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免疫共沉淀(Co-IP)的原理及步骤介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
一．原理 免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法，是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是：当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X，那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。目前常用prorein A预先结合固化在argarose的beads上，使之与含有抗原的溶液及抗体反应后，beads上的prorein A就能吸附抗原。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。 优点： （1）相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的，处于天然状态； （2）蛋白的相互作用是在自然状态下进行的，可以避免人为的影响； （3）可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。 缺点： （1）可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质－蛋白质相互作用； （2）两种蛋白质的结合可能不是直接结合，而可能有第三者在中间起桥梁作用； （3）必须在实验前预测目的蛋白是什么，以选择最后检测的抗体。所以，若预测不正确，实验就得不到结果，方法本身具有冒险性。
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影响花药培养的主要因素
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
花药培养是用植物组织培养技术，把发育到一定阶段的花药，通过无菌操作技术，接种在人工培养基上，以改变花药内花粉粒的发育程序，诱导其分化，并连续进行有丝分裂，形成细胞团，进而形成一团无分化的薄壁组织——愈伤组织，或分化成胚状体，随后使愈伤组织分化成完整的植株。影响花药培养的因素包括以下5个方面。 1、基本培养基 基本培养基的选择因植物种类和品种而异。MS培养基和H培养基适合双子叶植物花药培养；B5培养基适合豆科与十字花科植物花药培养；Nitsch培养基适合芸薹属和曼佗罗属植物花药培养；而禾谷类植物的花药培养常采用N6、C17和W14等培养基。 2、无机盐 培养基中高浓度的铵离子显著抑制花粉愈伤组织形成。铁盐对花粉胚状体发育很重要，如在Fe-EDTA浓度小于40μmol/L的低铁或无铁培养基上，烟草花粉胚只形成多细胞原胚体（球形胚）便停止发育。 3、生长调节剂 生长调节剂的种类与浓度对花粉的启动、分裂、分化具有关键的作用。细胞分裂素也椰汁促进花粉分化成胚状体，生长素类尤其2，4-D促进愈伤组织形成，但2，4-D抑制愈伤组织分化成胚状体。高浓度生长素甚至可引起茄科花粉胚状体转化为愈伤组织。因此，诱导愈伤组织分化成苗，应将其转入无2，4-D或含有低浓度IAA，NAA与较高浓度细胞分裂素的分化培养基上。烟草、水稻等少数植物的花药可在不含生长调节剂的培养基上形成愈伤组织或花粉胚。 4、蔗糖 蔗糖作为碳源和调节培养基渗透势的物质，其浓度对花粉愈伤组织诱导率有一定的影响，例如诱导油菜、烟草花粉愈伤组织或胚状体的适宜蔗糖浓度是2%-3%，水稻则是4%-8%，甘蔗则高达20%，但对大多数植物来说是2%-4%。在许多植物花药和花粉培养中，诱导花粉形成愈伤组织阶段，宜采用较高浓度蔗糖，而愈伤组织分化成苗阶段宜用较低浓度的蔗糖。 5、附加物 添加天然有机物如水解乳蛋白、水解酪蛋白、椰子汁、酵母提取液等，是对基本培养基组成成分和生长调节剂的补充，可提高花粉愈伤组织和胚状体
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细胞实验中如何预防真菌污染
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
思考多日，生物咖终于写给污染君的一封分手信，污染君的回信也是值得思考的…… >>>>生物咖：“虽然你总是无时无刻、无处不在的渗透了我的生活，但终究我还是爱我的细胞的，请你离她远一点，不要再伤害她，也别再来找我了……” “你口口声声说爱她，却为什么来招惹我，明明你自己就根本“狠”不下心摆脱我，要不然……”：污染君
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细胞培养中预防污染的方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
