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高效液相色谱串联质谱法测定奶粉中的双氰胺
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
高效液相色谱串联质谱法测定奶粉中的双氰胺 周 亮 1. 引言 双氰胺又名二氰二氨，缩写DICY 或DCD。是氰胺的二聚体，也是胍的氰基衍生物。白色结晶粉末，可溶于水、醇、乙二醇和二甲基甲酰胺，几乎不溶于醚和苯。干燥时稳定。双氰胺化肥，双氰胺复合肥料可控制硝化菌的活动，使氮肥在土壤中的转化速度得到调节，减少氮的损失，提高肥料的使用效率。农民普遍会在牧场使用双氰胺，目的是防止硝酸盐等对人体有害的肥料副产品流入河流或湖泊。新西兰的奶牛养殖是采取放养的方式，如果草木干旱，奶农往往会使用一些肥料增强草木的抗旱性以及肥力，这就造成了污染。而由于新西兰国内注重环保，因此使用双氰胺对草木中的有害物质进行中和，这就导致了残留的药品流入奶牛体内，造成奶品的污染。2013年1 月25 日，新西兰牛奶中发现了有害物质—双氰胺。虽然国际标准未对食品中的双氰胺限量，但高剂量的双氰胺对人体是有毒的。 奶粉中双氰胺的LCMSMS 检测的难点在于：首先双氰胺本身的分子量很小，极性很大，一般的C18 柱保留不住，其次婴幼儿奶粉的基质非常复杂，含有大量糖类和蛋白质，必须有合适的前处理方法以获得更好的净化效果。本实验选用Thermo Scientific Syncronis HILIC色谱柱配合Hypercarb 净化柱，建立了双氰胺LCMSMS的检测方法，结果显示该方法具有灵敏度高，重现性较好等特点。 2. 实验部分 2.1 仪器与试剂： TSQ Quantum Ultra 三重四极杆串联质谱仪（Thermo Fisher Scientific 公司），配置有电喷雾电离源（ESI）；Dionex Ultimate 3000 RSLC 超高压液相色谱 标准品：双氰胺纯度大于98％，内标双氰胺-15N4 纯度为95％。用乙腈溶解并配制成1.0 mg/mL 标准储备液，再根据需要稀释成适当含量的混合标准工作液。其他试剂均为HPLC 色谱纯。 表1. 液相梯度 时间/min 水(含0.5mM NH4Ac, pH=4.0) 乙腈 流速/μL/min 0.00 5 95 300 4.00 5 95 300 4.50 50 50 300 8.50 50 5
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高效液相色谱串联质谱法测定血浆中的替加环素
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
高效液相色谱串联质谱法测定血浆中的替加环素 周 亮 1.引言 替加环素（Tigecycline）又名9- 叔丁基甘氨酰胺基米诺环素、丁甘米诺环素，是首个被批准用于临床的静脉内给药的甘氨酰四环素类抗生素，具有超广谱的抗菌活性，包括革兰氏阳性和革兰氏阴性的好氧菌及厌氧菌等临床分离的重要致病菌。替加环素的作用机制与四环素类抗生素相似，都是通过与细菌30S 核糖体结合，阻止转移RNA的进入，使得氨基酸无法结合成肽链，最终起到阻断细菌蛋白质合成，限制细菌生长的作用。替加环素能够克服或限制细菌的外排泵和核糖体保护两种耐药机制的作用，不易产生耐药性，其广泛的组织分布和较长的清除半衰期的药动学性质令人乐观；同时对于肾功能紊乱及需进行血液透析的患者，不必进行剂量和时间上的调整。2005 年6 月美国FDA 批准用于成人复杂皮肤及软组织感染和成人复杂的腹内感染，但在国内尚处于临床研究、申报生产阶段。 本实验建立了测定血浆中替加环素的LCMSMS 方法，采用适当的样品前处理方法，血浆中的杂质不干扰样品的测定，具有灵敏度高，重现性较好等特点。 2．实验部分 2.1 仪器与试剂： TSQ Vantage 三重四极杆串联质谱仪（Thermo Fisher Scientific 公司），配置有电喷雾电离源（ESI）；Dionex Ultimate 3000 RSLC 超高压液相色谱。 标准品：替加环素和内标盐酸四环素纯度均大于98％，信息见表1。