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PCR Array——基因表达分析疾病和信号通路的利器（三）
作者：德尔塔 日期：2022-04-12
RT2 PCR Profiler Arrays可用于生物学和医学研究的各个领域，包括：癌症研究、炎症和细胞因子分析、干细胞研究、神经生物学、信号转导通路研究、细胞黏附和细胞迁移、生物标记分子筛选和验证 截止目前，QIAGEN 拥有专利申请的PCR Array可以分析超过150条通路和特异的疾病类型。 具体如下通路名称供您参考： Adherens Junctions 粘附连接 Adipogenesis 脂肪生成 Aging 衰老 Allergy & Asthma 过敏&哮喘 Alzheimer’s Disease 阿尔茨海默氏症（老年痴呆） Alzheimer’s Disease 阿尔茨海默氏症（老年痴呆） Amino Acid Metabolism I 氨基酸代谢I Amino Acid Metabolism II 氨基酸代谢II AMPK Signaling AMPK信号通路 Androgen Receptor Signaling Targets 雄激素受体信号目标物 Angiogenesis 血管生成 Angiogenic Growth Factors 血管生长因子 Antibacterial Response 抗菌反应 Antifungal Response 抗真菌反应 Antiviral Response 抗病毒反应 Apoptosis 凋亡 Atherosclerosis 动脉粥样硬化 Autism Spectrum Disorders 自闭症 Autophagy 自噬作用 Birth Defects 出生缺陷 Brain Cancer 脑癌 Breast Cancer 乳腺癌 cAMP / Ca2+ Signaling PathwayFinder cAMP / Ca2+ 信号通路发现者 Cancer Drug Resistance 肿瘤药物耐药性 Cancer Drug Targets 癌症药物靶标 Cancer PathwayFinder 癌症发现者 Cancer PathwayFinder 384HC 癌症发现者 Cancer Stem Cells 肿瘤干细胞 Cardiotoxicity 心脏毒性 Cardiovascular Disease 心血管疾病 Cell Cycle 细胞周期 Cell Death PathwayFinder 细胞死亡通路发现者 Cell Development & Differentiation 细胞发育和分化 Cell Junction PathwayFinder 细胞连接通路发现者 Cell Lineage Identification
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维生素A对免疫的影响
作者：德尔塔 日期：2022-04-12
据Nature的一篇研究报道(S. van de Pavert et al., “Maternal retinoids control type 3 innate lymphoid cells and set the offspring immunity,”Nature, doi:10.1038/nature13158, 2014.)，母体的维生素A可显著影响胎儿免疫系统的发育。研究者发现，相比于子宫中维生素A含量较高的小鼠，饮食中维生素A含量较低的怀孕小鼠的后代，其发育的淋巴结较小。缺乏维生素的小鼠的肠道中淋巴结样结构的派尔集合淋巴结更少。在基因工程改造后缺乏维生素A代谢产物视黄酸受体的小鼠胚胎中也发现了该现象。出生后即使饮食正常，也无法逆转在子宫时缺乏维生素A的影响，甚至也影响其成年后对感染的抵抗力。 “我们发现怀孕期间母体的饮食与后代的免疫适应性有密切的关系，”指导该研究Henrique Veiga-Fernandes说道，“也就是说，怀孕期间母亲的饮食对后代的健康有不可逆的影响。” “维生素A在胎儿发育过程中具有很多功能，例如参与眼球和视网膜的发育，出生后与免疫系统有关，”为该研究发表社评的巴黎巴斯德研究所的Gérard Eberl说，“该研究很新，因为它显示了由目前提供给胎儿的维生素A对免疫系统发育的影响，这确实非常重要。” “这是第一次表明怀孕期间任何饮食都可能影响后代终身的免疫功能。”伯明翰阿拉巴马大学的研究淋巴器官发育的David Chaplin在给The Scientist的一份email中提到。 之前对二级淋巴器官发育(除了淋巴结和派尔集合淋巴结，还包括脾脏)的研究认为该过程是严格受控的，而该研究是第一次表明该过程的发育会受母体行为影响。 “我们一直认为免疫器官的发育是一种自主过程，”荷兰鹿特丹伊拉斯摩斯医学中心的免疫学家Tom Cupedo说，“但现在我认为该研究揭示了母体饮食可以影响免疫器官的发育及其功能。” 除了淋巴结大小，研究者也在寻找其他检测维生素A对免疫系统影响的途径。在免疫系统发育期间，淋巴组织中表达CD4的诱导细胞(LTi4)对淋巴结和其他二级淋巴器官的形成很重要。这些细胞与缺乏CD4的另一类
