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2016生命科学与药物研发新技术系列讲座资料下载
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
2016年5月12日—13日，由上海市生物工程学会、中科院院士上海浦东活动中心主办，上海浦东新区生物产业协会、上海张江生物医药基地有限公司协办，中国生物器材网和上海伯豪生物技术有限公司承办的“2016生命科学与药物研发新技术系列讲座暨展示会”在生物芯片上海国家工程研究中心成功举办。本次讲座聚焦基因分型、细胞分析、免疫检测三大领域，旨在为张江高科技园区及周边地区的生物医药研发企业和科研单位用户搭建一个学习交流的平台，促进药物研发的创新发展。 在2天20场讲座里，来自伯豪、礼来中国研发中心、Agilent、Affymetrix、中科院上海药物所、QIAGEN、Thermo Fisher、illumina、贝克曼库尔特、Clontech、上海中医药大学、仁济医院、Nexcelom China、Molecular Devices、长海医院、倍辉科技、CountStar等科研院所、医院和生命科学仪器公司的专家通过实际的应用案例，为大家详细阐述了基因检测与精准**、二代测序技术、流式细胞仪、量化成像技术、M4激光全息/LSP技术等在精准医学和药物研发中的创新应用。 讲座现场学术气氛浓厚，与会人员与演讲嘉宾进行了热烈的交流与讨论。现应广大师生的强烈要求，公布部分讲座PPT，供广大老师下载学习。 友情提示： 1、请在注册“个人用户”后再下载讲座PDF资料。点击此处立即注册 2、由于部分文件较大，请耐心等待下载完成。 3、讲座资料尚在陆续整理上传中，请持续关注此下载页面。 4、所提供资料仅供学习交流用，不得擅自转载，用作其他用途。 5、由于部分老师不方便公开演讲内容，所以只能公布部分讲座PPT。
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怎样延长高速离心机的寿命
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
高速离心机广泛应用于生物学、医学、遗传学、农业科学、食品卫生、环保等科研和生产单位。如何让高速离心机保持良好状态，湖南吉尔森小编为大家简单介绍一下。 首先，使用前要关注到高速离心机使用手册，必须要遵循其中所建议使用方法，要确保到供给机器质量正确的水和空气比例，一定要做好配比的工作。使用的润滑油，必须是经过批准的品牌油，必须要做到定期使用状况的检查。 其次要做好对离心机的监控，可持续的对设备的振动过程和轴承的温度来监控。经常要做设备的检查工作，看是否有泄漏和任何的异常声响，一旦发现就要立即进行处理。对于操作区域是要始终保持清洁，切记不要将零部件给直接放到地面上，在平时就要开始养成操作的好习惯，就会避免了操作不当的失误。 再次，必须使用的是真正由原始设备制造商给提供的配件，来用于服务和维护，要把配件存储到一个干净又安全且是干燥的地方。必须严格使用到正牌配件，这样才能达到承诺的性能和可靠性，更能保证设备的使用寿命。 最后，在设备使用中一定要注意到操作原理，要安全得使用，就得从日常维护和正确的操作开始的，在高速离心机的使用中注意的事项要坚持做到，这样才可以提高机器的工作效率，尤其是要根据高速离心机的特性来正确的使用，方可维持好的运转能力。 此文章由实验室仪器--湖南吉尔森科技发展有限公司编辑整理。
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高温消毒两种方法的优劣对比：湿热灭菌PK干热灭菌
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
