-
制冷系统风冷与水冷的区别
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
风冷的制冰机和水冷的制冰机区别 各自的优缺点对比 一、制冷系统的冷凝温度极限： 不高于55℃，不低于20℃。通常情况下，环境温度超过42℃的地区都不建议采用风冷冷凝器。所以是否可选择风冷冷凝器，首先要确认环境温度。一般设计风冷制冰机时，必须要求客户提供当地全年最高的环境干球温度。环境温度超过40℃的地区不能使用风冷冷凝器。 1、风冷冷凝器的优点： (1)无需水资源，运行成本较低； (2)安装、使用方便，无需其他配套设备，只要接通电源即可投入运行； (3)不污染环境； (4)适用于严重缺水或供水难得地区。 2、风冷冷凝器的缺点： (1)成本投入较高； (2)冷凝温度较高，使制冷机组的运行效率降低； (3)不适用于空气污浊、有沙尘气候的地区。 3、水冷冷凝器冷凝器的冷却性能： 由环境湿球温度来决定，环境湿球温度越高，那么冷凝温度也越高。一般地，采用水冷冷凝器，冷凝温度比环境湿球温度高5～7℃左右。 二、一般制冷系统的冷凝温度极限： 不高于55℃，不低于20℃。通常情况下，环境湿球温度超过42℃的地区都不建议采用水冷冷凝器。所以是否可选择水冷冷凝器，首先要确认环境湿球温度。 一般设计水冷制冰机时，必须要求客户提供当地全年最高的环境湿球温度。同时当环境温度超过50℃时，也不能用水冷冷凝器，冷却塔容易会被高温晒坏。冷却塔必须在有遮阳保护的情况下使用。 1、水冷冷凝器的优点： (1)使制冷机组的冷凝温度低，提高制冷效率； (2)初期投入成本比风冷、蒸发冷低； (3)冷却效果好，适用于中大型制冷系统。 2、水冷冷凝器的缺点： (1)消耗水资源； (2)喷水，对周围环境有些影响； (3)需要安装水路系统、供水系统。 3、蒸发冷冷凝器的冷却性能： 由环境湿球温度来决定，环境湿球温度越高，那么冷凝温度也越高。一般地，采用水冷冷凝器，冷凝温度比环境湿球温度高5～7℃左右。
-
杀虫灯在田间应该如何布局？
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
在当前无公害农业的大背景下，各地都在开展绿色农业种植，其中最重要的一项措施，就是通过安装杀虫灯来替代传统的农药杀虫方式。但是就杀虫灯在各地区的使用情况来看，并不是所有的杀虫灯都发挥出了其最佳的效果，在使用的过程中，还需要根据害虫发生规律进行合理的田间布局。 一般来说，杀虫灯的田间布局方式有棋盘式和闭环式着两种，这是根据杀虫灯的安装位置来进行命名的，在目前实际的安装过程中，棋盘状分布较为普遍。因为这种方式，可以保证杀虫灯的辐射范围更加全面，避免由于杀虫灯辐射不够，造成害虫对某一块地区的严重危害。但是无论是采用棋盘式和闭环式分布，需要注意的是要求单灯辐射半径120m 来计算控制面积，一般林业控制面积2hm2，农业为4.0~5.3hm2，这样能够最大限度达到节能治虫的目的。 从杀虫灯的田间布局方式上可以看出，杀虫灯的安装并不是杂乱无序的，而是有章程可循的，而在实际的安装过程中，还需要根据作物的分布状态和地形情况来确定安装方式，否则有可能会影响杀虫灯的控制面积和诱杀效果，导致杀虫灯诱虫效果不佳的情况，造成资源的浪费。 当然，以上的杀虫灯的田间布局方式，主要是针对于面积较广的大田而言的，对于一些面积较小的田间防控可能就不是很适用的。但是随着我国农业种植规模的扩大，杀虫灯的安装数量势必会提高，到时是采用棋盘式分布还是采用闭环式分布，你不妨可以参考一下。
-
高压灭菌锅的使用方法与注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
