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定量蛋白质组表达谱分析技术---iTRAQ/TMT
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
iTRAQ(Isobaric Tag for Relative Absolute Quantitation)和TMT(Tandem Mass Tags)技术是分别由美国AB Sciex公司和Thermo公司研发的多肽体外标记定量技术。这两种技术采用2-10种稳定同位素标签，通过特异性 标记多肽的氨基基团，然后进行串联质谱分析，可同时比较多达10种不同样本中蛋白质的相对含量。 iTRAQ/TMT试剂由三部分组成：报告基团、平衡基团和反应基团。反应基团形成2-10种等质量同位素标签。iTRAQ/TMT试剂标记酶解后的肽段，可与氨基酸N端及侧链的伯胺基团发生反应。在一级谱图中，来自于不同样本的同一肽段，标记后表现为相同的质荷比。在二级谱图中，报告基团、平衡基团和反应基团之间的键断裂，带不同同位素标签的同一肽段产生质量不同的报告离子，根据报告离子的丰度可获得样本间相同肽段的定量信息，再经过软件处理得到蛋白质的定量信息。其基本原理与技术流程如下图所示： Thermo Scientific Q Exactive/Thermo Scientific Q Exactive Plus/Thermo Scientific Orbitrap Fusion 平行比较2-10个样本；蛋白通量高，覆盖度高；可用于各种类型生物样本。 各种胁迫、生理、病理条件下细胞、组织样品中高通量蛋白表达谱分析 各种物种的蛋白质组草图的构建 参考文献 [1]Yang QS, Wu JH, et al. Quantitative proteomic analysis reveals that antioxidation mechanisms contribute to cold tolerance in plantain (Musa paradisiacal L.; ABB Group) seedlings. Mol Cell Proteomics. 2012; 11(12): 1853-69. [2]Leivonen SK, Rokka A, et al. Identification of miR-193b targets in breast cancer cell and systems biological analysis of their functional impact. Mol Cell Proteomics.2011; 10(7). [3]Xu C, Gao X, et al. The basal level ethylene response is important to the wall and endomembrane structure in the hypocotyl cells of etiolated arabidopsis seedlings.
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从野外学到的比较生理学重新定义医疗方式
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
