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普通光学显微镜的原理和性能介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
（一）光学显微镜的成像原理 显微镜的放大是通过透镜来完成的，单透镜成像具有像差，影响像质。由单透镜组合而成的透镜组相当于一个凸透镜，放大作用更好。 （二）显微镜的性能 显微镜分辨能力的高低决定于光学系统的各种条件。被观察的物体必须放大率高，而且清晰，物体放大后，能否呈现清晰的细微结构，首先取决于物镜的性能，其次为目镜和聚光镜的性能。 1、数值孔径 也叫做镜口率（或开口率），简写为N.A，在物镜和聚光器上都标有它们的数值孔径，数值孔径是物镜和聚光器的主要参数，也是判断它们性能的最重要指标。数值孔径和显微镜的各种性能有密切的关系，它与显微镜的分辨力成正比，与焦深成反比，与镜象亮度的平方根成正比。 数值孔径可用下式表示： N.A=n.sin（α/2） 式中： n—物镜与标本之间的介质析射率 α—物镜的镜口角 所谓镜口角是指从物镜光轴上的物点发出的光线与物镜前透镜有效直径的边缘所张的角度，见图1—5。 镜口角α总是小于180°。因为空气的折射率为1，所以干燥物镜的数值孔径总是小于1，一般为0.05—0.95；油浸物镜如用香柏油（折射率为1.515）浸没，则数值孔径最大可接近1.5。虽然理论上数值孔径的极限等于所用浸没介质的折射率，但实际上从透镜的制造技术看，是不可能达到这一极限的。通常在实用范围内，高级油浸物镜的最大数值孔径是1.4。 几种物质的介质的折射率如下： 空气为1.0，水为1.33，玻璃为1.5，甘油为1.47，香柏油为1.52。 介质折射率对物镜光线通路的影响见图1—6。 2、分辨力 D可用下式表示： D=λ/2N.A. 可见光的波长为0.4—0.7微米，平均波长为0.55微米。若用数值孔为0.65的物镜，则D=0.55微米/2×0.65=0.42微米。这表示被检物体在0.42微米以上时可被观察到，若小于0.42微米就不能视见。如果使用数值孔径为1.25的物镜，则D=2.20微米。凡被检物体长度大于这个数值，均能视见。由此可见，D值愈小，分辨力愈高，物象愈清楚。根据上式，可通过：
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药物疾病**的研究思路：由表及里，由浅到深
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
一种药物运用于疾病**需要前期的研究工作，怎么去研究某一种药物对一个疾病的作用机制呢？这边通过一篇发表在《Experimental Cell Research》上关于槲皮素用于**肺动脉高血压的报道来了解下药物疾病**的研究思路。 研究背景 肺动脉高压（PAH）是一种多因素引起的复杂疾病，有关PAH发生特异性信号通路靶向药物的开发是大家所关心的热点。 槲皮素是一种存在很多蔬菜水果中的常见类黄酮。近年来的研究表明槲皮素可通过抑制增殖，诱导凋亡，细胞周期阻滞和减少转移而用于抗氧化，炎症和癌症**。此外，也有研究报道槲皮素可以抑制冠状和肺动脉舒张和降低血压，但是具体的分子机制还不清楚。 因此，本研究的目的就是通过在大鼠模型中缺氧诱导PAH来探究槲皮素的作用机制。 一槲皮素可以**肺动脉高压么？ 要想研究槲皮素对PAH的药效，首先得确认槲皮素是否对PAH有作用。研究人员利用大鼠缺氧条件下，每天给予100mg/kg槲皮素4周。结果显示，缺氧组比正常组表现出高的RVSP和右心室肥大。而用槲皮素**组的RVSP增长被明显抑制了。同时，缺氧条件下的大鼠体重降低表型也在槲皮素**后受到抑制，右心室肥大也在药物**组得到抑制。肺动脉重建检测显示槲皮素**组可显著抑制由于缺氧引起的胞壁增厚和肺小动脉肌化。因此，从这部分结果可以看到槲皮素可以有效改善缺氧诱导的肺动脉高压和肺动脉重塑。 二槲皮素**是怎么样起作用的？ 在肺动脉重塑过程中，肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）是重要的中介。那么，槲皮素是否是直接抑制了PASMCs的增殖，并诱导其凋亡呢？肺切片PCNA，Ki67和TUNEL染色表明，槲皮素处理后细胞凋亡比例显著增加，增殖明显抑制。因此，槲皮素通过抑制了PASMC细胞的增殖，增强其凋亡而逆转缺氧诱导的
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斜纹夜蛾核型多角体病毒侵染SL221细胞早期阶段的转录组分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