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eBioscience ELISA试剂盒使用手册
作者：德尔塔 日期：2022-04-12
Q. 铂金版ELISA试剂盒中有哪些组分？ What do Platinum ELISA Kits contain? A、 试剂盒中包含ELISA实验用的所有组分，同时包含优化过的预包被酶标板。All reagents necessary to perform 1 or 10 plate ELISA assays, including optimized capture-antibody pre-coated plates. Q. 铂金版ELISA试剂盒适用于检测哪些样本类型？ Which samples are suitable for Platinum ELISA Kits? A、 大部分铂金版ELISA试剂盒可以检测常见ELISA样本，比如：血清、血浆、细胞上清及其他体液样本。详细信息可以查看对应产品的说明书。 Most ELISAs are suitable for serum, plasma, cell culture supernatants and other body fluids.Detailed information is given in the product manual for each individual kit. Q. 使用铂金版ELISA试剂盒，标曲和样本是否必须做复孔？ Do I have to run the Platinum ELISA standards and samples in duplicates? A、 不是必须。但是为了结果准确性，我们还是强烈建议您标准曲线和样本做一次重复。No, but it is highly recommended to make at least double determinations of each sample and standard point. Q. 不同试剂盒或者不同批次的铂金版试剂盒中的组分能否混用？ Is it possible to use the reagents of other Platinum ELISA kits/lots? A、 不可以。 The reagents within the Platinum ELISA kits are not interchangeable between different lots of the same kit or between kits against different analytes. Q. 不同批次试剂盒说明书能参考使用吗？ Can I always use the same manual for different ELISA kit lot numbers? A、 不推荐。建议您参考随货收到的产品说明书。 We recommend that you use the manual included with the Platinum ELISA kit. Q. 铂金版ELISA试剂盒使用前有必要洗涤酶标板吗？ Is it necessary to wash the Platinum ELISA plates before us
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eBioscience ELISA试剂盒使用手册（二）
作者：德尔塔 日期：2022-04-12
