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使用 GC Orbitrap MS 技术进行婴儿食品中农残的快速筛查、鉴定和定量分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
使用 GC Orbitrap MS 技术进行婴儿食品中农残的快速筛查、鉴定和定量分析 Cristian Cojocariu,1 Dominic Roberts,1 Michael T. Hetmanski,2 Richard J. Fussell,2 and Paul Silcock1 1Thermo Fisher Scientific, Runcorn, UK 2Food and Environment Research Agency (FERA), York, UK 关键词 婴儿食品；精确质量；筛查；食品安全；GC Orbitrap；高分辨 GC-MS；农残分析；定量分析；TraceFinder 前言 农药是广泛用于控制虫害的化学物质，可以用于昆虫、植物病害和野草等对农业生产造成危害的生物。农药使用后可能会在作物上残留下来，因此，对这类化合物的使用都会进行严格的监管，以确保残留不会超过规定允许的最大残留水平（MRLs）1。 农药分析大都使用基于液相色谱（LC）和气相色谱（GC）方法进行的。GC与质谱（MS）联用仪被农残检测实验室广泛使用，因为许多农药并不适合用 LC-MS分析，或是在“软”电离的条件下离子化效率不高。GC的分离效率比较好，并且有包括单四极杆或三重四极杆在内的多种质谱检测器可以选择。四极杆质量分析器是一款选择性、灵敏度、经济性都非常好的质量分析器，不过只能达到单位质量分辨率（nominal mass resolution）。当使用四极杆质谱仪时，通过选择离子监测（SIM）或选择反应监测（SRM）即可实现目标农药与化学背景的选择性分离。SIM 和 SRM 皆适用于定靶分析实验，在这类分析中通常会根据一个预先确定好的农药列表对质谱仪进行一些参数设定。这样一来，在分析中就确定了要监测的化合物，从而限制了分析的范围，并对未知及未定靶的化合物产出假阴性（未检出）的结果，进而为食品安全带来隐患。 这一局限性促使科学家和业界人士开始不断努力建立新分析方法，使用能够以全扫模式运行、质量分辨率更高、而选择性和定量表现堪比三重四极杆的质谱分析仪。 到目前为止，高分辨精确质量 GC-MS 仪器尚未被广泛接受，主要因为其全扫选择性和定量表现尚无法与以 SRM 模式运行的三重四极杆
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基于 Orbitrap GC-MS 的非靶向代谢组学
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
基于 Orbitrap GC-MS 的非靶向代谢组学 Stefan Weidt,2 Bogusia Pesko,2 Cristian Cojocariu,1 Paul Silcock,1 Richard J. Burchmore,2 and Karl Burgess2 1Thermo Fisher Scienti_c, Runcorn, UK 2Glasgow Polyomics, University of Glasgow, Glasgow, UK 关键词 法医学；代谢组学；多变量统计分析；Q Exactive GC 系统 引言 代谢组学旨在表征和定量生物系统中的完整小分子代谢通路或代谢物组。代谢物组包含小分子多元混合物（包括氨基酸、糖和磷酸糖、生物胺和脂质）。非靶向代谢组学极具挑战性，因为其要求定性和定量上百个不同种类化合物，而有关这些代谢物的经验知识有限。因此，有必要使用一个既可以以非靶向的方式灵敏检测特定分子，又可以提供精确质量数信息，用于确认未知物并对其进行结构解析的检测系统。 气相色谱质谱联用仪（GC-MS）基于其自身的优点经常用于代谢组学分析，尤其是其色谱分辨率、重现性、峰容量和便于使用的质谱库。GC为非靶向代谢组学中生物标志物的发现提供了卓越的色谱分离能力，但是，由于目前缺乏高端质谱仪的支持，从而限制了提供用于分析复杂样品（例如，哺乳动物的肌肉组织）的动态范围、精确质量数和扫描速度。鉴于大部分重要代谢物的极性特征，必须将其衍生化，以使其有效挥发，从而确保得到良好的色谱分离。代谢组学分析尤其是临床代谢组学要求高通量和先进的自动化技术。 本项研究展示了新型 Thermo Scientific™ Orbitrap™ GC-MS 完整非靶向代谢组学工作流程，检测了大鼠模型中的生物标记物，以判定其死亡时间。死亡时间（PMI）推断是法医调查中一项最关键也是最困难的任务，尤其当尸体温度与周围环境温度达到平衡后。由于当前用于确定 PMI 的方法不精确性且以目视检查尸体为主。因此，建立一种实验方法，使用耐用生物标志物推断死亡时间可辅助法医调查。 该 GC-MS 装置使用基于 Orbitrap 的检测器，得到超高质量数分辨率、亚 ppm 质量数精度、宽动态范围以及一定的
