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化学实验室三废处理方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
化学实验室经常会产生某些有毒的气体，液体或废渣需要处理，特别是某些剧毒物质，如果直接排出就可能污染周围的空气和水源，造成环境污染，损害人体健康。因此对废液、废气和废渣要经过一定的处理后，才能排弃。严禁将浓酸、浓碱废液和不能溶固体物质倒入水池，以防堵塞和腐蚀水管。化学实验室的“三废”排放应做到以下几点： 一. 废气：产生少量有毒气体的实验室应在通风柜中进行，通过排风设备将少量毒气排到室外。产生毒气量较大的实验室必须有吸收或处理装置。如 NO2、SO2、H2S、HF 等可用导管通入碱溶液中，以使其大部分被吸收后排出，CO可点燃使其生成CO2。 二. 废渣：少量有毒的废渣，应安排指定地点并深埋于地下。 三. 废液：废液的处理与其性质有关，不同的废液处理方法不同。如废硫酸液可先用废碱液和碱液中和，调制pH6-8，然后从水道排出。含酚、氰、汞、铬、砷的废液经以下处理才能排放，具体办法如下： 1 酚：高浓度的酚可用己酸丁酯萃取，重蒸馏回收。低浓度的酚废液可加入次氯酸钠或漂白粉使酚氧化为二氧化碳和水。 2 氰化物：含有氰化物的废液不得直接倒入实验室水池内，应加入氢氧化钠使呈硷性后再倒入硫酸亚铁溶液中（按质量计算：1份硫酸亚铁对1份氢氧化钠），生成无毒的亚铁氢化钠再排入下水管道。 3 汞：若不小心将金属汞散落在实验室内，必须立即用吸管、毛笔或硝酸汞溶液浸过的薄铜片将所有的汞滴拣起，收集于适当的瓶中，用水覆盖起来。散落过汞的地面应撒入硫磺粉，将洒落区覆盖一段时间，使其生成硫化汞，再设法扫净，也可喷洒20%的三氯化铁溶液，让其自行干燥后再清扫干净。 含汞盐的废液，可先调节pH至8-10，加入过量硫化钠，使其生成硫化汞沉淀，再加入硫酸亚铁作为沉淀剂，清夜可以排放，残渣可以用焙烧法回收汞，或再制成汞盐。 4 铬：铬酸洗液如失效变绿，可浓缩冷却后加高锰酸钾粉末氧化，用砂心漏斗滤去二氧化锰后再用。失效的废洗液可用废铁屑还原残
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薄层色谱点样选购指南、操作技巧、注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
薄层色谱点样 点样方法 点样除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边2.0cm，样点直径及点间距离同纸色谱法，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。点样直径不超过5mm，点样距离一般为1~1.5cm即可。样品在溶剂中的溶解度很大，原点将呈空心环——环形色谱效应。因此配制样品溶液时应选择对组分溶解度相对较小的溶剂。点样方式有点状点样和带状点样。 怎样提高点样效率? 点样是造成TLC定量误差的主要来源。实验证明：定量毛细管更适合较小体积的点样；微量注射器更适合较大体积的点样。这主要是因为微量注射器受小气泡、溶液回爬现象的影响较大。为避免不同定量毛细管间的点样误差、建议一块薄层板上**用同一只定量毛细管。但应注意更换样品时，应将毛细管用超1声bo或不同极性溶剂清洗干净。在制备样品时，溶样溶剂黏度不能过高，以便于点样；溶剂沸点过低则进样体积易变，过高则会改变展开剂组成；对样品溶解度过高会使样点发生空心现象；常用的溶剂为甲醇、乙醇、**。经典TLC样点原点一般为直径3mm点间距1--2cm 底边距1.5cm；HPLC样点原点一般为直径1mm点间距5mm 底边距1cm。 不同溶剂对样品的洗脱能力不同，因此在点样的同时，样品在原点开始呈环形展开，如果样品在溶剂中的溶解度很大，原点将变成空心环，Kaiser称这种现象为“点样环形色谱效应”。这种效应对随后的线形展开造成不良影响，因此配制样品溶液时应选用对组分溶解度相对较小的溶剂；溶剂的粘度不宜过高，以便于点样，溶剂的沸点要适中，沸点过低由于挥发会改变样品溶液浓度导致较大误差，沸点过高，样品溶液的溶剂会在原点残留，导致改变展开剂的选择性，特别是样品溶液的溶剂与展开剂的极性相差较大时更为明显，最常用的溶剂为甲醇及乙醇，有时也用丙酮。点样后必须将溶剂全部除去后再进行展开，但要避免高温加热，以免改变待测成分的性质。（长沙德之瑞仪器科技有限公司定量毛细管）