高温消毒分为两类，一是传统的高温干热消毒，另一种是先进的高温湿热灭菌。 干热空气灭菌法：系指用高温干热空气灭菌的方法。 特点：该法适用于耐高温金属、玻璃等物品以及不允许湿热穿透的油脂类（如油性软膏基质、注射用油等）和耐高温的粉末化学药品的灭菌，不适与橡胶、塑料及大部分药品的灭菌。 MMM集团干热灭菌柜 注意：在干燥的状态下，由于热穿透力较差，微生物耐热性较高，必须长时间受高温的作用才能达到灭菌的目的。因此干热空气灭菌法采用的温度一般比湿热灭菌法要高。一般规定为135-145℃灭菌3-5小时；160-170℃灭菌2-4小时；180-200℃灭菌0.5-1小时。 湿热灭菌法（特指热压灭菌法）：系指用高压饱和水蒸气加热杀灭微生物的方法。 特点：穿透能力强，灭菌效率高，时间短。该法适用于耐高温和耐高压蒸汽的所有药物制剂、液体培养基、纺织物、玻璃容器、金属容器、瓷器、橡胶塞、滤膜过滤器等。一般121℃灭菌20min，134℃灭菌7min。 MMM集团湿热灭菌柜 接下来我们重点说一下高温干热和高温湿热两种方法的优劣。 ①蛋白质凝固所需的温度与其含水量有关，含水量愈大，发生凝固所需的温度愈低。湿热灭菌的菌体蛋白质吸收水分，所以较同一温度的干热空气中易于凝固。 ②湿热灭菌过程中蒸汽放出大量潜热，加速提高湿度。因而湿热灭菌比干热所需温度低，如在同一温度下，则湿热灭菌所需时间比干热短。 ③湿热的穿透力比干热大，使其深部也能达到灭菌温度，故湿热比干热收效好一些。 所以高温灭菌并不是简单的看灭菌温度，主要是看是否湿热消毒。高温湿热由于蒸汽潜热大，穿透力强，容易使蛋白质变性或凝固，因此该法的灭菌效率比干热灭菌法高。
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如何提高低速冷冻离心机的分离效果
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
低速冷冻离心机操作简单、运行平衡、性能稳定、安全可靠，实验室各种试管、离心管、离心瓶，酶标板等基本上都能通用，一机多用，非常实用，广泛应用于放射免疫、生物化学、血液制品、环境保护等生产和科研单位，对溶液中密度不同的粒子进行分离。那么在具体应用中，如何操作来提高低速冷冻离心机的分离效果呢？ 1、精确控制离心时间 离心时间是影响低速冷冻离心机离心效果十分重要的一个因素，离心方法的不同所需要的离心时间也会不同。下面以差速离心和等密度梯度离心以及密度梯度离心为例，详细介绍。对于差速离心来说，离心时间指的是某种颗粒完全沉降到离心管底的时间；而对于等密度梯度离心来说，离心时间则是指颗粒完全到达等密度点的平衡时间；最后一个密度梯度离心的离心时间指的是形成界限分明的区带的时间。对于后面两种离心方法，其所需的区带形成时间或平衡时间，影响因素很复杂，可通过试验后确定。 2、控制好离心转速 低速冷冻离心机的转速的大小主要由转子的转速和颗粒的旋转半径来决定，在说明离心条件时，往往也用相对离心力场来表示。实际工作中，离心力场的数据是指其平均值。即是指在离心溶液中点处颗粒所受的离心力场。 3、注意离心介质的PH值和温度 离心介质的PH值的设定一般是处于酶稳定的PH范围内，可采用缓冲液，在试验过称重，要避免过酸或者过碱的环境对离心机本身产生腐蚀作用。我们在利用离心机工作时，除了要格外注意对离心介质的选择之外，还要控制好温度及介质溶液的PH值等离心条件，防止其分离物质的凝集、变性和失活。一般来说，我们将离心温度会控制在4℃左右，对于某些热稳定性较好的酶等，离心也可在室温下进行。 此文章由实验室仪器--湖南吉尔森科技发展有限公司编辑整理。
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Western Blot中蛋白样品的制备与试剂选择
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