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AutoSRM（全自动SRM 离子对优化软件）--简便易用的SRM 带来表现优秀的结果
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
AutoSRM（全自动SRM 离子对优化软件） 简便易用的SRM 带来表现优秀的结果 概述 在选择反应监测（selected reaction monitoring，SRM) 和多反应监测（multiple reaction monitoring，MRM) 分析中常常是优势与挑战共存 ，尤其是在实验室启用这些方法的时刻。 这些挑战有可能源于质谱仪的方法的设置和优化。那些想要利用MS/MS 优势的实验室必须克服存在于调谐、设置和优化过程中的那些困难和不确定性，才能缩短准备时间， 进入常规分析。Thermo Scientific TSQ 8000 GC-MS/MS 系统在研发时就把易用性作为第一要务。无论您是要从头建立全新的分析方法，或从单四极杆的GC-MS 进行方法转移，还是从另一台仪器导入已知的MRM 方法，TSQTM 8000 GC-MS/MS 系统都会保证您能最快地得到高水平的SRM 结果。 AutoSRM 研究 AutoSRM 包括三个步骤。我们称这些步骤为“ 研究（studies）”： • 第一步: 母离子研究 • 第二步: 子离子研究 • 第三步: SRM 碰撞能量优化 AutoSRM 流程 第一步：从全扫谱中选择您的母离子 第二步：从产物离子扫描谱中选择您的子离子 第三步：为选定的离子对优化碰撞能 图1. AutoSRM 可以从头创建SRM 方法。AutoSRM 也可以用于 SIM 方法开发和优化已有的SRM 方法 ( 例如换一种新的碰撞气时)。 第一步: 母离子研究 第一步的目的是要选择您的母离子。要开始这一步研究，您需要为化合物命名并输入进样位置。 AutoSRM 会通知您的TSQ 8000 系统先对标准品里的化合物进行全扫描分析。在得到产物离子谱图的同时，会同时得到一份丰度最高的几个产物离子质量数的列表。AutoSRM 还能进行手工选择。 第二步：子离子研究 已选定了母离子的质量，接着需确定子离子。AutoSRM会指导TSQ 8000 系统，对您选定的母离子质量在三个碰撞能下进行子离子的数据采集。期间无需设置任何方法、序列，或数据输出即可完成这一步。 AutoSRM 会自动处理。在得到您的色谱图和子离子谱图的同时，会得到一份列出最
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利用气相色谱- 质谱/质谱联用仪进行高灵敏度的亚硝胺分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
利用气相色谱- 质谱/ 质谱联用仪进行高灵敏度的亚硝胺分析 Alex Chen1, Hans-Joachim Huebschmann2, Li Fangyan3, Chew Yai Foong3 and Chan Sheot Harn3 1Alpha Analytical Pte. Ltd., Singapore; 2Thermo Fisher Scientific, Singapore, 3Health Sciences Authority, HSA Singapore 关键词 亚硝胺，食品安全，啤酒，TSQ 8000，气相色谱- 质谱/ 质谱，定量分析，确认， 自动SRM，TraceFinder 简介 亚硝胺是N- 亚硝基烷基胺一类化合物的通用名。已知的含有不同烷基基团的这类化合物有很多。最简单的N- 亚硝基烷基胺含有两个甲基，即N- 亚硝基二甲基胺(NDMA)。亚硝胺是常见的剧毒化合物，对人和动物都有强致癌性，高剂量的摄入会导致严重的肝损伤和内出血。 食物中的亚硝胺主要是由亚硝酸生成的。亚硝酸通常作为防腐剂被添加到肉及肉制品中，以避免肉毒杆菌造成的中毒。维生素等有抗氧化作用的添加剂能抑制亚硝酸向亚硝胺的转化。亚硝胺的另一个来源是由氮的氧化物与生物碱（alkaloids）反应产生，这一反应在啤酒生产时干燥已萌发的麦芽的过程中已有报道。由于麦芽和啤酒中的亚硝胺水平在发酵过程中已大幅降低，需要更好的分析表现才能胜任此检测任务。而除了其它各项日常食品的常规控制项目之外，啤酒中麦芽的低剂量亚硝胺检测也是必须的。 已采用多年的“经典”亚硝胺检测方法是利用串接热能分析仪（TEA）检测器的气相色谱进行分析的。选择特殊的TEA 检测器是由于该检测器能够从亚硝胺生成NO，NO又能与臭氧进行特异性的化学发光反应，从而实现特异性的亚硝胺检测。而如今，随着对检测方法的灵敏度的要求不断增加，TEA 的检出限及其复杂的操作程序，已无法满足目前的低检出限和高样品通量要求。质谱仪已在不断取代TEA。 由Munch 和 Bassett 于2004 年建立的EPA 方法521 提供了一个适应当时要求的、基于化学电离（CI）和带有内部离子化功能的离子阱质谱仪的气质联用检测方法，而不是标准的带有外部离子源的四