斜纹夜蛾（Spodoptera litura, S. litura）是来源于印度的谷物类害虫，属鳞翅目类昆虫，目前在多个国家都有广泛的分布。核型多角体病毒（nucleopolyhedrovirus, NPV）可寄生于鳞翅目昆虫的血、脂肪、氯管、皮肢等细胞的细胞核内发育，对其产生致命影响。然而由于缺乏参考基因组序列以及转录组数据，以致迄今为止，并未有关于斜纹夜蛾核型多角体病毒（SpltNPV）侵染斜纹夜蛾细胞时细胞内早期变化的报道。在农业生产上，对现代农业粮食安全也产生了较大的威胁。本研究中，研究者对18h侵染循环的宿主斜纹夜蛾细胞进行链特异性转录组测序（Strand-specific RNA sequencing, RNA-seq），序列拼接后得到99180个非重复序列。在整个侵染过程中，有超过2000个斜纹夜蛾基因被显著性差异调控。在侵染6 小时后（hours post infection, hpi），病毒mRNA水平开始急剧增加，且该现象在剩余的侵染过程中一直存在。根据对表达基因变化的归类分析，研究人员将目光聚焦在与胁迫反应、细胞凋亡、代谢酶、宿主细胞天然免疫系统相关的基因上。他们发现一小簇与宿主胁迫反应相关，尤其在6 hpi时发现的62个基因显著性差异表达，分别包含了酶、配体、受体相关基因。在18hpi的时候发现，有104个功能基因在从0 hpi到18 hpi连续不断的发生显著的变化，其中包括3个SL221功能基因和81个病毒基因，例如：四次穿膜蛋白及iap 基因。这些对被杆状病毒侵染早期阶段的宿主调控基因的研究将为今后利用该病毒作为有效的杀虫剂提供重要的依据。 该研究中连特异性转录组测序服务由上海伯豪生物技术有限公司提供。 重要结果 GO分析 COG注释 火山图及韦恩图 差异表达基因GO分析 qRT-PCR验证RNA-seq结果 小结 该研究让我们很好的认识了SpltNPV-G2病毒侵染斜纹夜蛾后所产生的细胞反应，为今后更深入研究提供了潜在靶标。研究者的数据主要揭示了病毒侵染细胞早期，宿主细胞所产生的防御反应。广义上来讲，该研究为今后利用该病毒乃至其他杆状
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一年4篇Cell一作论文 大牛分享了10条科研经验
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
罗纳德·韦尔博士（Ronald D. Vale）是加州大学旧金山分校（UCSF）的细胞与分子药理学教授。研究方向是驱动蛋白和动力蛋白分子马达。他创造了一个科研界的世界记录：一年内作为第一作者发 4 篇高质《Cell》论文，迄今无人打破。加上这 4 篇，他在研究生期间共发表 12 篇第一作者的实验论文。这一记录，大概是现代生命科学研究生的上限。 以下是他在获得拉克斯奖后，在《自然-医学》（Nature Medicine）发表的文章，摘选部分，和大家分享。 十诫 以下是我从自身经验中总结的十条经验之谈。我全神贯注于科学中，时而犯些小错误，并从错误中学习，对于科学将把我带向何方，最终我将有何成就我几乎从来没有想过。 1.寻觅良师，学习他然后发展自己的风格 从你周围的事物中学习。科学与哲学相似，都是来处理问题，在试验进程中，需有个人风格及与其他人的合作。作为一名年轻的科学家，你需要接触不同的科学研究方法，从比你资深的科学家哪里汲取思想及治学态度。这种吸取的混合营养最终会沉淀成为最适合你的一种风格，也将让你身上拥有你所钦佩的人的气质特征。既不极度崇拜谁，也不轻视谁。我深感幸运，因为在我成长过程中遇见了许多不同寻常的导师，他们是由Bruce Schnapp, Tom Reese, Mike Sheetz和Jim Spudich组成的核心团体。从他们各自独一无二的个性及科学方法上我所获甚多。但是，他们拥有一个共同点：都非常友善，且支持我成为一个年轻的科学家。在我研究生期间，我也遇见了对我影响深远的英雄人物。第一位是我的导师Eric Shooter。试问，能有几位论文导师任他的研究生漫步于他的课题之外，或做一些与实验室工作无关之事？且任其对学分不上心？那时，我还不完全明白与其他许多科学家相比，Eric对他的实验室“家庭”是多么的无私。在MBL，我也遇见了活跃的老科学家Shinya Inoue和Andrew Szent-Gyorgyi。他们拥有虽小但非常专注的实验室（不像斯坦福的大多数大实验室），他们热爱生活，热爱科学，并不会对任何一方做出