春暖花开，万物复苏，当我们沉浸在这美好的春意之中，怡然自得时，实验室的细胞培养小能手或许得注意了，那些危害细胞的细菌、真菌、支原体也活跃起来了。在细胞培养的过程中，我们该如何去预防控制呢？小编总结了一些，希望对实验室的伙伴们有帮助！ 预防为主是细胞培养过程中必要的思路！三月四月不预防，五月六月徒伤悲！ 一、良好的无菌操作 1.所有细胞培养的相关耗材、试剂瓶均应灭菌完全 2.细胞培养液与相关试剂的配制应严格无菌操作 3.实验前备齐所需实验器材及物品，避免来回出入细胞培养区 4.超净台内勿放置过多用品或重叠摆放，否则会阻挡紫外照射而降低灭菌效果 4.培养前将移液器、废液缸、试管等用75%酒精棉球擦拭后置超净台内紫外照射15min 6.吸入或吸出液体时，切勿触及细胞培养瓶的瓶口 7.培养液应分装并置4℃保存 8.每种细胞应使用单独的培养液 9.细胞培养时需佩戴口罩和无菌手套，减免交谈， 10.每次实验结束后，用75%酒精清理台面，并紫外照射15min 二、合理使用抗生素 不可过度使用抗生素，滥用抗生素常导致耐药菌的产生，牢记抗生素不能代替无菌操作 三、建立细胞库 四、良好的规章制度 1.只有相关实验人员才可进入细胞间 2.细胞间必须和其他实验区域分开 3.细胞培养区应避免使用水池，从而避免微生物污染 五、保持细胞间的清洁 1.定期对地面和台面进行清洗和消毒 2.CO2培养箱应定期消毒清洗（2-3个月），所有溅出或溢出的液滴应立即擦拭并消毒，每周培养箱内的水盘需彻底消毒清洗并更换灭菌水。 3.及时清理废弃物和易感染材料 某些相关产品试剂，有助于我们及早预防，及早发现！ PromoCell PCR支原体检测试剂盒可用于定期检测细胞培养物中支原体/细菌污染，及早发现及预防。源培生物的支原体去除试剂可用于解决因支原体污染而导致细胞污染或状态下降的问题，同时其对于常见的革兰氏阴性和阳性菌也有一定的清除作用。具体货号目录如下表： 名称 货号 PCR Mycop
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人高香草酸（HVA）分析检测ELISA试剂盒使用说明书
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
人高香草酸（HVA）分析检测ELISA试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 标本：血清或血浆 上海乔羽生物专业供应： 使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本高香草酸（HVA）含量。 试验原理： HVA试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知HVA浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将HVA和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中HVA的浓度呈比例关系。 试剂盒内容及其配制 试剂盒成份（2-8℃保存） 96孔配置 48孔配置 配制 96/48人份酶标板 1块板（96T） 半块板（48T） 即用型 塑料膜板盖 1块 半块 即用型 标准品：80ng/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按说明书进行稀稀 空白对照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即用型 标准品稀释缓冲液 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml） 即用型 生物素标记的抗HVA抗体 1瓶（6ml） 1瓶（3.0ml） 即用型 亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml） 即用型 洗涤缓冲液 1瓶（20ml） 1瓶（10ml） 按说明书进行稀释 底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型 底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型 终止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型 标本稀释液 1瓶（12ml） 1瓶（6.0ml） 即用型 自备材料 1． 蒸馏水。 2． 加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。 3． 振荡器及磁力搅拌器等。 安全性 1． 避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。 2． 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。 3． 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。 操作注意事项 1