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没有放疗仪器，如何做放疗研究？
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
肿瘤**的三大手段，手术、化疗、放疗。手术，每个肿瘤外科医生天天都在手术台上进行研究。化疗，在三大手段中目前是临床基础科研领域研究最多的地方。放疗，临床基础研究总在不温不火中进行。原因是啥呢。听放疗科医生介绍，其实从临床角度来说，不少肿瘤**，采用放疗比手术和化疗效果好。季博在这里不展开讨论他们的临床应用区别，因为了解不多。只说一个临床基础研究中放疗看上去研究少的原因，实验的条件。因为需要放射线，那么就需要特殊的仪器。而临床上用的仪器，规则上是不允许用于科研的。有啥科研用的仪器呢，季博特地打听了下，有个叫做CellRad的仪器（吉盛医学），可以用来做动物和细胞的X射线相关研究。很开心的去找吉盛医学了解具体情况，发现，价格不便宜。鉴于很多做放疗的老师，经费还不充裕，不大afford起这么一台仪器。哪，咋办。 放疗的原理是什么呢？借用百度的一句话“所谓放射**，就是通过放射线（如 X 射线、γ 射线等）对肿瘤或内照射或外照射，利用正常组织与肿瘤组织对射线的生物敏感性不同而杀伤肿瘤组织的一种**方式”。说得更简单些，肿瘤细胞快速增殖，如果用放射线进行照射造成DNA的断裂，细胞很容易就活不了了。其实很多化疗药物也是这个原理。只不过，放射线造成的DNA是双链断裂（DSB）。知道了这个原理，那么是否有放射线替代物来造成DNA双链断裂，从而方便我们在实验室进行放疗研究工作呢。 因为DNA损伤修复是现在肿瘤药靶开发领域的一个热点。比如今年比较火的PARP抑制剂药物。所以，季博就特别关心这个问题。今天给大家分享两篇文章， Chromatin relaxation in response to DNA double-strand breaks is modulated by a novel ATM and KAP-1 dependent pathway.2006. Nature cell biology. The ATM Kinase Induces MicroRNA Biogenesis in the DNA Damage Response. 2011. Molecular cell. 两篇文章都是十分以上，可参考性强。 老规矩，不详细看做了啥研究，而是看我们刚才提出
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环境样品中OCPs, PAHs, 和PCBs 的GC-MS/MS 分析方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
环境样品中OCPs, PAHs, 和PCBs 的GC-MS/MS 分析方法 Inge de Dobbeleer, Joachim Gummersbach, Hans-Joachim Huebschmann, Anton Mayer, Paul Silcock Thermo Fisher Scientific, Dreieich, Germany 关键词 有机氯杀虫剂，多氯联苯，多环芳烃，土壤样品，水样品，建筑材料，可重复性，线性 目标 本文描述了对多种环境基质中半挥发性化合物的分析，展示了GC-MS/MS系统的高生产力和高质量结果。 简介 有机氯杀虫剂 (OCP)，多环芳烃 (PAH)，和多氯联苯 (PCB) 等几类化合物对于环境常规监测实验室和合同检测实验室来说都十分熟悉。这些实验室尝试采取多种方法来解决这几类化合物在多种环境基质中的检测问题。 气相色谱- 质谱(GC-MS) 非常适合用来进行OCPs, PAHs, 和PCBs 的检测。较之传统检测器，诸如HPLC 的UV 和荧光检测器，以及GC 的ECD 和FID 检测器，单四极杆 GC-MS系统已经为环境监测实验室提供了提高分析这些化合物的机会。从而得以有限的简化样品前处理程序，以增加样品通量并最终降低实验室成本。 