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大鼠敞箱实验/旷场实验方法总结以及实验注意事项（干货）
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
大鼠敞箱实验/旷场实验方法总结 一.基本原理 动物进入敞箱后因其对新异环境的恐惧而主要在敞箱内靠周边的区域活动，在中央区域的活动较少。然而，动物的探究特性又促使其产生在中央区域活动（包括运动、饮水或进食）的动机，因而形成冲突状态。抗焦虑剂（如地西泮）可解除这种冲突状态，表现为在不改变活动计数的剂量明显增加大鼠进入敞箱中央区域的次数及在中央区域逗留的时间（Stefanski法）或增加大鼠在中央区域的饮水时间（Stout-weiss法），致焦虑剂（如FG7142）则使饮水时间明显减少。 二.操作步骤 Stefanski法：实验装置为一圆形敞箱，直径80cm，高30cm；敞箱底部中央划有直径分别为35cm和50cm的内外两个圆圈，内圈所包含的区域为中央区；靠近底部的侧壁上对称装有3个光电管，并可通过毕露电视观察老鼠的活动情况。实验在弱光照明、65dB的白噪声(背景声)下进行。实验用雄性Wistar大鼠，体重200-240g。将大鼠置于敞箱中央，观察10min内大鼠总的活动计数、进入敞箱外圈的次数（从敞箱周边向中央区域运动约为15cm为一次）和在敞箱中央区域逗留的时间。 Stout-weiss法：（敞箱饮水实验，the open field drink test，OFDT），实验用一36cm*36cm*36cm的透明有机玻璃箱，其底部漆成黑色，顶部敞开（此实验仪器可由上海欣软信息科技有限公司提供）。箱子的中烟倒着悬挂一水瓶，瓶嘴离地10cm；箱的上方离地面60cm处有一25w的白炽灯用于照明。除一面外，箱体其余三面都用黑色隔板遮挡，以排除额外的的可见刺激。实验前至少三天每天抚摸大鼠1min，以减少非特异性应激对实验的影响；实验前3天每天仅饮水1h（下午3：00-4:00）。实验时将大鼠置于敞箱中央，观察10min内大鼠开始饮水的潜伏期、饮水时间（主要指标）、靠近水瓶的次数及站立数等。 三 .注意事项与评价 （1）在每只大鼠实验后，用5%的醋酸水溶液彻底清洁实验箱，以防止嗅觉暗示传递给下一只大鼠。 (2)敞箱实验由于其设备简单、操作简便，在行为研究中使用非
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中华眼镜蛇心脏毒素（CTX）对疼痛及记忆的影响
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
中华眼镜蛇心脏毒素（CTX）对疼痛及记忆的影响 (此研究来自于华东师范大学刘华清等人) 摘要:通过热板法及醋酸扭体法观察中华眼镜蛇心脏毒素(CTX)对成年昆明种小鼠疼痛的影响，通过Y型电迷宫及穿梭箱法研究CTX对东蓖若碱诱发成年昆明种小鼠学习记忆障碍的影响，利用跳台法研究CTX对东蓑若碱诱发成年BABL/C小鼠学习记忆障碍的影响，利用Morris水迷宫法研究CTX对东蓖若碱诱发成年C57BL/6J小鼠学习记忆障碍的影响。实验发现，CTX能明显增加热刺激引起的疼痛闭值，明显减少醋酸引起的扭体次数，并能显著增加小鼠在Y型迷宫实验中的正确反应次数，减少在穿梭箱实验中小鼠重新训练至学会标准的训练次数及小鼠的反应时间，能增加小鼠在跳台法中的潜伏期，减少错误反应次数，减少小鼠在Morris水迷宫实验中的寻台时间和游泳路程，以上效果均表现出明显的剂量依赖性。以上结果提示，CTX有良好的镇痛作用以及对东莫若碱诱发的小鼠学习记忆障碍的改善作用，这可能是由于CTX与眼镜蛇神经毒素(NT)三维结构相似而导致了相似的生物学效应。 一.实验方法 1.Y型电迷宫法 昆明种小鼠雌雄各半。Y型电迷宫底部通以35v交流电，以小鼠受电击后直接逃至左 侧安全区为正确反应，以小鼠连续10次中反应正确8次为训练至学会的标准。24h后，将已经学会的小鼠随机分组，各组间达到学会标准的训练次数不存在显著性差异(P>0.05) o于测试前45min给药，空白组与模型组ip生理盐水，阳性组ip 0.1mg/kg HupA,CTXl,CTX2,CTX3组分别ip CTX 0.03,0.06,0.12mg/kg，测试前30min除空白组外其余5组均按5mg/kg体重给药剂量ip东蓑若碱。测试记忆成绩，以固定测试10次中的正确次数作为评价指标。（Y型迷宫视频分析系统由上海欣软信息科技有限公司提供，Y迷宫分为食物奖赏型和电刺激型，因不同的实验需要提供不同的实验装置）。 2.穿梭箱法 昆明种小鼠雌雄各半。以蜂鸣声刺激为信号，延迟5s以后同侧施加35v交流电刺激。 小鼠在蜂鸣声开始后5s之内到达安全区为正确反