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干货：腺相关病毒（AAV）技术快速入门手册
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
腺相关病毒（AAV）作为一种安全、持久、高效、高特异性的基因操作工具，在生物学特别是神经生物学领域中被广泛使用。许多新手对于AAV的使用往往是知其然而不知其所以然。这篇短文将以图文结合的形式争取让大家在最短的时间内全面了解这种病毒工具。 什么是AAV？ 野生型AAV是一种复制缺陷型微小病毒，需要腺病毒或疱疹病毒帮助其在体内复制扩增。而我们做实验用的是不需要辅助病毒的重组AAV病毒（rAAV）。将目的基因的CDS区序列或者RNAi干扰序列插入rAAV表达质粒中，包装病毒，然后直接使用rAAV感染细胞就能完成目的基因操作。 什么时候用rAAV？ 当我们需要对特定基因进行过表达或干扰时，特别是做动物实验的时候，就可以使用rAAV病毒。针对不同的实验需求，下表可以帮助您选择合适的病毒工具。 rAAV的优点是什么？ 1.安全性高，目前还没有发现AAV对人体致病；每10个人中就有8个人在一生中会感染AAV，而rAAV更是去除了96%的AAV基因组，进一步确保了安全性。目前唯一通过欧盟药监局的基因**药物Glybera也是一种rAAV。 2.免疫原性低：当AAV用局部大剂量感染肌肉、脑、眼等组织时，很少有感染上的细胞之后被免疫系统所清除。这种特性对于动物实验上显然极有帮助。 3.感染谱广：几乎所有处于分裂期和静止期的细胞都可以使用AAV来感染。 4.表达时间长：rAAV可在宿主细胞中形成附加体（episome）存在于细胞核中，在细胞分裂不旺盛的组织中可持续表达5个月以上。 5.扩散性强：rAAV具有远高于腺病毒和慢病毒的扩散性，可以穿透血脑屏障，是最理想的神经元和胶质细胞感染工具。 6.高稳定性：rAAV病毒可使用冰袋运输，并且对氯仿等试剂具有抗性 7.特异性强：rAAV有十数种常用的血清型，不同的血清型对不同的脏器有较高的识别及感染能力。 rAAV的局限性有哪些？ 1.体外实验表达水平较低：主要是因为rAAV病毒的基因组是单链DNA，在体外环境形成双链并转录翻译外源基因的效率非常低。可以在体外水平感染rAAV病毒的同时感
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潮霉素B性质及应用介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
潮霉素B(HygromycinB )是由吸水链霉菌（Streptomyceshygroscopicus）代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过抑制蛋白质合成而杀死细菌、真菌和高等真核细胞。潮霉素B通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而抑制蛋白合成。目前常用于筛选和维持培养含潮霉素抗性基因的原核或真核细胞。 潮霉素B的应用： 1）筛选和维持培养稳定转染Hph+载体的原核细胞或真核细胞（植物细胞和哺乳动物细胞）； 2）由于作用模式的差异，常与G418（GeneticinTM），Zeocin™ 和blasticidin S联合使用，筛选稳定转染两个不同载体的细胞株 3）抗病毒剂，由于潮霉素B选择性渗透进入因病毒感染增强通透性的细胞，而且具有抑制翻译的功效； 4）作为驱虫药加入动物饲料；哺乳动物细胞选择的有效浓度通常是50μg/ml-1 mg/ml之间；对于植物细胞，其有效浓度是20–200μg/ml；对于细菌，有效浓度是20–200μg/ml；对于真菌，有效浓度是200μg–1 mg/ml。 化学性质： 潮霉素B是微黄褐色无定形粉末，有特殊气味，熔点160-180℃。为弱碱，易溶于水、甲醇、乙醇，易与许多有机酸和无机酸生成盐。 保存方法：溶液直接存放在2℃～8℃，至少存放1年。 北京索莱宝科技有限公司备有现货产品潮霉素B(Hygromycin B )，货号为H8080，为Germany分装产品，溶解度为100mg/ml，效价为1100 units/mg，用于生化实验研究，转染中用的特定抗生素；潮霉素B磷酸转移酶灭活潮霉素B；携带hph基因转染的细胞对潮霉素有抗性，转染细胞稳定或暂时表达该基因。
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人B细胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）酶联分析检测ELISA试剂盒使用说明书