较之单四极杆GC-MS，三重四极杆 GC-MS/MS 系统对化合物选择性的改善则更为显著。好的选择性对从背景中有效检出目标化合物至关重要，也因此能够增强环境监测实验室的检测能力和生产力。越来越多的实验室都开始选择这一技术，尤其是那些希望在竞争中领先一步的实验室。不幸的是，对于新接触GC-MS/MS 技术的实验室，采取新技术并在不显著影响实验室的连续运行的前提下实现生产力的提高是一大挑战。 这份应用文章描述了一种基于Thermo ScientificTM TRACETM1310 GC 和TSQTM 8000 三重四极杆GC-MS/MS 系统的GC-MS/MS 方法。通过该方法能够实现环境样品中的OCPs, PAHs和PCB 的高性能、高产出的分析。 本文还描述了对整合在方法开发和分析流程中的智能软件工具的使用，这些工具能够有效缩短常规检测方法建立和维护所需的时间。 实验条件 样品制备 水样 向1 L 样品中加入正己烷震荡混合。水相和有机相充分
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气相色谱三重四极杆质谱用于9种有机氯农药和拟除虫菊酯类农药的检测分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
气相色谱三重四极杆质谱TSQ Quantum XLS用于9种有机氯农药和拟除虫菊酯类农药的检测分析 朱曼洁 关键词 TSQ Quantum XLS；有机氯农药；拟除虫菊酯类农药。 1.前言 有机氯农药是人类有史以来首次发现的最强大的人工合成杀虫剂，在世界农业生产中长期担当防治害虫的主角。研究表明，有机氯杀虫剂虽然毒性较低，但在环境中的残留期比较长，较难降解，其大量施用不仅对农作物造成直接污染，而且会残留在土壤和水体中，通过食物链富集，进入人体而危害人类健康（1-2）。拟除虫菊酯是一类重要的合成杀虫剂，与传统的有机氯农药相比具有高效、广谱、相对低毒和生物降解等特性，是近年来应用较广泛的农药。这类农药仍有一定毒性，并有一定蓄积性，有些品种还具有致癌、致畸、致突变作用，是近年来各国标准的主要检测对象（3-4）。 本实验用TSQ Quantum XLS结合高惰性的弱极性色谱柱分析有机氯农药和拟除虫菊酯类农药，得到了非常出色的结果。基质样品的最低检测限在0.05-0.5ppb之间，在1ppb-500ppb的范围有良好的线性，且在基质加标样品连续5针进样的RSD%在1.52%-3.30%。 2 实验部分 2.1 仪器和色谱柱 TSQ Quantum XLS 三重四极杆气相色谱质谱联用仪（，美国），TG-5MS（30mX0.25mmX0.25um），高惰性的弱极性色谱柱。 GC方法： 传输线温度：280ºC； 进样口：250ºC，不分流加压进样，不分流时间1min，加压压力150kPa，加压时间1min； 载气：恒流，1.2ml/min； 柱温箱：50ºC起始保持1min，以30ºC/min升至240ºC，再保持1min，再以8ºC/min的速率升至300ºC，保持2min。 进样量：2ul 质谱方法： 离子源温度：250 ºC，灯丝电流为25uA，碰撞气1.0mTorr，采用T-SRM方法，无需分时间段，各化合物离子对如下表所示： 3．实验结果 3.1 标准曲线 配制梯度浓度的混标溶液，浓度分别为1ppb，5ppb，10ppb，50ppb，100ppb和500ppb。各化合物标准曲线如下图所示，R2均在0.995以上： 图1：9种含氯农药的标准曲线 3.2
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气相色谱三重四极杆质谱TSQ Quantum XLS用于甲胺磷，氧化乐果等4种农残的分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
气相色谱三重四极杆质谱TSQ Quantum XLS用于韭菜及菠菜基质中甲胺磷，氧化乐果，溴氰菊酯和甲氰菊酯4种农残的分析 朱曼洁 关键词 TSQ Quantum XLS；有机磷杀虫剂；菊酯类农药；复杂基质。 1.前言 韭菜和菠菜中的农药残留测定问题一直受到广泛关注，主要是这些基质中的活性酶会在样品粉碎时促使其释放出硫化物，从而严重干扰样品中残留农药的定性、定量分析（1-2）。因此，需要一款具有高灵敏度和高抗干扰能力的仪器对这些基质中的农药残留进行检测，以确保检测结果的准确。 本文应用三重四极杆质谱TSQ Quantum XLS的选择性反应监测技（SRM）对复杂基质（韭菜和菠菜）中的4种农药同时进行了分析。由于TSQ Quantum XLS超高的灵敏度以及极强的抗干扰能力，使得低浓度多农药残留分析成为可能。