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各类转染实验小技巧汇总
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
转染实验技巧（如下信息全部由客户提供） DNA体外转染试剂 如何准备转染所需的质粒DNA 转染效率受到诸多因素的影响，除了细胞、培养基和载体等影响因素外，另外一项非常重要的因素便是DNA的质量。为了比较不同厂家的转染效率，我们分别从三家不同的供应商购买了质粒制备试剂盒来制备pEGFP-N3质粒DNA，并通过不同的方法将制备的pEGFP-N3质粒转运至NIH-3T3细胞。 pEGFP-N3质粒分别通过Endofree Maxi Piasmid Kit(Qiagen),PerfectPrep Endofree Piasmid Maxi Kit(5 PRIME,inc)及NucleoBond DNA Maxi Kit(MACHEREY-NAGEL GmbH&Co.KG)制备，我们测定了230,260,280及320nm的吸光值检测DNA的质量。通过上述三种方法制备的DNA质量如下：MACHEREY-NAGEL＞5Prime＞Qiagen。 pEGFP-N3由PolyJetDNA转染试剂运至NIH-3T3细胞。转染效率的高低与DNA的质量相符，由MACHEREY-NAGEL纯化DNA对应的转染效率最高，而由Qiagen纯化DNA对应的转染效率最低。因此，MACHEREY-NAGEL GmbH & Co.KG的质粒制备试剂盒被认为是制备转染级别DNA的最佳选择。 How to prepare transfection grade plasmid DNA Transfection efficiencies are affected by a variety of different parameters. Besides factor such as cell culture, medium and vectors, one of most critical parameters is DNA quality. We prepared pEGF-N3 plasmid DNA by large plasmid preparation kits from three different vendors and tested transfection efficiencies by delivering pEGFP-N3 DNAs prepared by different methods to NIH-3T3 cells. We prepared pEGFP-N3 plasmid with Endofree Maxi Plasmid Kit (Qiagen), PerfectPrep Endofree Plasmid Maxi Kit (5 PRIME, Inc.) and NucleoBond DNA Maxi Kit (MACHEREY-NAGEL GmbH & Co. KG). The DNA quality was determined by measuring absorbance at 230, 260, 280 and 320 nm by spectrometry. The purit
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荧光显微镜成像质量的决定因素
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
荧光光学系统的成像质量主要取决于像的衬度和像的亮度，像的衬度是由样品中激发出的荧光与背景上观察到的光之比决定的。背景光包括透过截止激发光的滤色片的杂散激发光，样品组织成分的自发荧光和光学系统的自发荧光和杂散光，在荧光显微术中尽全力要解决的是既获得最佳的像衬度，同时又维持像有足够亮度，这两者往往是矛盾的。例如用极窄波带滤色片激发时仅利用了极少的光能，背景暗了但荧光亮度也弱了。在应用时，只能兼顾，合理的权衡以决定取舍。 荧光显微光学系统需要优先考虑的是： (1) 光学系统组成的材料应选用在激发光波内无荧光材料，不但指光学系统玻璃也包括胶合制造中的胶合剂、切片、盖玻片和浸液以及密封剂。若有自发荧光，不但会增加背景光，有时还会混淆观察荧光图像。 (2) 光学系统的参数选择中, 应将获得最大光能作为第一考虑因素。 