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小鼠Treg检测操作步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-12
1、在每个流式上样管中加入100 µl准备好的细胞悬液，细胞数约为1x106个. 2、按照细胞表面抗原染色方法标记表面抗原。根据说明书加入CD4和CD25抗体100 µl体系中使用0.125 µg FITC anti-mouse CD4，0.06 µg APC anti-mouse CD25抗体。**根据这些试剂详细的说明书操作。4 ℃孵育30 分钟。孵育表面抗体之前加入Fc受体阻断剂。 3、用预冷流式染色缓冲溶液洗涤细胞（离心并转移）。 4、旋涡震荡重悬细胞后加入1ml的固定/破膜工作液（Fixation/Permeabilization）（1:3稀释好），并再次旋涡混匀。 5、避光4℃孵育30分钟到18小时（孵育30分钟到18小时，结果一样）。 6、加入2ml 破膜缓冲液（Permeabilization Buffer）（1:9去离子水稀释）离心洗涤细胞并弃去上清液。 7、重复第6步操作洗涤细胞。 8、（可选）加入含0.5 µg Fc受体阻断剂的破膜缓冲液，保证100 µl体系4 ℃孵育15分钟。 9、封闭液无需洗去，体系加入0.5 µg PE antimouse/rat Foxp3抗体和PE Rat lgG2a同型对照（用Permeabilization Buffer工作液进行稀释），避光4℃孵育至少30分钟。建议进行预实验摸索出抗体的最适浓度。 10、加入2ml破膜工作液离心洗涤细胞并弃去上清液。 11、重复上一步洗涤细胞。 用适量体积的Flow Cytometry Staining Buffer重悬细胞，并上机检测并分析。注：由于染色过程中使用了细胞固定和破膜，对比起活细胞在形态上会有一定变化，因此FSC/SSC图中圈门时需要做一定调整。 以上步骤仅供参考，以厂家说明书为准。 阅读原文：
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Western常见问题分析（二）
作者：德尔塔 日期：2022-04-12
1、Western用的一抗，单抗好些还是多抗好些？ 做Western来讲，理论上单抗比多抗的特异性要好，但单抗种类较少，一般价格偏高，所以一般来说多抗足够了。用于Western的抗体和用于ELISA的抗体，一般来说用于Western的抗体识别的是氨基酸序列特异性，而可用于ELISA的抗体要看抗原种类，有些是识别氨基酸序列特异性，有些是识别构象特异性，所以一般根据说明书来确定。做免疫印迹选择抗体主要考虑两个问题，一时所选抗体是否识别凝胶电泳后转印至膜上的变性蛋白，另一个是所选抗体是否会引起交叉反应条带。 2、半干转是否要去膜、滤纸、胶同样大小，因为胶大小不一定规则，膜和滤纸会大一点，那样会不会短路？ 可以相等，但是如果纸、膜比凝胶大就比较容易形成短路了，上下两层滤纸也不能因过大而相互接触，这样会短路，电流不会通过胶和滤纸。转移前和转移过程中看看电压就行，正常的半干转是慢慢变高的，最后结束时一般是开始的1.5-3倍都是正常的。 3、Western Blot哪种染色好？ 阴离子染料是较常用的，特别是氨基黑，脱色快，背景低检测极限可达1.5ug，考马斯亮蓝虽然与氨基黑有相同的灵敏度，但脱色慢，背景高。丽春红S和快绿在检测后容易从蛋白质中除去，以便进行随后的氨基酸分析。胶体金，灵敏度高，检测范围可达到pg级，但染色稳定。 生物素话灵敏度位于1.2之间，可用于任何一种膜。 4、不能很好的将大分子量蛋白转移到膜上，转移效率低怎么解决？ 可以考虑，转移缓冲液中加入20%甲醇，因为甲醇可以降低蛋白质洗脱效率，但可增加蛋白质和NC膜的结合能力，甲醇可以防止凝胶变形，甲醇对高分子量蛋白质可延长转移时间；转移缓冲液中加入终浓度0.1% SDS，也是为了增加转移效率；用优质的转移膜，或使用小孔径的NC膜，低浓度胶，提高转移电压/电流，增加转移时间。 5、DAB显色，碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶显色原理是什么。 DAB显色在辣根过氧化物酶的作用能形成一种灰褐色的终末