本方法采用了通过SRM扫描排除基质的干扰，同时凭借三重四极杆质谱高灵敏度的特点，所有待测的农残的检测下限可低于1 ppb。 2 实验部分 2.1 仪器和色谱柱 TSQ Quantum XLS 三重四极杆气相色谱质谱联用仪（，美国），TR-Pesticide II 30m*0.25mm*0.25μm毛细管色谱柱（带5m预柱）。 2.2 仪器方法 GC方法： 传输线温度：280 ºC； 进样口：250 ºC，不分流加压进样，不分流时间1min，加压压力150kPa，加压时间1min； 载气：恒流，1.2ml/min； 柱温箱：50 ºC起始保持1min，以20 ºC/min升至100 ºC，再保持1min，再以30 ºC/min的速率升至300 ºC，保持5min。 自动进样器方法： 热针进样，进样量2ul 质谱方法： 离子源温度为250 ºC，碰撞气1.5mTorr，采用EZ-SRM的方法，具体检测离子对如下表所示： Name 中文名 Parent ion Product(CE) RT Time Methamidophos 甲胺磷 141 80(10), 95(10) 6.79 omethoate 氧化乐果 156 79(15), 80(10) 8.70 deltamethrin 甲氰菊酯 181 152(23) 11.70 265 89(10), 210(15) fenpropathrin 溴氰菊酯 251 172(8) 14.50 253 174(8)
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气相色谱三重四极质谱联用法（TSQ8000）测定水产品中7 种多溴联苯醚（PBDEs）
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
气相色谱三重四极质谱联用法（TSQ8000）测定水产品中7 种多溴联苯醚（PBDEs） 摘要 本文建立了一种运用三重四极杆气质联用仪（GC-MS/MS）来检测水产品中多溴联苯醚的分析方法。试样中加入内标物BDE-77 后进行索氏提取，提取液经自动GPC 系统除脂，多层硅胶层析柱净化后，在15 m 长的毛细管气相色谱柱上分离，采用GC-MS/MS 的多反应监测模式（Timed-SRM），以保留时间和离子对（母离子和子离子）信息来定性，以响应值高的离子对进行定量。结果表明，该方法的检测限为0.1 pg/ul，相对标准偏差为2.29-5.58%。 前言 多溴联苯醚(polybrominated diphenyl ethers,PBDEs) 属于溴代阻燃剂(brominated flame retardants, BFRs) 的一种, 由于其优良的阻燃效率、热稳定性而被广泛地应用于建材、纺织、化工、电子电器等行业. 近10 年来全世界对PBDEs 的需求量大幅增加，我国自20 世纪80 年代初以来, 十溴联苯醚已经成为国内产量最大的含溴阻燃剂。 作为一种添加型的阻燃剂, PBDEs 易于从产品中特别是在电子废品堆放及回收利用过程中向环境中释放.1981 年在瑞典的梭鱼、鳗鲡和海鳟中发现了PBDEs 的存在[1], 之后又在海鱼、贻贝、底泥中检测到了 PBDEs[2].1987年,Jansson等人[3] 首次提出把PBDEs 归结为一类全球性的环境污染物, 自此不断有报道从空气、水和人体中检出 PBDEs, 并且最近几年在世界范围环境中其含量呈快速上升趋势[4~8].一个对瑞典母乳中POPs 比较详细的调查显示, 母乳中其他POPs 如多氯联苯从20 世纪70 年代至90 年代呈减少趋势, 但是PBDEs 含量一直处于递增趋势[9]. 此后, 欧洲、北美、日本、中国等地区相继开展了关于人体中PBDEs 污染的研究。 本研究采用自动GPC 结合多层硅胶层析柱净化技术进行样品的前处理－气相色谱三重四极杆质谱，建立测定水产品中多溴联苯醚的方法。本文介绍了采用全新一代三重四级杆气相色谱质谱联用仪（TSQ8000）分析检测水产品中7 种多溴联苯醚的方法。通过二级质谱扫描大大降
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Q Exactive四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱快速筛查和确证蔬果基质中555种农残
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