在新西兰东岸的一个潮水潭里，一条小鱼飞快地钻进了一抹阴影中。那是一条三鳍鱼，一种在全世界随处可见的沿海鱼类。它的身体呈带斑点的棕色，与它的同类相比并无特异之处，但是当我们一同漫步在达尼丁南部的海滩上时，Tony Hickey 博士却告诉我们，它就是解开世界上一种极其普遍而致命的疾病之谜的钥匙。每年承受中风病痛的人数高达令人咂舌的1500万。全世界共有将近600万人死于中风。根据世界卫生组织的统计，中风致死的人数比艾滋病、疟疾和结核加起来还要多，许多人在患病后都留下了移动和沟通能力上的永久损伤。一条鱼能帮上什么忙，着实令人费解。 中风是指由于脑部血液供应受到阻碍，组织缺少氧气和营养供应而引起的损伤。Tony解释道，这种缺氧或说低氧状态，正是三鳍鱼每天都会经历的状态。“在退潮时水温较高，水体里溶解的氧气较少，这时潮水潭就立即形成了低氧环境，就跟中风时感受到的缺氧差不多。但是这种三鳍鱼却不会受到任何伤害——既没有肌肉损伤，也没有脑部损伤。从它们身上，我们也许可以学会如何在发生中风时保护脑部。” 还有一点，新西兰沿海的广大地带中栖息着数量繁多的三鳍鱼种类。“如果我们能找到两种亲缘关系极其密切、几乎属于同类的鱼，生活在潮水潭里的那种可以承受低氧环境，生活在深海里的那种却不行，那么我们很有可能找到这种鱼之所以适应低氧环境的决定性因素。” 在犁足蛙的帮助下，这种物种间比较已经通过器官移植取得了进展。冬天时，这种青蛙可能会冻得硬邦邦的，但是当它解冻时却没有任何内伤。这是为什么？研究人员发现，随着气温下降，这种青蛙将会大量产生葡萄糖，灌注到它们的器官中，增加血液的摩尔浓度并防止冰晶的形成——这种惊人的办法可用于增强移植器官的存活时间，使得它们能够尽可能远地被运输到需使得它们能够尽可能远地被运输到需要的地方去。按照从前的方法，从捐赠者身上摘除的器官可以保存大约六个小时——但是根据研究人员开发出来的灌注合成葡萄糖的方法，器官可
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Nature子刊：激光全息HoloMonitor M4助力肿瘤亚磁环境研究
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
一篇刊登Nature 子刊上的研究论文中，来自中科院生物物理所研究人员的一项最新研究成果表示，亚磁环境可以改变磁性非敏感生物功能，机制尚不明确。该课题组之前研究发现地磁场 HMF抑制人神经母细胞瘤细胞某些与细胞迁移和细胞骨架组装相关基因是响。研究结果表示，暴露在HMF环境中，细胞形态上变小，变圆。 亚磁环境（hypomagnetic eviroment）通常指远小于地磁场的极弱的磁场环境。迁徙动物例如：信鸽,海龟,和蝴蝶 感应地球磁场进而指引飞行航向。但是大对数生物尤其是人类来说不能感应地磁场，但是很多实验表明当暴露于静磁场或者亚地磁场环境中，细胞增殖，凋亡，迁移等表现出明显变化。另外，亚磁环境是外太空基本环境要素之一。持续暴露于亚磁环境中，影响胚胎发育和脑功能。 在这项研究中，论文作者使用亚磁环境下细胞培养体系研究地磁场对SH-SY5Y细胞迁移和细胞骨架的作用。激光全息HoloMonitor M4用于检测细胞分别长时间暴露于磁场环境和亚亚磁环境中迁移的影响，结果显示，亚磁环境中细胞的迁移明显变慢。 同时，研究人员使用HoloMonitor M4追踪SH-SY5Y细胞长期暴露磁场环境和亚亚磁环境中 动力学形态变化，记录了体积，厚度，面积，周长，不规则度和偏心度等参数变化。阐明了亚磁环境对F-actin细胞骨架的调节。 随着人类太空探索计划的不断推进，人类将向月球移民和进行载人火星探空探测等活动，人类在太空的停留时间越来越长，长期脱离地球磁场环境人类的生理活动会受到不同程度的影响。看来，人类克服亚磁环境对身体机能的影响，移民太空还有很长的路要走……
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中药研究中需要做细胞实验吗？
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