"良好的开始是成功的一半"，尤其对于生物学实验，如果没有高质量的实验样本，等待我们的很可能是失败的实验结果。优质特异的蛋白样品对Western Blot实验至关重要。下面将从蛋白样品制备的方法和试剂选择上给大家一些建议，同时也和大家分享一些因蛋白样品制备不当而导致Western Blot实验失败的案例。 √ 蛋白样品制备的基本原则 目的蛋白因其物种来源和组织特异性的不同，在种类和性质上有很大差异，因此并没有一种制备方法可以适用于所有蛋白的提取。这就需要我们进行全面的分析后才能选择最合适的蛋白制备方法，在这个过程中遵循的一个基本原则是"知己知彼"。 首先，"知己"是要了解：样品是来自什么物种？目的蛋白定位在哪种组织或细胞器？是可溶蛋白还是不可溶蛋白？是高丰度蛋白还是低丰度蛋白？在制备时需要保持蛋白的天然活性，还是需要变性蛋白？ 其次，"知彼"是要知道：哪种方法或试剂能够防止蛋白降解、聚集、沉淀、变性、修饰？哪种能够去除高丰度蛋白干扰，富集低丰度蛋白？哪种能去除核酸、多糖、脂肪等杂质？哪种能在有限的实验条件下，简便快速地获得高纯度且完整性好的蛋白？ 遵循"知己知彼"的原则对蛋白样品制备进行全面分析，就能明确蛋白样品制备的合适方法或试剂。 √ 细胞组织裂解液的选择 裂解液是最普遍使用的蛋白提取试剂，可根据文献或经验自行配制，也可购买商业化的产品。常见的细胞裂解液有NP40、Triton X-100、RIPA buffer等。下表是根据目的蛋白的不同定位选择裂解液的建议。虽然裂解液的使用范围比较广泛，能够满足总蛋白的提取，但是无法做到特异蛋白的提取，特别是遇到低丰度蛋白或者活性蛋白功能分析时，通用型的裂解液存在很大的局限性。 样品类型 裂解液 全细胞 NP-40或RIPA 细胞质（可溶） Tris-HCl 细胞质（细胞骨架） Tris-Triton 细胞膜结合部分 NP-40或RIPA 细胞核 RIPA或核裂解液 线
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血管性认知障碍动物模型神经行为学评价方法-参考记忆篇
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
血管性认知障碍动物模型神经行为学评价方法-参考记忆篇 血管性认知障碍(vascular cognitive impairment VCI)自1993年首次提出后，已经成为近20 y来社会关注的焦点，也是神经科学领域研究的热点。VCI的发病率呈逐年上升趋势，其发病率仅次于Alzheimer病(Alzheimer disease}AD)，是引起老年期痴呆、导致老年生活质量下降的重要因素之一。虽然VCI的临床研究取得了一定进展，但是VCI的发病机制及病理生理变化仍然不明确，因此迫切的需要更多的基础研究为VCI的预警诊治提供理论依据。 临床研究与基础研究最大的区别就是临床研究可以通过MMSE, Moca等各类量表来直接反应患者的认知状况，而对动物认知障碍的认定只能通过各类评价工具来完成。但是，文献报道的认知评价工具及其应用各种各样，所以我们分析了近年来文献常用的评价方法及其应用，总结出口前常见的对实验动物认知功能的评价主要集中在参考记忆、工作记忆等。 1参考记忆评价 空间记忆障碍是目前VCI研究最多也最全面的，空间记忆是指记忆中负责记录环境信息和空间方位的部分。 1. 1 Morris水迷宫：水迷宫(morris water maze,MWM)是利用动物求生本能促使其在水池内游泳找到逃生平台，参考记忆的评价通常包含定位航行、空间探索等阶段。MWM是目前世界公认的较为客观的学习记忆功能评价方法，主要是由于动物训练所需的时间较短，有利于急性期的认知评价;同时在迷宫内的线索，例如气味可以被消除掉;动物在实验中不需要禁食;MWM较放射臂迷宫对学习记忆检测的灵敏度更高，在脑缺血后7d放射臂迷宫没有阳性发现时就能发现实验动物的参考记忆受损。由于国内外学者收集参数及排除标准不同，虽然作为经典的学习记忆评价工具近年来其实验结果的可信度引起国内外学者的质疑。例如:(1)不适合长期记忆功能的评价及重复实验，采用厌恶逃避测试本身就会产生应激，增加了混杂因素，增加假阳性风险;(2)非认知因素，如活动能力、听觉、嗅觉、触觉、焦虑抑郁等可能影响实验结果的可靠性
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液相色谱故障排除之谱图的各种问题
