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2019年，大牛们都在研究什么？—m6A文章盘点
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
19年悄悄的已经将近过半，但RNA甲基化研究马不停歇。单单过去一个半月的时间里高分文章就有十多篇，Nature，Cell子刊均有相关文章发表；造血干细胞分化，癌细胞上皮间质转化，树突细胞活化，心肌细胞肥厚，内源性免疫应答调控都有它的身影。这里小编给大家列举展示几篇最新的m6A RNA甲基化研究成果，来看看这个科研热点是如何在几位大牛课题当中被精彩呈现的，给大家来个RNA m6A甲基化年中盘点。 您是否还在痴迷writer，eraser？是否还在寻求m6A介导降解mRNA？我们首先选择近期最有特色的两例研究和大家分享。发表在核酸研究上的文章“The m6A reader YTHDF1 regulates axon guidance through translational control of Robo3.1 expression”从另一角度揭示甲基化与蛋白翻译之间的关系，一篇Nature Communication上发表的“RNA m6A methylation regulates the epithelial mesenchymal transition of cancer cells and translation of Snail”则强调了不同以往的3’UTR，发生在CDS区的甲基化修饰同样有重要的调控意义。 Article 1： Writer or Eraser？不，这次我们看Reader 是不是看厌了METTL14，METTL3，FTO或者ALKBH5？这次我们看看这篇文章怎么做Reader蛋白。Reader蛋白能够特异性的识别甲基化位点与之结合并发挥生物学功能，虽然对它的关注度远没有甲基化酶（Writer）或者去甲基化酶（Eraser）高，但其实Reader是甲基化位点的直接识别者，它的地位更重要。这篇Nucleic Acid刊登的文章当中明确指出了Reader能够结合一个发生了甲基化修饰的有关轴突导向（Axon Guidance）的重要基因Robo3.1。 1）说来有趣，Robo3.1是一个轴突导向受体，在脊髓联合轴突（spinal commissural axons）的中线交叉过程当中起重要作用。作者在研究轴突外植体生长过程中发现，Robo3.1在交叉后的联合轴突中的下降是依赖于底板（floor plate）进行的，而这种下降主要发生在蛋白水平。 2）为了研究这个蛋白调控背后的秘密，作者率先考虑了YTHDF
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布鲁氏菌的检测方法！
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
布鲁氏菌的检测方法！ 荧光偏振方法(Fluorescence polarisation assay， FPA)是以荧光素标记物作为示踪剂来检测抗原/抗体相互作用的一种简便技术，该方法属于同源性分析，分析物不需进行分离，因而该法简便快捷。FPA 诊断布鲁氏菌的特异性和敏感性几乎和竞争 ELISA (Competitive enzyme-linked immunosorbent assay，C-ELISA)相同，一次检测仅需15 min，即可完成上百份样品的检测，可应用于动物群体布鲁氏菌病的检疫、筛查和净化。FPA 检测方法在某些发达国家已经得到了大量应用，并经研制开发了商品化 FPA 检测试剂盒。 而我国对 FPA 检测方法的研究起步较晚，目前尚无商品化 FPA 检测试剂盒，进出口贸易中牛、羊布鲁氏菌病 FPA 检测方法均依赖于使用进口试剂盒，因此开发布鲁氏菌荧光偏振抗体检测方法有其现实意义。本研究使用异硫氰酸荧光素 (Fluorescein isothiocyanate，FITC)标记的布鲁氏菌光滑型 LPS 的小分子片段脂多糖-O-链(O-polysaccharide，OPS) 作为抗原，通过对标记抗原、反应条件、结果判断标准等多方面条件的优化，建立敏感性和特异性良好的布鲁氏菌荧光偏振方法，为多种动物布病检测提供快速高通量的新技术手段。 材料与方法 一、材料 ⒈菌种：猪布鲁氏菌 S2 菌株(CVCC 70502)由本实验室保存。 ⒉实验用血清：布鲁氏菌病阳性血清国家标准品由本实验保存，布鲁氏菌病阴、阳性血清样本由本实验采集并保存。 ⒊主要试剂和仪器： 布鲁氏菌荧光偏振试剂盒购自 Diachemix 公司；胰大豆肉汤(TSB)和胰大豆琼脂(TSA)购自美国BD公司；异硫氰酸荧光素(FITC)、表面活性剂脱氧胆酸钠(Sodium deoxycholate)、三乙胺购自 Sigma 公司；SDS-PAGE 凝胶制备试剂盒购自康为世纪公司。低温离心机购自 Sigma 公司；超声破碎仪购自新芝生物科技有限公司；Powerpac Universal 通用型电源购自美国 Bio-Rad 公司。 二、方法 ⒈OPS 的提取及标记：(1) OPS 提取。鉴定合格的 B. suis 2 株二级种子，大量培养并灭活，参
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小鼠ELISA试剂盒样本取血操作步骤及注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
小鼠ELISA试剂盒样本中血浆的取血操作步骤 大鼠、小鼠ELISA试剂盒检测中，经常有客户采用鼠类的血清，血浆做检测样本，但是收集样本复杂，本章小编就根据大鼠，小鼠ELISA试剂盒样本取血及注意事项。 以小鼠为例： 1 剪尾采血 小鼠每次采血量0.1ml，大鼠每次采血量0.3-0.5ml 左手拇指和食指从背部抓住鼠颈部皮肤，将鼠头朝下，鼠保定后将其尾巴置于50℃热水中浸泡数分钟，使尾部血管充盈。擦干尾部，再用剪刀或刀片剪去尾尖1-2mm，用试管接流出的血液，同时自尾根部向尾尖anmo。取血后用棉球压迫止血并用6%液体火棉胶涂在伤口处止血。 2 摘除眼球采血小鼠采血量0.5-1ml 左手抓住小鼠颈部皮肤，轻压在实验台上，取侧卧位，左手食指尽量将小鼠眼周皮肤往颈后压，使眼球突出。用眼科弯镊迅速夹去眼球，将鼠倒立，用器皿接住流出的血液。采血完毕立即用纱布压迫止血。大鼠少用。 3 心脏采血 小鼠采血量0.5-0.6ml，大鼠采血量1-1.5ml 鼠仰卧位固定，剪去胸前区被毛，皮肤消毒后，用左手食指在左侧第3-4肋间触摸到心搏处，右手持带有4-5号针头的注射器，选择心搏zui强处穿刺，当刺中心脏时，血液会自动进入注射器。 4 断头采血 小鼠采血0.8-1.2ml，大鼠采血量5-10ml 左手拇指和食指从背部抓住鼠颈部皮肤，将鼠头朝下，右手用剪刀剪断鼠颈部约1/2-4/5，让血液流入试管。 5 眼眶静脉丛采血小鼠采血量为0.2-0.4ml，大鼠采血量为0.4-0.8ml 取内径为1.0-1.5mm的玻璃毛细管，临用前折断成1～1.5cm长的毛细管段，浸入1％肝素溶液中，干燥后用。取血时左手抓住鼠两耳之间的颈背部皮肤以固定头部，轻轻向下压迫颈部两侧，引起头部静脉血液回流困难使眼眶静脉丛充血，右手持毛细管由内眦部插入结膜，再轻轻向眼底部方向推进，轻轻旋转毛细管以划破静脉丛，让血液顺毛细管流出，接收入事先准备的容器中。采血后纱布轻压眼部止血。小鼠、大鼠、豚鼠及家兔均可采取此法取血。刺入深度小鼠为2-3mm，可采血0.2-0.3ml；大鼠为4-5mm，
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化合物虚拟筛选平台技术交流问答
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
以下内容来自殷赋学术交流群，由小殷收集整理，希望对大家有所帮助。 虚拟筛选相关 A:问一下，贵公司有没有关于虚拟筛选的在线培训课程? 小殷 :没有呢。不过今年平台会上线虚拟筛选功能，届时会针对此功能进行免费培训。 A :哦哦，之前看过公众号的教程，哈哈哈，但是想系统学一下如何选择和使用分子库。 殷赋科技 : 分子库大多使用商业库，主要看你们经费条件。尽量选择结构多样性良好的库。化合物库还需要经过一系列仔细的处理，包括：结构检查、加氢(质子化)、加电荷、能量优化。我们会在平台上提供这项功能。 如果有版权，可以用MOE来处理，先wash，再minimize。或者你手头有其他软件，也可以使用，Sybyl、DS这些软件都有完善的工具。我们是使用免费开源的编程库来编写程序的，这方面恐怕难以传授。**使用我们的平台，它是我们多年的技术经验的积累。 A :谢谢啊，我参考你们的教程和paper，可以做现有单个化合物模拟(模仿)，但是还不太懂选择库，好的 ，很期待。 殷赋科技 : 你说的是两件事吧，一个是使用分子对接预测结合模式，另一个是虚拟筛选。