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强致癌物质黄曲霉毒素M1检测方案
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
针对近日来国家质检总局公布了的蒙牛乳业（眉山）和福建长富纯牛奶抽查的产品被检出黄曲霉毒素M1超标的问题。蒙牛乳业对此向民众进行了致歉申明，反应了民族企业的责任心和对食品安全的重视。对于黄曲霉毒素M1的限量，在之前的相关食品卫生标准中有明确规定，其中：鲜乳及其乳制品（折算为鲜乳汁）不得超过0.5ug/kg;婴儿代乳食品不得检出黄曲霉毒素b1。（GB 2761-2005国家标准—食品中真菌毒素限量 GB 9676-2003国家标准—乳及乳制品中黄曲霉毒素M1限量！ 黄曲霉毒素主要存在于谷物、坚果、花生、棉籽粉、玉米、干辣椒粉等食品中以及一些与人类血液，动物饲料相关的产品中。霉菌的生长并不一定表明黄曲毒素的存在，因为黄曲毒素只有在湿度、温度适合及通风良好才会生成。黄曲霉素B类具有蓝色荧光，G类具有绿色荧光。除了蔬菜中常见的(B1,B2,G1,G2)，还有存在喂食了有毒饲料的奶牛的牛奶中的黄曲霉素M，其中毒性最高的M的代谢物为4－羟基化的产物Bs.黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1的羟基化代谢产物，也是一种强致癌物质。其危害巨大，人类日常消费食品中如牛乳及其制品是易受到黄曲霉毒素M1污染的食品之一。黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用，严重时，可导致肝癌甚至死亡。毒性是砒霜的100倍其实主要是指黄曲霉毒素比砒霜毒。 目前来讲，Aflatoxin M1的检测方法有高效液相色谱法(HPLC)，酶联免疫检测法等。液相色谱法可以精确的检测奶制品中黄曲霉毒素的微小含量。而使用黄曲霉毒素M1 ELISA试剂盒则能够快速而准确的分析样品中黄曲霉毒素M1残留。 作为国内专业从事霉菌毒素检测技术与产品服务的主要供应商， 2010年泰乐祺科技投巨资成立了"检测应用实验室"，重点关注食品安全事件尤其是涉及霉菌毒素安全等检测技术问题，以期望快速提出解决方案。近期应针对奶中出现的黄曲霉毒素M1超标问题，泰乐祺科技提供了两种检测方案，可以帮助企业轻松应对奶中黄曲霉毒素M1的限量检测。 高效液相色谱法： 根据
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Isolation of kidney glomeruli from mice
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
Isolation of kidney glomeruli from mice Isolation of mice glomeruli 1. Mice were anesthetized by an intraperitoneal injection of Avertin (2,2,2-tribromoethyl and tertiary amyl alcohol; 17 μl/g mice) and perfused with 8 × 107 Dynabeads diluted in 40 ml of phosphate-buffered saline through the heart. 2. The kidneys were removed, minced into 1-mm3 pieces, and digested in collagenase (1 mg/ml collagenase A, 100 U/ml deoxyribonuclease I in HBSS) at 37°C for 15 minutes (for newborn mice) or 30 minutes (for adult mice) with gentle agitation. 3. The collagenase-digested tissue was gently pressed through a 100-μm cell strainer using a flattened pestle and the cell strainer was then washed with 5 ml of HBSS. 4. The filtered cells were passed through a new cell strainer without pressing and the cell strainer washed with 5 ml of HBSS. 5. The cell suspension was then centrifuged at 200 × g for 5 minutes. 