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移植NEP基因转染的神经干细胞对AD大鼠行为学的影响
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
移植NEP基因转染的神经干细胞对AD大鼠行为学的影响 阿尔茨海默病(Alzheimer disease ，AD)病理过程的关键问题是患者脑中p一淀粉样多肽的异常增加和沉积。中性内肤酶( NEP)是脑内最重要的A p降解酶，是影响脑内Ap分解代谢速率的限制因素。神经干细胞(neural stem cell ， NSC)是具有向多种细胞系分化又具有自我更新能力的细胞。NSC、**AD是运用其特性修复和替代受损的神经细胞，另外，NSCs是非常理想的基因载体，拥有许多其他载体所没有的优点。本实验将NEP基因转染的神经干细胞移植到AD大鼠侧脑室，观察行为学的变化，为阿尔茨海默病的**提供新的依据。 1材料和方法 1. 1实验动物 清洁SD大鼠由佳木斯大学动物实验中心提供。 1.2主要试剂 胎牛血清、Ap1一40、神经干细胞基础培养基、神经干细胞完全培养基、神经小球分散试剂盒等均购于美国Sigma公司。 1.3方法 1.3.1动物模型的建立 选左侧海马CAI区为注射区:根据Pellegrino和Cusmhna的大鼠脑立体定位图谱，确定本研究中的注射坐标为前囱后3. 3mm，中线左侧2. 2mm，硬脑膜下2. 8mm。用微量加样器缓慢注射Ap一40溶液1 uL，之后缓慢撤针，充分消毒，缝合皮肤。术后常规饲养，待两周后做细胞移植。 3. 2分组和细胞移植 30只AD大鼠在随机分为3组，每组各10只:AD模型组、移植神经干细胞组(NSCs组)和移植NEP基因转染神经干细胞组(NEP一NSCs组)。选左侧海马C AI区在3组AD大鼠分别微量植入6},L细胞培养液、NSC悬液及NEP一NSC悬液(浓度约为1 x 105个细胞枢L)，注射完毕后，全层缝合头皮，腹腔注射青霉素，术后放置于温暖安静处至清醒。每组大鼠术后第8周进行实验。 1.3.3隐蔽平台实验 实验期限为6d。实验前让大鼠自由游泳1分。在水迷宫象限的中央固定隐蔽平台的位置，将每只大鼠头朝外壁在任何一个象限内的随机位置放入水中，大鼠爬到平台上或到达60秒时，实验立即停止。大鼠自己爬到平台或操作人员引导使其爬上平台后停留10秒。每天训练4次，每次间隔30min。通过影
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ELISA实验原理与类型
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
ELISA的原理 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。 ELISA的类型 ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有三个必要的试剂： （1）固相的抗菌素原或抗体，即"免疫吸附剂"（immunosorbent）； （2）酶标记的抗原或抗体，称为"结合物"（conjugate）； （3）酶反应的底物。 根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件，可设计出各种不同类型的检测方法。用于临床检验的ELISA主要有以下几种类型： √ 夹心法（双抗体夹心法测抗原、双抗原夹心法测抗体） √ 间接法测抗体（常用） √ 竞争法（竞争法测抗原、竞争法测抗体） √ 捕获包被法测抗体 √ 亲和素-生物素ELISA法 1. 双抗体夹心法测抗原 双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，操作步骤如下： 1）将特异性抗体与固相载体联结，形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。 2）加待测样品，保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。 3）加酶标抗体，保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。 4）加底物显色。固相上
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MK- 801建立精神分裂症动物模型研究进展
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