前者不用选库啊，而是你指定若干个化合物，**经过实验验证的。后者也是根据需要去挑选，比如想筛选有机小分子的，可以选Specs、ChemDiv、Enamine等库。 B:第一个是反向筛靶的是么?就是指定化合物筛选其靶标? 殷赋科技:不是啊，也不是正向筛选，就是对某些感兴趣的化合物进行分子对接，去了解他们在蛋白口袋中的结合模式(方式)和相互作用情况。 如果对编程感兴趣，我们也可以教授一些基础，用来处理日常工作。建议学习Linux和Python。 A:好的，我对编程感兴趣，但是它对我不感兴趣，我先等平台吧。 殷赋科技: Python很好学，当年我花了一个晚上就看完这篇《A byte of python》(建议学Python3)：https://python.swaroopch.com/，我能学会，大家都可以。 云计算平台 D:目前云平台可以进行什么分析，是免费的吗?还是如何收费的？ 小殷:目前可做分子对接的vina
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云序客户再发高分文章，教你如何玩转tRNA机制研究
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
文章导读： “忽如一夜春风来，千树万树梨花开！”自然界的花花草草在悄无声息的感受着大自然的变化。随着全球气候的变化，环境温度也在不断的变化，那么什么是温度感受器？AET1是tRNA上鸟苷转移酶，它是水稻高温条件下正常生长所必需的。本文研究结果表明，tRNAHis鸟苷转移酶AET1在植物应对高温环境中发挥着重要作用。 发表期刊：MOLECULAR PLANT 影响因子：10.12 实验方法：tRNA测序、RIP、RIP qPCR、RNA pull down 文章内容： 1. AET1突变水稻热敏性 AET1突变水稻在高温环境下生长时主要呈矮小株，叶片狭窄卷曲，无法产生种子，相反在相对温和环境下生长时没有展现其他异常性状。AET1基因的ORF区第1144个SNP（C突变为T）会引起第382个氨基酸从脯氨酸改变为丝氨酸。预测AET1基因编码tRNA鸟苷转移酶，多物种比对结果显示AET1基因在包含哺乳动物在内的多种真核生物当中都是高度保守的，而第382个氨基酸在大部分双子叶和单子叶植物中也是高度保守的。遗传互补分析（genetic complementation test）显示互补品系以及过表达水稻株都能够有效的逆转高温下AET1突变所造成的异常形状。CRISPR/Cas9的基因编辑水稻株也可以造成明显的生长缺陷。控制变量实验表明温度是造成这一现象的环境因素，并且AET1基因是水稻对非生物因素敏感的主要原因。进一步观察可以看到的是，尽管野生型和AET1突变水稻幼苗们没有明显的形态学改变，但是超微结构已经有巨大的改变，表明AET1基因对于高温条件下细胞的增值是必不可少的。所有的形态学观察和表型实验都说明AET1在水稻的生长、发育过程中对高温的应答过程种起到重要作用。 图1. AET1突变体是热敏性的 2.AET1对tRNAHis成熟和tRNA表达稳态起重要作用 体外酶活实验证明AET1编码的AET1His可以结合到pre-tRNA（tRNAHis前体）并在pre-tRNAHis 5’端添加鸟嘌呤，然而发生了突变的AET1P382S没有该功能，表明被突变的382位的脯氨酸对于tRNA的鸟嘌呤转移酶活性是必不可少的。tRNA测序（云序生物
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高效液相色谱法测定石杉碱甲的含量！
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
高效液相色谱法测定石杉碱甲的含量！ 昆明石杉HuperziakunmingensisChing.系石杉科石杉属植物，为我国特有种，主要分布于云南、贵州等地，生于灌木下、苔藓丛中。20世纪80年代，我国科学工作者从同属植物蛇足石杉中分离到石杉碱甲(Hup-A)，并阐明它是一种可逆性乙酰胆碱酯酶抑制剂，对**重症肌无力、记忆力减退和早老年痴呆具有较好的效果，现已被广泛应用于临床。为了科学、合理地利用石杉属植物资源，本实验首次采用HPLC法对昆明石杉中石杉碱甲的含量进行测定，为寻找和筛选石杉碱甲新的植物资源提供科学依据。 