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CIK/DC-CIK及其在细胞**上的应用
作者：德尔塔 日期：2022-04-12
【背景知识】 CIK是“Cytokine-Induced Killer Cells”的缩写，中文全称为“细胞因子诱导的杀伤细胞”。 CIK是单个核细胞在CD3单抗和多种细胞因子(包括IFN-γ，IL-2等)的作用下培养获得的一群以CD3+CD56+细胞为主要效应细胞的异质细胞群，其既具有T淋巴细胞强大的抗肿瘤活性，又具有NK细胞(自然杀伤细胞)的非MHC(主要组织相容性抗原)限制性肿瘤杀伤能力。 CIK细胞优势：杀瘤活性高、杀瘤谱广，对正常组织毒性低，体外可高度扩增，是目前临床上广泛使用的过继性免疫**细胞。 【培养原理】 CIK培养用细胞因子和抗体： 1. CD3激发型单抗： T细胞活化的第一信号来自于T细胞表面的受体，即T细胞抗原受体(T cell antigen receptor, TCR)与APC提呈的抗原的特异性结合，也就是T细胞对抗原的特异性识别。TCR是由2条不同肽链构成的异二聚体，在T细胞表面，其与CD3分子通过非共价键结合，形成 TCR/CD3复合体。TCR识别特异性抗原后会引起CD3和T细胞表面的辅助受体CD4或 CD8分子的胞浆尾部聚集，进而激活与胞浆尾部相连的酪氨酸激酶(Lck, Fyn和ZAP-70等)，促使CD3分子胞浆区的免疫受体酪氨酸活化基序(immunoreceptor tyrosine-based activation motif, ITAM)中的酪氨酸(Y)磷酸化。磷酸化的酪氨酸(pY)进一步磷酸化下游含酪氨酸的蛋白，从而引起激酶活化的级联反应(磷脂酰肌醇途径或 MAP激酶途径等)，最终通过激活转录因子，使其进入细胞核内，结合于调控T细胞增殖和活化的靶基因(如IL-2和IFN-γ等)，引起基因的表达和转录，T细胞因而由静止状态转为增殖和活化状态。 由上可见，CD3分子在T细胞活化信号的转导中起着极其关键的作用。CD3激发型单抗与T细胞表面CD3分子特异性结合后，可引起CD3分子胞浆区ITAM基序中酪氨酸的磷酸化，进而导致 T细胞增殖和活化的下游信号的激活，从而使T细胞增殖和活化。也就是说，CD3激发型单抗能够模拟抗原与TCR/CD3复合物的识别和激活过程，从而引起 T细胞的增殖与活化，因此是CIK细胞培养中不可或缺的刺
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质粒纯化方案中的关键步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-12
如今质粒纯化不再是什么难题，那么做了这么次质粒抽提的你了解质粒纯化的原理吗？你知道哪些步骤对质粒纯化的成功起着关键作用吗？ QIAGEN质粒抽提简单原理： 在碱性条件下裂解细菌之后，将裂解液以指定的盐浓度加入QIAGEN-tip当中。质粒DNA将发生选择性的结合而从RNA、蛋白质及其他细胞污染物中被分离出来。 1、制备细胞裂解产物 细胞产率很大程度上依赖于细胞裂解质量。因此制备澄清的细胞裂解产物是QIAGEN纯化方案中的重要一环，QIAGEN已经仔细针对最优的裂解条件进行了相关的专业设计。 对培养物进行收获和重悬之后，在RNase A存在的条件下使用NaOH-SDS（P2缓冲液）裂解细菌细胞。SDS溶解了细胞膜中的磷脂和蛋白成分，导致细胞裂解并释放出内容物。NaOH则对染色质和质粒DNA以及蛋白质进行变性。最优化的裂解时间能够让细胞中释放出最多的质粒DNA，却不会释放出与细胞壁结合的染色体DNA，从而使得质粒暴露于变性条件下的时间达到最小。碱性处理的时间过长可能导致质粒DNA形成无法恢复的变性状态。这一状态的质粒在琼脂糖凝胶中移动得更快，并且能够抵抗限制性内切酶的降解。随后通过加入酸性的醋酸钾（P3缓冲液）对裂解液进行中和。