“中药研究中需要做细胞实验吗？”如果这个问题换一下，“临床疾病研究需要做细胞实验吗？”大家的答案是什么呢。看下CNS上做疾病研究的文章，大家都很清楚了。 我们先聊聊为什么疾病研究需要做细胞实验。这个跟疾病的研究历史，或者说疾病研究的发展程度相关的。 1、任何疾病的发现，都是有个临床表型，哪里不舒服了，而称为病。 2、在疾病研究历史中，哪里不舒服了，先进行研究的是，什么器官和组织出问题，导致这个临床表型的。所以目前医院里面分科，大部分是按照器官来分的，心内科，心外科，肝胆外等等。解剖学的出现促进了这一步研究的发展。当然我们也可以说因为从临床表型到器官组织需要深入研究而促进了解剖学的出现。达芬奇是此中高手。 3、确定了是什么器官和组织出问题，进一步深入研究到什么呢。器官组织的最小功能单位是细胞。进一步深入研究就是，组织中什么细胞发生改变与正常细胞不同了从而使得组织器官的正常功能发生改变，造成临床表型。显微镜的出现促进了这一步的快速发展。出现了病理学，病理科被“现代医学之父”威廉·奥斯勒称为“医学之本”。从这里开始医学研究进入了显微时代。 4、病理学的研究把疾病研究精细到组织内的最小功能单位，对于临床疾病的诊断发挥了巨大作用。但对于**，细胞为什么会改变，如何逆转其改变，显得力不从心。分子生物学出现后，人们开始对这个问题再次深入探讨。细胞内生命活动的主要物质之一是蛋白，蛋白技术也是先发展起来的。人们就开始在细胞内找疾病相关的蛋白。但是，从分子的层面来讲，蛋白其实是个结果，是基因编码后的结果，当DNA被发现，且被证明是细胞内的遗传物质，其指导了细胞内蛋白的表达，疾病研究真正的进入了分子阶段。目前，我们仍然还处于这个阶段，寻找疾病相关的基因，这个基因改变了组织内什么细胞的什么功能，导致疾病发生发展。 5、疾病研究到了基因这个分子层面是不是结束了呢。人类探索的热情是人类发展的源泉，探索并未停止。找到这个疾
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细胞活力检测方法的介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
细胞活性是判断体外培养细胞在某些条件下是否能正常生长的重要指标，如药物处理、放射性或紫外线照射、培养条件变化等。细胞活性检测方法有很多种，如台盼蓝染色法、克隆（集落）形成法、、ATP含量测定法、荧光染色法、比色法（MTT法）等。 一、ATP含量测定法---生物发光检测 有研究表明内源性三磷酸腺苷 (ATP) 的数量可以反映细胞的活性度，内源性ATP是活体细胞最基本的能量来源，细胞死亡时，ATP迅速水解。因此，测定细胞内源性ATP的含量可以及时反映细胞的活性和活细胞数量。基于ATP的细胞活力检测法是一种敏感而可靠的检测方法。 反应原理是活细胞在有氧和ATP的条件下，荧光酶催化荧光素发出荧光 (波长为562nm)，强度与ATP含量呈正相关。故所测得荧光强度可间接反映出存活细胞量。 Promega CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay是基于ATP检测的快速细胞活力检测法。（目录号：G7570） -检测类型：发光 -检测标志物：ATP -应用：细胞活力，细胞增殖，细胞毒性 -细胞类型：细胞系，原代细胞(悬浮或贴壁) -检测步骤：一步法，均质检测 -操作时间：10min -灵敏度：10个活细胞(96孔板) 二、 荧光法检测 一些荧光染料对死细胞和活细胞有不同的作用效果，利用荧光显微镜检测细胞活性。如碘化丙锭 (PI) ，被活细胞排斥但能穿透正在死亡或已经死亡细胞的细胞膜，因此活细胞不被染料染上色，只有死细胞或是凋亡细胞才能染上红色。吖啶橙 (AO) 能透过质膜完整的细胞，嵌入细胞DNA，使之发出明亮的绿色荧光。溴化乙锭 (EB) 仅能透过胞膜受损的细胞，嵌入DNA，发橘红色光。也可应用AO-EB双染法鉴定细胞活性。这种检测方法相比传统的染料，具有灵敏度高，操作简便，结果容易分辨等特点，而且利用双染法还可以分辨活细胞、凋亡早期细胞、凋亡晚期细胞、死亡细胞。在细胞凋亡的检测上有很广泛的应用。 Alamar Blue是一种安全、稳定、易溶于水、且对细胞无毒的新型染料，可通过荧光产生或颜色变化指示细
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高大上的CarT慢病毒是怎样炼成的（二）