用甲醇溶解并配制成1.0 mg/mL 标准储备液，再根据需要稀释成适当浓度的混合标准工作液。其他试剂均为HPLC 色谱纯。 表1. 待测化合物信息 2.2 仪器方法： 2.2.1 液相条件： 色谱柱：Hypersil GOLD C18，100mm×2.1mm； 梯度洗脱程序见表2，进样量5μL。 表2. 液相色谱梯度条件 时间/min 水(0.2%甲酸+5mM甲酸铵) 乙腈 流速/μL/min 0.00 95 5 400 3.00 20 80 400 3.50 20 80 400 3.60 95 5 400 5.00 95 5 400 2.2.2 质谱条件： 电喷雾电离源（ESI），正离子模式；选择反
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应用三重四极杆GC-MS/MS同时筛查食品中的600多种农药残留
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
概述 目的：介绍两种一针进样进行目标化合物和非目标化合物筛查的方法 方法：应用选择反应监测（SRM）模式，或应用选择反应监测/全扫描（SRM/FS）交替扫描模式进行600种农残的筛查分析 结论：两种方法均可以应用于目标化合物和非目标化合物筛查，灵敏度损失小 引言 由于高灵敏度 GC-MS 的出现，使得农残检测中大部分化合物的分析都可以采用统一的样品前处理方法，因而可以将不同基质中不同化合物的检测整合到一个方法中，并且一针进样检测的化合物数量越来越多。GC-MS 非常适合各种基质样品中多种残留物的分析。但是，随着目标化合物数量增多，方法优化变得更加复杂，分析性能会变差。而且，人们希望能够拓展有潜在危害的食品污染物清单。本文介绍了一种灵活的仪器分析方法和数据处理软件，能够通过优化MS 分析过程来减少分析性能的损失，使 GC-MS/MS 能应用于分析样品中的 600 种农残。本文还讨论了通过选择反应监测 / 全扫描（SRM/FS）交替扫描模式进行目标化合物的定量及未知化合物的定性分析。 方法 1——600 种农残的筛查分析 样品制备 从本地商店里购买莴苣样品，用QuEChERS方法进行萃取和净化后，再用1:1的乙酸乙酯/环乙烷进行提取，之后，将5 ml的提取液溶剂置换为9:1的己烷：乙腈溶剂，且定容至1ml，最后向浓缩的空白基质中加入多种标准品的混合标样。 气相色谱条件 Thermo Scientific 的TRACE 1310 GC 配置有一个SSL和一个PTV进样口，使用PTV进样口进样，进样量1µL。系统使用一个Siltek惰性衬管（Thermo Scientific产品号 453T2120），键合5%联苯95%二甲基聚硅氧烷为固定相的毛细管色谱柱（30 m x 0.25 mm 0.25 µm）。表1为PTV进样口和柱温箱参数。 表1. PTV 和炉温参数 质谱条件 使用Thermo Scientific 的 TSQ 8000 三重四极杆质谱仪分析 600 种化合物，采用 SRM 模式进行目标物检测。首先进行全扫描以确定各化合物的保留时间，然后采用选择反应监测（SRM）模式建立一种定时 SRM 方法，实现一次进样分析
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行星式球磨机进行样品研磨时如何选择合适的球磨罐材质？
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
现在市场上球磨罐按材质可分为不锈钢、刚玉、尼龙、玛瑙、聚氨酯、氧化锆、碳化硅、硬质合金、聚四氟乙烯，按研磨形式可分为立式球磨罐、卧式球磨罐、真空球磨罐，那么我们到底应该如何选择适合球磨罐材质呢？ 选择什么样材质的球磨罐一般主要取决于研磨样品的行政和（包括物理性质和化学性质）出料粒度要求，样品的硬度必须比球磨罐和研磨球的硬度小，球磨罐和研磨球的材质也是如此，所以我们在选择球磨罐和研磨球时**尽量选择相同材质，假如样品硬度比球磨罐和研磨球的硬度大时，那磨耗的就是球磨罐和研磨球了，样品没办法达到粉碎的效果，而且球磨罐和研磨球的磨损会造成样品的污染。研磨球不同物料**选用不同的球磨罐，而不要通用。 