1、仪器与试药 Aigent1100型HPLC色谱仪(带四元泵，自动进样器，紫外检测器等);电子分析天平(日本岛津);KQ50B超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司);电热恒温水浴锅(上海医疗器械厂);石杉碱甲对照品(中国药品生物制品检定所，批号：100243-200401);乙腈(色谱纯);二次重蒸水;其他试剂均为分析纯。 实验药材采至贵州黔东南，由贵州科学院生物研究所王培善教授鉴定为昆明石杉H.kunmingensisChing.，标本存放于贵阳中医学院民族医药研究所，标本凭证(20056)。 2、方法与结果 2.1色谱条件ZORBAXSB-C18色谱柱(150mm×4.6mm，5μm)，流动相0.02mol·L-1磷酸二氢钾-乙腈(92∶8)，检测波长为310nm，流速1ml·min-1，柱温25℃，进样量为5μl。在此色谱条件下，样品中的石杉碱甲与其他峰能达到基线分离，其理论塔板数为4656，对称因子为0.92。石杉碱甲的保留时间为11.15min，对照品与样品的色谱图见图1。 2.2样品的制备 精密称取实验药材细粉2g于500ml的圆底烧瓶中，每次加入200ml石油醚提取3次，弃去滤液。滤渣再用95%的甲醇提取3次，合并滤液并回收溶剂，加入2%的酒石酸溶解，用氨水调节pH值至8.0，再用氯仿萃取至Dragendorffors反应呈阴性，挥干有机溶剂，用无水乙醇溶解并定容至25ml即得。 2.3线性关系的考察 精密称取石杉碱甲对照品2.40mg于25ml容量瓶中以无水乙醇溶解并定容，得浓度为0.096mg·ml-1对照
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海狸生物解读His-tag蛋白纯化技术
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
导读：在进行基因重组时，通常将目的蛋白和一个亲和纯化标签进行融合表达，然后借助亲和层析方法实现蛋白质的高效纯化。常见的标签有组氨酸标签（His-tag）、GST标签、Flag标签等。BeaverBeads™ IDA-Nickel具备高磁含量，可快速进行磁性分离，在一小时内就能获得高纯度的目的蛋白，且能轻松实现多样品平行处理，实现高通量蛋白纯化。 随着基因组学和基因工程技术的发展，快速获得目标蛋白的基因已相对容易。将目标基因构建到原核或真核细胞系统中进行蛋白质的重组表达是获得目的蛋白的有效方法。今天，小海狸就为大家来详细说一说。 His-tag蛋白纯化技术 在进行基因重组时，通常将目的蛋白和一个亲和纯化标签进行融合表达，然后借助亲和层析方法实现蛋白质的高效纯化。常见的标签有组氨酸标签（His-tag）、GST标签、Flag标签等。 BeaverBeads™ IDA-Nickel具备高磁含量，可快速进行磁性分离，在一小时内就能获得高纯度的目的蛋白，且能轻松实现多样品平行处理，实现高通量蛋白纯化。 产品性能 标技术图示&实验案例 图: BeaverBeads™ IDA-Nickel显微镜中形貌。该磁珠产品微观为球形，分散性良好。透明琼脂糖微球中均匀分散磁性颗粒。 可溶性蛋白纯化效果 图：BeaverBeads™ IDA-Nickel可纯化原核细胞胞内表达可溶性蛋白。纯度可达85%。 包涵体蛋白纯化效果 图：BeaverBeads™ IDA-Nickel 可纯化包涵体变性蛋白 图：BeaverBeads™ IDA-Nickel产品已在各大国际期刊中引用。以上为部分文献数据，目的蛋白纯度可到90%以上。 实验流程对比展示 通过实验流程的对比发现，可以看出BeaverBeads™与金属传统离子鳌和琼脂糖预装柱纯化组氨酸标签蛋白操作流程的优化与效率的提升。 产品展示 图：磁性分离器 图：BeaverBeads™ IDA-Nickel产品包装形式Cat. 70501-K10产品包含实验过程及磁珠再生所需要的各种试剂，更方便使用。 欲了解产品详情，欢迎联系我们！
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一级菌种培养基的制备实验！
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