Q Exactive 四极杆- 静电场轨道阱高分辨质谱快速筛查和确证6 种蔬果基质中555 种农残 程明川 江峥 关键词 Orbitrap 高分辨质谱技术，Q Exactive，TraceFinder，大规模农残快速筛查 引言 农药残留已成为现阶段社会高度关注的热点问题，我国国家标准《GB 2763-2012 食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量》在实施不到2 年后即将被最新的2014 版所替代。新版GB 2763 比以往更加严格，规定了387 种农药在284 种( 类) 食品中3650 项限量指标，较2012 版有大幅增加。新发布的标准中，国际食品法典委员会已制定限量标准的有1999 项，其中共有1811 项国家标准等同于或严于国际食品法典标准，占90.6%。越来越严格的标准和规范，需要更准确、灵敏、快速的方法来完成农药的筛查。目前，三重四极杆液质联用系统广泛应用于食品中有毒有害残留或非法添加物分析，但三重四极杆质谱需要标准品来优化仪器参数，且能同时分析的化合物数目有限，对于大规模筛查或完全未知残留物鉴定，具有一定的局限性。同时，它属于单位分辨质谱，依靠特征离子的相对丰度来定性，在复杂基质样品分析中存在一定的假阳性风险。 基于Orbitrap 静电场轨道阱技术独特的高分辨率和高质量精度测定原理以及优良的稳定性和操作性，Q Exactive 四极杆- 静电场轨道阱高分辨质谱具有高达140,000FWHM的分辨率、单次外标法校正质量轴后持续1 周以上小于3ppm 的质量精度，保证了分析结果的可靠性；媲美高端三重四极杆的灵敏度和宽线性范围可轻松分析复杂基体中的痕量化合物；匹配UHPLC 的扫描速度满足高通量的分析需求。Q Exactive可以准确而可靠地应用于食品安全相关的非目标化合物快速筛查确证以及高灵敏度高通量的多残留分析。本文采用Q Exactive 在20 分钟内完成了对西红柿、辣椒、空心菜、卷心菜、黄瓜以及四季豆等6 种基质样品中555 种农残的亚ppb 级别的快速筛查。实验使用full scan+ddms/ms ( 全扫描+ 自动触发二级质谱) 采集数据，利用高分辨的二级全
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液相色谱耦联Q Exactive 台式轨道阱质谱仪分析利妥昔单克隆抗体
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
液相色谱耦联Q Exactive 台式轨道阱质谱仪分析利妥昔单克隆抗体 Martin Samonig1,2, Christian Huber1,2 and Kai Scheffler2,3 关键词 单克隆抗体，完整蛋白质的质量测定，序列确定，蛋白质去卷积，自上而下的测序 目的 优化液相色谱质谱工作流程，采用整体柱在线耦联Thermo Scientific Q Exactive 台式轨道阱质谱仪对单克隆抗体进行分析和表征。 前言 单克隆抗体（mAb）是增长需求最快的医药产品之一。他们在多种病症如癌症、感染性疾病、过敏症、炎症和自免疫疾病的**中发挥着主要作用。由于单克隆抗体可以表现出显著的异质性，作为**产品，新的mAb 要获得批准需要进行大量的分析表征。质谱法已经成为表征单克隆抗体的重要工具，能测定完整蛋白及分离的轻链和重链的分子量、解析糖基化和糖链的结构，确证正确的氨基酸序列，鉴定杂质，如生产过程中固有的宿主细胞蛋白质（HCP）。 利妥昔单抗是一个拮抗蛋白质 CD20 的重组单克隆抗体，其在美国的商品名为 RituxanR（Biogen Idec 公司/ 基因泰克公司），在欧洲的商品名为 MabTheraR（罗氏）。它是第一代肿瘤免疫**药物之一。利妥昔单抗分别在1997 年被美国食品和药物监督管理局和1998 年由欧盟委员会批准用于恶性淋巴瘤的**。这个抗体的可变区域作用靶点为细胞表面分子 CD20，这些分子存在于一些非霍奇金淋巴瘤中。 在这个应用报告中，结合使用自上而下和自下而上的方法，不管是分析完整和还原的利妥昔单抗，还是对其进行氨基酸序列分析，Q Exactive Orbitrap 质谱仪都具有优异的表现。 此外，评价了两套整体柱色谱系统在线耦合质谱仪的灵敏度。数据表明Q Exactive 系统具有优异的分辨率和质量准确度，是一个具有高置信度的筛选工具，可快速精确地进行生物制药产品的开发和表征。 实验部分 样品制备 本研究所有实验均采用商品化的单克隆抗体利妥昔。利妥昔是一种无菌，透明，无色，不含防腐剂的静脉滴注用浓缩液。该产品浓度为 10 mg/mL，通常配制
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应用Target MS2 方法对大鼠血浆中人重组干扰素进行绝对定量的测试方案
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