常用的不同材质的球磨罐按硬度从高到低依次是碳化硅、氧化锆、玛瑙、刚玉、不锈钢。一般情况下，如金属粉末、矿石等坚硬类样品研制可选择不锈钢球磨罐或是碳钢球磨罐，硬度极大的物料可选用碳化硅球磨罐、玻璃、陶瓷等样品可选用尼龙球磨罐、刚玉球磨罐或氧化锆球磨罐进行研磨球，避免使用金属球磨罐研磨中金属杂质掺杂到样品中污染样品，也防止样品变色情况出现，带有强酸碱性等腐蚀性样品常用聚四氟乙烯球磨罐、PP聚丙烯、超高分子聚乙烯球磨罐可适合食品、医疗、美容行业对样品纯度要求较高的样品研磨应用中。在特殊情况下，某些样品为避免在空气中变质或需要在介质气体中研磨时可用到真空球磨罐进行真空球磨或惰性气体球磨，真空球磨罐一般为304不锈钢材质，或304不锈钢材质内衬其他几种材质，当样品需要使用真空球磨罐研磨但又不能使用不锈钢材质研磨时，可在不锈钢真空球磨罐内衬如尼龙、聚四氟乙烯、聚氨酯、聚丙烯、刚玉、氧化锆、玛瑙、硬质合金等其他材质，避免样品与不锈钢接触的同时也能实现真空球磨和惰性气体球磨。 根据以上原则基本可以帮助您选择一款适合自己使用的球磨罐，当然，因为行星式球磨机应用行业广泛，研磨样品的种类多样，如果您对自己的研磨需求仍然有
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实验室高能球磨机与市场普通球磨机室如何区分的？
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
随着实验室球磨机的种类越来越多，如何选择合适的球磨机成为了一个难题。比如行星式球磨机、实验室滚筒式球磨机、实验室搅拌球磨机、轻型卧式球磨机......一系列实验室球磨机，了解其区别，成了快速选择合适机型的一种方法。 实验室球磨机的区别从研磨方式分为行星式、滚筒式、搅拌式等等，研磨方法有干法研磨和湿法研磨，而普通球磨和高能球磨是以研磨球研磨时对物料作用所蕴含的能量高低来区分的。 目前普通球磨与高能球磨并没有一个相关的标准。如果只以研磨时的转速来鉴定又恨不准确。我们不能说同一台设备，在10r/min时为普通球磨，到100r/min时就变成了高能球磨。 用实验室球磨机中的普通球磨机和高能球磨机来进行对比一下或许更加清楚。滚筒式球磨机就是十分经典的普通球磨机，而行星式球磨机广泛运用于机械合金化等高能球磨法，是十分热门的高能球磨机。同一大小机型，行星式球磨机的最高转速在1000r/min以上，而滚筒式球磨机约在100-200r/min之间，球磨时产生的能量高下立见。 你可能问这不就是转速的区别吗？当然不是，滚筒式球磨机要做到1000r/min很简单，但市场上的机型多在100-200r/min之间，是因为滚筒式球磨机受到临界转速的限制根本用不上这么高的转速，一旦转速产生的离心力超过研磨球所受重力，研磨球就会与球磨罐同时运动，相对静止，研磨完全失效。行星式球磨机则是多种离心力相互作用，行星结构使得多种力得到平衡，始终能够有效研磨，将大部分能量用于球磨作用之中。
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脑胶质瘤研究体内外模型综述
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
胶质瘤是最常见的原发性中枢神经系统肿瘤，约占中枢神经系统肿瘤的40-60%。 恶性胶质瘤是中枢神经系统的顽疾之一，有着预后差、复发率高等特点，现有的**方法如手术、放疗和化疗效果均不满意。近年来随着分子生物学技术的发展，肿瘤的基因**已成为当前神经外科领域的热点课题。子曰：“工欲善其事，必先利其器。”想做好脑胶质瘤的研究，疾病模型和基因操作工具不可或缺。So，想“蹭热点” 的各位“筒子们”赶紧瞪大乃们的眼珠子看过来了，以下内容可助你上天和神州十一号肩并肩。 一、我需要哪种细胞模型？是否易于操作？ 俗话说，实验要想做好，细胞必不可少。细胞模型有三个优点：周期短，背景干净，易出结果，所以一般都作为所有研究的第一步。由于细胞的不同特点，常常导致基因操作的难易程度不一样。慢病毒是一种非常高效的基因操作工具，不仅在细胞系中具有高效的表现，在做体内实验的时候，也会经常使用。那么脑胶质瘤中，有哪些易于操作的细胞模型可供选择呢？