6. The supernatant was discarded and the cell pellet was resuspended in 2 ml of HBSS. 7. Finally, glomeruli containing Dynabeads were gathered by a magnetic particle concentrator and washed for at least three times with HBSS. 8. During the procedure, kidney tissues were kept at 4°C except for the collagenase digestion at 37°C. Morphological Studies 1. Dynabead-perfused kidneys were snap-frozen for cryostat sectioning. Sections were stained with hematoxylin and eosin (H&E) and were examined by light microscopy. 2. Isolated glomeruli were examined by both light and electron microscopy (EM). Specimens for EM were fixed with 2% paraformaldehyde and 2.5% glutaraldehyde. 3. Glomeruli inte
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防止纯水水质劣化的方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
由于作为进水的纯水系统的制水速度较慢，因此在纯水系统与超纯水系统之间必须有水箱作为过渡。然而在水箱中贮放纯水会因为材质的溶出、空气中无机物质与有机物质的污染，以及微生物的繁殖等因素造成纯水水质的劣化，进而增加超纯水系统的纯化负荷。为了让超纯水装置有稳定的进水水质，如何使水箱的水质劣化程度控制在最小范围内非常重要。 1)以空气过滤器去除空气中的污染物质 实验室的空气中含有使纯水水质劣化的二氧化碳与浮游微生物，使用有机溶剂实验室空气中则含有挥发性有机溶剂。当空气中的二氧化碳溶解于水中，会形成碳酸根离子，使水箱中纯水的电阻率大幅降低，将造成超纯水系统中阴离子交交换树脂的负荷量增加，而缩短其使用寿命。除此之外，水箱中的纯水若混入微生物与有机物质，也会造成微生物增殖和有机物质的再次污染。因此，纯水水箱应呈密闭状态，因为水箱必须设置通气口使纯水可以顺利的流出，所以为了防止空气中的污染物质透过通气扣、口进入纯水水箱内，加装空气过滤器是不可或缺的。 2)以杀菌用UV灯防止微生物繁殖 水质纯化虽然有不同的方法，但仍有少量微生物残存。只要留存于水箱中，就有繁殖的可能性。虽然纯水中几乎不含营养成分(有机物等)，但仍有能适应贫瘠营养环境的微生物存在的可能。所以，在水纯化的过程中，应该具备杀菌的相关程序。 药剂洗净与热水杀菌，对于纯水中微生物的杀菌效果是单次性的，而非持续性的。相对而言，紫外线照射杀菌法，只要在照射期间，对微生物的杀菌作用就能够持续。紫外线的杀菌能力，以紫外线光强与照射时间来表示。当纯水中的微生物受到100mw.s/cm2的照射量处理时，杀菌率就可达99.9%。这里，我们在水纯化过程中加装紫外灯，并对其杀菌效果进行检测。首先我们在纯水系统的水流管路中加装紫外灯，采用连续照射方法，对进行杀菌效果进行检测。 一般来说，水纯化过程中若不使用紫外线照射，纯水系统的细菌
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影响蛋白与硝酸纤维素膜结合的四个主要方面
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
影响蛋白与硝酸纤维素膜结合的四个主要方面 1、用于溶解捕获试剂的缓冲液 2、膜本身 3、捕获试剂本身 4、蛋白结合时的周围环境（主要指湿度） 缓冲液的使用 合适的缓冲液必需能够溶解捕获蛋白以达到应用所需浓度，并能保持稳定（换言之，即溶解蛋白并维持其结合能力）。要获得最佳的结合意味着创造利于蛋白分散于固相的最佳条件。随着捕获蛋白不同，蛋白与膜结合的优化条件也有所不同。缓冲液中捕获线的使用必需要求溶解其中的蛋白达到合适的浓度。如果浓度过低，将无法在捕获线处捕获足够的蛋白。蛋白若形成沉淀，将阻碍膜上的孔隙从而导致样品经过测试条的测试区域时出现不规则的流动。沉淀也可能阻塞仪器管道和孔洞从而损坏仪器装置。尽管去稳定剂和共沉淀剂可利于蛋白在固相表面的分布，但必需在一开始就找到合适的蛋白溶剂。pH值和离子浓度是需要进行优化的两个重要参数。 pH水平 缓冲液中pH水平在很大程度上会影响蛋白与膜的结合。由于NC膜无酸性质子，因此调节pH时仅仅能改变的是蛋白的性质。蛋白质的溶解度在其等电点（pI）时最小。过大或过小的pH值可使蛋白发生变性，使其结合特性发生巨大改变，甚至产生聚集及析出沉淀。