照明系统中集光镜应选用最大的包容角； 采用柯勒照明并使灯丝或弧光像充满入瞳，以期望获得高效率的均匀照明。 收集荧光成像的物镜，因为像面照度与数值孔径NA 2 成正式，为此作为荧光用物镜应有较大的NA值。目前10×已达015；20×达0175；40×达019；油镜40×达113。 双目镜筒作为荧光用时应在可见光谱段有较高的透过率，采用镀膜技术可大大地减少光能的损失，它可比一般双目镜筒透射率提高一倍，这对弱荧光物质观察是必须的。 目镜放大率不宜选大，因为象面照度与目镜放大率平方成反比。若其它条件相同，当用613×目镜时，照度定为100% ，换上1215×时，照度约为25%，因此常在4×～ 613×之间选用。 由此表明，用不同物镜和目镜组合成同一倍率的显微镜时，象面照度和曝光系数可相差数倍，对于荧光观察最佳组合是选用低倍率目镜和NA 大的物镜最为合适。 (3) 作为荧光光学系统各组成部件的光谱特性也是至关重要的，特别是紫外光要通过的部件，如照明系统，聚光镜以及物镜，要关注紫光区的透射系数。聚光镜要选用透紫外线的材料。照明系统中反光镜表面镀铝比镀银好，因
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细胞培养中的常见污染类型
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
凡是混入细胞培养环境中对细胞生存有害的成分和造成细胞不纯的异物都可视为污染。细胞污染可分为三大类：微生物污染、细胞间交互污染和化学污染。 微生物污染：包括真菌、细菌、支原体和病毒污染。 细胞间交互污染：指的是非同种的其他细胞污染 化学污染：指影响细胞生存的非细胞所需的化学成分。 一、微生物污染 细菌和真菌污染是较容易发现的，而病毒、支原体和其他细胞系的污染是不容易被察觉的。 1. 细菌污染时培养液pH值改变，溶液变浑浊。细菌的大量增殖导致细胞液中营养大量消耗，并产生毒素抑制细胞的生长，最终导致细胞崩解死亡。在有抗生素存在的条件下易造成隐性污染。 2. 病毒污染是最难发现和清除的，对于实验人员也是一个潜在的危险因素，不过病毒具有严格的宿主性和自限性。 3. 支原体污染是一种比较严重的细胞污染，难发现难去除。该种污染在显微镜下看不到，不引起培养液浑浊和pH改变。由于支原体营养要求高，故不容易用传统的微生物培养法检测到。此外，支原体不能通过过滤清除，且大多数抗生素对其无效！ 4. 真菌污染中多是毛霉菌、孢子霉、白念珠菌、酵母菌等污染，易通过孢子传播。霉菌污染后多数在培养液中形成肉眼可见的白色或浅黄色漂浮物，短期内培养液不浑浊。显微镜下观察可见在细胞之间有纵横交错穿行的丝状、管状及树状菌丝。常规的抗生素、紫外线和酒精对真菌的灭菌效果较差，难以消除。真菌污染大部分是人为带进细胞间，或者空气环境造成。 二、细胞系交叉污染 细胞系交叉污染难于发现，当传代细胞出现生长速度异常时，可怀疑该种污染。预防该类型污染时，操作人员应同一时间只传一种细胞，每种细胞液要有单独的培养液，并且建立细胞库，每三个月更换一次细胞。
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Morris水迷宫的硬件要求对实验结果的影响
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
Morris水迷宫的硬件要求 1.水池和站台： 对于水池的大小，存在一个人为选择的问题，看起来应该统一标准，其实并不容易。但是有个原则就是水池不能太小，站台也不能太大。Morris最初（1981年）用于大鼠的水池是直径1.32米、高为0.6米，水池的水深为0.40米;但后来（1984年）改为直径2.14米、高0.4米，水池的水深为0.25米。对于小鼠的实验水池，文献中介绍的迷宫直径差异巨大，小到0.6米, 大到2.0米。一般而言，过小的水池使小鼠爬上平台的偶然性增加，任务难度减小。过大的水池会使小鼠游泳路径延长，体力消耗过大，爬上站台的机率减少。现在国内文献中所用水迷宫水池大多数为大鼠1.6m或1.8m居多，而小鼠一般为1m或1.2m，高0.5m。站台一般为圆形，直径可分为大鼠12cm,小鼠6cm,表面粗糙，高度一般为30cm。国外文献中所用水迷宫水池大多数为大鼠1.8m或2.0m居多，高0.6m,站台直径10cm；而小鼠一般为1m到1.5m，高0.3m站台直径5cm。国内尺寸能统一么？如何定标准？ 2.水温： 水的温度要求实验过程中恒温。大鼠温度范围一般为25± 1℃，小鼠可能低些在18~22℃。