应用Target MS2 方法对大鼠血浆中人重组干扰素进行绝对定量的测试方案 顾培明 1. 前言 随着蛋白质组学的不断发展，蛋白质组学已广泛深入到生物学研究的各个领域，目前，蛋白质组学研究已经由传统的大规模鉴定逐步转向了靶向蛋白质组学，研究内容已经由蛋白质鉴定扩展到了蛋白质相对和绝对定量，对复杂样本中蛋白质的相对与绝对定量有助于发现疾病的生物标志物，对于研究各类疾病的发生与发展有着重要的意义。 基于质谱的蛋白质组学定量方法主要有SILAC，TMT，iTRAQ 以及应用三重四级杆的MRM 等，本文主要介绍了赛默飞世尔新一代台式高分辨质谱仪Q-Exactive 在目标蛋白质定量方面的应用。结果显示Q-Exactive不仅可以在ng级上样量情况下达到98% 以上的蛋白质氨基酸序列匹配度，同时应用target ms2 方法，可以很好的对复杂样本中目标蛋白质进行绝对定量，其定量下限达到了amol，动态范围达到了6 个数量级，且线性相关系数在0.99 以上。 2. 实验部分 2.1 样品信息 人重组干扰素α-2b 标准品（浓度为1mg/ml），注射人重组干扰素α-2b 后的处理组大鼠血浆样本以及空白大鼠血浆样本。 2.2 实验流程 1. 使用Full MS/ddMS2 方法对人重组干扰素α-2b 标准品酶解的肽段进行鉴定，筛选其unique peptide； 2. 将人重组干扰素α-2b 标准品酶解肽段稀释成不同浓度的标准品，其浓度分别为104ng/ml，103ng/ml，102ng/ml，101ng/ml，100ng/ml，10-2ng/ml，并掺入至空白大鼠血浆样本酶解肽段中，分别上样18ul，使用Target MS2 方法根据其unique peptide 的fragment ion 峰面积，绘制标准曲线； 3. 处理组大鼠血浆酶解肽段上样18ul， 根据其unique peptide 的fragment ion 峰面积计算出大鼠血浆中人重组干扰素α-2b 的浓度。 2.3 仪器条件 2.3.1 高效液相色谱条件 高效液相色谱仪：Thermo Scientific Easy-nLC 1000 色谱柱：C18 ,3μm, 100Å ,75μm×15 cm 上样量：均18 ul 流动相：A：0.1% Formic acid in water； B：0.1% Formic a
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气相色谱/三重四极杆质谱（TSQ8000）内标法用于17种邻苯二甲酸酯的检测分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
气相色谱/ 三重四极杆质谱（TSQ8000）内标法用于酒类产品中17 种邻苯二甲酸酯的检测分析 1. 前言 近年来，由于塑料制品在全球范围内的广泛使用，邻苯二甲酸酯(Phthalic Acid Esters，简称PAEs) 已成为全球最普遍的污染物之一。PAEs 不是食品添加剂，严禁违法添加到食品中。卫生部在发布的2011 年第16 号公告中，已将邻苯二甲酸酯类物质列入第六批“食品中可能违法添加的非食用物质”黑名单中。大量研究证实，PAEs 在人体内的残留将严重的影响到人类的生殖系统、免疫系统和神经系统，使生物体内激素不能正常分泌，导致细胞突变、致畸和致癌等危害。 本文采用全新一代三重四级杆气相色谱质谱联用仪（TSQ 8000）内标法分析检测酒产品中17 种邻苯二甲酸酯的方法。通过二级质谱扫描充分减少了在复杂基质样品中的背景干扰影响，提高了目标化合物的检测灵敏度，同位素内标方法会减少仪器稳定性的影响，抵消提取过程的干扰影响，该方法具有检测限低，稳定性好，线性范围广等优点。 2. 实验部分 2.1 仪器和试剂 仪器：TSQ8000 气相色谱- 三重四级杆质谱仪( ，美国) 色谱柱：TR-5MS 30m×0.25mm×0.25μm 毛细管色谱柱 试剂：正己烷，农残级。 白酒：自购于超市 2.2 仪器方法 气相方法： 柱温箱：60℃ 保持1min，以20℃ /min 升至220℃ ，保持1min，再以5℃ /min 的速率升至290℃ ，保持3min；进样口：不分流进样，不分流时间1min，进样口温度为250℃ ；载气：恒流，1ml/min；传输线：280℃ 质谱方法： 离子源温度为280℃ ，采用 Acquisition-Timed 方法，SRM扫描，具体检测离子对如表1 所示： 表1.17 种邻苯二钾酸酯和2 个内标物的质谱条件 其中DINP 和DIDP 为多峰 2.3 前处理方法 称取酒类样品2 克，加入1ml 乙酸乙酯：乙醚=1 : 1 的溶液，摇匀。然后加入4 毫升的水，震荡3 分钟后，加入3 克无水氯化钠混匀，置于5000r/min 的离心机上离心分离3 分钟，取上清液过无水硫酸钠干燥后，氮吹至干。然后加入1 毫升正己烷复