MK- 801建立精神分裂症动物模型研究进展 精神分裂症是精神科常见的重型精神疾病，致残率极高，也是疾病负担最重的精神障碍之一，其终生患病率约占整个人口的1%。其病因尚未阐明。目前大多数研究认为精神分裂症是由生物、心理和社会环境以及它们的相互作用造成大脑功能损害的结果。推进对精神分裂症病因与生物机制的理解、探讨抗精神病药物作用机理以及识别评估新的**手段离不开精神分裂症动物模型的建立。由于精神分裂症具有独特的人类本质，动物模型无法模拟精神分裂症患者的精神和心理因素，发展完善动物模型这一课题面临艰巨的挑战。因此本文将就此方面研究进展展开综述。 1动物模型建立的现况 精神分裂症的动物模型按其诱导策略的不同大致可分为药理学诱导动物模型、发育动物模型和转基因动物模型三大类[Cil。药理学诱导动物模型采用药物诱导精神分裂样症状。多巴胺假说是最早的精神分裂症病因假说，该理论认为精神分裂症症状是由于脑内多巴胺过剩所致。通过精神振奋药如安非他明来诱发动物的异常行为是这一模型的代表。由于多巴胺递质失调的假说无法完全解释精神分裂症的发病机制，近年来，谷氨酸盐失调假说引起了广泛的关注。研究发现给人类注射NMDA受体拮抗剂药物后可引起类似精神分裂症症状的行为表现，包括幻觉、妄想和怪异行为。同样，在啮齿类动物身上注射此类药物，也会出现类似精神病的行为改变，如感觉运动门控障碍、极度活跃、社会退缩，以及学习和记忆功能障碍。报道称这些行为异常可以通过注射临床上一些抗精神病药物恢复正常。因此它成为阐明精神分裂症发生的病理机制，检验新型抗精神病药物有效性的一个有力的工具，也是目前国内外研究中最常使用的一种模型建立方法，其代表药物有氯胺酮,PCP和MIA-801。其中MIA-801可以同时模拟精神分裂症的阴、阳性症状，因此近年来广泛用于模型建立的研究中，本文将对其详细介绍。此外，研究发现神经紧张素与精神分裂症病理机制有关，并且参与了抗精神病药物的作
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ELISA实验的注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
1. 正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。 2. 在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括: （1） 固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。 （2）包被抗体(或抗原)的选择：将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时，要求纯度要好，吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响，一般多采用4℃18～24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg/ml。 （3） 酶标记抗体工作浓度的选择：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。 （4） 酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。 3. 标本收集：标本收集及保存的好坏，直接决定了实验能否成功。在收集标本之前必须考虑到实验对标本收集及保存的要求，这些要求对标本中待测物质稳定性影响很
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亲和层析原理及应用介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