下表对一些常用的细胞系做了一个总结，每株细胞都配有吉凯独家的预实验数据哦～ 二、细胞实验效果不错，那动物实验怎么做？ 细胞实验做完，想发高分文章？没有体内实验数据的证实怎么行！脑胶质瘤研究中，增殖方向常用的体内模型为裸鼠皮下成瘤和原位成瘤。 另外，也可通过转基因动物的方式构建自发性脑胶质瘤模型。但转基因动物成本高、周期长，使用具有很大的局限性。今天就给大家介绍的一个厉害的：直接向Cre模型鼠脑部特定区域注射含有loxP位点的原癌基因慢病毒，激活内源性信号通路后导致肿瘤形成。 三、体内外模型选好了，那么我的实验需要使用哪种慢病毒载体对基因进行操作呢？ 问：把基因功能做好，一共分几步？ 答：三步！选模型-基因操作-看表型。 因此，选好模型后，下面需要选择合适的基因操作载体。启动子、荧光标记、抗性标签是我们选择载体需要考虑的三大要素。实验不同，这些元件也需要相应变化。对于脑胶质瘤研究来说，GFAP启动子
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威斯腾详解三代基因编辑技术的原理、优缺点及运用
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
基因编辑技术就像一把手术刀指能够对目标基因进行编辑修改，实现对特定基因片段的敲除、加入等。到目前为止，ZFN（锌指核糖核酸酶），TALENs（转录激活因子样效应物核酸酶）和CRISPR/Cas9这三代技术已经席卷国内外各大实验室？那么他们各有什么优势？他们之间相比又如何呢？小编带着好奇专程采访请教了威斯腾基因编辑团队申总监。 申总监深入浅出地向小编介绍了三代基因编辑技术的原理、优缺点及运用。小编也是生物学专业出身，听得津津有味，乐在其中，决定现学现卖给大家简单介绍一下基因编辑技术的奥妙。 ZFN（锌指核糖核酸酶）作为人工合成的限制性内切酶通过其锌指DNA结合域、DNA切割域发挥作用。研究者通过改造DNA结合域，靶向定位于不同的DNA序列，再由DNA切割域进行特异性切割。此外，ZFN技术还可与细胞内DNA修复机制共同发挥作用，使研究者自如地编辑基因组。ZFN技术的优势在于具有很高的特异性，因而避免了免疫应答，但高度的特异性却带来了另一种弊端，即基因工程化锌指DNA结合蛋白成为了难题，究其原因或许是因为蛋白质本身体积庞大的性质及其环境依赖性结合的属性。另外，ZNF技术易于脱靶，导致细胞死亡或者额外突变。 TALEN为第二代基因组编辑核酸酶。TAL效应因子（TALE）可以特异性结合目的序列，通过将一段人造TALE与FokI核酸酶连接起来，即组成了TALEN，一类具有特异性基因组编辑功能的强大工具。与其它技术相比，TALEN技术很大程度上的地避免了功能蛋白脱靶，因为它们可以高度特异性地结合DNA靶位点，产生的脱靶效应非常微弱。此外与ZFN技术相比，其设计和工程没有那么复杂，也不像ZFN那样容易受周围连接环境绑定的影响。因此TALEN运用起来更简单、构建更便捷，且价格更低廉。但是装配TALEN编码质粒却是一个冗长的、高强度工作的过程。 申总监介绍完前两种技术，开始变得越来越兴奋，原来是要讲他团队的拿手好戏——CRISPR/Cas9系统了。最近几年基因编辑技术CRISPR/Cas9显得异常火爆，自面世以后，弥
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威斯腾分子诊断技术的优势、应用及发展趋势介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