高的盐分会导致KDS*发生沉淀，变性蛋白、染色体DNA和细胞碎片随之被盐——去垢剂复合物所俘获。而质粒DNA由于其更小的体积和共价闭合性，得以重新正确地复性并存留于液相之中。由于裂解液中任何残存的SDS都会抑制DNA与QIAGEN树脂的结合，所以裂解液必须缓慢而彻底地进行混合，确保去垢剂完全沉淀。 *十二烷基硫酸钾。 从染色体DNA中分离质粒的原理主要基于细胞壁结合的染色体DNA与盐分、去垢剂和蛋白的不溶复合物之间的共沉淀效应。质粒DNA则仍存留于上方澄清的液相当中。裂解过程中的剧烈处理将会切断细菌染色体，导致上清液中发生染色体DNA碎片的污染。后续的反应条件将无法在化学上区分质粒DNA与染色体碎片，因此这两种成分将不会被QIAGEN树脂分离，进而在相同的盐浓度下被
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质粒DNA质量如何评估才可靠？
作者：德尔塔 日期：2022-04-12
质粒抽提过程中有很多步骤会影响最后的产量和质量，那么如何评估质粒DNA的产量和质量呢？ 目前使用分光光度法定量质粒DNA和通过琼脂糖凝胶电泳进行质粒DNA产率和质量的分析是两种最常用的方法。 溶液中的核酸浓度可通过260 nm的吸光度方便地进行计算。A260的数值处于0.1至1.0之间时测量结果具有良好的重复性，但当A260数值小于0.1或大于1.0的时候，结果的可重复性将显著下降。而且，3.0以上的读值是无法使用的，它可能会潜在导致对DNA质量的低估。因此，为了获得可靠的DNA分光光度定量结果，A260的读值需要处于0.1至1.0之间。当检测小量DNA时，使用琼脂糖凝胶电泳进行的定量分析可能更为可靠。 造成较低的产率和质量的可能因素有很多。为了确定存在问题的环节，可于每一纯化步骤都保留一小部分样品，并通过琼脂糖凝胶电泳进行分析。 制备样本 如各个实验方案和下列表格中所示，从澄清裂解液（样本1）、流出液（样本2）、QC洗涤缓冲液的混合组分（样本3）和QF/QN缓冲液洗脱产物（样本4）中各取出部分样品。使用1倍体积的异丙醇沉淀核酸，并使用70%的乙醇洗涤该沉淀，充分蒸干后重悬于10 µl pH8.0的TE缓冲液中。 表一 琼脂糖凝胶分析所需样本体积 样本 实验方案步骤 Midi Maxi Mega Giga （极低拷贝数质粒/科斯质粒） QIAGEN-tip 100 （极低拷贝数质粒/科斯质粒）QIAGEN-tip 500 1 240 µl 120 µl 120 µl 75 µl 600 µl 750 µl 2 240 µl 120 µl 120 µl 75 µl 50 µl 24 µl 3 400 µl 240 µl 160 µl 120 µl 200 µl 120 µl 4 100 µl 60 µl 22 µl 20 µl 50 µl 30 µl (制备产物占样本量的百分比) 2% 0.40% 0.08% 0.02% 1% 0.20% 琼脂糖凝胶分析 在1%的琼脂糖凝胶*中，对于各个质粒纯化步骤中
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Novus细胞器抗体大全
作者：德尔塔 日期：2022-04-12
每种细胞在质膜表面都有一系列独特的糖蛋白，这些糖蛋白镶嵌在细胞膜中，在细胞之间交流中发挥重要作用。Novus提供一系列细胞器标记物抗体，方便广大科研用户。 （1）核仁标记物 Catalog # Antibody Name Tested Applications Species Reactivity NBP2-16492 Fibrillarin Antibody WB, ICC Hu, Ms NB300-269 Fibrillarin Antibody WB, FLOW, ICC, IHC Hu, Ms, Rt + NBP1-92192 NOL1 Antibody WB, ICC, IHC Hu, Ms, Rt NBP1-81680 NOP58 Antibody WB, ICC, IHC Hu （2）细胞核标记物 Catalog # Antibody Name