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决；而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。 A、 峰拖尾 1、筛板阻塞 a、反冲色谱柱 b、更换进口筛板 c、更换色谱柱 2、色谱柱塌陷 a、填充色谱柱 3、干扰峰 a、使用更长的色谱柱 b、改变流动相或更换色谱柱 4、流动相PH选择错误 a、调整PH值。对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰 5、样品与填料表面的溶化点发生反应 a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂 b、更改色谱柱 B、 峰前延可能的原因 在大峰前，有小峰流出 柱死体积 样品溶剂不适当 过滤片部分堵塞 柱过载 1、柱温低 a、升高柱温 2、样品溶剂选择不恰当 a、使用流动相作为样品溶剂 3、样品过载 a、降低样品含量 4、色谱柱损坏 a、见A1、A2 C、 峰分叉 1、 保护柱或分析柱污染【柱中有死体积】 a、取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞，拆下来清洗。如果问题仍然存在， 可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。 2、样品溶剂不溶于流动相 a、改变样品溶剂。如果可能采取流动相作为样品溶剂。 D、 峰变形 1、样品过载 a、减少样品载量 E、 早出的峰变形 1、样品溶剂选择不恰当 a、减少进样体积 b、运用低极性样品溶剂 F、 早出的峰拖尾程度大于晚出的峰 1、柱外效应 a、调整系统连接（使用更短、内径更小的管路） b、使用小体积的流通池 G、 K’增加时，脱尾更严重 1、二级保留效应，反相模式 a、加入三乙胺（或碱性样品） b、加入乙酸（或酸性样品） c、加入盐或缓冲剂（或离子化样品） d、更换一支柱子 2、二级保留效应，正相模式 a、加入三乙胺（或碱性样
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医用离心机转子不平衡原因分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
在使用医用离心机过程中，容易因为离心机转子不平衡而不能正常运转，或者因为不平衡状态下工作造成断轴等事故，今天来分析一下医用离心机转子不平衡的原因。 1．医用离心管在使用中平衡时，由于天平长期使用而又未能校对，对称放置的离心管不平衡超过了0．1～1g。 2．医用离心管在装样时，因样品液束装满或离心管帽没有拧紧密封，在离心过程中离心腔内的高真空状态造成离心管抽扁、破裂和样品液外溢，造成转子不平衡而发生轴弯曲或断轴事故。 3．由于原样品的比重不等于配平液的比重，转子动平衡失调而发生事故。 4．使用水平转子时，不细心将吊桶的序号与水平转子主体的序号装错，影响转子的动平衡。 5．铝合金离心管帽与不锈钢离心管帽混用(两者比重不同)而发生事故。 6．离心管帽内橡胶密封环和转子盖橡胶密封环使用不当和消毒不当，如长期使用内部断裂和固高温消毒r使用干燥箱烘烤)等处理而老化龟裂、失去密封作用等，使样品在高速运转时外溢，从而使转子在不平衡状态下运行。 7．对予各种材料的离心管，使用前没能很好地了解厂家要求的离心管使用范围和消毒方法，采用化学溶剂和不适当的消毒液处理，造成离心管在运行中溶胀、破裂而发生事故。 8．由予工作中粗心大意，转子盖没有拧紧或是将转子盖和转子柄互换，造成螺扣不吻合，当开机运行时，转子盖抛出而发生严重的断轴事故。 此文章由实验室仪器--湖南吉尔森科技发展有限公司编辑整理。
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量子点多色成像显示临床组织样品的肿瘤异质性分子图谱
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