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
要做行业新标准，看看我们有多狠； 为了高大上，搭上精力和成本； 搞定绝对又定量，推出质量控制高精准； 如何做到高精准？看我大QC如何能！ 子明曰：“慢病毒质量靠啥控制？” 子怒曰：大QC！大QC！大QC！ 大QC，就是对慢病毒设立一些检测的项目，对每一管慢病毒进行全面体检。通过了这些QC检测项目，质量自然就高大上；通不过的，就地销毁！销毁！销毁！ 子明又曰：“大QC检测项目有哪些？ 如何检测？” 子又怒曰：“看表！“ 参考中国药典、FDA对生物制剂给出的经典方法，对吉凯基因慢病毒一一筛查、甄别。 检测项目 检测方法 支原体 Nest PCR 内毒素 LAL 病毒毒性 LDH 细菌 培养法 真菌 培养法 活性滴度 绝对定量 子明再曰：“QC的检测项有代表意义么？“ 子垂死病中惊坐起曰：“娃儿问得好！“ 慢病毒是绝不允许微生物污染存在的。细胞支原体污染是世界性问题，支原体由于小而简单，很容易逃过纯化过程中滤膜的拦截；细胞细菌污染一旦发生，往往无法挽救。细菌污染短时间内培养基变黄，混浊物飘起，细胞停止生长甚至死亡；对细胞存在威胁的真菌种类繁多，短时间内不易察觉，对后续功能研究的危害是不可修复的；内毒素是由革兰氏阴性菌分泌的脂多糖，内毒素能通过两种途径进入血液导致内毒素血症；病毒毒性由病毒杂质引起的，杂质含量越高，病毒毒性越大，病毒毒性会导致细胞直接性死亡。 细胞一污染，实验要重复，老板心疼钱，毕业要延期…… 所以，不惜一切代价，我们要把万恶之源扼杀在大QC里！ 那么，问题来了，吉凯大QC如何做到？ 答：数据会说话 统计吉凯基因慢病毒QC大数据，（囊括200组过表达、200组干扰实验数据） 咱将吉凯结果和FDA要求汇总如下表中： 检测项目 吉凯检测结果 单位 FDA参考范围 支原体 阴性 -- 阴性 内毒素
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实验动物血液标本的选择及处理
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
实验动物血液标本的处理-----系列一 血液标本的选择 一般血液标本分为全血、血浆和血清。 1、全血 全血一般加入适当的抗凝剂，使血液不产生凝固含有形成分的标本，常用于碳氧血红蛋白、高铁血红蛋白、硫血红蛋白、细胞培养等的测定，及制备血中各种细胞和全血分析用。 2、血浆 血浆是全血去除细胞成分后剩余部分的标本，比血清分离快且量多。多用于血液凝固机制等方面的检验。 3、血清 血清是血浆除去凝血因子纤维蛋白原的标本。血液离体后由于激活一系列凝血因子，最终形成纤维蛋白而使血液凝固，析出的澄清黄色透明液体就是血清。血清成分接近于组织液的化学组成，测定血清中有关物质含量比全血更能反映机体的情况。血清是生化分析的最常用的标本。 血液标本的区别 1、血浆与血清的区别 血浆采血后立即分离，避免在凝血过程或运输时造成溶血，而血清就可能出现此种现象，血浆与血清的主要区别是含有一种纤维蛋白原和前凝血酶。 2、全血与血浆的区别 血浆含水93%，全血含水81%，所以某些溶于水的物质如葡萄糖、尿素等血浆则比全血高。在大多数血液检测项目中是血浆或血清来测定的，很少使用全血。 实验动物血液标本的处理-----系列二 血液标本通过相应途径采集后应及时处理，及时的分离血清或血浆，否则容易发生红细胞与血清之间成分转移，或细胞中的某些酶分解待测物等，从而影响实验结果。 血液标本的处理 血浆的制备 血液标本采集后，放入抗凝管中，放入4℃冰箱静置，红细胞开始沉降，一般72小时内基本沉降完毕，也可以采用离心机离心加速红细胞沉淀，一般离心速度为3000r/min，5~10min。 血浆约占血液的3/5，半透明、呈金黄色，下层红细胞约占血液的2/5，呈暗红色。红细胞层上面有一层灰白色物质，即为白细胞和血小板组成。这三层物质分界清晰整齐，如分界不清，说明有溶血现象。 血清的制备 血液标本采集后，放置室温下使其自然凝固后即可析出血清，也可以放置37℃水浴箱内20-30min可以加速