Tested Applications Species Reactivity NB100-1762 LSD1 Antibody WB, ChIP, ELISA, IHC Hu, Ms + NB500-171 Fibrillarin Antibody WB, ICC/IF, IHC Hu, Ms, Rt + （3）核糖体标记物 Catalog # Antibody Name Tested Applications Species Reactivity NBP1-33691 RPS3 Antibody WB, ICC, IHC Hu NBP2-20217 RPL7A Antibody WB, ICC, IHC Rt + NB110-57469 RSK1 Antibody WB, FLOW, ICC, IHC,IP Hu, Ms, Rt （4）液泡标记物 Catalog # Antibody Name Tested Applications Species Reactivity NB100-615 Caveolin 1 Antibody WB, FLOW, ICC, IHC, IP Hu, Ms, Rt + NB300-613 Clathrin Heavy Antibody WB, FLOW, ICC, IHC,IP Hu, Ms, Rt + NBP1-05048 RAB7A Antibody WB, ICC Hu, Ms, Rt + NBP1-30914 EEA1 Antibody WB, DB, ICC, IHC Hu, Ms, Rt （5）内质网标记物 Catalog # Antibody Name Tested Applications Species Reactivity NBP1-89357 BCAP31 Antibody WB,
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浅谈实验中BSA的选择
作者：德尔塔 日期：2022-04-12
牛血清白蛋白（BSA）是牛血清中的一种球蛋白，包含607个氨基酸残基，分子量为66.446KDa，等电点为4.7。牛血清白蛋白在生化实验中有广泛的应用。按照等级从低到高分为：牛血清白蛋白，牛血清白蛋白第五组分，牛血清白蛋白（无必须脂肪酸），牛血清白蛋白（无蛋白酶），牛血清白蛋白（细胞培养级），金标级牛血清白蛋白，交联牛血清白蛋白。客户需根据实际情况，选择合适级别的牛血清白蛋白，下面对各等级的BSA进行简要说明。 一、等级最低的BSA 主要成分是BSA的产品都可以成为牛血清白蛋白，一般是工业生产使用。 二、牛血清白蛋白第五组分，英文简写BSAV 这个是生物技术级的产品，适用范围最广，有些厂商的BSAV脂肪酸和内毒素很低，可以直接用于细胞培养，纯度高甚至可以用于任何相关实验。比如ELISA,WB实验。 三、牛血清白蛋白（无必须脂肪酸） 脂肪酸含量低，脂肪酸含量≤0.002%（W/W），或在1% BSA溶液中脂肪酸浓度＜5umol/l，可用于测定培养的组织细胞释放的游离脂肪酸浓度等。 四、牛血清白蛋白（无蛋白酶） 或称为无Protease牛血清白蛋白，产品不含DNAase酶，蛋白酶以及IgG，可以用于放射免疫，酶联免疫以及作为稀释剂或封闭剂等。 五、牛血清白蛋白（细胞培养级） 纯度98%即可，但是要求脂肪酸含量和内毒素含量极低，用于细胞培养基细胞培养相关的实验。 六、金标级牛血清白蛋白 高纯度，纯度99%以上，用于制作金标抗体等。 七、交联牛血清白蛋白 冷冻干燥粉末，含单体（66000），二聚体（132000），三聚体（198000），四聚体（264000）等。用于测定位置蛋白质的分子量，可用于生化教学实验，用于摸索电泳条件，检定电泳结果等。 阅读原文：
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循环肿瘤细胞的分选
作者：德尔塔 日期：2022-04-12