Instant® ELISA Q. 一步法Instant ELISA试剂盒，能做多少个检测？How many tests can I perform with an Instant ELISA Kit? Instant ELISA包含128 tests。 其中包含可以做8个点复孔标曲，共有32孔做标曲，96孔检测样本。With an Instant ELISA, 128 tests (includes samples plus standards) can be performed. The number of tests results from the following composition:One 96 well plate designed only for samples; 96 samplesTwo 8-point standard curve in duplicates; 32 wells; thus the kit can be used at two different time points, each with their own standard curve. Q. 我需要将标准品加到酶标孔中吗？Do I have to add recombinant standard to the wells? 不需要。标准品已经冻干在酶标孔中，不需要再另外加入。No, the recombinant standard is included as a component of the lyophilized reagents in the wells. Q. 酶标孔中需要加二抗吗？Do I have to add the secondary antibody to the wells? 不需要。二抗也已经被冻干在酶标孔中。No, the secondary antibody is included as a component of the lyophilized reagents in the wells. Q. 样本检测之前，需要稀释吗？Do I have to dilute my samples before adding them to the wells? A. 一般情况下，使用Instant ELISA检测，样本不需要稀释。但是具体请您参考随货说明书。In general, one can use undiluted samples with the Instant ELISA. Please refer to the product manual to determine if dilution of the sample is required for your kit of interest. The volume of sample required for the individual kits will also be listed in the product manual. Q. 不同批次试剂盒，标准品的溶解体积一样吗？Is the reconstitution volume of the standards the same for different lot numbers? 对大部分Instant EL
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一种同时诊断多种癌症的方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-12
研究人员报告了一种能检测血液样本中几种类型癌症的方法，该方法基于免疫应答信号，但有些人对这样的检测方法持怀疑态度。 坦佩亚利桑那州立大学的研究人员已经开发出一种廉价的可以检测几种常见癌症的血液测试方法，该方法基于它们引发的的免疫应答。他们用随机生成的肽阵列与人血液样本中的抗体结合，这些血液样本来自于健康人群或来自患有五种不同癌症的人。基于绑定模式或免疫信号，研究者能够区分所有这五种类型的癌症。这个小组还使用另一个随机生成肽矩阵来区别更大范围的癌症和其他疾病之间的联系。研究结果于七月十四日发表在美国国家科学院院刊PNAS上。 希腊雅典学院生物医学研究基金会的临床蛋白质组研究人员Antonia Vlahou 说“这个想法是简洁精妙的，但有却有东西被漏掉了”，她没有参与这项研究。但她说，从文章中目前还不清楚肽阵列和免疫信号是如何准确工作的，因为它不可能告诉我们哪些抗体结合了这些多肽。“我们必须准确知道是什么结合上了什么，这才能解释与疾病的关联，”她说。“能更好地描述测量特性是必要的。” 格拉斯哥大学一位研究蛋白质组学生物标记的科学家Harald Mischak表示：“我必须承认，这听起来太美好，会令人难以置信。” 亚利桑那州立大学的免疫学家和生物化学家Phillip Stafford领导这项工作。他承认，目前虽然还不清楚到底哪些抗体确定每种癌症的信号，但坚持认为他团队的研究方法有效。 研究人员获得两组多于10000个随机多肽来筛选癌症患者血液样本中的独特抗体类型。习惯上，生物标志物检测是基于多肽和抗体的数量是十分有限的，但Stafford说，使用更多种类和数量看起来更有效。“除非你百分之百确定你知道目标信号是什么，否则试图猜测或者事后预言什么蛋白会对你的免疫系统反应都是徒劳的。” Stafford的小组使用一个随机数发生器生成了它的肽阵列，17个不同的氨基酸产生的多肽，加上三个结构标准蛋白。癌细胞产生的蛋白质和其他生物分子，不同于