亲和层析是利用待分离物质和它的特异性配体间具有特异的亲和力，从而达到分离目的的一类特殊层析技术。 具有专一亲和力的生物分子对主要有：抗原与抗体、DNA与互补DNA或RNA、酶与它的底物或竞争性抑制剂、激素（或药物）与它们的受体、维生素和它的特异结合蛋白、糖蛋白与它相应的植物凝集素等。可亲和的一对分子中的一方以共价键形式与不溶性载体相连作为固定相吸附剂，当含有混合组份的样品通过此固定相时，只有和固定相分子有特异亲和力的物质，才能被固定相吸附结合，其它没有亲和力的无关组份就随流动相流出，然后改变流动组成份，将结合的亲和物洗脱下来。亲和层析中所用的载体称为基质，与基质共价连接的化合物称配基。 亲和层析纯化过程简单、迅速，且分离效率高。对分离含量极少又不稳定的活性物质尤为有效。但本法必须针对某一分离对象，制备专一的配基和寻求层析的稳定条件。 使用亲和层析的方法可以简便、快速、高效地将目标蛋白从杂蛋白溶液中分离纯化出来，亲和层析技术已成为广泛应用的一种蛋白分离技术，或可为客户提供的抗体或抗血清制备亲和层析柱。 亲和层析可用于：1.纯化生物大分子2.稀溶液的浓缩3.不稳定蛋白质的贮藏4.从纯化的分子中除去残余的污染物5.用免疫吸附剂吸附纯化对此尚无互补配体的生物大分子6.分离核酸是亲和层析应用的一个重要方面。 我公司目录中的抗体均可根据客户的需求制备成亲和层析柱，或可为客户提供的抗体或抗血清制备亲和层析柱。
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热休克蛋白HSP对细胞凋亡的调节作用
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
细胞凋亡是生物发育过程中或在正常生理状态下清除衰老及受损细胞的一种普遍现象。细胞凋亡的发生受胞外或胞内的多种刺激源所诱导，其中热休克蛋白（热激蛋白）是细胞凋亡的调控因子之一。细胞是通过调节自身的防御系统来适应环境胁迫，并且根据胁迫程度的强弱，利用自身遗传机制或调控自身状态抵抗胁迫，或主动诱发细胞死亡。细胞死亡有两种形式：细胞凋亡和细胞坏死。 细胞凋亡：是一种依赖于能量的、普遍存在的生理过程，受一些在进化上保守的基因所表达蛋白的调控。热休克蛋白(heat shock protein，HSP)被认为是生物进化上最保守的蛋白家族之一，经研究表明，HSP与细胞凋亡关系密切，尤其是HSP70、HSP27对热激胁迫、氧化胁迫、电离辐射等引起的细胞凋亡具有保护作用。 一.热休克蛋白与细胞凋亡 细胞凋亡是一种由基因控制的细胞自主性死亡。它是指在一定的生理或病理条件下，有核细胞启动细胞内的特定程序(自身的遗传机制)，通过激活内源DNA内切酶，导致细胞自然死亡。细胞凋亡的特点在于特异的形态和生理变化：形态上的变化包括细胞收缩、质膜出现孔隙、细胞核浓缩和胞体自行分割成许多由膜包裹的超微结构完整的细胞体，称凋亡小体(apoptotic body) ；而生理上的变化包括核DNA的断裂，以及caspases (cysteine as-partate-specific protease)活化后生成了被部分消化的蛋白水解产物。 细胞凋亡是一个高度精确调节的过程，它首先对初始的刺激产生响应，尔后在一些激酶和调节因子的作用下发生一系列级联反应。 细胞凋亡过程大体可以分为三个阶段： (1)起始阶段(或信号感应阶段)，包括细胞表面死亡受体的激活，主要是肿瘤坏死因子(TNF)家族成员 ； (2)信号转导阶段(或准备阶段)，包括caspases感应器和特定激酶/磷酸酶的活化； (3)执行阶段(或死亡阶段)，主要是caspases效应器的活化。对细胞凋亡的调节主要发生在信号转导通路的交叉处。 表达热休克蛋白是细胞受高温胁迫后在分子水平上最主要的响应之一。 根据相对分
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真空冷冻干燥机行业应以质量为重
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
随着医药行业的不断发展，真空冷冻干燥机的前景不断广阔，这就吸引了众多的企业相继加入到这个行业中来，在干燥机在食品、医药等行业中都发挥着十分重要的作用，而真空冷冻干燥机则将引领机械行业未来的发展。 根据真空冷冻干燥机现在的发展情况来看，靠价格制胜的时代已经不复存在，主要是因为市场要求不断提高，新的技术不断产生，所以对于真空冷冻干燥机的质量一定好严格把关，让质量说话才是我们在这个行业中生存下来的王道。 一个好的质量不仅是可以让我们不断开辟新的市场，有更大的市场位置，更重要的就是真空冷冻干燥机在以后的发展过程中，我们将赢得更多的消费者的信赖和支持，所以真真空冷冻干燥机要充分重视起来，在我们为自己的利益的同时提高在技术和质量方面力度的管理。 尽管我国真空冷冻干燥机行业已经取得很大的发展和进步，甚至其中也有产量位居世界前列的产品，然而也应该看到的是，我国真空冷冻干燥机行业仍然不够强大，工业附加值及劳动生产率都很还比较低，高水平生产能力尚且不足，低水平生产能力过剩，技术创新能力还很薄弱，产品技术含量及产品附加值低。 因此业内人士都表示行业需要加大科研力度。