近年来，随着中国医疗不断的改革，人们对自身健康愈加关注都驱动了体外诊断试剂市场的需求，加上国家政策的大力扶持，体外诊断试剂未来将成为并购高发的产业地带。 体外诊断，业内人士俗称其为IVD也就是英文In Vitro Diagnostic。体外诊断产品包括对人体样本（包括体液、细胞、组织样本等）进行收集、制备（定向处理）、检测的试剂仪器及分析系统。通常体外诊断市场主要分为四大类：生化试剂、免疫诊断、分子诊断、即时检验（POCT）。 生化诊断和免疫诊断市场已经趋于饱和，市场占比最小的分子诊断有望迎来高速成长期。 种类 主要用途 特点 发展现状 发展趋势 生化诊断 肝功能、肾功能、糖尿病、高血脂等常规项目 技术壁垒低，简单快捷成本低 起步最早，大小厂商多，试剂国产化率≥2/3，高端仪器由外企主导 市场增速放缓，整顿力度加大，市场集中度提升 免疫诊断 肝炎、性病、肿瘤、代谢、心血管疾病、传染病、孕检等 灵敏度较高，发展成熟 市场占比最大，发展快速，化学发光与酶免并存，高端市场由外企主导 保持主流地位，化学发光取代酶免，国产品牌技术升级 分子诊断 传染病、性病、艾滋病、遗传病等筛检、个体化诊疗，药物**监测等 灵敏准确，检测通量较高，技术要求更高 起步晚，增速最快，核心技术由国外掌握，国内企业扩大布局 需求不断释放，保持快速增长，发展受技术和成本限制 什么是分子诊断？ 分子诊断是指应用分子生物学方法检测患者体内遗传物质的结构或表达水平的变化，从而做出诊断的技术，属于体外诊断的方法之一。分子诊断中使用的主要技术包括PCR、芯片、杂交、DNA测序和新一代测序（NGS）。在这些技术中，PCR是最常用的，目前也占据了最大的市场份额，不过，分析预计芯片技术将在五年内以最快的速度增长（PCR的一个缺点就是它看点不看面。一个实验就分析一个基因，可是一个表型可能和许多基因型有关。所以需要高通量芯片技术）。 分子诊断打破了常
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原代细胞培养经典案例和细胞药筛介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
原代细胞培养经典案例 1、淋巴细胞的原代培养 淋巴细胞主要来源：脾脏、外周血 分离方法：Ficoll-hypaque（葡聚糖－泛影葡胺）密度梯度离心法，因为血液中各成分的比重存在差异，因此得以分离。 分离效果：单个核细胞纯度可达95％，淋巴细胞约占90％～95％，细胞获得率可达80％以上，其高低与室温有关，超过25℃时会影响细胞获得率。 步骤： 1）眼球取血，将血液滴入肝素抗凝管中，加入PBS按1：1稀释血液（一般采血管2mL+2mL）。 2）取淋巴细胞分离液2mL于15mL灭菌离心管中待用。 3）吸取稀释血液，在离分层液上方1cm处，沿试管壁徐徐加入，使稀释血液重叠于分层液上，并与分离液形成明显界面。 4）室温，离心2000rpm，20min。此时离心管中形成5层：最上面是血浆，血浆层和淋巴细胞分离液之间是淋巴细胞层呈白膜状。 5）小心吸取中间呈白膜状的淋巴细胞层，尽量全部吸出。加5倍以上体积的PBS洗2次，每次离心1500rpm，10min。 6）去上清液，加入1640培养基1mL混匀，取少量进行细胞计数。 7）用台盼蓝染液检查所分离的细胞活性：活性应在95％以上。 8）接种后培养，条件为37℃、5%CO2、饱和湿度。3d后，每48h添加等体积的新鲜培养基。 淋巴细胞 2、乳鼠心肌细胞的原代培养 原理： 乳鼠心肌细胞属于原代生长细胞。心肌组织中心肌细胞约占50%，非心肌细胞占50%，用酶消化法将心肌组织碎块经纯化分离成单个心肌细胞，用培养基制成心肌细胞悬液，内心肌细胞可达95%，在体外适宜条件下，使心肌细胞生长繁殖，并保留其一定的结构和功能特性。在乳鼠心肌细胞培养实验中能直接观察到培养心肌细胞生命活动的动态过程，还可利用电镜手段、同位素标记、放免法和免疫组化法来研究细胞形态结构及细胞内化学物质的分布。 步骤： 1）新生乳鼠剪开胸，取心尖部位。 2）剔除周围结缔组织，将心脏置于无菌平皿中，将心脏尽量剪碎，平皿内加入适量0.125%的胰酶，在37℃培养箱中，采用分次消化，每次消化5min，一共消化8-10
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甲基化标记物可预测早期肝癌病人术后复发的模型建立方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