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氮气/氢气发生器领导者教你简单7步，氢气如何成功替代氦气
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
1.气源 氦气的价格正在日益上涨。据报道称，2013-2015年间，氦气的价格在某些领域已经增加了几倍。除了价格以外，在某些区域甚至不能确保氦气的供应，这就使得越来越多的实验室正在将氦气转换为氢气。 氢气发生器：Precision Hydrogen Trace可以提供99.9999%纯度的载气级别的氢气，被认为是极安全的氢气源，可保证色谱柱的使用寿命和最高级别的分析质量。 管路供应：氢气管路应该使用新的不锈钢管路或分析级别的铜管。如果先前是用氦气来供应GC的，那就管路就需要更换。因为时间用久了之后，管路的内壁会有沉淀物的累积，氢气会将其带出来，导致在很长一段时间内出现较高的背景信号。 2.氢气安全 氢气的安全使用：因为氢气是可燃性气体，实验室的健康和安全性则不容忽视，因此很多实验室会限制氢气钢瓶的使用。 LEL: 氢气在空气中的爆炸极限下限(LEL)为4%。因此一个装有8000L氢气的钢瓶泄露到一个较密封的实验室中，很快就可能达到爆炸浓度的最低值，形成爆炸性的环境，且毫无征兆。除了气体泄露的风险，更换钢瓶时必须移动笨重的罐子，也是一个潜在的健康和安全隐患。 气体发生器：Peak Precision 氢气发生器则是理想的氢气源，能够为多台GC提供超高纯氢气用于载气和检测气，流量为几百毫升，且压力较小。Precision氢气发生器有很多安全特点，可以检测发生器和GC的任何内部或外部的泄露，然后自动停机。 泄露检测器：Peak还可以提供一个置于柱温箱内的氢气检测器，一旦检测到柱温箱内有明显氢气泄露，发生器会自动停机。 3.硬件 如果打算用氢气作为载气，必须先跟您的GC供应厂家确认好。使用氢气时，每个厂家都必须进行测试，因为您使用的型号可能会有一些特别的设置。必要的时候，GC-MS很有可能更换硬件。 真空泵：如果您正在使用GC-MS，确保您的真空泵能足够用来维持气源的真空环境很重要。用分子量更小的气体，真空效率会降低，因此必须跟您的GC厂家确认，以确保您的泵系统可以应付氢气载气。如果您正打算购
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“量子点”——点亮新的艾滋病毒和埃博拉病毒**方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
2016年3月15日，利兹大学官网发布了有关量子点技术用于病毒作用机制研究的新闻，标题为“’Quantum dots’ light the way for new HIV and Ebola treatment”（“量子点”点亮新的艾滋病毒和埃博拉病毒**方法）。利兹大学的一支研究团队利用量子点技术，模拟了艾滋病毒和埃博拉病毒吸附到宿主细胞进行感染的过程。相关研究结果发表在国际学术期刊ANGEWANDTE CHEMIE（Guo Y,etl. Angew Chem Int Ed Engl. 2016; 55(15):4738-42.）。 基于量子点的FRET技术（QD FRET）已广泛应用于生物诊断、细胞监测与示踪等。但是，受到多价量子点制备技术的限制，QD FRET用于多价蛋白-配基相互作用的研究非常有限。上述研究者利用基于DHLA配基的帽交换法制备了致密而生物相容性好的量子点，使QD FRET首次用于检测多价的受体-多聚糖配基的相互作用。该项研究将树突细胞受体DC-SIGN和内皮细胞受体DC-SIGNR用作多聚蛋白模型。