综上原则，在探索使蛋白溶液能在固相中理想分布的条件时，对于检测线最理想的缓冲液条件是其pH值等于或接近pI的时候。 常用的缓冲系统有磷酸盐、硼酸盐、碳酸盐和Tris盐缓冲液。值得注意的是，侧向流检测应用时捕获分子在膜上需被干燥，这意味着缓冲液所有组分，除可挥发成分外，都需在膜上干燥。这就使得可挥发的缓冲液如醋酸铵或碳酸铵特别受青睐。但高浓度的伯铵（例如来自Tris缓冲液）可导致捕获蛋白中酸性氨基酸残基（谷氨酸、天冬氨酸）与缓冲离子氨基间形成盐桥，从而遮盖住结合位点。 离子浓度 电解质溶液中离子的解离可降低蛋白-蛋白之间的相互作用力，因此在特定离子浓度范围内溶液中蛋白溶解度显著增强（盐溶效应）。而过高离子强度则相反（盐析效应）。这是因为此时大量的
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peprotech细胞因子注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
peprotech细胞因子注意事项 目前检测单个细胞特定细胞因子的表达手段包括：ELIspot、原位杂交、免疫细胞化学、限制性稀释分析（limiting dilution analysis，LDA）和单细胞PCR，应用原位杂交技术和免疫组化方法观察细胞因子蛋白表达及mRNA表达可以识别Th1和Th2细胞，此方法可获得较强的细胞内信号，但此方法工作量大、主观性强，难以进行大样本检测，且人肉眼识别能力有很大的局限性，而ELISPOT及单细胞PCR技术，技术性强、劳动强度大，难以进行广泛推广。随着多标记及胞内细胞因子标记流式细胞技术的出现，使对细胞内细胞因子的研究推向了一个新的阶段。下面主要对胞内细胞因子流式细胞技术作以介绍。 早期细胞因子表达与细胞功能相关性研究是基于特定克隆">克隆细胞的激活。尽管研究应用T淋巴细胞克隆">）与TH2（IL－4，IL－5，IL－10），但这些研究很难外推，因为T细胞克隆"g克隆证明了不同细胞因子的合成，如TH1（IL－2，IFN－>克隆与体内T细胞功能相关性还未被揭示。 近来，Jung与Picker采用了monensin、PMA等药物预孵，用Brefeldin（BFA）、Monensin阻断了胞内高尔基体介导的转运的方法使得细胞因子聚集，蓄积，增强细胞因子信号可被流式细胞仪检测。因为自然状态下，T淋巴细胞产生少量的细胞因子，通常要对T淋巴细胞体外活化进行研究。在体外刺激过程中，T淋巴细胞产生的细胞因子已释放出来，胞内细胞因子信号较弱，难以进行检测。这一方法可检测单个细胞内多个细胞因子，并可区分表达特定细胞因子的细胞亚群。在细胞水平该方法证明了人与鼠的淋巴细胞都存在1型与2型分化，且这些分化在特定细胞因子增强时可被逆转。且这些研究清楚地证明，只有激活的细胞亚群可以表达细胞因子，静止的正常淋巴细胞（T、B、NK）不能分泌细胞因子。 胞内流式分析法是用抗细胞因子抗体与细胞表面或胞内特定亚群标志组合，即可检测不同细胞亚群细胞因子的分泌，同时采用特殊的化学与抗体选择，确保静止与无细胞因子分泌细胞
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PM2.5的致命因素——"X"及其来源
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
PM2.5又称气溶胶PM2.5，指的是直径小于或等于2.5微米的超细悬浮颗粒物，也称为可入肺颗粒物,是人类身边隐形的“致命杀手”。那PM2.5的致命因素——“X”到底是什么?其又是来自何方呢? PM2.5等细微颗粒物中PAHs的GC/MS、UHPLC分析解决方案 业内研究表明，多环芳烃类化合物（PAHs）是PM2.5等空气中细微颗粒物中主要的有害成分之一，该类化合物已被国际癌症研究署（IARC）作为优先控制的有毒有害物，具有致癌、致畸、致突变等毒性，且在环境中广泛分布。空气中PM2.5等细微颗粒物中的PAHs主要来源于汽车尾气排放、煤的燃烧、垃圾焚烧、工业燃料的不完全燃烧等。 PAHs的全自动热脱附（ATD）-GC/MS分析 GC/MS方法是分析细微颗粒物中PAHs的常用方法之一，主要可测量碳原子数在24以下的PAHs。目前，其科研、日常监测中采用的方法大多是依据或参考EPA429、TO-13A等方法进行分析，但这一类方法通常比较耗时、且需使用二氯甲烷、乙醚等有害、危险试剂对样品进行萃取，测量结果也易受溶剂、试剂、器皿等其材的干扰；另外因PAHs本身的化学性质，也易受臭氧、NO2,紫外线等外界因素的降解，从而影响测量结果的准确性。 PerkinElmer为解决常规的GC/MS方法分析PAHs过程中所遇到的上述挑战，开发了专门针对细微颗粒中PAHs的全自动热脱附-GC/MS分析解决方案，对传统分析方法进行了明显的改进。 方案特点 • 一次运行，全部分析EPA提出的“优先污染物”中的16种PAHs • 可对所有的ng级的PAH化合物进行定量检出 • 无需对样品进行溶剂萃取，明显减少样品制备时间 • 完全自动控制的热脱附分析方法，操作更方便 • 无需使用任何有害、危险性试剂 • 无需担心试剂及其它器材对测量结果的影响 • 测量过程中无需担心臭氧、NO2、紫外线等对目标组分进行降解 • 解决了一般PAHs热脱附分析过程中峰拖尾问题 仪器：PerkinElmer Clarus®SQ8GC/MS 配件：PerkinElmer TurboMatrixTM热脱附仪 注：从填充有TenaxTA的ATD管中脱附的5ngPAH标样的提取离子色
