，究竟受到哪些因素的影响？
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
谈论混合DNA图谱分型技术 DNA图谱中的峰信号，究竟受到哪些因素的影响？ 1. PCR扩增效率（Amplification efficiency）； 2. 模板量(Template)； 3. 降解系数(Degradation)； 4. 扩增子的分子量(molecular weight)； 5. 等位基因类型（Heterozygote or Homozygote）； 6. 位点特异性（Locus）； 假设有如下图谱，贡献者为2，实际分型如下表 如果不考虑其他因素，分型的图谱应该如下： 1. 模板量：contributor 1>contributor 2 2. 降解因素：contributor 1> contributor 2 3. 扩增效率：Locus2 > Locus 1 4. Stutter 5. 模拟结果 STRmix生物模型考虑到了所有相关因素： 如何将生物模型应用在图谱的拆分中？ MCMC（马尔科夫链-蒙特卡罗算法）产生于19世纪50年代早期，是在贝叶斯理论框架下，通过计算机进行模拟的蒙特卡洛方法。 蒙特卡洛方法的实质是通过大量随机试验，利用概率论解决问题的一种数值方法。马尔科夫链是指生成随机数列的一种方法。 MCMC是一种简单有效的计算方法，在很多领域到广泛的应用，如统计生物学、贝叶斯(Bayes)问题、计算机问题等。 MCMC通过将随机生成的数值与之前的数值进行比较，通过检测是否与正确值更接近，来判断下一步是接受还是重新生成一个随机值，循环往复，最终找到最接近正确值的区域。云算GPM系统将这个过程分为两个部分，pre-burn in 和post-burn in 分别计算10万次和5万次，最终找到正确的解释。 MCMC结合系统的生物模型，具体的工作方式如下： 目前云算GPM DNA混合图谱分析系统的客户数量已经近100个，主要分布在北美、欧洲，成为目前最受欢迎的混合图谱分析系统之一。
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脐静脉内皮细胞相关实验应注意哪些事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
脐静脉内皮细胞作为科研工作者很多相关实验要用到的产品在近年来受到了市场的热烈追捧。而进行相关实验的前期准备和对脐静脉内皮细胞产品的选择及处理都是尤为重要的，这需要消费者在各个方面都要做到谨慎而严密。下面小编就为各位介绍一下脐静脉内皮细胞相关实验应注意哪些事项。 一、注意做好实验前准备 科研工作者在做脐静脉内皮细胞相关实验的时候应该做好充分的实验前准备，这要求实验者拥有专业的实验室和合格的实验环境以及专业的实验设备，这些条件的满足是保证消费者的相关实验得到**结果的前提条件。 二、选择质量过硬的脐静脉内皮细胞 众所周知脐静脉内皮细胞是一种需要专业培育和严格技术把关的实验性产品，品质好纯度越高的脐静脉内皮细胞在进行实验的时候能够获得越好的试验效果和反馈。所以消费者们在进行相关实验的时候应该选择专业的脐静脉内皮细胞公司所培育的产品，其品质更可靠稳定。 三、注意脐静脉内皮细胞的保存 同时脐静脉内皮细胞作为专业的实验产物在运输和保存方面也要做到周全严密，一般情况下脐静脉内皮细胞都是通过干冰保存运输到消费者的手中的，消费者要注意在收到产品之后应该将脐静脉内皮细胞放入质量较好的液氮中保存，避免环境其他物质对其产生破坏而影响实验效果。 可见人们在进行专业而受欢迎的脐静脉内皮细胞相关实验的时候，首先应该针对脐静脉内皮细胞做好充分而专业的实验前准备，同时选择质量过硬的脐静脉内皮细胞并注意按照专业要求对其进行液氮保存，这样才能从实验体和实验流程上都充分保障最终的实验效果。电话13683626447
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2×CTAB提取缓冲液说明书
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
2×CTAB提取缓冲液 ● 产品编号及规格： 货号 名称 规格 贮存 RTG2405-01 2×CTAB提取缓冲液 200 ml RT RTG2405-02 还原剂 1 ml RT 说明书 一份 ● 产品介绍： CTAB (hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵)，是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl) CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物而不沉淀核酸。通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。 