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抗生素、免疫力和肥胖
作者：德尔塔 日期：2022-04-12
研究表明，幼年时给予小鼠低剂量的抗生素会导致成年后肥胖。 小鼠出生后不久给予一个短期的，低剂量的抗生素用量，对其肠道微生物具有持久的后果，而且啮齿类动物一到中年便会导致肥胖。这些研究结果，于今天（8月14日）发表在细胞学杂志上，表明肠道微生物在早期生命过程中是一个关键的时间窗口，可能影响代谢途径的发展。 几十年来，低剂量的抗生素用于在农业上促进动物生长，虽然药物增肥的机制还不清楚。美国纽约大学Langone医学中心Martin Blaser和他的同事在2012年一篇自然杂志上的文章显示，小鼠生命早期的抗生素**会改变小鼠体内激素水平和参与碳水化合物和脂质代谢有关基因活动的改变。 Blaser告诉科学杂志说，最新的这项研究，他和他的同事们的目的是更好地了解这些**的机制怎样介导了微生物对宿主代谢的影响。研究者利用两组低剂量青霉素处理的小鼠，一组是即将出生的小鼠，另一组是断奶时期的小鼠。第三组是在小鼠已经断奶后，给予抗生素。这些实验所使用的低剂量青霉素虽然的确导致了肥胖和肠道中优势菌群的比例倾斜，但不足以降低肠道内的微生物种群。 处理小鼠的肠道中乳酸菌水平显着低于未经处理的小鼠；另两种细菌，Candidatus和Allobaculum，通常在生命早期所占比例会达到峰值，却被小剂量青霉素抑制了。 麦迪逊大学的微生物学家Federico Rey 说，“我们通常看到，高剂量的抗生素减少微生物的多样性，但这是典型的“抗生素炸弹”，他没有参与这项工作。“此种情况下，抑制优势细菌可能会让其他物种蓬勃发展。” 与未经处理的小鼠相比，青霉素处理的断奶后小鼠加速增长，骨矿物质含量改变，并且脂肪和总体重增加。但是在生育前和养育过程中对母鼠进行处理，其对后代的影响更大。Blaser 说，“仅仅给小鼠喂四周抗生素就足以得到充分的效果，”他又说道，“基本上，越早，越强。” 抗生素处理加上高脂饮食可以加剧诱发肥胖的效果。抗生素诱导的微生物变化也会影响宿主肠细胞；研究者发现肠道免疫
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Novus血液肿瘤研究
作者：德尔塔 日期：2022-04-12
常见的血液肿瘤主要包括各类白血病、多发性脊髓瘤以及恶性淋巴瘤。急性白血病占常见恶性肿瘤的第八位，淋巴瘤也是在前十位，并且发病率逐年升高，多发性骨髓瘤的整个发病率在血液恶性肿瘤里面占10%。 以下产品可用于多种常见血液肿瘤研究，急性淋巴细胞白血病（Acute Lymphoblastic Leukemia (ALL)是一种起源于淋巴细胞的B系或T系细胞在骨髓内异常增生的恶性肿瘤疾病。异常增生的原始细胞可在骨髓聚集并抑制正常造血功能，同时也可侵及骨髓外的组织，如脑膜、淋巴结、性腺、肝等。急性髓细胞白血病(acute myelocytic leukemia，AML)包括所有非淋巴细胞来源的急性白血病，是多能干细胞或已轻度分化的前体细胞核型发生突变所形成的一类疾病是造血系统的克隆性恶性疾病。淋巴瘤（Lymphoma）是起源于淋巴造血系统的恶性肿瘤，主要表现为无痛性淋巴结肿大，肝脾肿大。 相关产品列表： 急性淋巴细胞白血病相关抗体 Antibody Catalog No. Host Clone Reactivity Tested Application/s CD3 NBP2-25186 Ms OKT3 Hu FLOW CD19 NBP2-25196 Ms CD19 Hu FLOW, IHC IL2RA/CD25 NBP2-27425 Rt PC61 Ms FLOW CD44 NBP1-47386 Ms 8E2F3 Hu, Ms, Ca, Rb, Eq WB, ELISA, FLOW, ICC/IF, IHC, IHC-P Notch-1 NB100-78486 Ms mN1A Hu, Ms WB, FLOW, ICC/IF, IHC, IHC-P, IP 急性髓细胞样白血病相关抗体 Antibody Catalog No. Host Clone Reactivity Tested Application/s c-Kit NB100-77477 Rt 2B8 Hu, Ms FLOW, IHC, IHC-Fr, IP ETV6/Tel NBP1-80695 Rb poly Hu, Rt WB, ICC/IF, IHC, IHC-P Flt3/CD135 NBP1-43352 Rt A2F10 Ms FLOW, Func, IP Nucleophosmin NB110-