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
人B细胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）酶联分析检测ELISA试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 标本：血清或血浆 上海乔羽生物专业供应： 使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本B细胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）含量。 试验原理： Bcl-2试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知Bcl-2浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将Bcl-2和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中Bcl-2的浓度呈比例关系。 试剂盒内容及其配制 试剂盒成份（2-8℃保存） 96孔配置 48孔配置 配制 96/48人份酶标板 1块板（96T） 半块板（48T） 即用型 塑料膜板盖 1块 半块 即用型 标准品：80ng/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按说明书进行稀稀 空白对照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即用型 标准品稀释缓冲液 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml） 即用型 生物素标记的抗Bcl-2抗体 1瓶（6ml） 1瓶（3.0ml） 即用型 亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml） 即用型 洗涤缓冲液 1瓶（20ml） 1瓶（10ml） 按说明书进行稀释 底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型 底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型 终止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型 标本稀释液 1瓶（12ml） 1瓶（6.0ml） 即用型 自备材料 1． 蒸馏水。 2． 加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。 3． 振荡器及磁力搅拌器等。 安全性 1． 避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。 2． 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。 3． 不要用嘴吸取试剂
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LIBS光谱对水系沉积物的分类及铬元素测定研究
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
激光诱导击穿光谱（LIBS）是光谱分析领域的一种崭新分析手段，其原理是通过高能量激光在分析样品的表面产生高强度的等离子体，样品激发所产生的光通过光谱检测系统进行分析。因此LIBS 技术具有便捷、无需预处理、可同时分析多种元素等特点。 随着工业化的继续推进，水系沉积物中的重金属成为了影响环境质量的重要影响因素。水体中重金属可与沉积物结合，沉积物在环境条件发生改变后，会迁移或释放其中的重金属。因此，通过对水系沉积物中的重金属污染物进行检测和分析，既是反演和追溯该区域金属污染历史的主要根据，更是查明水系环境重金属污染状况的关键。随着经济的发展，越来越多含有重金属的污染物排放至河流，对生态环境造成了严重的危害。目前，我国已列入环境优先污染物黑名单的重金属有Cd 、As、Be、Cr、Cu、Pb、Hg、Ni 和Ti[10]。其中铬对人体健康的危害尤为引起了人们的重视。铬金属的污染主要来自于化工、耐火材料、电镀、制革、颜料和铬矿冶炼等工业生产以及燃料燃烧排出的含铬废气、废水及废渣等，相关研究表明六价铬能引起贫血、神经炎、肾炎、循环系统衰竭等疾病，长期摄入会导致肺癌、腺癌。因此对水系沉积物中的铬进行检测和监测具有非常重要的意义。 LIBS技术除了对水系沉积物进行定量分析外，还可根据不同地区重金属的分布特征对其进行分类研究。而对于浅覆盖区的地质研究，往往只有水系沉积物或土壤的资料，因此通过LIBS 技术及采用主成分分析方法对水系沉积物进行分类，还可进一步用于浅覆盖区岩石的岩性与构造识别的研究，而目前此方面研究很少。 王阳恩等基于激光诱导击穿光谱技术对水系沉积物中铬元素进行快速定量检测为目的，利用采用美国应用光谱公司生产的RT100-HP 激光诱导击穿光谱仪（型号现更新为J200）对标样和样品进行了分析，建立了标样中铬元素浓度与其激光诱导击穿光谱强度间的定标曲线，线性相关系数达到0.992，得到了样品中的铬含量。同时利用主成分分析方法对样品进行了分析，