一级菌种培养基的制备实验！ 一、实验目的 1．了解一级菌种培养基配制的原则； 2．掌握一级菌种培养基配制的工艺流程； 3．学会一级菌种培养基配制的具体方法步骤； 4．学会棉塞的制作方法和手提式高压蒸汽锅的使用方法。 二、实验设备、工具和材料 手提式高压锅、1000～1500W电炉、感量1／10g的粗天平、1000mL量杯、玻璃漏斗、漏斗架各一个，8～10cm长乳胶管一根，止流夹一个，20mm×200mm试管150支左右，铁丝筒两个，小刀和剪子一把，普通棉花250g，牛皮纸、马铃薯、琼脂和葡萄糖或蔗糖适量。 三、实验步骤 (1)取适量马铃薯，削去皮，挖去芽眼。称取200g，切成薄片或小块，用清水淘洗之后，放入锅内，加水1200mL，用文火煮沸20～30min，用四层纱布过滤，取滤液1000mL，如不足加水补足1000mL。 (2)称取琼脂20g，洗净剪碎，加入马铃薯煮出液中，用文火加热，边煮边搅拌，直至全部琼脂融化，再用四层纱布过滤，并用热水补足1000mL，加入预先溶解的葡萄糖水，搅拌之后煮2min后停火。 (3)分装试管。根据要求，用1%盐酸或1%氢氧化钠溶液调整酸碱度后，将培养基趁热分装在试管中。 先在玻璃漏斗嘴上套一段长8～10cm的乳胶管，卡上止流夹，将培养基倒入漏斗中（其余培养基要置电炉上保温）。左手握住3～5支试管，让乳胶管伸入试管中部，右手拇指和食指按下止流夹，逐一注入培养基，装入量以试管长度的1/5～1／4为宜。分装时不要让培养基沾在试管口上，若已沾上，要用干净纱布擦干净。 (4)塞棉塞。培养基分装试管后，要塞上棉塞。 制作棉塞的方法很多，这里介绍一种常用的方法。取适量棉片，在桌上铺成长12～15cm，宽12cm左右的薄棉垫，先将棉垫下部1／3向上折叠，再将上部1／3向下折叠，然后将长棉垫逆时针方向转90°，让光滑的一边向左用右手持棉垫并用拇指按住，左手拇指和食指向外旋卷，并将参差不齐的棉纤维缠住呈一圆柱形。用右手按顺时针方向将棉塞塞进管口内，塞入部分为棉塞长度的2/3。 (5)捆扎试管。塞好棉塞之后，应将
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气相色谱法分析野生菱角壳中多糖化合物
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
气相色谱法分析野生菱角壳中多糖化合物 1、引言 20世纪60年代以来，人们逐渐发现多糖具有复杂多样的生物活性和功能，如多糖有免疫调节功能可作为广谱免疫促进剂，作为药物可以**风湿病、慢性病毒性肝炎、癌症等；还具有抗感染、抗放射、抗凝血、降血糖、降血脂，促进核酸与蛋白质的生物合成等作用。菱，别名菱角、水菱角、风菱，为菱科菱属植物乌菱TrapabicomisOsbeck的种子，据文献记载，其果壳、果柄、果、茎及叶柄均可进药，有健胃止痢、抗癌等作用；还可用于**胃溃疡、痢疾、食道癌、子宫颈癌及乳腺癌等。 本研究首次从野生菱角壳中提取分离出多糖，并对多糖的单糖组成进行了深进的研究，为进一步开发和利用野生菱角资源提供了科学依据。 2、实验部分 2.1 样品、试剂与仪器市售的菱角往仁后，壳晒干，粉碎备用。单糖及双糖标准物质(半乳糖、阿拉伯糖、木糖、鼠李糖、甘露糖、葡萄糖、乳糖和蜜二糖)均购自ChemService，纯度大于98％。所用化学试剂除甲醇和乙醇为色谱纯外，其余均为分析纯。UV-2501PC紫外光谱仪(日本岛津公司)；NicoletMagna560傅里叶变换红外光谱仪(美国尼高力公司)；VarianUnityPlus600核磁共振波谱仪(美国瓦里安公司)；HP6890和HP5973气相色谱-质谱联用仪(美国安捷伦公司)。 2.2 实验方法 (1)多糖化合物的提取及纯化方法称取800g洗净晒干的菱角壳，加人1:1乙醇-乙醚混合液，65℃水浴回流1～3h往脂；残渣中加水，9O～100℃水浴提取4～6h，更换净水反复提取2～3次，合并深红色多糖提取液，过滤，浓缩。向提取液加人3／7倍体积的乙醇，离心分离沉淀，冻干得多糖粗品F1。向上清液中加人1.0倍体积的乙醇，离心分离沉淀，冻干得多糖粗品F2。依此方法，向上清液中先后加人1.5和4.0倍体积乙醇，分别得到多糖粗品F3和F4。。若直接向原多糖提取液中加人4倍体积的无水乙醇，则得到混合多糖粗品F5。用Sevag法除往多糖粗品中的蛋白质，H2O2法除往色素，透析72h后，浓缩，冻干，即得多糖纯品； (2)多糖
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关于Elisa试剂盒竞争法测抗原的原理与步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