循环肿瘤细胞（CTC）：根据肿瘤细胞转移的途径，在血液或淋巴管中循环的游离肿瘤细胞被定义为循环肿瘤细胞，被认为是癌症转移的一个重要因素。 CTC的应用： 体外早期诊断化疗药物的快速评估个体化**，包括临床筛药、耐药性检测评估预后及存活时间肿瘤复发的监测肿瘤新药物的开发 CTC检测 ： 鉴于CTC的含量非常少，一般在10 ml血液中只有几十个，晚期患者的CTC数量会增加，而10 ml血液则含有大约1亿个白细胞和500亿个红细胞。因此，**首先对临床血样中的CTC进行富集，然后进行生物学、遗传学等检测和分析。免疫磁珠分选法是目前最常用的CTC富集方法 CD326（EpCAM，HEA，ESA）： CD326，也称为EpCAM（上皮细胞粘附分子）、HEA（人上皮抗原）或ESA（上皮特异性抗原），见于大多数癌组织中。 CD326表达于上皮来源的细胞、上皮来源的肿瘤细胞、循环肿瘤细胞和肿瘤干细胞中。 注意：大多数但不是所有的癌细胞表达高水平EpCAM MACS®技术分选人肿瘤细胞 阅读原文：
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肿瘤干细胞介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-12
肿瘤干细胞是肿瘤中一小群具有自我更新能力，并能产生异质性肿瘤细胞的细胞。 肿瘤干细胞假说最先是由Mackillop于1983年提出，他认为在所有的肿瘤中都可能存在着一小部分细胞具有类似干细胞的特殊功能。 1997年，Bonnet第一次在急性髓性白血病（AML）中分离出了一类细胞表面抗原标记是CD34+CD38-的细胞：数量约占AML总细胞数量的0.2%；将这部分细胞移植至非肥胖型糖尿病/重症联合免疫缺陷小鼠（NOD/SCID)后，会引起AML的发生；将其他的AML细胞以更大的数量移植入NOD/SCID小鼠体内，却不能引起AML的发生。 功能： 肿瘤的存活和增殖：肿瘤干细胞通过自我更新和无限增殖维持着肿瘤细胞群的生命力； 肿瘤转移：肿瘤干细胞的运动和迁徙能力又使肿瘤细胞的转移成为可能； 肿瘤复发：肿瘤干细胞可以长时间处于休眠状态，并具有多种耐药分子，而对杀伤肿瘤细胞的外界理化因素不敏感，因此肿瘤往往在常规肿瘤**方法消灭大部分普通肿瘤细胞后一段时间复发； 由于肿瘤干细胞特异的细胞表面标志很少，在不同的肿瘤组织中肿瘤干细胞的表面抗原标志也各不相同，目前对于肿瘤干细胞的研究有一定困难 常规方法是首先筛选出可能的肿瘤干细胞表面标志，然后通过细胞分选的方法分选出具有该标记的细胞，再进一步进行干细胞活性检测、细胞移植、克隆形成、细胞增殖以及细胞分化等肿瘤干细胞功能分析 肿瘤干细胞——表面Marker 肿瘤类型 表面marker Acute Myeloid Leukemia（AML）急性髓系白血病 CD34+/CD38- Breast Cancer 乳腺癌 ESA+/CD44+/CD24-/Lineage- Ovarian Cancer 卵巢癌 CD133+CD44+/CD117+ Glioblastoma 成胶质细胞瘤 CD133+CD15+ Medulloblastoma 成神经管细胞瘤 CD133+CD15+ Small cell and non-small cell lung cancer 肺癌 CD133+ Hepatocellular carcinoma 肝细胞癌 CD45-/CD90+ Prostate cancer 前列腺癌 CD44+/A2B1 hi/CD133+ Colon cancer 结肠癌 CD133+C
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常规组织样本核酸（DNA/RNA）提取纯化
作者：德尔塔 日期：2022-04-12