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植物miRNA及piRNA的逆转录
作者：德尔塔 日期：2022-04-12
miRNA在植物的发育、抗病、和应激反应中发挥着重要作用。一般认为，这些小的非编码RNA通过靶向mRNA剪切，在后转录水平调节植物的基因表达。这些基因表达中的靶向变化由数百个成熟miRNA的差异表达所调控，每个成熟miRNA结合在靶mRNA的特定序列上。因此，对植物的成熟miRNA调控和表达进行分析，能够为植物的组织发育、干旱保护及疾病防御机理提供宝贵信息。目前基本无法通过qRT-PCR对植物的成熟miRNA进行分析，由于植物miRNA的特性，基于多聚腺苷酸的逆转录反应对其反应效率十分低下。QIAGEN推出了独特的解决方案，能够对植物组织中的成熟miRNA进行通用的逆转录反应。 QIAGEN miScript Plant RT Kit用于植物miRNA和其他3’端修饰的小RNA的cDNA合成；是针对具有3’端甲基化(2’-O-Me)修饰的小RNA进行无偏差 cDNA合成的通用型试剂盒。本试剂盒专为基于实时定量PCR技术的小RNA表达分析应用设计和优化，能够配合miScript SYBR Green PCR Kit和miScript miRNA PCR Array或miScript Primer Assay等产品使用。这一类通过功能验证的分析和芯片产品可应用于水稻、玉米、大豆、烟草和其他一些重要农业作物的检测，以及植物学相关的研究。在3’末端碱基具有2’-O-Me甲基化修饰的小RNA（如植物成熟miRNA和piwi互作RNA (piRNA)）中，一般不具有poly A尾结构，因此无法通过多聚腺苷酸依赖的cDNA合成方法有效地反转录。专用的miScript Plant RT Kit通过首先向植物miRNA的3’末端连接一个接头解决了这一难题。不同于多聚腺苷酸化，这一链接反应不会受到植物miRNA 3’末端碱基上存在的2’-O-Me甲基化修饰的负面抑制。接头一旦连接成功，即可实现反转录反应。 性 能 miScript Plant RT Kit与miScript Plant qPCR System的联合使用，能够确保针对植物样本实现灵敏和特异性的miRNA检测和定量工作。由于许多miRNA表达丰度很低，因此检测灵敏度对于确保获得可靠数据至关重要。miScript Plant qPCR System能够提供优异的灵敏度，宽广的动态
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Morris水迷宫：学习记忆的行为学研究方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-12
本实验由美国科学家Richard GMMorris于1981年建立。最初用于研究脑内结构对学习和记忆的调节作用，后来逐步发展成为目前最为常用的评价动物学习与记忆的模型。这一实验的基础是，啮齿类动物在水中有强烈的逃避水环境的动机，并以最快、最直接的途径逃离水环境。学会逃避水环境的过程体现动物的学习能力；根据周围环境进行空间定位，有目的地游往水中安全的地方（平台），体现动物的空间记忆能力。 （一） 实验设备 实验用大鼠或小鼠进行。大鼠水迷宫实验设备包括一个灰色或黑色圆形水池（直径200cm，高100cm；小鼠规格尺寸减半）、一个平台（直径10cm）、一台跟踪摄像机以及摄像机相联的计算机（图25-1）。池内盛水，深50cm，水温为摄氏22~24℃。平台置于水面下2cm（小鼠为1cm）。在水中加入奶粉或牛奶将水搅浑以免让动物看清水下平台。摄像机位于水池中央上方200cm，可记录动物的位置、游泳距离和时间（从而可计算出游泳速度）以及游泳路径等。房间周围墙壁上贴上色彩鲜明、形状不同的图画用为迷宫外暗示（extra-mazecues）。 （二） 实验方法 分获得性训练、探查和对位训练3个过程。 