这些蛋白质通过其簇集的糖基识别结构域（CRDs），识别人类免疫缺陷病毒和埃博拉病毒表面富含甘露糖多糖的表面糖蛋白。同时制备致密、多价、甘露糖加帽的量子点，模拟艾滋/埃博拉病毒对细胞的吸附和感染过程，通过敏感的比率法FRET输出策略，检测病毒糖基与多价受体蛋白之间的相互作用，提供可定量的亲和力及热力学参数。研究结果显示，多价甘露糖-量子点偶联物（伪病毒）可用于检测病毒受体的CRD排列，只有朝向相同的CRDs才能多价结合于量子点。总之，该研究形成一项新的病毒**策略，即阻断病毒与宿主细胞上受体的相互作用，从而避免病毒感染的发生和扩散。 A) DHLA-PEGn-Man（dihydrolipoic acid–poly(ethylene glycol)–mannose）配基的化学结构及应用甘露糖加帽的量子点进行配基交换方法的模式图。 B,C,D) 通过DHLA-PEGn-Man[n = 13 (B) or 3(C)]中PEG连接子长度调整多聚糖之间的空间间隔，以DHLA-zwitterion间隔配基进行稀释(D)。 E) 通过FRET检测DC-SIGN/R和QD-PEGn-Man细胞外片段之间的多价相互作用。
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冷却循环水机的应用和原理
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
冷却循环水机是一种水冷却设备，能提供恒温、恒流、恒压的冷却水设备。其工作原理是先向机内水箱注入一定量的水，通过制冷系统将水冷却，再由水泵将低温冷却水送入需冷却的设备，冷冻水将热量带走后温度升高再回流到水箱，达到冷却的作用。冷却水温可根据要求自动调节，长期使用可节约用水。因此，冷却循环水机是一种标准的节能设备。 冷却循环水机的冷却原理 冷却循环水机组系统的运作是通过三个相互关联的系统：制冷剂循环系统、水循环系统、电器自控系统。 制冷剂循环系统： 蒸发器中的液态制冷剂吸收水中的热量并开始蒸发，最终制冷剂与水之间形成一定的温度差，液态制冷剂亦完全蒸发变为气态后被压缩机吸入并压缩（压力和温度增加）,气态制冷剂通过冷凝器（风冷/水冷）吸收热量，凝结成液体，通过热力膨胀阀（或毛细管）节流后变成低温低压制冷剂进入蒸发器，完成制冷剂循环过程。 制冷系统基本组成 压缩机：压缩机是整个制冷系统中的核心部件，也是制冷剂压缩的动力之源。它的作用是将输入的电能转化为机械能，将制冷剂压缩。 冷凝器：在制冷过程中冷凝器起着输出热能并使制冷剂得以冷凝的作用。从制冷压缩机排出的高压过热蒸气进入冷凝器后，将其在工作过程吸收的全部热量，其中包括从蒸发器和制冷压缩机中以及在管道内所吸收的热量都传递给周围介质（水或空气）带走；制冷剂高压过热蒸气重新凝结成液体。（根据冷却介质和冷却方式的不同，冷凝器可分为三类：水冷式冷凝器、风冷式冷凝器、蒸发式冷凝器。） 贮液器：贮液器安装在冷凝器之后，与冷凝器的排液管是直接连通的。冷凝器的制冷剂液体应畅通无阻地流入贮液器内，这样就可以充分利用冷凝器的冷却面积。另一方面，当蒸发器的热负荷变化时，制冷剂液体的需要量也随之变化，那时，贮液器便起到调剂和贮存制冷剂的作用。对于小型制冷装置系统，往往不装贮液器，而是利用冷凝器来调剂和贮存制冷剂。 干燥过滤器：在制冷循环中必须预防水分
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MTT法细胞活性检测实验步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