一、高压蒸汽灭菌器使用方法 （1）在外层锅内加适量的水，将需要灭菌的物品放入内层锅，盖好锅盖并对称地扭紧螺旋。 （2）加热使锅内产生蒸气，当压力表指针达到 33.78kPa时，打开排气阀，将冷空气排出，此时压力表指针下降，当指针下降至零时，即将排气阀关好。 （3）继续加热，锅内蒸气增加，压力表指针又上升，当锅内压力增加到所需压力时，将火力减小，按所灭菌物品的特点，使蒸气压力维持所需压力一定时间，然后将灭菌器断电或断火，让其自然冷后再慢慢打开排气阀以排除余气，然后才能开盖取物。 二、高压蒸汽灭菌器注意事项： （1）待灭菌的物品放置不宜过紧。 （2）必须将冷空气充分排除，否则锅内温度达不到规定温度，影响灭菌效果。 （3）灭菌完毕后，不可放气减压，否则瓶内液体会剧烈沸腾，冲掉瓶塞而外溢甚至导致容器爆裂。须待灭菌器内压力降至与大气压相等后才可开盖。又名:高压灭菌器,高压灭菌锅,高压蒸汽灭菌锅,手提高压灭菌器,手提高压灭菌锅,手提式高压灭菌器,手提式高压灭菌锅,手提式高压蒸汽灭菌器,手提式高压蒸汽灭菌锅 （4）装培养基的试管或瓶子的棉塞上，应包油纸或牛皮纸，以防冷凝水入内。 （5）为了确保灭菌效果，应定期检查灭菌效果，常用的方法是将硫磺粉末（熔点为115℃）或安息香酸（熔点为120℃）置于试管内，然后进行灭菌试验。如上述物质熔化，则说明高压蒸气灭菌器内的温度已达要求，灭菌的效果是可靠的。也可将检测灭菌器效果的胶纸（其上有温度敏感指示剂）贴于待灭菌的物品外包装上，如胶纸上指示剂变色，亦说明灭菌效果是可靠的。 （6）现在已有微电脑自控型高压蒸气灭菌器，只需放去冷气后，仪器即可自动恒压定时，时间一到则自动切断电源并鸣笛，使用起来很方便。 三、高压蒸汽灭菌器应用： 为最常用的灭菌方法，一般以 101.33kPa处理15～20min，可达到对物品进行灭菌的目的。凡耐高温和潮湿的物品，如常用培养基、生理盐水、衣服、纱布、玻璃器材等都可用本法灭菌。
-
MCMV和SCMV复合侵染玉米引起玉米组织中siRNAs的积累
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
背景介绍 RNA沉默是真核生物中调控基因表达的一种保守机制，它在植物生长发育和抗病毒中发挥着重要的作用。RNA病毒进入寄主植物细胞后，其复制中间复合体和单链基因组RNA的高级结构形成的双链RNA可以被寄主植物DCL蛋白识别，加工产生21-24-nt的初级来源于病毒的siRNA（vsiRNA）。初级vsiRNA装载到特异AGO蛋白中形成RISC复合体，根据碱基互补配对的原则识别其靶标并主要以切割的方式降解靶标。病毒基因组是vsiRNA最主要的靶标，被切割后的病毒RNA可以被RDR识别，并将其加工成双链RNA，再一次被DCL蛋白切割形成次级vsiRNA。初级和次级vsiRNA没有本质上的区别，都可以作用于靶标，发挥抗病毒的功能。 玉米褪绿斑驳病毒（MCMV）与侵染玉米的马铃薯Y病毒科病毒，如玉米矮花叶病毒（MDMV）、小麦条纹花叶病毒（WSMV）和甘蔗花叶病毒（SCMV），复合侵染时引起玉米致死性坏死（MLN），对玉米产量造成很大的威胁。虽然有报道称马铃薯Y病毒属病毒编码的沉默抑制子HC-Pro可以增加异源病毒的致病性和积累量，并且MCMV与马铃薯Y病毒科病毒复合侵染时积累量显著增加，但是，关于它们复合侵染的机制研究却很少。我们准备以MCMV和SCMV复合侵染为例，从RNA沉默的角度初步探索其复合侵染的机制。 研究思路 为了研究MCMV与SCMV复合侵染的机制，我们使用玉米自交系B73作为研究材料，在复合侵染植物表现坏死症状前进行系统取样，提取总RNA后进行小RNA高通量测序（该研究中miRNA 测序服务由上海伯豪生物技术有限公司提供）。