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仪表冬季保温、防冻措施有那几种
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
在冬季，当被测介质通过测量管线传送到变送器时，常出现环境温度过低时就会发生冻结、凝固、析出结晶等现象，因环境温度过低而超出所使用仪表的正常工作温度区间，直接影响到仪表测量显示的准确性。为此，必须对仪表和仪表测量管线进行防冻处理，需要伴热保温的对象主要有安装在仪表保温箱内的变送器，外浮筒式液位变送器或其它形式的露天安装的液位变送单元，压力，差压，流量等仪表的检测管线和测量管线。通过选型或其他方式避免此类事故发生。 采取的措施通常有：选型，保温伴热，维护（点巡检、排污）等。 一、选型措施 选带保温装置型仪表。根据仪表的类别用途及拟安装地理位置，提出该仪表的保温防冻需求，再提交与厂家来处理。 北方有的地方昼夜温差太大，夜间可以到达－20多度，若从选型上解决则性价比相当大不合算．而选择保温伴热，维护（点巡检、排污）等方法则是防冻最佳的解决办法。 二、保温措施 用保温材料保温，即用保温材料将仪表易冻或怕冻的部位包起来。冬季来临时要检查、经常排污，防止包装的保温材料破损。 三、伴热措施 1、蒸汽伴热措施 即使用管蒸汽暖气保温。冬季保温送汽之前要检查一下蒸汽保温管路是否畅通或堵塞。**蒸汽是24小时通的，不要太热，有时还要根据天气温度变化来调整供保温汽量，以防止温度太高使变送器引压管内冷凝液汽化影响变送器工作或因温度太低使变送器引压管内冷凝液冷冻影响变送器工作畅通。 2、保温保护箱措施 a、电热管伴热保温箱，由箱体、加热器、仪表托架等三大部分组成，其结构形式与保护箱相同，所不同的是箱内装有电器加热装置，起结构形式如图，电热装置是由电热管，温度控制器组成，箱体侧面装有插座，当接通电源后，箱内加热到所需温度时，再由温度控制器接通电源继续升温。通过反复工作使箱内温度能保持在一定范围内。 其恒温加热器主要参数： ⑴、额定电压 200V.50Hz ⑵、额定功率 300～500W ⑶、控制温度可由用户自定 ⑷、恒温加热器也可做
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聚焦蒙牛事件——关于黄曲霉素的检测方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
12月24日，蒙牛牛奶被检出含强致癌物黄曲霉毒素M1。12月26日，蒙牛集团相关负责人表示，造成产品不合格的原因，是当地奶牛饲料因天气潮湿发生霉变，奶牛在食用这些饲料后，原奶中的黄曲霉毒素超标。而眉山工厂原奶质检员在前期的原奶检验上出现失误，导致未能检出黄曲霉素…… 送走了三聚氰胺，又迎来了黄曲霉素。看来几经折腾，民众的化学知识倒增长了不少。这次我们主要来聊聊黄曲霉素，重点是关于它的检测方法。 黄曲霉毒素（AFT）是一类化学结构类似的化合物。黄曲霉毒素是主要由黄曲霉、寄生曲霉产生的次生代谢产物，在湿热地区食品和饲料中出现黄曲霉毒素的机率最高。 下面先送上一张黄曲霉毒素的近照。 黄曲霉毒素主要有B1,B2 ,G1 ,G2 以及另外两种代谢产物M1 ,M2.其中M1 和M2是从牛奶中分离出来的.B1,B2 ,G1 ,G2 ,M1 和 M2 在分子结构上十分接近。这次蒙牛事件的主角是M1。我们来看看各自的化学结构式。 B1,B2,M1,M2右边是一个五元环结构，B1的不饱和程度要略大于B2，M1和M2上的呋喃环多了一个羟基，而G1和G2是一个六元环结构。这里黄曲霉毒素分子中的双呋喃环结构是产生毒性的重要结构。研究表明，黄曲霉毒素的细胞毒作用是干扰信息RNA和DNA的合成，进而干扰细胞蛋白质的合成导致动物全身性损害。另外黄曲霉毒素B1能与tRNA结合形成加成物，黄曲霉毒素-tRNA加成物能抑制tRNA与某些氨基酸结合的活性对蛋白质生物合成中的必需氨基酸，如赖氨酸亮氨酸,精氨酸和甘氨酸与tRNA的结合均有不同的抑制作用，从而在翻译水平上干扰了蛋白质生物合成影响细胞代谢。 看来对黄曲霉毒素的检测势在必行。现在主流的检测方法主要有两种，即高效液相-质谱法（HPLC-MS）和ELISA快速检测方法。下面我们摘取相关文献进行讨论。 1. 王岩松等用固相萃取-高效液相色谱/串联质谱检测谷物中黄曲霉毒素 B1 B2 G1 G2 和 M1（，提取码XBpS8G8n）。并且优化了液相色谱条件和质谱的相关参数。如可能含黄曲霉素