MTT是一种粉末状化学试剂，全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide，汉语化学名为 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝，是一种黄颜色的染料。MTT主要有两个用途：（1）药物（也包括其他处理方式如放射线照射）对体外培养的细胞毒性的测定；（2）细胞增殖及细胞活性测定。 MTT方法能简单、快捷、准确地测定细胞的增殖反应，并且其价格低廉，成为日前各实验室检测细胞活性的**方法之一。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶标仪在490nm波长处测定其光吸收值，在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。根据测得的吸光度值（OD值）来判断活细胞数量，OD值越大，细胞活性越强（如果是测药物毒性，则表示药物毒性越小）。 一、MTT 溶液的配制 1、MTT 溶液的配制通常MTT 配成的终浓度为5mg/ml，须用PBS或生理盐水做溶剂。 市面上一般MTT的包装为100mg，250mg或1g。对于100mg这样的小包装，厂家都是将MTT放入小管中的，个人建议不要再用天平称量分装，而应该一次性将其全配制成溶液，如100mg用20mlPBS来溶解。具体做法：预先在50ml离心管（没有的话，可用培养瓶替代）加入20ml PBS，从中先吸取500-1000ul PBS装入含MTT的小管中，吹打若干次后将其移入50ml离心管，然后再混匀。可以重复几次，以使小管中的MTT不残留于管内。将MTT完全混匀后，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，分装避光(避光袋或是黑纸、锡箔纸包住)可长期保存于-20℃。按细胞培养板每孔需加10ul计算，一般每96孔板约需1ml，所以分装时可考虑每管分装1ml。对于大包装，可按上述方法称取一部分溶解，也有人将粉剂分装在EP管里，用的时候现配，直接往培养板中加。 2、注意事项： （1）在配制和保存的过程中，容器**用铝箔纸包住。 （2
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影响血液标本质量的因素
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
实验动物血液标本的处理-----系列四 如何避免血液标本溶血现象？应注意的细节？ 实验动物血液标本的处理系列四-------影响血液标本质量的因素 1、采血针头内壁不光滑 采血针头分类： 1）不锈钢针头：外壁光滑，内壁看似光滑，实质毛糙，容易划伤细胞，引起溶血级联反应，导致血液标本溶血。 2）静脉滞留针：外壁光滑，内壁光滑，可以避免划伤细胞，有效防止采血过程引起的溶血，但是成本较高。 2、血液标本盛装容器不洁净 3、混入动物毛发 采血过程操作不够干练，不够清洁，造成动物毛发等异物混入或接触血液标本，引起溶血。 4、回抽速度太快，压力过大 在有效的针头横截面内回抽速度越大，压力越大，细胞遭受挤压，容易导致破裂，引起溶血。 5、血液从注射器注入容器时未取下针头 血液注入真空采血管时，因真空压力过大，造成细胞急剧挤压破裂，引起溶血。应将针头取下，将血液沿管壁缓慢注入，不能出现泡沫。 6、采血时形成气栓 采血只能向外抽，不能向血管内推，以免注入空气形成气栓，导致溶血。 7、实验本身因素 因实验本身因素导致的溶血，例如药物水合氯醛，本身就有轻微溶血作用。 8、运输过程中剧烈震荡 血液标本运输过程中避免剧烈震荡引起的溶血反应。
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细胞转染的途径与方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