从提升真空冷冻干燥机的制造工艺入手，加大科技研发和技术更新的力度，淘汰陈旧加工设备和工艺，同时不断的吸收消化国内外的先进制造技术，利用先进的科技检测手段从源头上提高真空冷冻干燥机的质量。还应该大胆的向无人化操作方向发展，要利用现有科技技术发展，使我国真空冷冻干燥机摆脱傻、大、粗的局面。 作为制药机械设备的产品，质量是消费者关心的首要问题。只有拥有合格的质量，真空冷冻干燥机才能良好的工作，才能生产合格的产品，反之就会带来不必要的损失。众所周知，近年来，药品、中药不断陷入质量门，这些企业瞬间就没了，由此看来，一个企业如果因为质量安全的问题而失去顾客的信任的话，那么这个企业将会失去了生存的筹码，被无情的市场淘汰。可见，质
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【锐赛小课题】miRNA研究之动物总RNA的提取与电泳
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
动物总RNA的提取与电泳 I． 实验目的与要求 A. 理解和掌握提取和纯化动物总RNA的技术原理和操作方法。 B. 理解和掌握通过电泳鉴定提取所得的动物总RNA的技术原理和操作方法。 II． 实验原理和背景知识 A. RNA是生命活动中基因表达过程非常重要的生物大分子，如mRNA,它携带了DNA的全部编码信息。RNA的分离是研究基因功能的重要基础之一，在分子生物学中占有重要的地位。提取的mRNA可用于Northern blot、RT-PCR、构建 cDNA文库、Gene Chips以及体外翻译等实验。 B. 本次试验中，由于RNase极稳定，所以，在操作RNA时，要格外仔细，以防RNA被降解。在提取RNA之前，必须对所用器皿进行RNase灭活处理。如用180oC干烤8小时以上处理玻璃器皿，或用0.1%的焦碳酸二乙酯(DEPC)的水溶液浸泡玻璃器皿和其它用品。所用水以及相关的缓冲液也需要用0.1% DEPC水处理，但Tris-Cl缓冲液等不可以用DEPC处理。（注意：DEPC有致癌之嫌 ，必须小心操作，防止接触与吸入 ！） C. 在动物细胞内，所含RNA主要是 rRNA（占80～85％）、tRNA及小分子RNA（占10～15％）和mRNA（占1～5％）。rRNA含量最丰富，由28S、18S和5S几类组成。mRNA种类繁多，分子量从数百至数千碱基不等，但绝大多数mRNA在3’端都有一个Poly-A尾巴，因此，可根据此特性用寡聚脱氧胸苷(Oligo dT)层析柱从总RNA中将 mRNA分离出来。一般情况下，提取的总RNA也可用于Northern blot试验。 D. 提取动物RNA的实验操作中要注意的问题有以下几点： 1.一般用机械研磨或匀浆的方法破碎动物组织细胞； 2.要加入蛋白质变性剂，使核蛋白与RNA分离并释放出RNA； 3.抑制内源和外源RNase活性； 4.将RNA与DNA、蛋白质及其它细胞成分分开。 E. 总体而言，目前在实验中应用较多，较为成熟的提取总RNA的方法有3种: 1. 苯酚法：用SDS变性蛋白并抑制RNase活性，经多次酚/氯仿抽提除去蛋白、多糖、色素等后，用NaAC和乙醇沉淀RNA； 2. 胍盐法：用异硫氰酸胍或盐酸胍和b-巯基乙醇变性
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小常识：原癌基因（oncogene）的表达及其产物的功能介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
原癌基因是细胞内与细胞增殖相关的基因，是维持机体正常生命活动所必须的，在进化上高等保守。当原癌基因的结构或调控区发生变异，基因产物增多或活性增强时，使细胞过度增殖，从而形成肿瘤简称为TSG。 原癌基因是细胞的正常基因，其表达产物对细胞的生理功能极其重要，只有当原癌基因发生结构改变或过度表达时，才有可能导致细胞癌变。 一、原癌基因表达的特点： l、正常细胞中原癌基因的表达水平一般较低，而且是受生长调节的:其表达主要有三个特点： ①具有分化阶段特异性； ②细胞类型特异性； ③细胞周期特异性。 2、肿瘤细胞中原癌基因的表达有2个比较普遍和突出的特点： ①一些原癌基因具有高水平的表达成过度表达； ②原癌基因的表达程度和次序发生紊乱，不再具有细胞周期特异性。 3、细胞分化与原癌基因表达，在分化过程中，与分化有关的原癌基因表达增加，而与细胞增殖有关的原癌基因表达受抑制。 二、原癌基因的结构改变与其表达激活： (一)点突变 C--ras：12、13、61位密码子点突变，存在于多种肿瘤．