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Isolation of liver infiltrating lymphocytes
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
Isolation of liver infiltrating lymphocytes 1. Hepatic T cells were isolated from fresh liver tissue collected into primary cell system. 2. In the second method, tissue was diced using sterile blades into 1-mm3 pieces in primary cell containing 1 mg/ml collagenase and incubated at 37°C for 2 h. 3. After enzymatic digestion, tissue was passed through a nylon mesh filter (100 µm) to remove cell clumps and undissociated tissue. 4. Cells were washed three times in PBS to remove collagenase, and the cell suspension was layered on a Percol density gradient (70/30%) and centrifuged for 30 min at 2000 rpm. 5. The lymphocyte band was then removed from the interface between 30% and 70% Percoll and further washed three times in PBS. 6. Greater than 95% of cells were viable by trypan blue exclusion. 7. In the second method, blocks of fresh liver tissue (2 x 2 cm) were perforated repeatedly with a 19-gauge needle (teabagging) and then injected with PBS to flush out cells from within the liver parenchyma. 8. The resultant cell suspension was filtered through fine nylon mesh to remove tissue debris and used with no further preparation for Ab staining and FACS analysis. 9. Cells obtained were compared directly with cells from the same liver isolated by the process of collagenase digestion and Percol gradient centrifugation. Reference Shields, P. L., C. M. Morland, M. Salmon, S. Qin, S. G. Hubscher, D. H. Adams. 1999. Chemokine and chemokine receptor interactions provide a mechanism for selective T cell recruitment to specific liver compartments within hepatitis C-infected liver. J. I
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MTT（噻唑蓝）的染色原理及使用方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，汉语化学名为 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。是一种黄颜色的染料。 MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。 缺点：由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲的有机溶剂对实验者也有损害。 MTT 溶液的配制方法 通常，此法中的MTT 浓度为5mg/ml。因此，可以称取MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃ 避光保存即可。