关于Elisa试剂盒竞争法测抗原的原理与步骤 当抗原材料中的干扰物质不易除去，或不易得到足够的纯化抗原时，可用此法检测特异性抗体。其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。标本中抗体量越多，结合在固相上的酶标抗体愈少，因此阳性反应呈色浅于阴性反应。如抗原为高纯度的，可直接包被固相。如抗原中会有干扰物质，直接包被不易成功，可采用捕获包被法，即先包被与固相抗原相应的抗体，然后加入抗原，形成固相抗原。洗涤除去抗原中的杂质，然后再加标本和酶标抗体进行竞争结合反应。竞争法测抗体有多种模式，可将标本和酶标抗体与固相抗原竞争结合，抗HBc ELISA一般采用此法。另一种模式为将标本与抗原一起加入到固相抗体中进行竞争结合，洗涤后再加入酶标抗体，与结合在固相上的抗原反应。抗HBe的检测一般采用此法。 实验步骤 1. 以稀释液将待检标本做适当稀释（预试中确定）加入包被有已知抗原的酶标板中（50ul/孔），加封口胶带于37℃作用30min。 2. 弃反应液，以冲洗液连续洗板5次并于吸水纸上拍干。 3. 加入酶标抗体（浓度在预试中确定）。加封口胶带后于37℃作用30min。 4. 重复第2步。 5. 加底物（浓度在预试中确定），加封口胶带后于室温下避光作用5-60 min，其间不时观察，显色满意后加终止液50ul/孔。 6. 于酶标仪测定OD值，OPD用492nm测定，TMB用450nm测定。 注意事项 1. 每次实验均应做阴性对照、阳性对照及空白对照（以PBS代替标本），后者为本底值，在分析实验结果时应扣除本底值，阳性对照
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外泌体速通手册（下篇——应用）
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
上周我们介绍了外泌体的概念与作用，本篇文章继续来了解外泌体相关知识，相信读完这两篇文章，大家能对外泌体有更深刻的理解。 01 应用 鉴于外泌体介导的疾病发病机制的证据越来越多，至少有四种策略可用于影响外泌体驱动的疾病，涉及抑制外泌体功能的各个方面。这些策略包括它们的产生，释放，细胞摄取或靶向促发疾病的特定外泌体组分。抑制外泌体介导的发病机制在癌症中具有原型相关性，其中外泌体与肿瘤发生和肿瘤相关病理学的许多方面密切相关。已经表明，循环外泌体的水平随癌症进展增加超过两倍并且与黑素瘤患者的存活相关。因此，正在开发旨在减少循环外泌体的负荷或阻断外泌体的关键组分的**性干预。然而，在此阶段需要谨慎，因为迄今为止大多数体外和体内研究都是使用高浓度的外泌体进行的。下面简单说明**策略。 抑制外泌体形成 已知各种细胞组分对于外泌体的形成是至关重要的，但是特定的抑制策略还在研发并且在疾病模型中的使用很大程度上未经测试。现阶段使用中性小分子抑制剂或通过用降血压药物阿米洛利（通常减弱内吞囊泡再循环）**，抑制神经酰胺形成（在内体分选和外泌体产生中很重要）可以减少外泌体的产量。阿米洛利的使用已被证明在体内通过阻断肿瘤来源的外泌体的分泌来减少小鼠和人类肿瘤细胞的生长是有效的，所述外泌体含有与膜相关的热休克蛋白72（HSP72），否则会介导对髓源抑制细胞的免疫抑制作用。 最近的一项研究表明，syndecan proteoglycans、syntenin，它们与PDCD6IP在调节外泌体形成，因此，可以通过RNA干扰（RNAi）或使用小分子抑制剂直接干扰这种相互作用减弱外泌体释放。替代尚未经过测试的方法可能是在空间上阻断特定的跨膜蛋白（例如TSPAN30、CD63）。 抑制外泌体释放 许多蛋白质与外泌体的分泌有关，但调节外泌体释放的确切机制仍然是难以捉摸的，并且不同细胞情况可能并不相同。在一些肿瘤细胞中，外来体释放依赖于GTP酶RAB27A，并且已被证明是合理的**靶标（
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氢化反应如何处理微通道反应器中的固体？
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