首先从总的小RNA中分离出vsiRNA，然后对vsiRNA特征进行分析，初步判定vsiRNA参与复合侵染时发挥的作用。 1) vsiRNA尺寸分布可以初步了解哪些DCL参与vsiRNA的形成； 2) vsiRNA正负链来源可以初步了解vsiRNA的来源； 3) vsiRNA 5'末端碱基偏好性可以初步了解vsiRNA可能装载到哪些AGO蛋白中发挥作用； 4) vsiRNA正负链上的分布可以进一步了解vsiRNA的来源； 5) vsiRNA靶标的预测和分析可以初步了
-
利用微型生物反应器系统进行实验设计
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
高效的生物工艺开发与优化 实验设计（DOE）是对实验进行组织、计划、执行和统计分析的最具价值的高效方法之一。虽然可以通 过在单一生物反应器内重复实验获得DoE结果，但设计开发并行实验的微型生物反应器系统（如 ambr15 或ambr250系统）为完成DoE提供了更优异经济的条件。由于工艺开发过程中涉及到众多互相关联的参数，如细胞系的建立，培养基筛选以及反应器操作参数的优化等，DoE 逐渐成为获得工艺知识重要且可或缺的方法。DoE 仅提高了工艺开发效率，还被用于协助确定高品质产品的生产工艺。 实验设计：有效策略 在生物制药工艺中，缩短开发时间和降低生产成本是关键的目标。在此背景下，工艺分析技术（PAT）工具与灵活可靠的生物工艺开发设备的联合应用便成了有效优化现有生产工艺和开发新工艺的基础。FDA鼓励使用PAT来更好地理解和控制生产过程，基于统计的DoE方法则被广泛应用于优化条件，用最少时间和实验量获得最佳工艺条件的过程中（1）。 DoE概念即根据一系列计划好的实验同步改变工艺参数，然后通过一个已验证的数学模型来说明结果。该模型后续可用于解释、预测和优化，还可助于更好地理解工艺。对比每次改变一个因素的单因素实验，DoE方案可以用最少的实验量获得最优化得结果，因此可以缩短开发时间，减少人工投入。 基础培养基和流加培养基组份的优化对形成最佳的重组细胞系生长及合成活性药物蛋白环境至关重要（2）。另一个影响工艺开发的关键目标是优化基本工艺参数，如温度、pH和溶氧（3）。通常，培养基和工艺参数的优化是密切相关的，DoE正好胜任此类任务（1）。 从培养基和补料开发转移至工艺优化 除去特定细胞系的产率，培养基对药物蛋白和单克隆抗体的产量和效价有着重要影响。细胞需要大量和微量营养糖组合，如糖，无机盐，维生素，氨基酸和其它支持细胞生长和蛋白生产的成份等。由于每一种细胞都具有独特的营养需求，以及培养基成分复杂，采用具有高通量平行实验能力的微型反应器系统成为
-
主被动回避实验原理及方法介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
主被动回避实验方法 一.实验原理 主被动回避实验是利用动物的好暗避光（明暗穿梭）、对厌恶刺激（如足电击）的恐惧和记忆而建立起来的。所以对实验者（而不是对动物）而言，回避实验在技术上与暗示关联条件恐惧相类似。所用的刺激为温和的足电击，发生的反应是动物逃避曾经受到电击刺激的地方。根据动物的逃避方式分为主动回避和被动回避（active and passive avoidance）。前者要求动物主动从有厌恶刺激的箱中逃离；后者则要求动物遏制自己而不进入有厌恶刺激的箱。根据所用仪器设备的不同又可分为穿梭回避、跳台回避、Y-形迷宫回避。这里主要介绍前两种回避。 二.实验设备 （一）穿梭回避实验设备 包括穿梭箱、刺激控制器和计算机(上海欣软信息科技有限公司生产的穿梭箱最具代表性)。