C-ras编码蛋白(21kD,P21)：RAS，是一种GTP结合蛋白，具GTP酶活性，是重要的信号转导分子。 (二)染色体易位 染色体易位(translocation)：是染色体的一部分因断裂脱离，并与其它染色体联结的重排过程。 因染色体易位造成的原癌基因激活： 1、因易位使原癌基因与另一基因形成融合基因，产生一个具有致癌活性的融合蛋白，如t(9：22)使c-abl与bcr融合，产生一个致癌的P210蛋白 2、因易位面使原癌基因表达失控，如t(8：14)易位使c-myc表达失控． (三)基因扩增 基因扩增(gene amplification)即基因拷贝数增加． 如HL-60和其它白血病细胞，C-myc扩增8-22倍．其它：c-erb B，c-net． (四)LTR插入。LTR是逆转录病毒基因组两端的长末端重复(long terminal repeat)，其中含有强启动子序列。 三、原癌基因产物的功能： 大多数原癌基因编码的蛋白质都是复杂的细胞信号转导网络中的成份，在信号转导途径中有着重要
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细胞表面抗原-流式细胞检测的一般步骤（供参考）
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
1.实验材料： 检测管或96微孔板 一抗（FITC标记），以表记Anti-CD19/FITC抗体为例 缓冲液：PBS（PH7.4） 设备：移液器、离心机、冰盒或冰箱、流式细胞仪 2. 注意事项： 标记抗体在使用之前用PBS溶解并振匀，并确认没有沉淀，迅速离心几秒，使所有的液体都集中到管底，标记抗体应避光4℃保存，避免冻结，因样本的固定保存或较长时间放置可能会影响细胞表面分子和抗体之间的结合，故建议尽可能使用新鲜样品。 3. 操作方法： 一、以大鼠淋巴组织细胞表面抗原的流式检测步骤为例 样品制备： 取出大鼠淋巴组织块，迅速浸泡在10ml的缓冲液中，并用注射器的活塞研磨或使用两块预冷的载玻片研压成单细胞。 把悬液转移到50ml的锥形管中静置片刻，使细胞团块和碎片沉降到管底，并通过尼龙网过滤成单细胞悬液。 在4℃下300-400g离心4-5分钟，除去上清液。 如果该样品为脾脏细胞，加入一定量的RBC lysis裂解红细胞，或者用分离液分离出淋巴细胞。若为其它样品，不用此步骤。 加入50ml 缓冲液重悬细胞后计数，根据需要用台盼蓝(Trypan Blue)进行细胞活性检测。 离心细胞液并除去上清；用适量的缓冲液重悬细胞为2×107个/ml。采用直接标记的一抗，则加入CD19/FITC抗体（0.5-1ug/106细胞）冰上孵育5-10分钟。 细胞荧光染色步骤： 1. 在每个流式检测管或板式微孔中加入50ul的稀释后的一抗；在空白管/孔或同型对照管/孔中加入50ul 缓冲液。若进行抗体最佳浓度测试，建议范围2-0.03ug/106细胞。 2. 在各管/孔中分别加入50ul细胞悬液（约106细胞），并轻轻混匀。 3. 避光冰浴或在4℃冰箱中孵育20分钟。（注意：有些抗体可能需要更长的孵育时间，建议实验者进行预试验摸索） 4. 孵育完成后，加入缓冲液（每流式检测管中加2ml，而每微孔中加200ul）4℃下300-400g离心5分钟，并弃去上清。 5. 重复洗涤过程3次。 6. 重悬细胞后上流式仪检测。 7. 使用直接标记一抗，用500ul 缓冲液重悬细胞后上机检测。若使用的一抗是纯化或生物素标
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DNA甲基转移酶与肿瘤的形成和变异
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
DNA甲基化有其重要的生物学上的意义，他的作用表现在控制基因表达，维护染色体的完整性(integrity)和调节DNA重组的某些环节。DNA甲基化可通过影响癌基因和抑癌基因的表达以及基因组的稳定性而参与肿瘤形成。然而，经过大量试验、研究证实，DNA甲基化是由DNA甲基转移酶（DNMT）催化发生并维持和调控的。目前认为：DNMT活性增高是肿瘤细胞具有特征的早期分子改变，因而受到越来越多的学者关注。 DNA甲基转移酶是一种能催化甲基转移至脱氧核糖核酸（DNA）受体的转移酶。DNA甲基化是最早发现的修饰途径之一，大量研究表明，DNA甲基化能引起染色质结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变，从而控制基因表达。