肿瘤异质性（Tumor heterogeneity）是肿瘤发生发展机制研究及肿瘤细胞根除**方法探寻所面临的巨大挑战。肿瘤异质性广泛存在于各种肿瘤（尤其是乳腺癌和前列腺癌具有高度异质性），但是检测和评估方法尚欠缺。目前的技术如RT-PCR, gene chips, protein chips, two-dimensional gel electrophoresis, biomolecular mass spectrometry等方法，会造成细胞和组织形态学信息的损失。而量子点自身光学特性和多色成像能力，非常适用于肿瘤异质性研究，可将分子表达与组织形态学观察整合，对于精确诊断具有重要意义。 埃默里大学Shuming Nie教授课题组，对于根治性前列腺切除术及穿刺活检的石蜡包埋组织标本，针对四个前列腺癌标志物E-cadherin、high-molecular-weight cytokeratin (CK HMW)、p63、a-methylacyl CoA racemase (AMACR)，利用不同种属和发射波长的量子点标记二抗，通过两轮一抗/二抗顺序染色，基于波长分辨的荧光成像和光谱分析，揭示了前列腺癌发展进程中，伴随着腺体结构的改变（从基底和腔细胞双层向恶性细胞单层的转变），呈现不同的分子标志物表达模式。相较于传统的组织切片HE染色和免疫组化（IHC）方法，量子点多色成像具有高度可重复性，并与HE、IHC结果具有良好的相关性。可以预计，对于复杂而可疑的非典型组织样本，量子点多色成像可提供分子表达谱和组织形态学的整合信息；同时，从复杂的细胞/组织环境中检测到罕见细胞类型（如肿瘤干细胞、单个恶性转化细胞等），早期发现细胞的恶性转化，对于精准诊断和**具有重要意义。 图1 前列腺肿瘤组织切片的量子点多色成像分析显示肿瘤异质性。 星形标记正常前列腺组织（E-cadherin、CK HMW、p63均表达，无AMACR表达），箭头标记恶性转化的腺体（AMACR高表达，CK HMW和p63表达缺失），雪花标记前列腺上皮内瘤（PIN）（AMACR和p63均有表达的转化期）。 图2 量子点多色成像显示前列腺恶性转化过程中的分子表达和组织形态变化。 (a) 良性前列腺（基底-腔细胞双
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血管性认知障碍动物模型神经行为学评价方法-工作记忆评价方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
血管性认知障碍动物模型神经行为学评价方法-工作记忆评价方法 血管性认知障碍(vascular cognitive impairment VCI)自1993年首次提出后，已经成为近20 y来社会关注的焦点，也是神经科学领域研究的热点。VCI的发病率呈逐年上升趋势，其发病率仅次于Alzheimer病(Alzheimer disease}AD)，是引起老年期痴呆、导致老年生活质量下降的重要因素之一。虽然VCI的临床研究取得了一定进展，但是VCI的发病机制及病理生理变化仍然不明确，因此迫切的需要更多的基础研究为VCI的预警诊治提供理论依据。 临床研究与基础研究最大的区别就是临床研究可以通过MMSE, Moca等各类量表来直接反应患者的认知状况，而对动物认知障碍的认定只能通过各类评价工具来完成。但是，文献报道的认知评价工具及其应用各种各样，所以我们分析了近年来文献常用的评价方法及其应用，总结出口前常见的对实验动物认知功能的评价主要集中在参考记忆、工作记忆等。 执行功能(executive function)是个体的许多认知加工过程的协同操作。它涉及对个体的意识和行为进行监督和控制的各种操作过程，包括自我调节、认知灵活性、反应抑制、计划等。而工作记忆(working memory WM)是评价实验动物执行功能最常用的方法。工作记忆是指在执行认知任务过程中，用于信息的暂时储存与加工的过程。工作记忆在人类及龋齿动物是依赖于前额叶皮质来完成的。评价工作记忆的常用方法有如下几类。 2. 1自主交替实验 T, Y迷宫自主交替(spontaneous alternation on a T/Y-maze)用来评价实验动物学习转换能力。即使没有食物奖赏，大鼠仍然保留对所探究区域有一定的新奇感。自发转换的次数/总选择次数用来说明工作记忆功能，VCI动物比值得分下降。正常的交替操作与完整的工作记忆能力相一致。T迷宫和Y迷宫自主转换实验已被广泛用于VCI研究。而且，在双侧颈总动脉狭窄模型及双侧颈总动脉逐步阻断模型中出现选择性的工作记忆受损。 2. 2 MWM工作记忆是指Morris水迷宫基础上改造的实验方法