研究背景 在全世界分范围内，每年因肝癌死亡的病例超过50万人，是主要的致死恶性肿瘤之一。在过去的十年中，随着影像学的进步以及健康体检的普及，越来越多的肝癌病人在患病早期被发现。但由于肝脏捐赠者的短缺，外科肝脏切除术仍然是**早期肝癌病人的最主要方法。目前对于术后患者缺乏准确预测体系或标志物。本研究建立了一种预测早期肝癌病人术后复发的模型。 研究结果 1. CpG位点选择 研究者首先对66例病人的样本采用450K芯片（该研究中Illumina Methylation 450k Beadchip服务由伯豪生物提供）检测，过滤得到2550个差异CpG位点。随后，研究者为了区分高风险和低风险的病人，采用LASSO和SVM-RFE算法分别得到了30个差异最显著的CpG位点。 2. 探究可预测的标签 通过比较两种算法得到的CpG位点，共筛选出46个不同的CpG位点。通过分析46个位点，把66例样本分成复发和不复发两个亚类。研究者随后采用Cox回归模型在训练组中进一步缩小了病人的甲基化检测位点。结果发现，cg20657849（SCAND3）, cg19406367（SGIP1）, 和 cg19931348（PI3）三个甲基化位点与病人复发高度相关。 随后研究者采用焦磷酸测序技术，分别在训练组和鉴定组中量化这一发现。为了更好的研究这三个CpG位点用来预测肝癌患者复发的准确性，在训练组中设定了一种危险系数评分。 3. 证实这一标签 为了证实这一模型的稳定性，研究者分别在一组内部样本和两组外部样本进行了检测。在内部样本中，该模型成功的分类了68例复发高风险病人，73例低复发风险病人。在外部样本中，同样成功分类了高风险和低风险病人。ROC分析发现，预测模型预测早期肝癌病人复发比三个CpG位点单独检测更有效。 4. 建立可预测的诺模图 为了建立临床上适用的用来预测个体复发的模型，综合考虑了协变量后，研究者用诺模图建立了可以用来预测的模型。研究者生成了一个诺模图预测患者的5年生存率，通过三个校正点的检测均得到理想结果。 本文通过分析早期肝癌患者甲基化芯片
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Cxcl9：骨生成重要调控因子，其表达抑制可作为骨质疏松症新的**策略
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
研究背景 骨髓是高度异质化和血管化的组织，各类型细胞相互交流以保证骨骼正常发育。哺乳动物骨骼发育过程，骨生成与血管生成通过成骨细胞与内皮细胞间的相互交流而密切联系。但参与调节骨生成和血管生成的分子机制及其信号通路尚不明确，因此研究成骨细胞与内皮细胞交流的关键分子尤为重要。来自南方医科大学的研究人员，通过他们的研究，揭示了Cxcl19在其中的重要调控作用。 研究思路 研究结果 1. mTORC1调节骨骼血管生成 研究者观察到mTORC1激活型小鼠△Tsc1的骨呈白色，CD31+Endomucin+血管数量减少，相应的体外实验未观察到细胞巢及短管的形成，而mTORC1缺失型小鼠△Raptor体内外实验显示与上述相反结果，表明mTORC1对骨的血管生成有抑制作用。 2. 成骨细胞产生某种血管生成抑制因子 根据前人报道的mTORC1正调控VEGF，研究人员在△Tsc1小鼠中检测到高表达VEGF，VEGFR2表达量未变但内皮细胞中磷酸化程度低，表明VEGF信号被中断，相应的体外实验中出现类似结果，而△Raptor小鼠体内外实验则显示与上述相反结果，结果揭示成骨细胞可能分泌某种血管生成抑制因子阻断VEGF信号通路的传导。 3. 成骨细胞分泌血管生成抑制因子Cxcl9 全基因组芯片检测（Aglient小鼠表达谱芯片由伯豪生物提供）mTORC1激活/沉默小鼠，结合已报道的Cxcl9调控VEGF信号传导信息，检测到△Tsc1中 Cxcl9基因转录显著上调，进一步分析显示其蛋白翻译及分泌均显著提高。而在△Raptorz中出现相反的结果，结果表明mTORC1正调控Cxcl9的表达及分泌。 4. Cxcl9抑制骨血管生成 研究者用抗Cxcl9抗体处理△Tsc1小鼠，CD31+Endomucin+血管量显著增加，相应的体外实验及SiRNA处理实验均显示血管生成作用增强。△Raptorz小鼠体内外添加Cxcl9实验出现相反结果。CXCR2沉默实验显示，Cxcl9独立于CXCR3行使血管生成抑制作用。VEGF体外标记等实验显示，Cxcl9通过与VEGF作用，抑制其与Ecs的结合，进而阻断VEGF信号的传导。 5. Cxcl9抑制骨生成 研究者为进一步确