在配制和保存的过程中，容器**用铝箔纸包住。实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光，觉得这样比较好。 需要注意的是，MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT 吸光度**在0-0.7 范围内。 MTT一般**现用现配，过滤后4oC避光保存两周内有效，或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存，避免反复冻融，**小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。我一般都把MTT粉分装在EP管里，用的时候现配，直接往培养板中加，没必要一下子配那么多,尤其当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用了。 MTT有致癌性，用的时候小心,有条件**带那种透明的簿膜手套.配成的MTT需要无菌，MTT对菌很
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多肽硫酯蛋白合成新技术
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
伦敦大学Macmillan研究组对采用化学配体技术合成经修饰改变的肽和蛋白感兴趣。蛋白合成和半合成——由合成和重组来源制备的多肽片段——对生产**性蛋白和理解转录后主导修饰的机制很重要。 理解该过程很困难，因为它们不是按模板工作，也不直接受遗传控制。Macmillan组研究采用有机合成化学、分子生物学、蛋白表达、蛋白工程来研究转录后的修饰改变。 尤其是，Macmillan研究组发现了NCL关键试剂多肽硫酯的新过程：多肽硫酯能从末端为Xaa-Cys序列的天然多肽中制备得到（其序列中Xaa 为Gly、His或者 Cys ）(图1, Ref 1A)。该反应产生的硫酯已经应用于合成具有生物活性的人β-defensin 3 (Ref 1B)类似物和人Hepcidin。最近已经证实它们同O- and N- 糖肽合成 (Ref 2)和磷酸化蛋白半合成相容。 图1 通过N→S酰基转换形成硫酯。典型反应条件：10% v/v MESNa; 0.1 M Na phosphate buffer, pH 5.8; 0.5% v/v TCEP, 55°C, 48 h。(MESNa = sodium 2-mercaptoethanesulfonate，巯乙磺酸钠, TCEP = tris-carboxyethylphosphine，tris-羧基乙膦)。 为了更好地理解反应， 研究发现增加相对少量过量的cysteine能逆转硫酯的形成(Ref 2)，表明硫酯形成和NCL能在相同反应条件下发生。 为了使NCL反应有效率提高，需要增加高浓度半胱氨酸。 但是在分子内NCL反应情况下(图 2)，半胱氨酸有效浓度高时能直接形成环状多肽产物(图 2C)，而无需采用任何特异性连接剂或蛋白处理成分，例如内含肽(Ref 3)。 图2 从简单的线性前体形成头尾相接的环形肽。典型反应条件：10% v/v MESNa; 0.1 M Na phosphate buffer, pH 5.8; 0.5% v/v TCEP, 55°C, 48 h。 (注意: 环化反应中可用TCEP替代抗坏血酸钠（sodium ascorbate）。) Macmillan研究组发现当反应在pH 2时进行，产生的硫酯为主。但是，当pH 5-6时，无需优化就能分离得到环形肽（产率为40-60%）。这是一个连续的过程，C端单一的氨基键选择性地断裂，同时新的氨基键在缺少酶的情况下不使用化学偶
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黄曲霉毒素分析方法汇总
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
黄曲霉毒素分析方法汇总 一、多功能净化柱＋KRC光化学柱后衍生法 1 简介 多功能净化柱是由多种固相复合填料不仅包括大分子物质，更重要的是含有多种活性亲脂性（非极性）和带电（极性）物质，用来吸附各种酯类，叶黄素，化学物质，碳水化合物和蛋白质等干扰物。多功能净化柱＋KRC衍生法就是利用PRIBOLAB公司的Pribofast 226/260多功能净化柱可以将黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2很好的分离出来，然后用HPLC/FLD＋KRC柱后衍生系统可以有效的测定黄曲霉毒素 B1、B2、G1、G2含量。 2 多功能净化柱特点： 2.1 多功能净化柱可以简化样品提取、净化步骤，无需清洗和洗提。 2.2 可以实现多种毒素检测，有效降低检测成本； 2.3 HPLC＋FLD+KRC衍生化，可以有效提高检测灵敏度，实现较低的检测限(黄曲霉毒素B1 0.05ppb)； 2.4 光化学衍生操作简便，无需使用衍生试剂（通常电化学柱后衍生均需要使用衍生试剂，分析成本高，操作麻烦，仪器故障率较高）； 2.5 一步法净化，回收率高达90％左右。 