有机化学反应中出现固体几乎是不可避免的，如何解析和处理微反应器的固体是大家都关注的问题。在本文中，我们将给大家介绍如何应对微反应器中的固体。 一、有固体参与的反应 在有固体参与的反应中，固体物料是反应物之一。可以首先看看是否可以寻找合适的溶剂把它溶解后按液态处理，或者是否可以加热溶化，在高温熔融状态下进料。如果这两项都不能实现，那就需要把固体分散在溶剂或反应液中形成浆料，在进料系统中，通常需要外部驱动场，并且相应的分散效果取决于粒子的大小，密度和浓度。康宁反应器对于处理 200 微米以下的固体，固含量 10%以下是没有问题的。 氢化反应案例 催化加氢反应是有机化学中常见的反应，很多加氢反应需要苛刻的反应条件（高温，高压）并且放热剧烈，反应难于控制，随着安评和环保要求的提高，很多传统的工艺急需升级换代，寻找更加安全，有效的生产工艺技术。今天我们以双键还原和硝基还原为例，介绍微通道反应器在气-液-固非均相反应中的应用。 A. 双键还原反应 反应例一：产物有活泼基团，产物易于被过还原，从而产生杂质。釜式反应的化学选择性在80%左右，而在微通道反应器上，其选择性达到 95%以上，并且可以反应时间相当短。 反应例二：在高温下进行该反应，产品易于聚合，从而产生大量的聚合杂质。对于釜式反应，聚合类杂质高达到 15%以上；而对于康宁微通道反应器，能将聚合杂质控制在 3%以内。 B. 硝基苯还原反应 在达到同等收率 98%的情况下，在微通道反应器内，利用较高的反应温度，反应时间可大大缩短，活性催化剂用量大大降低，而且并不增加杂质含量。 C.多相加氢反应在康宁反应器中实现的流程图例： D. 微通道反应工艺优化的过程如下 整个过程在无氧条件下进行，氢气可一次加入或分布加入，反应能瞬时淬灭；固体粉末催化剂可以先在贮罐内制备成悬浮态浆料，使用隔膜泵输送入反应器；在物料出口处加背压阀以增加和调节反应器体系压力，同时连接气液分离器进行气液分离。从
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哺乳动物细胞培养过程 & 培养条件
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
哺乳动物细胞培养过程 哺乳动物细胞在培养过程中会经过组织提取，原代培养，传代培养等过程。传代培养会根据具体情况分为细胞株培养和细胞系培养。如下对各个过程进行简述： 原代培养：从动物机体取出组织后切碎，经过各种酶（常用胰蛋白酶），螯合剂（常用EDTA）结合机械方法（吸液管反复吸吹）处理，分散成单细胞，置于合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。一般把从动物有机体内取出细胞开始培养，到繁殖十代以内的细胞培养称为原代细胞培养。 经过原代细胞培养，细胞分裂繁殖，培养物逐渐增多长满培养空间，继而相互之间接触，发生接触抑制现象，生长速度逐渐减慢甚至停止。需要重新接种到新的培养瓶内进行传（继）代培养。 传（继）代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传（继）代培养。 细胞系：初代培养物开始第一次传代培养后的细胞，即称之为细胞系。如果细胞系的生存期有限，则称为有限细胞系。已获得无限繁殖能力，能持续生存的细胞系称为连续细胞系或无限细胞系。 细胞株：从一个经过生物学鉴定的细胞系，用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增值形成的细胞群，称为细胞株。再由原细胞株进一步分离培养出与原珠形状不同的细胞群，成为亚株。 哺乳动物细胞培养条件 不同哺乳动物细胞在各个阶段的培养，都需要有基础的培养条件，归纳如下： 1、无菌无毒的环境：对培养液和所有培养用具无菌处理；培养液中添加抗生素防止培养过程中污染；定期更换培养液以清除代谢产物，防止对培养细胞造成危害。 2、营养：液体合成培养基包含糖、氨基酸、促生长因子、水、无机盐、微量元素等；通常还需加入血浆、血清等天然成分 3、适宜的温度和pH：人和哺乳动物细胞最适宜温度大多为36±0.5℃。适宜的酸碱度为pH 7.2-7.4。 4、气体环境：气体环境一般为“95% 空气+5% CO2”混合气体。氧气是细胞代谢必须气体，CO2维持培养液pH。 德国WIGGE
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小鼠神经干细胞（C17.2）的培养操作规程及注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