有文献报道，对小鼠进行了水温对迷宫成绩影响的观察，结果发现27~28℃组的小鼠成绩最差，而17~18℃组和21~22℃组小鼠的学习成绩没有区别，所以，我们推荐小鼠水迷宫的实验用21~22℃水。水温对潜伏期影响很大，特别是大鼠，如果温度过高，大鼠在游几次后渐渐适应了迷宫环境，它就会把迷宫当“浴盆”了，放进去以后，就漂浮不动；如果水温过低，大鼠体温下降很快，体力也会耗散太多，大鼠游泳能力不能坚持很久，就会出现游几次潜伏期突然增大的现象。甚至有些老鼠会出现较明显的应激反应，比如说会出现抽筋，腹泻现象。水温一般保持25度左右，另外气温也会导致水温偏差过大，应人为的调节水温。所以就要求在水池的底部装有可以恒定保持水温的 3.光源： 要保证水池水面上没有光影，主要是要避免光线在水面的反射问题，以免留在水面的光照影子被软件的采集系统将光影和鼠的影子
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连续变倍体视显微镜倍率介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
一、综述 连续变倍体视显微镜是光学系统具备连续变倍功能（Zoom）的汗盟仪器仪表体视显微镜，其倍率可以在标定范围内连续变化。由于麦克奥迪体视显微镜的目镜视场直径固定（比如：10X目镜视场直径为22mm），其物方（被观察物体方）视场直径随着倍率的变化而变化、与倍率呈反比关系：物方视场直径 = 目镜标称视场直径 / 物镜变倍手轮示值环上的倍率数值 二、显微镜物镜倍率的检测和国家标准 1.物镜倍率的检测 ⑴ 物镜台尺(1/100、总长2mm、每小格=0.01mm)、分划目镜（配5/100 一字分划板，每小格=0.05mm） ⑵ 准备程序 首先将显微镜按照常规使用要求调整好；换分划目镜，将分划板像调整到最测量者目视最清晰状态；将物镜台尺放置在显微镜载物台上，调整汗盟紫星显微镜对焦机构、在目镜中找到物镜台尺的标尺像，并进一步调整到高低倍齐焦；在镜下移动物镜台尺，使其标尺与目镜分划边标尺对准；可以先从高倍整数倍开始，向低倍依次测量各标称倍率的物镜放实际大倍率。 ⑶ 测量程序 在做好以上准备工作后，即开始测量：将当前拟测量的物镜变倍手轮倍率数字对准镜体上的“准线”；通过目镜观察、用目镜分化板上的标尺测量物镜台尺2mm标尺所成像的长度，该长度数值除以其物方实际长度2mm，即为本显微镜物镜在该标示倍率下的实测倍率；实测倍率与标示倍率之差，即为该标示倍率的放大倍率误差。 体视显微镜的左右光路的放大倍率可以通过以上测量方法，分别测量。 2.国家标准的规定 根据 GB/T 19864.2-2005 （高性能体视显微镜质量标准）体视显微镜总放大倍率误差不应超出±7.5%；左右光学系统的放大倍率差应不大于1.5%。 三、连续变倍体视显微镜与倍率相关的问题 1.连续变倍体视显微镜在性能发展方向上，既要追求“高倍率”、又要追求“大视场”，这是一对矛盾。尤其是在“大视场”方面，目镜视场直径确定的情况下（比如24mm），物方视场直径根据上式，物镜倍率0.66X时将达到直径36.36mm，完全实现了体视显微镜低倍时“广角、大视
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外泌体(Exosomes)分离提取方案介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
外泌体（Exosomes）是细胞经过"内吞-融合-外排"等一系列调控过程而形成的直径在30～100 nm的圆形单层膜结构的细胞外小囊泡。外泌体由机体众多类型细胞释放，并广泛分布于唾液、血浆、乳汁、尿液等体液当中，可以携带蛋白，运送RNA，在细胞间物质和信息转导中起重要作用。外泌体可能通过调控免疫功能，促进肿瘤血管新生和肿瘤转移，以及直接作用于肿瘤细胞等途径，影响肿瘤的进展。 由于外泌体的特殊结构和功能，使得它具有潜在的应用价值，一方面可以作为诊断多种疾病的生物指标，另一方面也可以作为**手段，未来有可能作为药物的天然载体用于临床**。外泌体的分离纯化一直是科研工作者关注的问题，获得高纯度的外泌体对后续的研究至关重要。 图1：外泌体通路示意图 超离法是最常用的外泌体纯化手段，采用低速离心、高速离心交替进行，可分离到大小相近的囊泡颗粒。超离法因操作简单，获得的囊泡数量较多而广受欢迎，但过程比较费时，且回收率不稳定，纯度也受到质疑；此外，重复离心操作还有可能对囊泡造成损害，从而降低其质量。 如何简单有效地提取外泌体呢？ 