QIAamp DNA Kits —— 纯化基因组 DNA、线粒体 DNA、细菌、寄生虫或病毒 DNA 20 分钟内快速纯化高品质，高产量，即用型 DNA（见图 20） 多种规格可选择：Mini Kit 可处理 25 mg 组织，Micro Kit 可处理小于 10 mg 组织 完全去除污染物和抑制剂 可在 QIAcube 上进行自动化纯化 表1 QIAamp DNA Mini Kit纯化各类样本的核酸产量 样品 用量 总核酸的量（µg）* DNA 的量（µg）† 血液 200 µl 4–12 4–12 白膜层 200 µl 25–50 25–50 细胞 106 20–30 15–20 肝脏 25 mg 60–115 10–30 大脑 25 mg 35–60 15–30 肺 25 mg 25–45 5–10 心脏 25 mg 15–40 5–10 肾脏 25 mg 40–85 15–30 脾脏 10 mg 25–45 5–30 * 核酸未经RNase处理 。† 核酸经RNase处理。总核酸的量（µg）* 图1 纯化长达50 kb的基因组DNAQIAamp Kits从图示来源的样本（每泳道3 µg）中纯化获得的DNA长度 RNeasy Kit —— 常规组织或细胞 RNA 纯化 从细胞、组织或酵母中纯化至总 RNA 数分钟内快速纯化得到高品质总 RNA 即用型 RNA 在各种下游应用中表现良好 无需有机试剂或乙醇沉淀步骤 RNeasy Kits 提供四种规格（Micro, Mini, Midi, Maxi），RNeasy 离心柱的结合能力分别为45 μg, 100 μg, 1 mg 和 6 mg 的 RNA。 表2 RNeasy Mini Kit从各类样本中纯化得到的总RNA产量 样本来源 起始材料 平均产量（µg） 动物细胞LMHHeLaCOS-7淋巴细胞（未受激） 1 x 1061 x 1061 x 1061 x 106 1215350.5 小鼠组织肝肺脾 10 mg10 mg10 mg 401035 真菌细胞S. cerevisiae 1 x 107 25 图2 从多种样本中纯化高品质RNA。 使用RNeasy Maxi Kit纯化的总RNA的甲醛琼脂糖凝胶电泳和northern印迹。从各种来源的样本中分离总RNA（10 µg）上样至各泳道。所有组织均来源于小鼠。酵母：Saccharomyces cerevisiae；E. coli菌株：
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特殊样本核酸纯化方案
作者：德尔塔 日期：2022-04-12
QIAamp Fast DNA Stool Mini Kit —— 从粪便，呕吐物中纯化 DNA 快速、方便、高效的纯化实验方案 创新的 InhibitEX buffer 高效去除 PCR 抑制剂 灵敏度高，适合多种下游应用 可在 QIAcube 上自动操作 图 22. 从不同粪便样本纯化 DNA 产量从 7 个不同的粪便样本中同时利用 QIAamp Fast DNA Stool Mini Kit 或竞争试剂盒进行 DNA 纯化， DNA 产量利用 Nanodrop 测量。结果显示 QIAamp Fast DNA Stool Mini Kit 能够纯化出更多高质量 DNA。 图 23. 高灵敏度 PCR 结果使用 QIAamp Fast DNA Stool Mini Kit 和另外两种竞争产品从粪便样本中纯化 DNA，利用PCR 方法对 human alu gene 进行扩增 . 结果显示 QIAamp Fast DNA Stool Mini Kit 的 Ct 值最低，表明该试剂盒纯化得到的 DNA 产量最高。 皮肤组织核酸纯化 QIAamp DNA Kits —— 皮肤组织 DNA 纯化 依据皮肤组织的样本量大小，推荐使用 QIAamp DNA Mini 和 QIAamp Micro Kit 试剂盒进行纯化。 RNeasy Plus Universal Kits —— 皮肤组织 RNA 纯化 适用于所有组织类型 整合 RNeasy 和 QIAzol 技术，节省时间 配有 gDNA Eliminator 柱快速去除基因组 DNA RNA 纯度高，适用于下游应用 该试剂盒含有 QIAzol® Lysis Reagent 和 RNeasy 离心柱，前者用于裂解脂肪组织和其他组织类型，后者用于纯化高品质 RNA。该试剂盒有两种规格：Mini Kit 可从至多 50 mg 组织中纯化 RNA，Midi Kit 可从至多250 mg 组织中纯化 RNA。 显微切割，穿刺样本及微量样本核酸纯化方案 针对纯化的核酸类型不同，QIAGEN 提供一系列的显微切割等微量样本纯化方案：1、 QIAamp DNA Micro Kit —— 显微切割组织 DNA 纯化 该产品可从各种微量组织（显微切割，各种微量法医检材等小于 5 mg的组织样本，小于 105 个细胞）中进行 DNA 纯化。2、 RNeasy Plus Micro Kit —— 显微切割组织 RNA 纯化 该产品可从各种微量组织（显微切割，流式分选细胞等