2×CTAB提取缓冲液成分：2%(w/v)CTAB，100mM Tris (pH 8.0)，20mM EDTA,1.4 MNaCl,，0.2%(v/v) 还原剂(随用随加) 。 ● 储存条件： 室温贮存一年。加入还原剂后4℃贮存。 ● 实验操作步骤： 1. 2×即用型CTAB提取液配制： 按照终浓度0.2% （v/v）加入还原剂，如100ml 2×CTAB提取缓冲液中加入0.2 ml 还原剂。加入还原剂后的2×即用型CTAB提取液4℃贮存。 2. 取0.2-0.5克新鲜植物材料，于液氮中研磨成粉末。 3. 将粉末转入预冷的1.5ml离心管中，立即加入0.7 ml 2×即用型CTAB提取缓冲液，65℃水浴30分钟，间歇混匀。 4. 加入等体积的酚：氯仿：异戊醇(25:24:1)，轻缓颠倒离心管混匀8-10次，常温12000 rpm 离心10分钟。 5. 将上清液转入另一1.5ml离心管中，加入等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)，颠倒离心管混匀8-10次，常温12000 rpm离心10分钟。 6. 将上层水相转入新的1.5 ml离心管中，加入0.6倍体积的冰冷异丙醇，轻柔混匀，冰浴30分钟。 7. 12000 rpm4℃ 离心10分钟。 8. 去上清液, 加入1ml 70%乙醇漂洗沉淀，4℃12000 rpm 3分钟，吸弃乙醇。 9.4℃ 12000 rpm 1分钟，用移液器吸尽残余乙醇，超净台吹干沉淀
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肠道微生物影响多发性硬化症小鼠脑内免疫细胞活性
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
根据本周《自然》在线发表的一项研究 Microglial control of astrocytes in response to microbial metabolites，肠道微生物组的变化改变了实验形多发性硬化症（MS）小鼠的脑内免疫细胞的活性。这项研究扩大了我们对肠道和脑之间的相互作用的理解，或有助于开发针对多发性硬化症和其它神经疾病的新疗法。 大脑中免疫细胞的远距离调控。 Hartmut Wekerle 在多发性硬化症中，大脑通常静默的免疫系统被唤醒，非神经元细胞 （小神经胶质细胞和星形胶质细胞） 被激活。美国哈佛医学院的 Francisco Quintana 及同事展示了在多发性硬化症小鼠模型中，由肠道细菌产生的膳食色氨酸的代谢物如何抑制这两种类型细胞的促炎症活性。对多发性硬化症脑组织的进一步研究表明，人脑内也存在类似的机制。 脑脊髓炎期间芳烃受体限制小胶质细胞促炎性转录反应。 Rothhammer et al. 当膳食色氨酸的代谢物结合到细胞表面的特定受体时，这些免疫细胞的活性会发生改变。相同的受体也会结合其它天然存在的化合物，包括来自植物 （如花椰菜） 的衍生物。或许有一天，靶向相关分子路径成分的疗法被证明有助于**多发性硬化症，不过该研究也表明通过肠道或可以间接抑制炎症性脑疾病。
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储存培养基注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
培养基的配置以及生产都是经过层层把关才得到的心血，对于专业、一流的科研人员来说，培养基的贮存对于诸如培养基的服务怎么样之类的评估有着不言而喻的意义。倘若有口碑的培养基因为未能得到妥善的保管而功亏一篑，势必是十分痛心疾首的一件事。以下是结合权威的实验人员的实战经验，总结出的培养基的贮存注意事项。 贮存培养基的注意事项有哪些 第一：创造独特的保存条件 品质一流而有口碑的培养基标签上应标有：失效期及培养基的有关特性，生产商、使用者结合自己的情况，创造出独特的保存条件。除此之外，其所采用的运输条件也需要控制到最低限度的失去水分并提供机械保护。 第二：调整可靠而适宜的温度 培养基灭菌后若储藏在高压灭菌器中，质量可能会受影响，大多数资深的实验室不提倡这种存放法。举个例子：琼脂培养基不得在零度或零度以下存放，因为冷冻可能破坏凝胶特性。 第三：营造优质的避光密封环境 培养基应避光保存，若要长期保存，应置于密闭容器中以防止水分流失。琼脂平板是比较适合现配现用，当然，也可以放进冰箱冷柜保存，通常放置的时间在一周以内。若延长保存，保存期需经验证确定。 第四：做好科学的防污措施 固体培养基灭菌后的再融化只允许一次，以避免因过度受热造成培养基质量下降或微生物污染。培养基的再融化一般采用的水浴加热或流通蒸汽。使用过的培养基（包括失效的培养基）应按照国家污染废物处理相关规定进行处理。 综上所述，培养基的贮存作为实验室一个十分容易被人忽视的环节，是由许多值得留意的细节。经验风度的资深学者对于这个步骤的重要性有着清晰的认识，希望广大的科研人员本着严谨务实的态度，做好贮存的四个方面，为科研事业做出自己独到的贡献。