全球生命科学公司的领导者Biovision公司给出了专业的答案，针对不同样品来源的样品以及不同的分离方法原理，Biovision提供两类提取试剂产品： ·ExoPure™ Reagent: ExoPure™ Reagent 是基于化学沉淀的原理，可以一步法快速分离提取微粒体，并适用于生物液体和细胞培养基。 产品名称及描述 品牌 货号 产品说明 ExoPure™ Reagent (Overall Exosome Isolation, biological fluids) Biovision M1001 详情 ExoPure™ Reagent (Overall Exosome Isolation, cell media) Biovision M1002 详情 ExoPure™ Reagent (Overall Exosome Isolation, urine) Biovision M1003 详情 图2：ExoPure™ Reagent实验方案展示 ·ExoPure™ Immunobeads: ExoPure™ Immunobeads是将Exosomes表面抗原的特异性抗体共价包被在乳胶Beads上，利用免疫结合从而在生物液体和
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人透明质酸结合蛋白（HABP）分析检测ELISA试剂盒使用说明书
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
人透明质酸结合蛋白（HABP）分析检测ELISA试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 标本：血清或血浆 上海乔羽生物专业供应： 使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本透明质酸结合蛋白（HABP）含量。 试验原理： HABP试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知HABP浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将HABP和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中HABP的浓度呈比例关系。 试剂盒内容及其配制 试剂盒成份（2-8℃保存） 96孔配置 48孔配置 配制 96/48人份酶标板 1块板（96T） 半块板（48T） 即用型 塑料膜板盖 1块 半块 即用型 标准品：80ng/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按说明书进行稀稀 空白对照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即用型 标准品稀释缓冲液 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml） 即用型 生物素标记的抗HABP抗体 1瓶（6ml） 1瓶（3.0ml） 即用型 亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml） 即用型 洗涤缓冲液 1瓶（20ml） 1瓶（10ml） 按说明书进行稀释 底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型 底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型 终止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型 标本稀释液 1瓶（12ml） 1瓶（6.0ml） 即用型 自备材料 1． 蒸馏水。 2． 加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。 3． 振荡器及磁力搅拌器等。 安全性 1． 避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。 2． 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。 3． 不要用嘴吸取试剂盒里
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蛋白A、蛋白G与蛋白L之间的差异
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