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冷冻离心机故障及解决方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
实验室冷冻离心机可以保证实验温度在4度左右，保证样品的的生物活性。冷冻离心机在使用过程中难免遇到故障，湖南吉尔森离心机为您总结下日常遇到的故障以及处理的方式。 1.实验室冷冻离心机在使用过程中经常出现电机不能起动的现象。如主电源指示灯不亮时，检查指示灯保险丝及室内配电板保险丝是否熔断，同时检查电源线是否接触良好。保险丝断则应更换保险丝并保持电路畅通如主电源指示灯亮，这时应检查炭刷磨损程度，如炭刷磨损超过总量的三分之一，应及时更换新的炭刷。还应检查真空泵表及油压指示值，如油压过高而主机也不能启动，必须检查各油路是否堵塞，特别是节流小孔是否畅通，如不畅通应清洗使之畅通。 2.实验室冷冻离心机启动及制冷效果差的原因之一是电源不通，应分别检查电源及保险丝。电压过低，安全装置故障也可使冷冻机不能启动，电压过低可能是电网电压低;配电板配线过多;电源线过长(理想长度为3米)等。电源线容量不够，不仅使电压降低，还会造成意外事故。当电源电压降到180―190VJ时，冷冻离心机不能启动，影响制冷效果。通风性能不好，如仪器安装在日光直射或通风不良处，散热器效果差，或散热器盖满灰尘，也中会影响制冷效果。离心管重量不平衡，放置不对称;转子孔内有异物，使负荷不平衡;转轴上端固定螺帽松动，转轴磨擦或弯曲;电机转子不在磁场中心会产生噪音;转子本身损伤等都可导致机体震动剧烈、响声异常。 3.实验室冷冻离心机轴承损坏或转动受阻，轴承内缺油或轴承内有污垢较多而引起摩擦阻力增大，电机达不到额定转速，应及时清洗或更换轴承。整流子表面有一层氧化物，甚至烧成凹凸不平或电刷与整流子外缘不吻合也可使转速下降，应清理整流子及电刷，使其接触良好。如转子线圈中短路或断路，可用万用表检查，重新绕制线圈。转子在使用时可因金属疲劳、超速、过应力、化学腐蚀、选择不当、使用中转头不平衡及温度失控等原因而导致离心管破裂，样品渗漏，转子损坏。对于以上情况主要要求操作
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酸性磷酸酶的显示方法实验步骤介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
实验试剂 1. 10％中性福尔马林(pH6．8～7．1)甲醛 10ml 蒸馏水 90ml 醋酸钠 2g 2. 酸性磷酸酶作用液 蒸馏水 90ml 0．2mol／L醋酸缓冲液(pH4．6) 12ml 5％硝酸铅 2ml 3. 2％β—甘油磷酸钠 4ml 先将蒸馏水和醋酸缓冲液混合，随后分成大致相等的两份，一份中加硝酸铅溶液，另一份加甘油磷酸钠溶液，然后再将两者缓缓混合，边混边搅匀后若酸碱度值不到pH5．0，可加少量醋酸的调整。此作用液**在临用前配制，不能贮存。配好后的作用液应透明无絮状悬浮物和沉淀，否则将严重影响实验结果。 4. 1％硫化胺溶液 硫化胺 1ml 蒸馏水 9ml 5. 姬姆萨染液(1：30) 姬姆萨原液 3滴 磷酸盐缓冲液(pH6．8) 5ml 6. 6％淀粉肉汤 牛肉膏 0．3g 蛋白胨 1.0g 氯化钠 0．5g 蒸馏水 100ml 高压灭菌9．9×104pa(15磅)20min，再加入可溶性淀粉6g，水温浴，促使溶解后置冰箱保存备用。 实验步骤 1. 取小白鼠一只，每日腹腔注射6％淀粉肉汤1ml，连续注射三天。 2. 在第三天注射后3～4h，再向腹腔注射生理盐水1ml，过3min后在原注射部位抽取腹腔液0．1～0．2ml。请注意!注射和抽液的进针部位和深度要保持一致。否则可能抽不出腹腔液。 3. 将腹腔液滴在预冷的载玻片上，每片1～2滴，涂片，将玻片垂直插入玻片架，迅速放到冰箱内(4℃)，让细胞自行铺展。 4. 30min后，将玻片转入10％中性福尔马林，冰箱内4℃固定30min。 5. 自来水漂洗5min，把水甩干。 6. 转入酸性磷酸酶作用液中，37℃处理30min。 7. 自来水漂洗片刻。 8. 1％硫化胺处理3～5min。 9. 自来水冲洗，甩干。 10.用1∶30的姬姆萨染液染色15min。 11.自来水冲去染液，用磷酸盐缓冲液临时封片，镜检。 12.对照实验： 将第3步的腹腔液涂片置50℃温箱中处理30min，使酶失活，再进行6～11步的同样实验。