它包括左右两个同等大小（20.3cm*15.9cm*21.3cm）的隔室（compartment）。其中一隔室用一黑色布套包裹，形成暗箱（主动回避可不用暗箱）。两隔室之间由一个拱形门（8.9cm*11.4cm）相联，门可由实验者根据实验需要关上或打开。隔室地板为不锈钢栅栏（直径：大鼠4.8mm，小鼠3.175mm）。暗箱一侧的栅栏地板与刺激器相联，并可给予电击；明箱一侧则不与刺激器相联，故没有电流通过。 （二） 跳台回避实验装置 将上述穿梭箱的中门移去，代之以一个平台（可随Med Associates穿梭箱配套），即可改装成跳台回避实验装置。这里介绍上海欣软信息科技有限公司生产的跳台回避装置。它包括一个15cm*25cm*10cm的透明有机玻璃跳台箱、一个隔音外箱（48cm*62cm*24cm）和一台脉冲电刺激器组成。跳台箱底部的栅栏与刺激器相联，中央固定一个3.5cm*3.5cm*2.5cm的木制平台。实验时，将跳台箱放入隔音箱内，以防外界干扰。 三.实验方法 （一）小鼠穿梭被动回避实验（mouse step-through passive avoidance） 1．单次电击刺激训练 （1）将小鼠放入明箱，10s后，将明暗箱之间的门打开。多数品系的小鼠有很强的探究行为，喜暗恶光。因此，小鼠会很快
-
一次性搅拌生物反应器的特点及应用
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
工艺开发与控制（质量属性和关键工艺控制）的有效工具 在过去十年中，一次性生物反应器已被广泛接受作为替代传统的不锈钢或玻璃生物反应器，应用于药物生产和工艺开发。在生物制药行业，玻璃生物反应器主要应用于工艺开发和优化，也会作为工艺参数确证的比例缩小模型。所以无论是重复性还是一次性反应器，重现生产规模反应器的设计特征对实现上游目的具有极其重要的意义。2-L，5-L和10-L工作体积的搅拌式生物反应器已在整个行业中获得了广泛的认可与接受。其中，2-L体积反应器是工艺开发的主要设备，作为代表性的比例缩小模型，这类反应器易于操作，且具有足够大的取样体积。 提高药物开发效率 工艺开发期间的时间表和工作量可能会发生显著的改变。在整个工艺开发周期内一直保持足够可用的实验反应器数量也是一个不小的挑战。对玻璃容器进行清洁、安装以及高压灭菌等操作都需要占据实验人员额外的时间和精力，使他们陷于日常的维护，而无法执行其它更有价值的工作。对工艺开发实验室而言，增加一次性反应器可以与玻璃容器互换使用，在实验高峰或维护期提供了显著的灵活性，使得生物反应器控制器的停机时间降低至了最少。 表1对比了玻璃和一次性反应器，预计一次性生物反应器的控制器运行时间比玻璃反应器提升25%。如果不使用一次性反应器，则需要增加玻璃反应器的数量以达到同样的主机使用率；不过这样做需要付出更多的改变和成本。此外，当使用微载体时，一次性生物反应器能够避免麻烦且有害的硅化操作。一次性台式生物反应器从根本上减轻了实验室工作人员的日常维护工作，就如20年前在哺乳动物细胞培养中引进一次性摇瓶一样。 模拟成熟玻璃反应器的设计 玻璃生物反应器已被使用了数十年，且 已被证明是不锈钢和最新的大规模一次性搅拌反应器可靠的比例放大和缩小模型。UniVessel®一次性培养容器模拟了传统玻璃台式生物反应器的设计，以确保新获取的数据与以前使用玻璃 系统时所获得的数据具有可比性。每台设备交
-
闪式提取器原理及技术参数讲解
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