小鼠神经干细胞（C17.2）细胞接受后的处理： 1） 收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。 2） 在显微镜下确认细胞生长状态时，在低倍镜（4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下，同时给细胞拍照各2-3张（10×，20×都要拍照），作为售后的依据。 3） 观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。 4） 贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长，可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基的原培养瓶中（或新的培养瓶中）。 5） 悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基）。 6）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后次传代建议1：2传代 。 细胞用途：仅供科研使用。 本公司的细胞培养操作规程，供参考 一．培养基及培养冻存条件准备： 1） 准备DMEM培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。 2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。 3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。 二． 细胞处理： 1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2） 细胞传
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大肠菌群平板计数法！
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
本法参照国标GB 4789. 3-2010规定的大肠菌群测定方法第二法。 ⒈检验程序见图3-7 ⒉原理 样品先经过VRBA琼脂平板的筛选，因其中含有胆盐和结晶紫，可以很好的抑制革兰氏阳性菌的生长，乳糖可以产酸，在中性红存在时，产生典型的紫红色周围有红色胆盐沉淀的菌落。因为其他阴性肠杆菌可以分解其他糖类产生红色菌落，因此需接种BGLB培养基证实。 ⒊操作步骤 样品处理及稀释同MPN法。 ①加样制作平板：选取2-3个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种2个无菌平皿，每皿ImL。同时取1mL生理盐水加入无菌平皿作空白对照。及时将15 -20mL冷至46℃的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）倾注．于每个平皿中。小心旋转平皿，将培养基与样液充分混匀， 待琼脂凝固后，再加3～ 4mL VRBA覆盖平板表层。翻转平板，置于（36±1)0C培养18~24h. ②平板菌落数的选择：选取菌落数在15 ~150CFU的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0. 5mm或更大。 ③证实试验：从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于BGLB肉汤管内，(36±1)℃培养24-48h，观察产气情况。凡BGLB肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。 ④大肠菌群平板计数的报告：经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以8. 3中计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每克（每毫升）样品中大肠菌群数。例：10-4样品稀释液1mL，在VRBA平板上有100个典型和可疑菌落，挑取其中10个接种BGLB肉汤管，证实有6个阳性管，则该样品的大肠菌群数为：100 X 6/10 X 10-4 CFU/g(mL)＝6. 0 X 10一3 CFU/g（mL)。 ⒋检验时应注意的事项 ①检验步骤 2008版前的大肠菌群的检验步骤采用三步法（乳糖胆盐发酵试验、EMB琼脂分离培养和证实试验）。第一步乳糖发酵实验是样品的发酵结果，不是纯菌的发酵试验，所以初发酵阳性管，经过平板分离和证实试验后，有时可以成为阴性。大量的数据表明，食品中大肠菌群检验步序的符合率，初发酵与证实试
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