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RNAi实验原理与制备方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
实验原理 通过生化和遗传学研究表明，RNA干扰包括起始阶段和效应阶段(inititation and effector steps)。在起始阶段，加入的小分子RNA被切割为21-23核苷酸长的小分子干扰RNA片段(small interfering RNAs, siRNAs)。证据表明；一个称为Dicer的酶，是RNase III家族中特异识别双链RNA的一员，它能以一种ATP依赖的方式逐步切割由外源导入或者由转基因，病毒感染等各种方式引入的双链RNA，切割将RNA降解为19-21bp的双链RNAs(siRNAs)，每个片段的3’端都有2个碱基突出。 在RNAi效应阶段，siRNA双链结合一个核酶复合物从而形成所谓RNA诱导沉默复合物（RNA-induced silencing complex, RISC）。激活RISC需要一个ATP依赖的将小分子RNA解双链的过程。激活的RISC通过碱基配对定位到同源mRNA转录本上，并在距离siRNA3’端12个碱基的位置切割mRNA。尽管切割的确切机制尚不明了，但每个RISC都包含一个siRNA和一个不同于Dicer的RNA酶。 另外，还有研究证明含有启动子区的dsRNA在植物体内同样被切割成21-23nt长的片段,这种dsRNA可使内源相应的DNA序列甲基化,从而使启动子失去功能,使其下游基因沉默. 实验试剂 RNase III、 DNA Oligo、Taq酶、dNTP、氯化钙、磷酸缓冲液、克隆所需试剂、 siRNA合成试剂盒等 实验步骤 (一)siRNA的设计 1. 在设计RNAi实验时，可以先在以下网站进行目标序列的筛选： http://www.genesil.com/business/products/order2.htm http://www.ambion.com/techlib/misc/siRNA_finder.html http://www.ic.sunysb.edu/Stu/shilin/rnai.html http://design.dharmacon.com/rnadesign/default.aspx?SID=45358710 2. RNAi目标序列的选取原则： (1)从转录本（mRNA）的AUG起始密码开始，寻找“AA”二连序列，并记下其3'端的19个碱基序列，作为潜在的siRNA靶位点。有研究结果显示GC含量在45%—55%左右的siRNA要比那些GC含量偏高的更为有效。 Tuschl等建议在设计siRNA时不要针对5'和3'端的非编码区（untranslated region
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长期社会隔离对雌性大鼠行为生理的影响
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
摘要:为研究社会隔离能否导致雌性啮齿动物产生焦虑，将成年雌性大鼠分别进行单独隔离饲养(单养)和四只一笼群养，十周后进行行为学和生理测试。行为结果显示:与群养组相比，单养组大鼠在旷场中的直立次数减少，明暗箱测试中的暗箱停留时间增长，穿越次数减少;说明长期社会隔离使雌鼠产生了焦虑。虽然两组大鼠与应激和生殖相关的生理器官重量没有差异，但单养组血清皮质醇和孕酮水平比群养组低，说明长期社会隔离导致雌鼠下丘脑唾体一肾上腺轴和下丘脑-垂体-性腺轴的调节异常，可能会对雌鼠的生殖生理带来不利影响。 