★★★★★★★★编辑：西安市碑林区洪辰水热设备供应部 一、 闪式提取器的释义 闪式提取器是一种用于植物软、硬材料快速提取的新型提取器。依靠高速机械剪切力和超动分子渗滤技术，在室温及溶剂存在下数十秒钟内把植物的根、茎、叶、花、果实等物料破碎至细微颗粒，并使有效成分迅速达到组织内外平衡，通过过滤达到提取之目的。 二、闪式提取器的优势 该仪器能最大限度保护植物有效成分，不会受热破坏，溶剂用量小，提取时间短，效率高，且刀具耐磨，结构紧凑，使用安全可靠。 三、闪式提取器特点 1、快速高效 1分钟内即可完成对容器内物料的彻底提取。 2、常温提取 该仪器在常温下于适当溶剂中工作，避免了有效成分因受热而遭到破坏。 3、适用广泛 ① 适用于植物的根（饮片）、茎（饮片）、叶、花、果实等各个部位的快速提取。 ② 适宜于多种溶剂。除乙醚等易燃易挥发溶剂外，可根据所需有效部位或化学成分，直接选用丙酮、乙醇、甲醇、冷热水等作为溶剂进行提取，使工艺流程更加简单方便。 ③ 可单品提取，也可多品种混合提取。 4、节能降耗 该型号电机功率1800瓦，完成一次提取所需时间只有一分钟，与回流提取相比，单位能耗显著降低，从而降低了研究和生产成本。 四、提取方法的收率比较 五、各种提取方法的比较 提取方法 主要优点 主要缺点 煎煮法 经济、安全、易行 选择性差、成分易破坏、后处理困难 回流法 选择性好、收率较高 受热长、效率低、成分易破坏 浸渍法 简单、投资小、安全 效率低、耗时长、易变质 蒸馏法 选择性强、处理方便 适用范围小、需专用设备 渗漉发 室温、简易、节能 费时、有污染 连续回流法 省溶剂、效率高 需有机溶剂、受热时间长、规模小、成分易破坏 超临界萃取法 近室温、安全、收率高 设备复杂、投资大、规模小 超声提取法 近室温、安全、收率高 投资大、规模小、较
-
立式高压灭菌锅常见故障及处理方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
本文以自控型立式高压灭菌锅为例，就立式高压灭菌锅在使用过程中出现的常见故障进行分析并提出相应的故障处理办法及预防措。常见的故障有：加热功能失灵、水位器工作异常、联锁灯不亮、漏气、安全阀工作异常、无法正常排气、排液等。 （1）仪器使用时，加热功能失灵导致无法正常产生蒸汽。仪器运行时，面板上加热指示灯亮，但温度指示不上升，一直维持室温状态。 处理方法：打开仪器侧盖，面板显示正常表明220V 电源正常进入控制电路。将与加热管连接的电线拆下，用万用表检查加热管电阻，一般阻值在8~15Ω 之间，如阻值过大表明加热管内部断路，须更换。由于加热管烧坏是有原因的，所以无论第一步排查出加热管好坏与否，都应检查控制加热管的固态继电器。在通电情况下，其继电器输入电压应在12VDC 左右，输出电压应在220VAC 左右。如果输入正常、输出异常，则须更换此继电器；如果输入异常，须检查控制电路上的负载输出控制部分。一般常见的情况就是以上两种。 （2）仪器使用时，水位器工作异常。仪器一开机，控制电路就对水位器进行检查。控制面板上有“高水位”、“低水位”、“缺水”三个指示灯，正常使用时应保持水位在高水位，即“高水位”指示灯亮。如果在加入足量水的情况下水位灯不亮或一直是“缺水”灯亮并报警，则表明水位器工作异常。处理方法：打开仪器侧盖，先检查水位器与控制电路连线是否松动；用扳手旋开水位器上的旋盖，取出水位器，检查三个探针是否生锈，可用酒精棉进行去锈处理。在通电情况下，将三个探针依次与水位器外部钢管短接，检查控制面板水位指示灯工作是否正常。如正常表明水位器无损坏；反之须检查控制电路上水位控制电路；处理完毕后装好水位器，接通电源，加水检查指示灯。一般主要是由于水位器接线接触不良或探针表面生锈造成工作异常。 （3）联锁灯不亮，仪器不正常加热。联锁灯由仪器上盖处的联锁按钮、联锁杆及联锁控制器串联后与控制电路相连起到联锁保护功能。在仪器上盖关闭情况下