2.6 广泛适用于各类农产品：谷物、淀粉、动物饲料、食品、坚果、棉籽等。 3 多功能净化柱/KRC衍生法操作步骤简介： 3.1 提取样品：研磨粉碎、称重25g样品；用乙腈/水（84/16 V/V）混合样品， 高速均质 1 分钟。 3.2 过滤：将提取的样品定量滤纸过滤，收集滤液； 3.3 取4－6ml滤液快速通过 多功能净化柱PribofastM226 或Pribofast M260 3.4 收集过柱溶液，直接用于HPLC检测，KRC衍生化后直接记录黄曲霉毒素浓度。 二、免疫亲和柱＋KRC光化学柱后衍生法 1 简介 Pribofast黄曲霉毒素总量免疫亲和柱可选择性吸附样品液中的毒素，从而对毒素样品起到非常针对性的纯化作用，然后用HPLC/FLD＋KRC柱后衍生系统可以有效的测定黄曲霉毒素 B1、B2、G1、G2浓度，提高检测的准确性和灵敏度。 2 免疫亲和柱/KRC衍生法特点： 2.1 特异性很强使得样品净化效果极佳； 2.2 使用免疫亲和柱操作架可以使样品净化快速，提高检测效率高 2.3 HP
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Isolation of peripheral blood mononuclear cells (PBMC)
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
Isolation of peripheral blood mononuclear cells (PBMC) 1. Acid-citrate dextrose-treated blood (450 ml) was obtained from donors. 2. PBMC were isolated by centrifugation over lymphocyte separation medium. 3. After three washes in phosphate-buffered saline (PBS), the PBMC were counted and cryopreserved in 90% fetal bovine serum and 10% dimethyl sulfoxide at 107 cells/ml. 4. Thawed PBMC were mitogenically stimulated in the following medium: Dulbecco’s modified Eagle’s medium supplemented with 10% fetal bovine serum, 2 μg of phytohemagglutinin (PHA) per ml, 10 ng of phorbol 12-myristate-13-acetate per ml, nonessential amino acids, 5 mM β-mercaptoethanol, 10 mM HEPES, 2 mM glutamine, 1 mM sodium pyruvate, 100 U of penicillin per ml, and 100 μg of streptomycin per ml. 5. Where indicated, 0.2 μM A23187 (a calcium ionophore) was substituted for PHA in the medium. Schematic figure of a density gradient centrifugation Method: 1. Carefully layer 35 mL of diluted cell suspension over 15 mL of Ficoll-Paque in a 50 mL conical tube. 2. Centrifuge at 400×g for 30–40 minutes at 20 °C in a swinging- bucket rotor without brake. 3. Aspirate the upper layer leaving the mononuclear cell layer (lymphocytes, monocytes, and thrombocytes) undisturbed at the interphase. 4. Carefully transfer the mononuclear cell layer to a new 50 mL conical tube. 5. Fill the conical tube with buffer, mix, and centrifuge at 300×g for 10 minutes at 20 °C. Carefully remove supernatant completely.