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英国SFP公司超高压处理系统应用介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
英国SFP公司从1970年开始生产供应一系列先进、高性能的用于食品和生物制品处理的超高压处理系统。特别从1992年开始，为满足超高压食品、生物制品(如疫苗、血液制品)物理性灭菌及超高压物理改性应用的高速发展，STANSTED公司经过一系列革命性的技术创新设计，为科研工作者和工程人员开发了科研（实验型和中试型）应用的先进超高压处理系统。可靠和成熟的技术解决方案，有各种标准型号可供用户选择，也可根据客户的具体要求定制。STANSTED公司目前提供单腔体和多腔体超高压处理系统，以及系统相关的部件如：光信元件、压力腔、压力生成与控制系统、压力传感、阀和相关配件。STANSTED公司是全世界范围内研发型、中试型超高压处理系统领域的领导者。它所生产的超高压处理系统几乎为全世界所有最著名的超高压食品和超高压生物制品客户服务。 目前在国内客户的研发方向大概有如下几个方面： 果汁和饮料 超高压可保持果汁和冰沙的新鲜口感。这种非热加工处理可保持水果和蔬菜的原始味道和色泽，可制造高附加值的产品，真正品偿到新鲜果汁的味道。 果汁的味道和营养价值会被热加工严重破坏，但现在可用超高压处理，比如石榴、苹果、胡萝卜、西兰花、甜菜等。 营养和产品功能性完好保存。天然、有机、无防腐剂、和功能性，可开发健康食品：富含维他命、抗氧化剂、热敏性抗诱变成份，带来更高水平的功能新产品。 水果和蔬菜 超高压结合热处理水果和蔬菜，即超高压处理时施于保温或制冷。其优点在于保持水果和蔬菜新鲜、田园味道、营养价值的同时有效的延长保质期，根据不同样品，保质期一般可延长2-8倍。超高压处理可以消除致病性和破坏性细菌，防止交叉污染。 在促进食物安全的同时，产品可保持高感观、功能性和营养价值，超高压不破坏分子结构，开发新超高压食品成为可能，如超高压处理胡萝卜、花椰菜、甘蓝、韭菜、菠菜、甜菜、蕃茄、西兰花等，可保持它们的抗诱变成分，这启发了人们生产带有抗氧化剂的新功
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NF-κB(p65)/ NF-κB(p50)活性分析试剂盒原理及应用介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
NF-κB/Rel转录因子家族包含几种结构相关的蛋白（p65/p105,p52/p100,RelA(p65),c-Rel/ NF-κB)形成同源和/或异源二聚体。该转录因子家族成员调控超过150种目的基因，包括炎症细胞因子、趋化因子、免疫受体、细胞粘附分子等的表达。正因为如此，NF-κB被认为是“免疫应答的中心调节物”。作为二聚体，这些转录因子与DNA序列结合（这些结合位点被称为“κB位点”），从而调节目的基因的表达。在大多数细胞中，NF-κB/Rel转录复合物以未活化的形式存在于胞浆中，与抑制剂IκB结合。当细胞受到刺激后，一些列的磷酸化、泛素化反应导致IκB降解，NF-κB转录因子进入细胞核。 由于NF-κB转录因子在人类炎症反应和其他疾病中的重要作用，吸引了越来越多研究者的目光，而细胞中NF-κB各亚基活性的检测是NF-κB研究中必不可少的一步！ 怎样安全、方便、有效的检测细胞中NF-κB各亚基活性呢？ 艾美捷给出了答案：NF-κB (p65) Transcription Factor Assay Kit（货号：10007889）及NF-κB (human p50) Transcription Factor Assay Kit（货号：10006912）。在前期的样本处理中，还可以使用细胞核提取试剂盒（Nuclear Extraction Kit，货号：10009277）。 NF-κB（p65）/ NF-κB（p50）转录因子分析试剂盒原理： 微孔板预先包被含有NF-κB结合位点的dsDNA寡核苷酸，加入细胞核提取物，使NF-κB蛋白结合到dsDNA上，洗涤除去未结合组分，先后加入NF-κB特异性抗体和HRP标记的二抗。加入酶底物后，通过酶促反应，读取OD450值来定量样本中NF-κB的活性。 图2：NF-κB（p65）/ NF-κB（p50）转录因子分析试剂盒原理展示 NF-κB（p65）/ NF-κB（p50）转录因子分析试剂盒特点： ●取代了传统的凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA），基于ELISA反应原理可实现大量样本的快速高通量检测 ●在DNA与蛋白质相互作用的水平检测NF-κB活性，能够检测出细胞内真正处于活化状态的NF-κB ●试剂盒中分别含有NF-κB（p65）/ NF-κB（p50）转录因子阳性对照 ●NF-κB