1．获得性训练（Acquisition phase）理论上将水池分为4个象限，平台置于其中一个象限区的中央。 （1） 将动物（大鼠或小鼠）头朝池壁放入水中，放入位置随机取东、西、南、北四个起始位置之一。记录动物找到水下平台的时间（s）。在前几次训练中，如果这个时间超过60s，则引导动物到平台。让动物在平台上停留10s. （2） 将动物移开、擦干。必要时将动物（尤其是大鼠）放在150W的白炽灯下烤5min，放回笼内。每只动物每天训练4次，两次训练之间间隔15~20min,连续训练5d。 2．探查训练(probe trial1) 最后一次获得性训练结束后的第二天，将平台撤除，开始60s的探查训练。将动物由原先平台象限的对侧放入水中。记录动物在目标象限（原先放置平台的象限）所花的时间和进入该象限的次数，以此作为空间记忆的检测指标。
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频振式杀虫灯的全面分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-12
频振式杀虫灯是杀虫的利器，在特定的范围内散发光波，生态无污染的消灭害虫。下面就让我们从光、波、色、味四个方面来全面的了解下频振式杀虫灯吧。 1、频振式杀虫灯的光波作用。 (1)使昆虫在光波的干扰下活动周期延长，因此能使诱杀量增多。比如棉铃虫，每晚有3个活动周期，可以使混飞期、交配期、归巢期，如果每当活动期延长30分钟，就可以提高诱杀率。 (2)解决了杀虫灯在使用中的安全问题。灯光会根据波的频率不同自动调整电流，当有人体接触时，灯具立即进入安全保护状态。 (3)在下雨时空气湿度大时，以及因清理虫体时使电网出现短路，频振式杀虫灯就会进入安全保护状态，不会因短路使灯管烧坏。 2、频振式杀虫灯的颜色。 根据三色定理将灯具设计为黄色。夜间开灯时灯光变为黄绿色，这样就能使喜欢黄色的害虫大量扑灯，而喜欢绿色的草蛉、瓢虫等益虫则少扑灯，大大提高了害虫诱杀率。 3、频振式杀虫灯的味。 味也是引诱原理，在实际使用中发现，接虫袋内如有活虫存在，诱集的同类昆虫就会更多，证明了活虫会释放性信息素，可以提高诱捕率;因此，将频振式杀虫灯改进为不同昆虫扑灯有不同的电流量给以击伤，实践证明这一改进的思路是成功的。
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温湿度光照度对植物生长的影响
作者：德尔塔 日期：2022-04-12
影响植物生长的因素很多，目前科学家已经确定了52种因素，如土壤有机质、土壤水分、根层深度、温度、湿度、光照度、风速等等，所以掌握植物生长环境中的这些因素是很重要的，下面简单分析温度、湿度、光照度对植物的影响。 温度对植物生长的影响 温度对植物生长的影响是综合的，它既可以通过影响光合、呼吸、蒸腾等代谢过程，也可以通过影响有机物的合成和运输等代谢过程来影响植物的生长，还可以直接影响土温、气温，通过影响水肥的吸收和输导来影响植物的生长。由于参与代谢活动的酶的活性在不同温度下有不同的表现，所以温度对植物生长的影响也具有最低、最适和最高温度三基点。植物只能在最低温度与最高温度范围内生长。虽然生长的最适温度，就是指生长最快的温度，但这并不是植物生长最健壮的温度。因为在最适温度下，植物体内的有机物消耗过多，植株反倒长得细长柔弱。因此在生产实践上培育健壮植株，常常要求低于最适温度的温度，这个温度称协调的最适温度。 湿度对植物生长的影响 影响绝对湿度的因子主要取决于水汽的来源、输送与空气保持水汽的能力等。因此，影响水汽供应的因子如降水、水体的存在、土壤水分的高低和蒸发条件等，影响水汽输送的条件如风、垂直气流等，以及影响空气保持水汽能力的条件如气温等，都可能影响绝对湿度。相对湿度一方面决定于绝对湿度，另一方面决定于空气温度。空气相对湿度或饱和差是影响植物吸水与蒸腾的重要因子之一。在相对湿度较小(饱和差较大)时，如土壤水分充足，则植物蒸腾较旺盛，植物生长较好。若较长时间空气湿度处于饱和条件下，植物生长将受抑制，导致谷物子粒的灌浆速度降低，棉花蕾铃脱落加重，棉子生命力降低和影响棉花采收质量等。相对湿度太小，会加重土壤干旱或引起大气干旱，特别在气温高而土壤水分缺乏的条件下，植物的水分平衡被破坏,水分入不敷出,会阻碍生长而造成减产。相对湿度和饱和差的高低，可制约某些植物花药开裂、花粉散落和萌发的时间，从而影
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Western blot常用封闭液及注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-12