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甲基化与lncRNA：表观遗传学与转录组学研究的完美结合
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
2017年国自然申请的热点什么？circRNA，lncRNA，外泌体。除了这些大家耳熟能详的香馍馍之外，现在很多小伙伴们开始了新的玩法，通过多平台联用，将不同层面的东西结合起来，比如，表观遗传与非编码RNA的结合，就是一个很好的例证。 研究背景 肺癌是一种常见的恶性肿瘤，特别在中国，由于环境的污染，肺癌的发生率也在持续升高。非小细胞肺癌（NSCLC）是肺癌中最常见的一种，大约占了肺癌总量的85%，但是，目前我们对于NSCLC的理解还是处于初级阶段。其中，表观遗传学和转录组学的研究为我们理解肿瘤的发生提供了很多的证据。那么，这两个层面的分子又存在什么样的关联呢？本研究从甲基化，lncRNA和基因表达调控的角度出发，为我们理解NSCLC的发生和临床诊断提供了新的靶标。 研究思路 研究结果 1． 鉴定NSCLC特异性lncRNA-mRNA NSCLC在转录组层面，有哪些特异性表达的分子呢？利用转录组表达谱芯片（SBC human lncRNA array伯豪生物提供），研究人员发现有8500个lncRNA和1685个mRNA在癌和癌旁中有显著差异。通过对这些差异基因分析相关性，发现有1345个lncRNA与mRNA存在cis关系，159个lncRNA与mRNA有trans关系。把这些与lncRNA关联的cis mRNA进行IPA功能（IPA分析，详情咨询shbio）分析发现，主要的pathway涉及到肿瘤相关，包括细胞死亡与生存，细胞发育，细胞生长和增殖，表明这些关联的lncRNA可能参与肿瘤发生过程。研究人员把其中的两个lncRNA与mRNA(LOC146880/KPNA2，ENST00000439577/RCC2)作为后期验证的重点。 2. lncRNA与甲基化关联分析 除了转录组层面的变化，表观遗传层面会有什么差异呢？利用甲基化芯片，研究人员发现癌和癌旁共有113644个差异CpG位点。其中，cg12562461位点正好位于LOC146880的启动子区，且在癌组织中甲基化程度低。因此，cg12562461的低甲基化正好与LOC146880的高表达相对应。 3.lncRNA/mRNA与临床指标关联性分析 通过qPCR，研究人员首先在大量样本中（402个癌组织，105个癌旁组织
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退化土壤中微生物类群和功能基因的研究
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
研究背景 土壤退化是一个及其严重的全球问题，长期连作和滥用化肥会造成土质变差。全球范围内，每年约有40%的农业土壤发生严重退化，24%的土壤仍在持续恶化。在中国，农业化肥的滥用导致土壤退化，造成土壤养分失衡、土壤酸化、污染物积累和生物多样性下降等现象。但是关于土壤微生物群落对土壤退化及生态系统功能的反馈机制仍知之甚少。本文通过基因芯片与16S/18S rDNA多样性测序结合的方法研究退化土壤中微生物类群和功能基因的转变。 研究思路 样本的选取 5个正常土壤：烟草生长情况良好，没有病原菌感染的土壤。 5个退化土壤：发生酸化、烟草生长情况不好的被R. solanacearum感染的退化土壤。 选取的土壤深度为0-20cm，分别取自20个样点混合后分成2份，1份用于DNA抽提，1份用于物化指标的测定。 烟草生长120d后，测定株高、茎粗、R. solanacearum感染率及发病程度。 研究结果 1、土壤的物化指标的测定结果发现，退化土壤中的磷含量、pH、尿素酶、蔗糖酶和过氧化氢酶活性显著降低（P
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如何构建肿瘤皮下注射模型？关键三点做到位，肿瘤皮下注射模型so easy!