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内毒素快速去除试剂盒原理及应用介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
内毒素（endotoxin），即脂多糖或LPS，是革兰氏阴性菌（如大肠杆菌）细胞膜的组成部分。细菌外膜的外层脂质部分是完全由内毒素分子所构成的。单个大肠杆菌细胞约包含两百万个LPS分子，每个LPS分子由疏水的脂质A（lipid A）部分、复杂的糖类残基阵列部分及负电性的磷酸基团所组成。广泛存在我们的试剂耗材和样品之中，是生物医学试验和医药制品中的一大污染源，是蛋白、核酸、多糖等生物大分子纯化过程中最令人头疼的杂质之一。内毒素对哺乳动物的免疫系统具有极强的刺激性，极微量的内毒素即可引起动物机体发热甚至死亡，对动物细胞有很强的毒性，严重影响着各种体内外试验和药物的安全性。 内毒素结构成分复杂，含有多糖、蛋白、脂质等成分，热稳定性和化学稳定性极强，常规方法很难除去。为了保证生物医学试验的成功率、可靠性，生物医药制品的安全性、有效性，彻底地去除样品和溶液中的内毒素成为了科学家们必须克服的难题。 最近Biovision公司新推出ToxOut™ Rapid Endotoxin Removal Kit（货号：K2501-5）及High Capacity Endotoxin Removal Kit（容量：1.5 x 109 EU/ml resin，适合内毒素含量极高的样本，货号：K2502-5）可有效解决内毒素去除问题。 Rapid Endotoxin Removal Kit工作原理： Polymyxin B（PMB）是从多粘芽孢杆菌中分离出来的一种强阳离子环抗生素，是目前发现的唯一一种能特异性亲和吸附内毒素(脂多糖)的抗生素。将Polymyxin B通过共价偶联的方式固定在琼脂糖珠上，利用Polymyxin B能够特异性亲和内毒素的特性，除去溶液和生物制品中的内毒素。 Rapid Endotoxin Removal Kit卓越之处： · 高结合容量：高达9 x 108 EU/ml resin · 清除效果：产物内毒素含量
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分子生物学相关实验步骤及注意事项（一）
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
分子生物学相关实验步骤及注意事项（一） 刚进实验室的小伙伴们，当你们在进行RNA的提取，RT-PCR和QPCR实验时，是否会有这样的感受，明明是按照实验步骤往下做的，实验结果却不如人意，甚至很糟糕呢？小编我也曾经被实验狠狠地虐过呢~为了减少实验对亲们的打击，在此献上自己在实验过程中的一些小经验，希望能帮助到各位小伙伴们~ （一）RNA提取篇 在RNA提取过程中，严格防止RNA酶的污染，并设法抑制其活性，这是本实验成功的关键。对于人、动植物组织、细菌、细胞等多种RNA的提取，Trizol法效果良好，可同时分离一个样品内的RNA/DNA/蛋白质。Trizol裂解细胞，溶解细胞内含物，同时因含有RNase抑制剂可保持RNA的完整性。 如果对RNA纯度要求极高或者样品难以提取，也可以选择使用RNA提取试剂盒。有同学用过国内的天根，效果还好。小编曾用过Omega的RNA提取试剂盒，效果也挺好的，Promega的总RNA提取试剂盒对多种样本的小量纯化提取效果也还不错。 动植物总RNA提取——Trizol法的具体步骤如下： 1、将组织物研磨后，取50-100mg加入至1mlTrizol中，充分混合裂解。样品总体积**不要超过所用Trizol体积的10%。 2、研磨液室温静置5-10min后，加入200μl氯仿，盖紧EP管，置于涡旋振荡器上剧烈震荡15s。然后冰上静置10min。 3、于4℃，10000g离心15min，吸取上层澄清的液体500μl移至另一洁净的EP管内，并加入等体积（500μl）的异丙醇，轻轻混匀后静置10min。 4、于4℃，10000g离心10min去上清。离心后可能在管壁或管底出现胶状白色沉淀物，小心操作，避免沉淀物流失。 5、加入1ml 预冷的75%无水乙醇（DEPC水配置）至EP管内，并用手指轻轻弹起沉淀物，然后4℃，10000g离心5min。 6、小心弃去上清液，于室温静置干燥2-5min，注意不能过分干燥。 7、将RNA溶于20-50μl DEPC水，必要时可55-60℃水浴3-5min。水浴过程中，EP管盖需密闭。 所提RNA可用于后续试验或者保存于-80℃。 注意事项： 1、提取之前，将所需实验物品全部放置于超净