在做Western blot实验中，会用到固相载体（如NC膜，PVDF膜），在这些固相载体表面有很多洞洞，通过电转，胶上的蛋白被转移到膜上，蛋白以机械填补（堆积）和吸附的方式结合于表面。蛋白塞进了表面的很多洞洞里面，但是蛋白并不是连续的，而有很多空隙，抗体也是蛋白，也会被吸附在空的洞里，这样就会有很多非特异性的信号。 封闭液中的蛋白可以与固相载体表面的空白位置结合，同样以机械填补（堆积）和吸附覆盖的方式结合在膜上，因为有“填补”和覆盖“蛋白结合位点以避免一抗的非特异性结合，所以有”封闭“的说法。同样这两种作用使封闭液中的蛋白能够狠牢固的结合在空白位置上，这样抗体蛋白就不会被非特异性的吸附到膜上，而只会跟特异性蛋白结合。 封闭液应封闭所有的未结合位点而不替换表面上的靶蛋白，不结合靶蛋白表位，也不与抗体或检测试剂有交叉反应。 常见的封闭液： BSA BSA是最常用的封闭液，成分单一适用于大多数情况。若免疫原是偶联BSA的，BSA有很强的免疫原性，会导致产生很多针对BSA的抗体，为避免交叉反应，不能用BSA，脱脂奶粉封闭，可以选用酪蛋白或无蛋白的封闭液。 血清 封闭血清的原理主要有两点，第一是待测样本有些与蛋白非特异性结合的物质，从而导致背景过高，因此可以用BSA或血清封闭掉这部分分特异性的结合，从这点看，BSA和血清没有明显区别。第二待测样品中可能会有Fc受体，可以和抗体恒定区结合，与抗体特异性无关，封闭血清中有抗体，因此用血清可以封闭掉一抗及二抗和样本Fc受体之间的结合，BSA无法封闭Fc受体。 脱脂奶粉 脱脂奶粉最大的优点是价格便宜，但由于成分相对复杂，所以适用范围要狭窄一些。磷酸化抗体也许会导致背景增加，此外，因为自身含有生物素，不能用于生物素标记的抗体系统。脱脂奶粉种含有少量的生物素和碱性磷酸酶残留，在使用生物素-亲和素系统和碱性磷酸酶标记的二抗时，也会使得高背景或本底水平增高。 联科生物
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浅谈预染蛋白Marker与未预染蛋白Marker
作者：德尔塔 日期：2022-04-12
在Western实验中，蛋白Marker可以监控蛋白质在SDS-PAGE中的迁移，监控蛋白的转膜效率，确定蛋白分子量大小。选择正确的蛋白Marker是western blot实验成功的必备条件之一。蛋白Marker分为两种：一种是未预染的Marker，即宽分子量蛋白标准，高分子量蛋白标准及低分子量蛋白标准；另一种是预染的Marker，即单色预染和多色预染。 一、未预染蛋白Marker 未预染的蛋白Marker是最简单，也是最准确的一种，由于没有附带染料分子或者标记大小正好是蛋白原本的大小，是精确判断蛋白大小必须的。现在的Marker多数选用预混合的marker，方便不同大小蛋白的比较。 二、预染蛋白Marker 预染蛋白Marker是一些纯化较好的蛋白混合物，通过与染料共价偶联，在电泳过程中或者转膜时可以直接观察到。预染Marker的出现方便了我们的实验，这种蛋白分子量标准可以帮助我们在电泳时，电泳后，以及转膜后检测电泳情况和估计迁移率。值得注意的是预染蛋白Marker与染料共价偶联，所以在不同的缓冲条件下电泳时迁移特性可能会发生某些变化，可能导致一些偏差，所以不太适合精确定位蛋白。 联科生物现货供应即用型的预染蛋白Marker，无需煮沸可以直接上样，而且条带尖锐，颜色稳定，转膜效率高。 目录号 产品名称(简述) 规格 目录价 LK-PM0671 Prestained Protein Ladder(10-170kD) 125ul(25mini gel) ￥300.00 LK-PM0672 Prestained Protein Ladder(10-170kD) 250ul(50mini gel) ￥500.00 LK-PM1811 PageRuler Plus Prestained Protein Ladder (10-250 kDa) 125ul ￥400.00 阅读原文：
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人全血Foxp3实验步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-12