细胞转染是指将外源分子如DNA，RNA等导入真核细胞的技术,它是研究基因表达调控，突变分析等的常规工具。细胞转染分为瞬时转染和稳定转染。瞬时转染是指外源基因进入受体细胞后，存在于游离的载体上，不整合到细胞的染色体上。稳定转染是指DNA整合到宿主细胞的染色体中。 细胞转染途径 （一） 物理介导：电穿孔法、显微注射、基因枪 1. 电穿孔法： 电穿孔靠脉冲电流在细胞膜上打孔而将核酸导入细胞内。本法需用特殊设置（电穿孔仪），把悬浮状态的受体细胞和供体DNA共同放入皿中（或杯中），再施以高压电脉冲，能够促进DNA通过细胞膜而进入胞内，并可整合到细胞的DNA中，使细胞发生转化。若转移的DNA为带有选择标记基因的质粒，也可在选择培养基中进行鉴定。 优点：转染效率较高 缺点： 1）需要昂贵的仪器（电穿孔仪） 2）对细胞的损害较大，每次转染需要更多的细胞和DNA 3）每种细胞电转的条件都需要进行多次优化：电脉冲和场强的优化对于成功的转染非常重要，因为过高的场强和过长的电脉冲时间会不可逆转地伤害细胞膜而裂解细胞。 2. 显微注射 本法是借助显微注射器直接把DNA注射入核内，使之发生整合入受体细胞基因组中的技术。本技术需要有严密无菌的净化室，以免敞开操作污染，同时要能有自动拉针仪以制备显微针，一般用手动拉针器拉制时要能使针末端有一个0.6cm长的细部，太长易折断，针尖开口为2-3μm间，针口小于1μm更佳，针尖开口大于5μm易刺伤细胞。 优点：转染效率较高，可用于稳定转染和瞬时转染。 缺点：在导入DNA时需要一个细胞一个细胞注射，不适合大量转染细胞研究的需要。适用于制备转基因动物 3. 基因枪 基因枪依靠携带了核酸的高速粒子而将核酸导入细胞内。可以将大分子导入细胞。 （二）化学介导：磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、多种阳离子物质介导 1. 磷酸钙共沉淀法 磷酸钙被认为有利于促进外源DNA与靶细胞表面的结合。氯化钙+DNA+磷酸缓冲液按一定的比例混合，形
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小型恒温恒湿试验箱温度稳定的控制方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
小型恒温恒湿试验箱控制方法如下： 一：加温能力 1：加温装置是控制小型恒温恒湿试验箱是不是升温关键环节; 2：它是控制器得到升温指令时会输出电压给继电器，大约3-12伏直流电加在固态继电器上面;它的交流端相当于导线接通;接触器也同时吸合，加热器两端有电压使其发热，通过循环风机带动把热量带到箱里，使恒温恒湿试验机升温; 3：那温度快达到你的设定值;控制器通过加在固态继电器通断调节; 4：我们在恒温恒湿试验箱看屏幕上加热出力多少来调节发热量;这是在89度以上温度控制，在89度以下温度稳定如何控制呢?恒温恒湿试验箱是在一边通过固态继电器发热出力多少;另通过压缩机制冷循环降温达到动态平衡;温度恒定。 二：降温能力 1：恒温恒湿试验箱重要环节，是判定一台恒温恒湿机性能好坏重要参数，它包括压缩机、冷凝器、节流装置、蒸发器四大组成。 2：压缩机是制冷系统心脏，它吸入低温低压气体，变成高温高压气体，通过冷凝成液体放出热量，通过风机带走热量，所以恒温恒湿机下面是热风原因，然后通过节流到为低压液体，其次通过蒸发器成为低温低压气体最后回到压缩机;制冷剂在蒸发器中吸收热量完成气化过程重而吸收热量，达到制冷目的，完成恒温恒湿机降温过程。 三：加湿能力 四：降湿能力 降湿系统也是靠制冷系统完成，蒸发器放在小型恒温恒湿试验箱里面;比较冷，恒温恒湿试验箱里面高湿气体会见冷的物体冷凝成液体;如此反复箱体的高湿气体会很少，达到降湿目的。 小型恒温恒湿试验箱是航空、汽车、家电、科研等领域必备的测试设备，用于测试和确定电工、电子及其他产品及材料进行高温、低温、湿热度或恒定试验的温度环境变化后的参数及性能。 如需了解更多环境试验箱：恒温恒湿试验箱、恒温恒湿箱、冷热冲击试验箱、老化房、恒温恒湿房、高低温试验箱、淋雨试验箱、砂尘试验箱、紫外线老化试验箱、盐雾试验箱，请联系0512-65649796或浏览http:///
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