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luminex多因子检测样本收集方法一览
作者：德尔塔 日期：2022-04-12
ProcartaPlex™以更少量的样本完成对更多生物标志物的分析。由卓越的免疫试剂供应商开发，用于Luminex®平台，ProcartaPlex使您可以在25-50μL的样本（血浆、血清、细胞培养上清液以及其他体液）。实现在25-50μL的样本中同时对多达50种因子进行检测与定量。该技术在多通道“类ELISA”分析中，为每种靶标使用了经不同染色处理的捕获微球。相比于传统的三明治ELISA而言，ProcartaPlex免疫分析可以在使用样本量少而时间相同的情况下，分析多达50倍数量的因子。ProcartaPlex多通道免疫分析提供了多种试剂盒类型，涵盖六个物种（人类、小鼠、大鼠、非人灵长类、猪以及犬类），从而满足您的研究需求。 正确的样本收集整理方法，是实验成功至关重要的步骤. 目前ProcartaPlex可以检测样本类型有: 细胞上清、血清、血浆. 尽管其他生物学样本没有经过验证,但是理论上也可以检测,这些样本包括: BAL, 唾液，CSF, 组织匀浆液和尿液。 下面我们针对几种常见样本的收集、保存方法： 1、血清 全血室温（20-25 °C）凝固20-30min；室温1,000 x g 10min；收集上清，或者选择使用血清分离器；可选：如果样本是高血脂样本，请先在2-8°10,000 x g 离心 10min，分离出下层血清；多因子检测血清样本要求新鲜；如果不能在24h内检测，需要分装在-20 ℃以下，避免反复冻融。 2、血浆 根据要求选择柠檬酸或EDTA作为抗凝剂。如果选择肝素作为抗凝剂，建议每毫升血不超过10IU肝素（肝素用量过高，可能会导致部分检测指标值偏高）。收集抗凝全血后30min内，在4oC 下10,000 x g离心10min，分离收集血浆；可选：可选：如果样本是高血脂样本，请先在2-8°10,000 x g 离心 10min，分离出下层血浆；多因子检测血浆样本要求新鲜；如果不能在24h内检测，需要分装在-20 ℃以下，避免反复冻融。 3、细胞培养上清 检测分泌性的成份时，**用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。 4、组织样本 如果可以，请按照
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体液样本核酸提取纯化一站式解决方案
作者：德尔塔 日期：2022-04-12
无细胞体液包括：血浆或血清，脑脊液 ，尿液，其他无细胞体液，细胞培养上清液。 QIAamp Viral RNA Mini Kit —— 从无细胞体液中纯化病毒 RNA 1)快速纯化高品质病毒 RNA（见图 1）2)无需有机提取或乙醇沉淀3)重复性好，产量高4)完全去除污染物和抑制剂 图1 扩增血浆中的RNA从血浆中纯化的1026 nt RNA片段的RT-PCR产物。将10倍梯度稀释液（如图所示）加入血浆，使用QIAamp Viral RNA Mini Kit纯化。M：分子量标准；C：阴性对照。 QIAamp MinElute Virus Spin Kit —— 浓缩柱版，从血浆、血清或无细胞体液中同时纯化病毒 DNA 和 RNA 1)快速纯化并浓缩高品质病毒 DNA 和 RNA（见图 2）2)无需有机提取或乙醇沉淀3)重复性好，产量高4)完全去除污染物和抑制剂5)洗脱体积可低至 20 μl6)有对应 Vacuum kit，真空操作更快更高效 图2高灵敏 PCR 检测。