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如何选择Lamin B1抗体？
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
Lamin B1是一种蛋白质,在人类由LMNB1基因编码，核纤层由位于内核膜旁边的蛋白质的二维基质组成,层系蛋白家族构成基质并在进化过程中高度保守的。在有丝分裂过程中,板矩阵是可逆拆卸核纤层蛋白蛋白质磷酸化。核纤层蛋白的蛋白质被认为是参与核稳定、染色质结构和基因表达。脊椎动物核纤层蛋白包括两种类型,A和B,这个基因编码的两个B型蛋白质 B1。核纤层蛋白B和异染色质,固定在核膜的内表面的核纤层蛋白B受体。 为什么选择Lamin B1为细胞核的内参指标呢？ 核纤层蛋白是核纤层的结构部件，用于支撑核被膜并参与细胞周期中核被膜的解体和再形成。在动物细胞中，3种基因编码了至少7种核纤层蛋白。LMNA基因通过可变剪接编码A型和C型核纤层蛋白，而LMNB1和LMNB2分别编码核纤层蛋白B1和B2。B型核纤层蛋白存在于每个细胞。A型核纤层蛋白在原肠胚形成后表达，C型核纤层蛋白的表达是组织特异性的。在核纤层蛋白中，核纤层蛋白B1往往被用作内参。核纤层蛋白B1在物种间是高度保守的。分子量为66Kd，适合补充使用。 （PS：核纤层蛋白B1对于没有核被膜的样品，是不适合作为内参的。） 产品名称及描述 货号 产品说明 Anti-Lamin B1 Monoclonal Antibody(15T1)- 66Kd A01090 详情 为什么推荐Abbkine品牌的核纤层蛋白B1内参抗体（克隆号15T1）？ 目前市面上能提供的Lamin B1抗体有国产分装或原产的，国产分装的Lamin B1抗体在质量稳定性上有不足，并且经过分装以后，其效价也有损失。而原产于国内实验室的Lamin B1抗体有些具有较好的检测活性，在批次之间的稳定性上较难控制，而国内仅有的少量原产抗体也是多克隆抗体。至于原装进口供应Lamin B1抗体的进口品牌并不多，仅Abcam、Sigma等等几个品牌能够提供Lamin B1抗体，但是其在性价比上远逊于Abbkine产品。 《Lamin B1内参抗体综合对比》 品牌 货号 反应种属 应用类型 规格/价格 Abbkine A01090（单抗） 人，小鼠，大鼠 WB：(1:2000-1:5000) IP：（1:200） 605/50
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微生物实验室生物安全柜的使用及配置
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
实验室生物安全主要设备之生物安全柜 一、 生物安全柜概述 （一）概念：生物安全柜（biological safety cabinet,BSC）是操作有感染性的材料时，用来保护操作者本人、实验室环境及实验材料，使其避免暴露于操作过程中产生的感染性气溶胶和溅出物而设计的负压排气柜。 （二）生物安全柜的选择 生物安全柜 保护类型 保护对象 I 级 第二、三和四类病原微生物；挥发放射性核素/化学品 操作者，环境 Ⅱ级A1型 第二、三和四类病原微生物 操作者环境和样品 Ⅱ级A2型 二三和四类病原微生物；痕量挥发放射性核素/化学品 操作者环境和样品 Ⅱ级B1型 二三和四类病原微生物；少量挥发放射性核素/化学品 操作者，环境和样品 Ⅱ级B2型 第二、三和四类病原微生物；挥发放射性核素/化学品 操作者，环境和样品 III级 一二三和四类病原微生物；挥发放射性核素/化学品 操作者，环境和样品 1. I级生物安全柜--I 级生物安全柜能够为人员和环境提供保护，但不提供产品保护。 用途：I级生物安全柜被用作特殊的密封设备（例如离心、收获设备或小的发酵设备）或可能产生气溶胶的操作过程（例如倒笼子的垃圾，通气培养或组织搅拌）。也可用来操作放射性核素和挥发性有毒化学物品 。已被医用空气隔离装置替代，且安全防护性能更高。 2. II级生物安全柜--II 级生物安全柜能够为人员、环境和产品提供保护。用途：进行生物安全水平1、2、3级相关的操作。 3. III级生物安全柜--III级生物安全柜是一个没有开放式观察窗的气密性的结构；对环境、产品和操作者提供最大的保护。用途：操作4级生物安全水平的微生物病原体。 二、生物安全柜的使用 （一）个人防护要求：①使用生物安全柜时必须穿个人防护服，戴手套（手套应套在隔离衣的外面）②**带口罩和帽子，根据需要带防护眼罩或者面罩。③工作之前，操作者应调节凳子高度确保自己的脸在开口之上。 （二）生物安全柜内物品摆放原则
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