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接种环灭菌器在微生物实验中操作方法及注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
在微生物实验室很多实验人员习惯性的把用过的培养基(含菌的)直接作丢弃处理，没有经过彻底的灭菌，这样不仅污染了实验室本身人员的安全，还造成了极大的环境污染，危害是很大的，就SARS病毒研究过程中就出现过实验室由于不小心造成试验研究人员感染，这是十分危险且得不偿失的。 由于传统的酒精灯不能在生物安全柜中使用,虽然这种比较廉价的酒精洒在很长时间内是我们做微生物杀菌时经常用到的杀菌设备,但由于在一定程度上越来越不能满足我们实验的要求,接种环灭菌器的产生在很大程度上解决了这些问题.这种无明火,操作简单,而且杀菌时间只需要5-6秒种大大的节省了实验时间.但是在使用中我们往往也容易范许多初级问题: 使用接种环灭菌器时一定要注意。我做实验时经常用到，有时做多了就有点不耐烦。特别是灭菌粗接种环时，瞅着它老也烧不红就着急了，心想反正不用手扶也能放住，先做点别的，比如在试管上写上编号什么的，写完正好再次用到接种环，这时候再拿出来正好能用。一般都没事，但一组实验做到最后一个就容易出问题，因为这时不再用接种环了，往往等东西都清理完了才想起来，这时候再看接种环那叫一个惨不忍睹啊.已经严重变开形了.,所以在此提醒我们实验人员在做接种实验时一定不要图一时轻松而坏了整个实验. 如果你发现接种环塑胶棒与金属棒相接的地方有些膨胀，或者塑胶棒轻微向下弯折，那么不要着急，它还有救。关掉灭菌器电源，一只手拿一个镊子，分别夹住接种环的金属棒和塑胶棒，小心从灭菌器中取出，平放在实验台上(不要接触纸或者纱布，会着火的。如果实验台不耐热，则需要垫上金属盘子)，使塑胶棒和金属棒处在一条直线上，耐心等它冷却后，就可以再用了，只是膨胀的地方不会缩回去了，给你留个“纪念”。 如果你发现接种环已经被烧成“拔丝铁棒”，或者塑胶棒已经被烧成了“糖稀”，那你就要动作快点了，要不然“黑色糖稀”会粘得到处都是。这时候要关掉灭菌器电源，拿个废液缸盛大半缸水，用两个镊子分别夹着塑
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实验室红外线灭菌器的安全使用及选购要点
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
关于实验室红外线灭菌器的安全使用 实验室中常用到的火焰加热或灼烧灭菌装置有酒精灯、本生灯和红外线灭菌器，这一章我们重点来学习一下红外线灭菌器的使用方法及其注意事项。 一、使用红外线灭菌器灭菌注意事项：( 1．由被检验标本或培养物中取材观察细菌形态时，必须使用接种环。接种环系采用一段长约5 ～8cm 硬度适中的镍质电阻丝或特制铂丝，安置在一金属或玻璃棒上制成。无环者则称接种针。 2．接种环或接种针每次使用前后，均须用红外线灭菌器灭菌。即在红外线灭菌器内彻底烧灼1 次，在红外线灭菌器腔内金属棒或玻璃棒部分亦须转动着用进灭菌。 3．接种环(针)经红外线灭菌器灭菌后，需待冷却后再沾取标本或放置于工作台上，以防烫死微生物和烧损桌面。(冷却时间跟传统酒精灯时间一样)。 4．红外线灭菌器也可对玻璃材料的微生物培养管进么消毒，此时特别注意管中不能有任何液体和其它物体，以免里面的液体溅出或发生爆炸等危险事故。 5．不染色标本和染色标本观察后，应立即投入消毒液内灭菌。 6．使用过玻片，务须彻底消除玻片上的染色细菌后再用，否则再次使用时可能做出错误诊断。 二、关于红外线灭菌器的小知识： 怎么来判断一台红外线灭菌器的好坏最主要的就是加热体，红外线灭菌器加热体―-它是红外线灭菌器的主要组成部分，对灭菌效果的好坏影响极大。加热体故障是造成灭菌效果下降的主要原因之一，其主要表现为升温速度下降；影响热分布；产生尘埃物质。而造成加热器故障的原因，主要是加热体的长期使用或通过加热器的空气质量较差所致以及所购买的红外线灭菌器质量本身所致。所以我们选择红外线灭菌器时一定要认准选购，不要影响了整个实验。
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