-
高压反应釜的清洗方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
高压反应釜一般采用超声波清洗那么下来我们来讲讲具体的清洗流程： 1.高压反应釜要在指定的地点使用，并按照使用说明进行操作。查明刻于主体容器上的试验压力、使用压力及最高使用温度等条件，要在其容许的条件范围内进行使用。 2.高压釜属于精密设备，通过密封环采用锥面相接触密封形式，借拧紧主螺栓使他们相互压紧而达到密封的目的。必须对密封锥面特别加以爱护，避免各种碰撞而导致其损坏。在装盖时，先放置好反应釜釜体，然后将釜盖按固定位置，小心地装在釜体上，在拧紧主螺栓时，必须按对角，对称地分多次逐步拧紧，用力要均匀，不允许釜盖向一边倾斜，以达到良好的密封效果，不可超过规定之拧紧力矩，以防密封面被挤坏或加速磨损。 3.压力计所使用的压力，**在其标明压力的1/2以内使用。并经常把压力计与标准压力计进行比较，加以校正。 4.氧气用的压力计，要避免与其它气体用的压力计混用。 5.安全阀及其它的安全装置，要使用经过定期检查符合规定要求的器械。 6.操作时必须注意，温度计要准确的插到反应溶液中。 7.高压反应釜内部及衬垫部位要保持清洁。 8.盖上盘式法兰盖时，要将位于对角线上的螺栓，一对对的依次同样拧紧。 9.测量仪表破裂时，多数情况在其玻璃面的前后两侧碎裂。因此，操作时不要站在这些有危险的地方。预计将会出现危险时，要把玻璃卸下，换上新的。
-
揭示物相鉴定中元素判定的重要性
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
X射线衍射是物相鉴定的最佳方法，是不是所有的晶体物质都可以通过衍射准确无误的鉴定出来？ 并不尽然，世界上的物质很难获得纯物质，该物质由于生成环境所致，均或多或少的进入其它溶质元素，并与其化合，所生成的物质难以找到标准数据，但是他又接近某些标准物相，因而给出错误的物相鉴定结果，同时，测量条件、样品制备条件、环境的变化都有可能让同一个物质产生不同的衍射谱图，从而形成误检。 如果没有化学判据，根本无法发现这一错误！ 元素判据可以避免由于元素不同和测量条件不同引起的误检错误。而实际的检测中，对元素判据的手段提出了很多要求：测试全部元素、分析数据准确、分析速度快、样品制备方便、而且仪器价格便宜。 帕纳科Epsilon1 台式XRF能谱一体机可以一次给出样品中的所有元素的分析结果，分析准确度极高（查看数据），分析速度快（3分钟），样品制备极其方便（只是将样品放置在表面上即可）每个样品用衍射仪测试出衍射谱图，与此同时，采用E1能量色散谱仪获得元素信息，便可以防止发生错误的检索结果，使物相鉴定结果准确无误。 更多特殊物相实例，点击下载《X射线衍射物相鉴定与物相的元素组成》分析报告。 Epsilon1 台式XRF能谱一体机 - 样品种类广泛 - 横跨元素周期表的分析范围 - 配套工厂预校准Omnian无标定量软件 一键式操作，无需操作人员具备完整的XRF分析基础，即可得到准确的元素组成，为科研用户物相鉴定提供强有力的元素信息。 帕纳科是全球X射线荧光光谱（XRF）仪器及软件的主要供应商。产品广泛应用于材料的分析和表征，包括水泥、金属、矿业、玻璃、半导体、制药等领域。
-
分子生物学相关实验步骤及注意事项（二）--反转录篇
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