数据显示了低病毒滴度阳性样本的百分比，病毒核酸分别利用 QIAamp MinElute Spin or Vacuum Kit 进行纯化；结果显示，对于 95% 的置信区间内，离心操作对应的病毒滴度值为 27.25 IU / ml 和而真空操作过程则为 9.30IU/ml。 QIAamp UltraSens Virus Kit —— 血清和血浆中浓缩和纯化病毒 DNA 和 RNA 1)快速纯化并浓缩高品质的即用型病毒 DNA 和 RNA（见图 3）2)样本起始体积可多至 1 ml3)无需有机抽提或乙醇沉淀4)重复性好，产量高5)完全去除污染物和抑制剂 图 3. 纯化获得的核酸在下游分析中有出色表现。利用QIAamp UltraSens 步骤从典型的病毒中纯化 RNA， 在LightCycler 上进行一步法 RT-PCR。geq/ml：每毫升中的基因组当量；–：阴性对照；M：分子量标准。（数据由德国汉堡 Artus GmbH 的 Thomas Laue 博士提供。） QIAamp UCP Pathogen Mini Kit —— 从全血、拭子、培养基或体液中纯化微生物 DNA 1)从微量样本中纯化病原体(细菌和真菌) DNA 2)使用 Pathogen Lysis Tubes 对细胞进行高效的机械破碎3)简化的纯化流程，实验方案包括预处理步骤和真空或离心
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罗氏FFPET组织样本抽提RNA试剂盒实验结果分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-12
High Pure FFPET RNA Isolation Kit基于离心柱法的抽提原理，在柱上直接进行高效DNase消化，在整合的实验流程中方便地去除残留DNA。 图1：抽提获得宽泛的RNA片段范围，FFPET RNA抽提物片段长度范围在100-4000bp 使用3中不同的方法从乳腺癌组织的5um FFPET样品中抽提总RNA。绿色线显示了使用该方法抽提获得的RNA长片段极少，以RNA降解片段为主。灰色线显示的RNA抽提物覆盖的片段范围较广，但在短片段RNA的分布存在较大的偏倚性。 结果：罗氏High Pure FFPET RNA Isolation Kit的抽提产物（蓝色线）较均匀地覆盖了整个片段分布范围。 图2：从近期和长期保存的FFPET样品中均可抽提获得高RNA得率 A）柱形图显示了从结肠癌组织和正常结缔组织10um FFPET切片样本中抽提获得的RNA平均得率（n=24）样本保存时间分别为＜6个月和＞5年。结果：罗氏High Pure FFPET RNA Isolation Kit能获得更高得率的RNA抽提产物。 B）显示了图A的最左侧两列柱状图，其24个重复样本各自的RNA得率。24个重复样本来自于组织的连续切片，以避免来自不同组织区域的核酸含量差异。结果：在常规研究中，同一组织样本的不同FFPET切片的核酸得率存在差异。但对于同一种样本，罗氏High Pure FFPET RNA Isolation Kit始终能获得更高得率的RNA抽提产物。 图3：从样品中抽提获得高质量的RNA，提高RT-aPCR检测灵敏度。 作为qPCR实验中的核酸模板，要求高质量的RNA，即良好的核酸得率、纯度和片段大小分布，并能高灵敏度和不偏倚地检测模板基因的表达情况。 从3中不同异种移植物切片组织中抽提RNA，取150ng总RNA，使用Transcriptor Universal cDNA Master进行反转录反应，取10ng cDNA产物通过LightCycler 480 Real-Time PCR Instrument扩增检测ALAST基因表达情况。 结果：High Pure FFPET RNA Isolation Kit抽提获得的RNA模板（n=8）能在RT-qPCR实验中获得更高的检测灵敏度。 产品信息 产品 目录号
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