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学习记忆类实验-T型迷宫实验方法大全及其注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
T迷宫实验方法及注意事项 一.T迷宫的发展背景 近半个世纪前，Kivy和Dember等人证明大鼠能辨别T-形迷宫（T-maze）两臂颜色的变化。他们发现，将雄性大鼠置于T-形迷宫的主干臂15~30min，让其能看见、但不能进入黑白两臂。然后，改变其中一个臂的颜色，使两臂同为黑色或白色。让大鼠自由选择T-形臂。结果显示，大鼠总是选择改变了颜色的那个臂（新异臂）。这一过程要依靠动物的记忆来完成。由此发展而成的T-形迷宫实验成为目前用于评价空间记忆的最常用的动物模型之一。当然，现在的T-形迷宫使用的是食物而不是臂的颜色作为动物探究的动力。通常用这一模型来研究动物的空间工作记忆（spatial working memory），即测定动物只在当前操作期间有用的信息。经改进后的T-形迷宫也可用来评价参考记忆（reference memory），即记录在这一实验中任何一天、任何一次的测试都有用的信息。 二.实验设备 这里介绍上海欣软信息科技有限公司的大鼠T-形迷宫。迷宫由两个长46cm、宽10cm、高10cm的目标臂（goal arms）和一个与之垂直的长71cm、同样宽度和高度的主干臂（stem）或起始臂（approach alley）组成。主干臂内置一个16cm*16cm的起始箱，并有一闸门与主干臂的另一部分相联。实验用雄性成年大鼠。饮水不限，但进食控制在每天16~20g，以使体重保持在非进食大鼠体重的85%。在整个训练和测试期间，大鼠体重每周增加不超过5g。 三.实验方法 这里介绍传统T-形迷宫实验和T-形迷宫自主交替实验。 1.传统T-形迷宫实验 （1）适应 在T-形迷宫臂内分撒6粒食丸（45g），让大鼠适应迷宫5min，每天一次，连续5天。 （2）强迫选择训练 将大鼠放入主干臂的起始箱，打开闸门，让大鼠进入迷宫的主干臂。随机、交替选择左右两臂之一放入4粒食丸，同时关闭另一臂，使动物被迫选择食物强化臂并完成摄食；每天6次，连续4天。 （3）延迟位置匹配（delayed matching-to-position,DMP）训练 1）将动物放入闸门关闭的起始箱，打开闸门，让动物进
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广州语特PCR仪、加热板类、漩涡振荡器等仪器维修心得分享
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
广州语特公司作为英国比比BIBBY SCIENTIFIC在中国南方的总代理，派我去比比的上海技术服务中心学习维修维护。此次指导我的老师是在比比担任高级维修工程师多年的钱工，他对比比产品维修经验无比丰富，驾轻就熟。 比比产品包罗万象，本人就不一一举例了，这里只挑出几个实验仪器常出现的故障点和维修方法跟大家分享。 1.SA8（漩涡振荡器）：相信这款仪器大家都非常熟悉了，如果出现开机不得电的现象，可以检查下保险丝是否已经被烧，若从表面现象无法判断，可用万用表测量；当使用的过程中出现尖锐的异声或听到电机转动的声音但不转动，这时可以检查一下内部带动马达的皮带是否松动；如果出现试品管按下却不转动的现象，可能是PCB板上传感器的问题，把传感器接触片拨动在合适的位子即可。 2.加热板类：如果出现指示灯全灭，仪器无法得电的现象，可以检查下保险管，而由于加热板种类多，有些保险丝在内部的PCB板上，有些是在电源线输入的下方，具体看型号；面板不加热，可能是加热元件的损坏；若是SCTE、探棒配套使用的加热板出现故障时，首要的是把scte/探棒与主机分开，再逐一去进行排除，确定是scte/探棒还是主机的故障；若是带有磁力搅拌功能的加热板出现无法搅拌的问题，主要是马达或PCB板出现故障。 3.摇床:当出现转速不受控制、有异声、不摇、摇不顺畅，可以初步判断是马达传感器或者是轴承的故障。 4.最后一个是我们高大上的PCR仪，恰好工厂有台故障机，钱工就带着我一起维修了。我们开机后一直处于开机状态，过了一会弹出一个错误代码:1018，无法进去系统页面。根据客户的故障描述是所有的程序丢失，温度梯度也全部为零。钱工初步判断系统需要刷机，这种情况就有点类似于计算机突然崩溃了，需要重新刷机。我们先在电脑制作好一个软件，拷入u盘插入PCR的USB接口，比比公司的PCR在研发和生产中很多都是走智能路线的，许多繁琐的操作和复杂的设定都设计为简便化了。所以插入U盘就会自动进行系统刷新。
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