——反转录篇—— 反转录PCR（Reverse Transcription, RT-PCR）又称为逆转录PCR，是指扩增mRNA的一种实验技术。先将mRNA反转录成cDNA，然后再以cDNA为模板，用PCR方法加以扩增。 （一）逆转录酶的种类 AMV：有较强的聚合酶活性和RNA酶H活性。最适42℃。在高反应温度时可消除mRNA的二级结构对逆转录的阻碍，然而高水平的RNA酶H的活性既抑制cDNA产生也限制其长度。 MMLV：有强的聚合酶活性，而RNA酶H活性较弱。较弱的RNA酶H活性对获得2-3kb的mRNA的全长cDNA有很大好处。最适37℃。 Super RNaseH- Reverse Transcriptase：MMLV反转录酶的RNase H-突变体，它能将更大部分的RNA转换成cDNA，这一特性允许从含二级结构的、低温反转录很困难的模板合成较长的cDNA，最适42℃。（商品名为SuperScript和SuperScriptⅡ） GoScript Reverse Transcriptase：专为 qPCR 而设计，利用 M-MLV 和先进的缓冲液技术获得均衡稳定和可靠的 cDNA 合成结果，适合各种大小范围的低丰度和高丰度的转录子，即使存在抑制剂也不受影响。 根据很多实验人员的经验反映，Promega的反转录酶效果杠杠滴，本人用过TaKaRa的，也是不错哒！大家可以根据自身情况进行选择。 （二）引物的选择 反转录引物有多种选择，Oligo(dT)、随机引物、基因特异性引物（GSP）等。 用来进行反转录的引物及其常用的推荐浓度如下表所示： 引物 常用终浓度 调整范围 Oligo(dT)15 0.025µg/µl 0.01–0.125µg/µl Random Primer 0.025µg/µl 0.01–0.1µg/µl Oligo(dT)15＋Random Primer 0.025µg/µl each primer Each 0.01–0.1µg/µl Gene-specific primer 1µM 0.5–0.1µM （表格引用Promega公司的 GoScript 反转录系统操作方法说明书） （三）优化及注意事项 1. 逆转录PCR时，提取RNA是关键，需分离高
-
慢病毒行业新标准——绝对定量滴度测定
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
绝对定量时代——引领慢病毒行业新标准 高大上的慢病毒是怎样炼成的（一） 慢病毒活性滴度用什么单位？ 看TU！看TU！看TU！ TU=transducing units，即每毫升中含有的具有生物活性的病毒颗粒数。其他的VG/mL，VP/mL都是所有病毒颗粒数，死的活的都算上，一片虚假繁荣，请自由玩儿去！ 慢病毒活性滴度怎么标定最准？ 绝对定量！绝对定量！绝对定量！ 又绝对又定量的方法，准到不要不要的！再说了，这“绝对定量”是医疗级病毒产品的公认滴度检测方法，诺华、Juno，这些CarT大佬们都用！不准？不准的话FDA能认吗？ 复杂又昂贵的方法，为了准，咱们忍啦！ 1.标准品检定绘制标准曲线，精确定量病毒基因组DNA拷贝数 2.测定插入细胞基因组的5’LTR—3’LTR病毒基因组拷贝数 3.工具细胞 293T基因组中的病毒特征单拷贝基因A和宿主特征单拷贝基因B 4.TU=N*C/V=（初始细胞/感染病毒体积）×（2×A基因拷贝/B基因拷贝），计算感染效率 5.不要反转录，不要受RNA降解或反转录效率影响。 6.如果病毒有荧光或者抗性，再结合表型联合判断 准！准！准！重复性杠杠滴！ 处女座实验狗都无法抵抗的滴度标定方法！ 慢病毒滴度标那么准，有用吗？ 我！@#￥%&*…… 有人问我，为啥我的细胞用慢病毒一感就死？ 为啥我的细胞用慢病毒感染后会出现小黑点？ 很可能是，过感染啦！过感染啦！过感染啦！ 有木有先做预实验确定细胞的MOI？有没有根据病毒滴度准确计算病毒用量？ 越是高浓度高纯度的病毒，越是需要精确计算滴度，以避免感染不足或者过量感染，保证**的细胞状态，以继续下游实验，这样才能省时省力省病毒啊啊啊！！！ 最后，附赠感染预实验步骤详解，请叫我雷锋！ 吉凯基因引领慢病毒行业新标准——慢病毒活性标定从此进入新时代，不绝对定量的慢病毒，拜拜！ 长按加关注