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
由于更能模拟人类的生理和病理条件，所以在科研上，动物实验获得的结果，比体外实验更具有说服力。在肿瘤增殖方向的研究中，也通常会构建相应的动物模型来开展进一步的研究，皮下注射模型是最常规的方式。 那么如何构建肿瘤皮下注射模型呢？ 关键三点做到位，肿瘤皮下注射模型so easy! 选取什么样的样本进行注射？ 1. 组织块 选择生长良好，无液化坏死的鱼肉状的肿瘤组织块进行接种。这样的肿瘤组织生命力旺盛，活力强。当然，为了保证成功率，接种的时间也很关键，**是切除后1小时内就接种。 组织块一般来源于临床的肿瘤样本，或是在动物体内已经建立的肿瘤模型样本。 临床样本直接进行接种能较好的保持病人肿瘤的特性，因其含有较全的肿瘤生长微环境，可以为临床药物提供最有效的指导；但是其来源比较困难，在动物体内致瘤性也较差。 已经建立肿瘤模型的样本大大提高了其再次成瘤的能力，一个瘤体可以切成十几二十几份进行接种，也很大程度上降低了细胞培养的成本，适合一些成瘤能力较弱的肿瘤细胞。但是它也是需要先通过细胞注射建立肿瘤模型，且由于接种的样本都是靠人工剪切，很难保证接种后成瘤的均一性。 2. 肿瘤组织悬液 选取生长状态良好，活力强的肿瘤组织，加生理盐水或细胞培养液在匀浆器内研磨制成悬液后进行接种。 它一定程度上可以提高成瘤的均一性，但是研磨匀浆的过程容易导致样本活性降低，使其成瘤能力减弱。 3. 肿瘤细胞 取处于生长旺盛的肿瘤细胞进行移植。 肿瘤细胞接种时可以进行细胞计数，可控性较强，均一性也较好。 但是目前常见的一些细胞系的“年龄“较大，大部分都历经了几百上千代的培养，细胞的基因组和行为可能都已发生了改变。 因此，最终可以根据研究课题的实际情况进行合理选择。 要选择什么样的动物进行注射呢？ 1. BALB/c裸鼠：先天性胸腺发育缺陷，无被毛，T细胞功能缺失。其较好的成瘤能力以及无毛便于观察的特性使其成为肿瘤模型中最常用的工具鼠。 2. NOD-
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基于三重四极杆TSQ8000 Evo平台将婴儿食品中的农药残留的分析效率提高三倍
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
Cristian Cojocariu, 1 Michael T. Hetmanski, 2 Paul Silcock, 1 and Richard J. Fussell 2 1 ，英国朗科恩 2 食品与环境研究院（FERA），英国约克 关键词 农药分析，婴儿食品，GC-MS/MS，TraceFinder，食品安全 目的：评估 Thermo Scientific™ TSQ™ 8000 Evo GC-MS/MS 在农药残留分析方面的性能和分析效率。 前言 农药是超过 1000 种不同的化合物的统称，用于控制和消除害虫。目前已有各种严格的法规要求来确保安全有效的使用这些化学品，避免给人类、野生动植物和环境带来不利影响。包括 EU 在内的许多国际机构已经规定了食品和饲料中农药的最大残留限量（MRLs） 1 和痕量水平的农药残留的检测方法。因此，农药的定量分析和准确鉴定需要使用灵敏度高、选择性强和耐用的分析仪器。随着易腐坏商品需要快速分析的压力不断增加，测试周期要求越来越短，高通量的第三方分析实验室在寻求不断提高分析效率。近期以来，通过采用 QuEChERS（快速、简单、便宜、有效、耐用和安全）样品萃取方法与气相或液相色谱（GC 或 LC）质谱（MS）联用技术相结合已经实质性的提高了分析效率。本文报告了通过采用先进快速的 GC-MS/MS 技术与新的软件相结合以减少数据采集和处理的时间，从而进一步提高分析效率。 乙腈是 QuEChERS 常用的萃取溶剂。直接测定乙腈中的农药残留能避免费时费钱的溶剂置换过程。但是乙腈的极性特点会导致色谱峰不集中，而且其高膨胀系数限制了进样体积。 本文采用了一种快速、简单和耐用的工作流程来分析婴儿食品中的农药残留。由于这些化学品更容易损害婴儿的健康，婴儿食品中农药的准确和灵敏的测定、定量和定性鉴定尤其重要。结果显示直接进样小体积的 QuEChERS 提取物，与快速程序升温方法相结合能提高实验室分析效率。本文使用了TSQ 8000 Evo 三重四极杆 GC-MS/MS，其革新的 EvoCell 碰撞腔体技术与 time-SRM 软件的高效选择反应监测相结合使分析效率的提高成为可能。 本文根据 SANCO 标准全面评估了
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