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Cell:如何利用胃癌病人细胞建立类器官库及研究胃癌发生分子机制
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
胃癌是我国的主要癌症之一，每年有数十万人因胃癌而死亡。尽管肿瘤研究快速发展，胃癌研究却相对滞后，原因是没有合适的研究模型。 2018年8月9日最顶级杂志《Cell》发表了来自于日本庆应大学医学院，日本大冢制药，日本国立癌症研究中心医院的文章，Divergent Routes toward Wnt and R-spondin Niche Independency during Human Gastric Carcinogenesis，作者使用外科切除，内镜活检，腹水收集等不同方式获取的胃癌病人细胞样本，通过组织培养的方式建立37例胃癌病人类器官，用于进行胃癌研究。其中包括罕见的基因稳定的胃癌样本。 作者使用病人细胞建立胃癌类器官，并分析其分子特征 为了进一步研究胃癌中的基因型-表型相关性，作者将重点放在生态位因子依赖与基因突变之间的关系上。作者发现ERBB3或PTEN突变的胃癌类器官仍然依赖生长因子EGF和FGF，但ERBB2或ERBB3扩增的胃癌类器官不再依赖EGF和FGF。作者将37例胃癌类器官分为EGF 依赖，非依赖，及EGFR抑制剂抵抗等类别。因为来源于胃癌病人类器官样本极其珍贵，作者选择使用ProteinSimple Wes基于毛细管电泳的超微量样品western blot技术进行ERK及其磷酸化检测，以反映对于EGF的依赖性。 WNT通路方面，胃癌类器官研究发现肿瘤通过多种途径激活WNT通路：WNT自分泌、AXIN2（WNT靶基因）过表达、APC突变或缺失、RNF43或ZNRF3缺失（RNF43和ZNRF3范素化降解WNT受体LRP和Frizzled）、R-spondin自分泌（R-spondin结合并稳定WNT受体LRP和Frizzled）。 在WntCA 胃癌类器官中，有4例含有双等位基因APC突变或缺失。虽然作者不能检测到其他两例WntCA 胃癌类器官APC基因改变，但Wes毛细管免疫分析显示APC蛋白丢失。 该研究单位 2018年3月份在cell出版集团另外一个顶级期刊《Cell Stem Cell》发表了胰腺癌类器官的重要研究结果，Human Pancreatic Tumor Organoids Reveal Loss of Stem Cell Niche Factor Dependence during Disease Progression。
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非损伤微测技术NMT应用于组织3D模型研究
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
3D组织NMT研究：下一个科研热点？ 作者：许越 笔者以前介绍过，NMT：非损伤微测技术具有三维立体的活体组织生理功能研究能力，而且非常简便快速。 生命是3D的，现在又有了3D数据！但您知道如何使用它们吗？ 揭秘！NMT如何获取3D数据 为有勇气敢于尝试新技术的中国科研人员提供了宝贵的创新机遇。 活体组织Ca2+流3D检测 尽管NMT的3D功能技术发展远远超前于科学界多年，但进入2018年，世界范围内的生命科学工作者，尤其是动物医学研究人员，不约而同地把各自的研究兴趣放到了人体/动物活体组织的三维（3D)立体研究上。 笔者发现，仅就美国化学社团（American Chemical Society：ACS）今年就连发了两篇相关文章。 其中一篇基于组织工程的三维（3D）模具不仅可以模拟体内组织，而且具备一些传统二维（2D）培养没有的几个优势。其中最大的优势就是在3D模型条件下，提供了过去从未能够研究过的，相关基因表达转录后的微调信号及其网络。在这项研究中，通过使用新一代测序（NGS）来分析在3D支架上培养的MDA-MB-231乳腺癌细胞中转录后调节的变化，确定了几种关键的miRNA-mRNA相互作用，这些相互作用可能有助于预判乳腺癌的转移。 另一篇是骨癌生物3D模型的建立，该模型为研究接近体内环境条件下，过去通常因为过于复杂而无法研究的细胞互作或蛋白质互作提供了可能。这篇综述还深入描述了组织工程3D骨骼和癌症模型，并与2D模型进行了比较。描述了使用的生物材料和细胞类型，并且提出了组织工程化骨癌模型领域的未来方向。 2015年的ACS得的一篇文章则是一种三维（3D）支架系统的研发，它可以更好地模拟乳腺肿瘤的立体形貌和机械特性，从而在体外重建肿瘤微环境以研究乳腺癌转移。比较基因表达分析显示，与在常规2D组织培养聚苯乙烯中生长的细胞相比，在3D支架中生长的细胞表达与转移的三个主要事件（即，起始，进展和位点特异性定植）相关的基因水平均有所增加，说明该系统可作为一个综合的体外
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