关键词:社群隔离;雌性大鼠;焦虑行为;血液激素;生理指标 正常的社会关系对生物个体的健康有着重要意义，一旦遭到破坏将对机体带来消极影响。长期社会隔离对群居动物来说是一种生存应激。这种应激模型为研究人类精神疾病提供了很好的切入点，被广泛用于人类精神障碍疾病的发病机制、新药研发和预防等的研究。 社会隔离能使群居动物脑的形态、激素水平以及神经化学通路发生改变，进而使该动物表现出异常的行为和生理特征。以往研究发现长期社会隔离会导致啮齿动物多动，攻击行为增加困，在新环境中缺乏正常的习惯化行为，前脉冲抑制(prepulse inhibition, PPI)缺失等。然而，社会隔离对啮齿动物的影响受到很多因素的制约，与被测动物的性别年龄、品系以及隔离持续的时间均有关系。例如，社会隔离能使成年的雌性小鼠(M。musculus)'肾上腺肥大，动情周期缩短，使成年雌性大仓鼠(Tscheskia triton)的卵巢和子宫增大，但是对雄性大鼠(Rattus norvegicus )、雄性小鼠(Musmusculus)}和成熟的大仓鼠则没有影响;3周龄的雄性bong Evan大鼠隔离12周可以增加其对酒精的偏好，但是在成年期进行隔离则不会出现此现象,最近的研究表明短期隔离或者每天隔离1h，持续四周会导致草原田鼠血清皮质酮显著升高;但是长期隔离四周则对血清皮质酮没有影响 社会隔离能否使鼠类产生胁迫和应激反应，与鼠类在自然条件下的生活方式也有
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Uhrf1通过Akt-mTOR途径调控iNKT细胞的生存和分化
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
研究背景 Uhrf1（或者被称为Np95）是一个DNA甲基化和组蛋白泛素化的调控因子，在胚胎发育（embryogenesis）以及肿瘤发生（tumorigenesis）过程中有着重要作用。近日，上海中科院生化细胞所刘小龙课题组联合上海科技大学以及中国科学与技术大学在国际权威期刊Cell子刊Cell Reports上发表题为Uhrf1 Controls iNKT Cell Survival and Differentiation through the Akt-mTOR Axis的研究型论文。研究发现，Uhrf1在自然杀伤T细胞（invariant natural killer T ［iNKT］ cell）的发育过程中有着重要作用。Uhrf1在iNKT细胞的Stage1种表达量显著提高。对Uhrf1的突变触发了细胞凋亡从而导致Stage1阶段转化的出现异常，最终在Uhrf1缺失的突变小鼠中，iNKT细胞受损。研究还发现，Uhrf1的突变可以显著增加Stage1过程中Akt-mTOR信号通路的活性。过表达Akt可以使得iNKT细胞的表型得以回复。研究人员认为，该研究表明Uhrf1调控的Akt-mTOR信号途径在iNKT细胞发育过程中是必要的。 技术路线 研究结果 iNKT细胞发育过程中需要Uhrf1 为了研究Uhrf1在T细胞发育过程中的作用，研究人员首先构建了CD4-cre-介导的Uhrf1条件性敲除的小鼠模型。研究人员使用了流式细胞（Flow cytometry）分析技术等实验手段对这两类细胞的分析表明，iNKT细胞在Uhrf1-/-的小鼠胸腺，脾脏以及肝脏中显著减少（图1A-C）。 图1: iNKT细胞发育过程中需要Uhrf1。 Uhrf1调控iNKT细胞的生存和分化 Uhrf1的缺失显著降低了iNKT细胞的数量。细胞数量的下降通常是由于细胞增殖降低，生存受到影响或者分化畸形导致的。为了验证这些可能性，研究人员首先对细胞增殖进行了研究。在Stage1与Stage2中，Uhrf1-/-的小鼠细胞密度与野生型没有显著区别（图2A,B）。因此，研究人员认为iNKT细胞数量的下降并非由于细胞增殖导致的。随后对细胞生存以及分化的研究发现，Uhrf1-/-的小鼠iNKT细胞更易发生细胞凋亡并且细胞的分化受到显著影响（图2C-G）。 图2: Uhrf1调控iNKT细胞的生
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