-
由左颈总动脉导管经肾动脉的大鼠肾脏无创伤给药法
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
实验动物模型给药中有很多给药途径~但大多数都是全身给药，不但造成了贵重药物的浪费，而且也造成了没有必要的全身药物影响~ 肾脏疾病模型的**常用给药方法之不足： 1、尾静脉注入：尾静脉注入不能锁定靶向器官，显像差 2、肾实质注入：干细胞转移率不高 3、肾包膜下注入：药物吸收不好，干细胞转移不均匀 4、肾动脉注入：肾动脉直接穿刺注射后难以止血及造成肾动脉血管内膜损伤引起的肾动脉血栓等原因导致实验侧肾脏低灌注，甚至失去血供，导致实验失败 因此。根据大鼠的心血管解剖结构小编成功的建立了导管经左侧颈动脉直视下介入肾动脉注入药物及干细胞的方法，简便易行，手术时间短，成功率高，小编总结此方法特点：远距离插管，零距离给药。 先从影像学了解一下血管解剖结构吧... ... 上图由美国拜耳公司Perry Liu提供，赵桂锋标识 特殊材料的准备 PE10导管：外径 0.5MM内径 0.3MM尖端剪成 75°斜角，尖峰略向内弯。 手术方法： 腹部开口 腹部剑突下 1cm处向尾端背皮 6cm常规皮肤消毒，铺巾展单，沿腹中线分层切口肤和腹肌，开窗 2cm生理盐水温湿纱布将肠道推开，充分暴露腹主动脉从横隔膜至左肾动脉分叉处。 颈部开口 暴露左颈总动脉，远心端永久性结扎，留牵引线， 近心端穿线备用，颈动脉斜 剪一小口，将 PE10 导管向近心端方向插入并轻度结扎近心端打活结，使导管和左颈总动脉轻度结扎，保证血管导管入口处不漏血为宜，导管经左侧颈动脉-主动脉弓降部-胸主动脉，进入腹主动脉。 导管导入肾动脉 用棉签轻压肾动脉,腹主动脉分叉处，确认管在腹主动脉里，将左侧肾动脉轻轻拉向右侧直到与腹主动脉平行位，调整导管头端插入左肾主动脉，根据实验要求可以调整导管插入肾动脉前支、后支及肾上腺动脉，以便将药物准确的注入靶器官。 导管导入路线示意图 此方法同样可以有效的扩展到其他靶器官精准给药，减少药物对其他脏器的损伤和贵重药物的损失~~~ 此论文于2011年已发表在《中国比较医学杂志》，论
-
大鼠海马取材步骤详解
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
海马是研究大鼠神经生物学的重要结构，能够参与其行为反应、内脏活动、调节生物节律和内分泌，尤其与学习记忆密切相关。大鼠海马的研究也就随之火热起来，那么如何获得完整漂亮的大鼠海马呢？ 下面就是作者采集大鼠海马的图解步骤： 我们先来了解一下大鼠海马在大脑中的具体位置吧~~~ 上图来源于网络 上图来源于网络 通过以上两个图片可以清晰了解了海马在大鼠大脑中的具体位置了~~~ 下面我们拿实物笔划一下吧~~ 大鼠大脑背侧 小编一般都是使用手术刀片距离大脑皮质后缘向前约5mm位置，沿图中弧线深度约为2mm切开 将切开的皮质钝性向后剥离~~咦~~~好像看见海马了哦~~~ 沿海马边缘，钝性剥离海马~~~如下图 已经剥离完的海马~~~~~~ 钝性剥离，取出海马~~~~ 完成！！！！ 接下来做您想做的吧~~~~~~~~
咨询热线
18133906270
德尔塔官方微信