需要试剂 Human Regulatory T Cell Whole Blood Staining Kit （#88-8996-40） 包含组分： (1)、1X RBC Lysis Buffer: 200 mL (2)、Flow Cytometry Staining Buffer: 600 mL (3)、Fixation/Permeabilization Concentrate: 30 ml (4)、Fixation/Permeabilization Diluent: 100 mL (5)、Anti-Human Foxp3 PE (PCH101): 25 tests Anti-human CD4 （标记可选） Anti-human CD25（标记可选） Rat IgG2a K Isotype Control PE (#12-4321-41) 推荐操作步骤 取100ul全血，加入适量Anti-human CD4和Anti-human CD25，4 ℃孵育30 分钟（根据说明书和抗体管上的标识确定抗体用量）。按个人要求设置空白管、补偿管、同型对照管和样本管。 染色完的全血不用洗，每管加入2-3ml 1X RBC Lysis Buffer，混匀。室温孵育10分钟。 观察溶液透亮后，300 -400 g离心5分钟，去上清。 加入2-3ml Flow Cytometry Staining Buffer，300 -400 g离心5分钟，去上清。 重复洗一次。 制备固定/破膜工作液：1份Fixation/Permeabilization Concentrate加入到3份Fixation/Permeabilization Diluent中，按样品量现用现配，每管用量为1ml。 旋涡震荡细胞沉淀，每管加入1ml的固定/破膜工作液（第6步配置准备的），并再次旋涡混匀。 避光4℃孵育30分钟到60分钟，在此时间内效果一致。 加入2-3ml Flow Cytometry Staining Buffer，300 -400 g离心5分钟，去上清。 重复洗一次。 样本管中加入5ul或1test的Foxp3抗体，同型对照管中加入0.25ug Rat IgG2a K Isotype Control PE，保证最终染色体积不大于100ul，避光4℃孵育30-60分钟，根据结果优化染色时间。 加入2ml Flow Cytometry Staining Buffer洗涤细胞并弃去上清液。 用300-500ul Flow Cytometry Staining Buffer重悬细胞，并上机检测并分析。注：由于染色过程中使用了细胞固定和破膜，对比起活细胞在形态上会有一定变化，因此FSC/SSC图中圈门时需要做一定调整。
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凋亡试剂盒V13241和V13245检测步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-12
实验方法 该实验采用的是经过优化的喜树碱诱导Jurkat细胞系凋亡实验条件。其他类型的细胞需做相应调整。该试剂盒在传统及Attune™声波聚焦流式细胞仪上验证过，使用Attune™声波聚焦流式细胞仪时，各种流速（25 μL/min 到 1,000 μL/min）都可以。 1.用有效方法诱导凋亡；设一不加诱导的阴性对照。 2.孵育之后收集细胞并用冷的PBS洗涤。 3.制备1×annexin V 结合缓冲液：按10次分析的量计算，加1 mL试剂C到4ml的去离子水中。 4.制备100μg/mL的PI工作液：用45μl 1×annexin V 结合缓冲液稀释5μl试剂B，剩余可保存备用。 5.再次离心步骤2中收集的细胞，弃去上清，重悬在1×annexinV 结合缓冲液。计数并用上述缓冲液稀释至约1 × 106 cells/mL。按每次实验用量100μl准备充分。 6.在每100μl细胞悬液中加入5μl试剂A和1μl步骤4制备的PI工作液。 7. 室温孵育15min。 8. 孵育结束，加400μl 1×annexin V 结合缓冲液，轻轻混匀后置于冰上。 9.尽快对染色细胞进行分析。可用FL1检测530nm激发光，FL3检测>575nm的激发光。细胞群将被分为三组：活细胞显示弱荧光，凋亡细胞显示绿色荧光，而死细胞则同时发红、绿荧光。 10. 可用荧光显微镜验证结果，适用检测FITC、TRITC或Texas Red®的滤光片检测。 图1. Jurkat细胞经10μM喜树碱处理4h(B)或不处理(A)的流式图。细胞经喜树碱处理后，凋亡细胞增多。A=凋亡细胞；V=活细胞；N=坏死细胞。 阅读原文：
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