在甲基转移酶的催化下，DNA的CG两个核苷酸的胞嘧啶被选择性地添加甲基，形成5－甲基胞嘧啶，这常见于基因的5'-CG-3'序列。大多数脊椎动物基因组DNA都有少量的甲基化胞嘧啶，主要集中在基因5＇端的非编码区，并成簇存在。甲基化位点可随DNA的复制而遗传，因为DNA复制后，甲基化酶可将新合成的未甲基化的位点进行甲基化。DNA的甲基化可引起基因的失活。 近年来，在肿瘤的研究方面，从DNA水平上研究肿瘤的发生发展和变异，对DNA甲基转移酶的研究是很重要的课题，有待于更深一步的了解。 DNA甲基转移酶： 1) DNMT1-持续性DNA甲基转移酶：作用于仅有一条链甲基化的DNA 双链，使其完全甲基化，可参与DNA 复制双链中的新合成链的甲基化，DNMT1 可能直接与HDAC (组蛋白去乙酰基转移酶) 联合作用阻断转录；2) DNMT3a、DNMT3b-从头甲基转移酶:它们可甲基化CpG, 使其半甲基化，继而全甲基化。从头甲基转移酶可能参与细胞生长分化调控，其中DNM T3b在肿瘤基因甲基化中起重要作用。
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Nature communications：基于量子点的多轮次多色原位成像技术
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
题目：Nature communications：基于量子点的多轮次多色原位成像技术 摘要：基于量子点-Protein A-抗体的偶联物，对同一样品进行多轮次的多色共染，利用荧光光谱仪分析，具有同时获取单细胞内50-100个靶标分子信息的潜能。 华盛顿大学Gao Xiaohu课题组，利用Protein A与量子点（Quantum dots，QDs）的偶联物，通过Protein A捕捉抗体Fc片段，从而获得QD-Protein A-Ab荧光探针（图1）。该量子点荧光探针制备简单、成本低、适合流水线分析，同时易于洗脱，不会对下一轮染色发生干扰，并保持靶抗原和标本形态在每一轮染色中的完整性。对于每轮的多色共染，需要利用荧光光谱仪进行光谱分离和定量分析，从而获得单个细胞的详细的分子谱定量信息，对于系统生物学、基因表达研究、信号传导通路分析以及分子诊断具有重要意义。 在每轮的多色共染中，可分析N个靶标分子，而N的大小取决于对不同荧光探针的光谱分辨能力。如果每20nm发射波长即有对应的量子点进行抗体标记，同时荧光光谱仪有十个通道进行光谱分离和定量分析，那么，每轮可同时进行十个颜色的共染，如果再经过九个轮次的脱色-再染色，理论上可以在同一张固定样本上实现共计100个（10X10）靶标分子的分析。上述课题组开展了每轮5个颜色共染、反复进行5个轮次的原位成像分析，结果显示，全部五个靶标分子在五轮染色中呈现一致的染色模式和平均染色强度，同时每轮染色后没有荧光信号残留，标本在五轮染色后依然保持了良好的细胞形态（图2）。 图1 QD-Protein A-Ab荧光探针的多轮次多色原位成像模式图 (a) 染色前，QD-Protein A偶联物捕捉溶液中抗体（Ab），形成功能化的QD-Protein A-Ab荧光探针； (b) 将不同的探针汇集形成鸡尾酒混合物；(c) 混合探针与固定细胞孵育，进行平行的多色共染； (d) 利用荧光光谱仪采集图像和光谱数据，形成各抗原的表达谱；(e) 以再生缓冲液进行简短漂洗，使标本完全脱色；(f) 进行下一轮其它靶标的多色共
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右美托咪定对创伤后应激障碍大鼠焦虑状态和认知功能的影响
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
右美托咪定对创伤后应激障碍大鼠焦虑状态和认知功能的影响 目的：探讨右美托咪定对创伤后应激障碍(PTSD)大鼠焦虑状态和认知功能的影响。 方法：将雄性SD大鼠随机分为五组：对照组(C组)、PTSD模型组(P组)和右美托咪定10ug／kg组(D1组)、20ug／kg组(D2组)和40 ug／kg组(D3组)，通过条件性恐惧实验测定大鼠的恐惧记忆，旷场实验测定大鼠的自主活动能力和焦虑状态，高架十字迷宫测定大鼠的焦虑状态和水迷宫实验测定大鼠的空间学习记忆能力。结果与P组比较，D1、D2、D3组僵直时间百分比、总运动路程和潜伏期均明显降低(P
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