蛋白A (Protein A) 是金黄色葡萄球菌的一个株系的细胞壁蛋白，它通过Fc区与哺乳动物的IgG结合，天然的启维益成提供的Protein A，42kDa，含有四个Ig Fc结合位点，其中2个是有活性的，而用于纯化抗体的，一般是重组的protein A，含有4个Ig Fc区域结合位点。 蛋白A作为亲和配基被偶联到琼脂糖基质上即蛋白A琼脂糖（protein A agarose），可以特异性的和样品中的抗体分子结合，而使其他杂蛋白不结合，具有极高的选择性。1个蛋白A分子至少可以结合2个IgG。启维益成提供的天然蛋白A 和重组的蛋白A对于IgG的Fc段有着相似的特异结合。但重组的蛋白A经改造后含有一个C末端半胱氨酸，可以单一位点偶联于琼脂糖上，降低了空间位阻，增加了与抗体的结合能力。蛋白A与IgG的结合强度很大成度上依赖于该抗体的种属和亚型，启维益成提供的蛋白A琼脂糖常用于免疫沉淀鼠 IgG2a, IgG2b, IgA, 兔 IgG, 以及人的 IgG1, IgG2和IgG4几种抗体。 蛋白G是一种源自链球菌G族的细胞壁蛋白，分子量25kDa，为三型Fc受体。蛋白G可以与IgG的Fc 区域特异性结合，与Protein A相比对IgG具有更好的结合能力，血清蛋白结合水平更低，纯度更高，配基脱落也相对更低。重组蛋白G已经除去了与白蛋白及细胞表面结合位点，减少了交叉反应和非特异性结合。因此，它比天然蛋白G和蛋白A有更大的亲和力。 蛋白G作为亲和配基被偶联到琼脂糖基质上即蛋白G琼脂糖（protein G agarose），可以特异性的和样品中的抗体分子结合，Protein G能结合所有的人和鼠的IGG抗体亚型，包括鼠的IGG1。Protein G也可以与小鼠的IGG2a和IGG2b结合，而Protein A则不能。 Protein L是从马格努斯消化链球菌分离出来的能和免疫球蛋白特异性结合的蛋白质，分子量36Kd，与蛋白A和蛋白G结合到（抗体）的Fc区不同的是，蛋白L通过轻链相互作用结合的抗体。因为重链的任何部分都不会参与结合相互作用，蛋白L结合更宽范围的抗体类大于蛋白A或G蛋白L结合所有抗体类，包括IgG，IgM，IgA的，IgE和IgD的代
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免疫疗法之IDO信号通路介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
免疫逃避是识别恶性肿瘤的标志之一，研究者一直在努力地研究以明确能使癌细胞回避宿主免疫系统的复杂机制。癌症细胞以便于生存、增长、入侵及恶性肿瘤细胞的转移使用吲哚胺2,3-双氧酶（IDO）途径来抑制宿主的免疫应答。启维益成提供的IDO通路在许多的癌症中是非常活跃的，对于T细胞袭击提供直接防御。这个IDO路径在许多的抗原提呈细胞中也非常活跃，导致对肿瘤相关抗原的外周耐受性。 启维益成提供的IDO有两种同工酶，IDO1和IDO2，通常涉及到氨基酸色氨酸的分解代谢。IDO具有免疫阻尼效应，通过抑制巨噬细胞和效应T细胞应答。这个免疫抑制的确切机制目前并不清楚，但是他可能涉及了敏感T细胞色氨酸饥饿或色氨酸代谢过程中有毒代谢物（犬尿氨酸）的积累，导致细胞周期停滞或在有癌症细胞的环境下导致效应T细胞死亡。IDO的表达经常能直接激活关闭免疫应答反应的调节性T细胞，这放大了抑制效。 IDO的抑制剂能够预防这种免疫抑制并容许识别和对抗癌细胞的免疫细胞的激活。因此作为研发新一类的免疫**抗癌剂，IDO将会是继PD-1和CTLA通路之后一个新的研究热点。重要的是，这是一个广泛可适用的信号通路，而不是特定于任何特定形式的癌症。IDO 抑制能配合化疗和免疫**药物及临床疗法一起结合使用，包括使用单克隆抗体策略来免疫检查靶标如CTLA-4、PD-1和PD-L1。 许多大型药物公司已经意识到了开发IDO信号通路的价值（金融和**价值）。几个IDO抑制剂在早期的临床试验已经展现出很好的抗肿瘤活性，且有许多的公司正积极地投资于这些领域。近期Genentech (Roche)公司与NewLink Genetics公司达成一致意见，将NewLink’s的两个IDO 抑制剂（NLG919 和 indoximod）的研发估价为十亿美元。上周Bristol Meyers Squibb公司购买了Flexus Biosciences的F001287（Flexus公司的小分子IDO1抑制剂）花费了12.4亿元，这个小分子抑制剂能作用于相关的酶，TDO(色氨酸-2,3双加氧酶)。Incyte公司正积极地调查他们自己的IDO1抑制剂（INCB24360）和Mer
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