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细胞坏死和细胞凋亡的区别
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
细胞程序性死亡 概念： 细胞程序死亡(programmed cell death，PCD)也常常被称为细胞凋亡，是生物体发育过程中普遍存在的，是一个由基因决定的细胞主主动的有序的死亡方式。具体指细胞遇到内、外环境因子刺激时，受基因调控启动的保护措施，包括一些分子机制的诱导激活和基因编程，通过这种方式去除体内非必需细胞或即将发生特化的细胞。 而细胞发生程序性死亡时，就像树叶或花的自然凋落一样，凋亡的细胞散在于正常组织细胞中，无炎症反应，不遗留瘢痕。死亡的细胞碎片很快被巨噬细胞或邻近细胞清除，不影响其他细胞的正常功能。 凋亡细胞的主要特征是(参见表)： ①染色质聚集、分块、位于核膜上，胞质凝缩，最后核断裂，细胞通过出芽的方式形成许多凋亡小体; ②凋亡小体内有结构完整的细胞器，还有凝缩的染色体，可被邻近细胞吞噬消化，因始终有膜封闭，没有内溶物释放，故不会引起炎症; ③凋亡细胞中仍需要合成一些蛋白质，但是在坏死细胞中ATP和蛋白质合成受阻或终止; ④核酸内切酶活化，导致染色质DNA在核小体连接部位断裂，形成约200bp整数倍的核酸片段，凝胶电泳图谱呈梯状; ⑤凋亡通常是生理性变化，而细胞坏死是病理性变化。 理论意义： 程序性细胞死亡在生物发育和维持正常生理活动过程中非常重要.在发育过程中，细胞不但要恰当地诞生，而且也要恰当地死亡。 例如，人在胚胎阶段是有尾巴的，正因为组成尾巴的细胞恰当地死亡，才使我们在出生后没有尾巴.如果这些细胞没有恰当地死亡，就会出现长尾巴的新生儿.从胚胎、新生儿、婴儿、儿童到青少年，在这一系列人体发育成熟之前的阶段，总体来说细胞诞生得多，死亡得少，所以身体才能发育.发育成熟后，人体内细胞的诞生和死亡处于一个动态平衡阶段，一个成年人体内每天都有上万亿细胞诞生，同时又有上万亿细胞“程序性死亡”.两者处于一种动态平衡中，使人体器官维持合适的细胞数量得以正常运作的，正是“程序性细胞死亡”机制
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Seahorse XF 细胞线粒体压力测试技术服务
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
Seahorse XF 细胞线粒体压力测试 Seahorse XF 细胞线粒体压力测试全面了解线粒体功能 1、实验背景 安捷伦 SeahorseXF 细胞线粒体压力测试通过在 Seahorse XFe 和 XF 细胞外流量分析仪上直接测量细胞的氧消耗速率（OCR）来表征线粒体功能的关键参数。它是基于培养板的活细胞实验，能够实时监测 OCR。 实验使用 XF 传感器探针板内置的加药孔在实验过中将呼吸作用的调节剂加入细胞孔中，从而得到反映线粒体功能的关键参数。实验试剂盒里的调节剂为寡霉素（Oligomycin），羰基氰-4（三氟甲氧基）苯腙（Carbonyl cyanide-4 (trifluoromethoxy)Phenylhydrazone，FCCP），鱼藤酮（Rotenone）。 对线粒体功能进行评估使研究人员能够进一步了解代谢在细胞生理学，疾病病理学和病因学中的关键作用。SeahorseXF细胞线粒体压力测试是测量细胞线粒体功能的金标准，被广泛应用。本实验为了解线粒体功能障碍的原因和深入理解代谢途径，信号和表型提供了视角。 Seahorse XF 细胞线粒体压力测试词汇表： 基础呼吸（Basal respiration）：用来满足细胞ATP需求和线粒体质子渗漏的氧消耗。表示细胞在基础条件下的能量需求。 ATP产生（ATP Production）：加入ATP合酶抑制剂寡霉素后减少的氧气消耗速率，代表基础呼吸中被用来驱动ATP产生的部分。表示用来满足细胞能量需求的线粒体ATP产生。 H+（质子）渗漏（H+ (Proton) leak）：与 ATP产生不偶联的基础呼吸的剩余部分。质子渗漏可以被看作是线粒体损伤的标志，也可被看作是一种调节线粒体ATP产生的机制。 最大呼吸（Maximal respiration）：加入解偶联剂FCCP之后获得的最大氧气消耗速率。FCCP通过刺激呼吸链以最大能力运转模拟生理的“能量需求”，导致底物（糖，脂肪和氨基酸）的快速氧化以应对这一代谢挑战。显示细胞能够达到的最大呼吸速率。 备用呼吸能力（Spare respiratory capacity）：这个测量指标表示细胞应对能量需求的能力以及细胞呼吸与其理论最大值的差距
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Seahorse XF实时ATP速率测定技术服务中常见问题
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
实验背景 细胞三磷酸腺苷(ATP)的产生速率是一种描述细胞代谢的信息含量很高的测量，因为 ATP是细胞内普遍存在的主要能量货币。细胞的代谢调控使细胞根据ATP需求的变化调整ATP产生的变化来维持总的细胞内的ATP水平。 安捷伦Seahorse XF实时ATP速率测定被设计用来测量活细胞总的ATP产生速率。更重要的是，这个实验能够区分哺乳动物细胞内两条主要的产生ATP的代谢途径线粒体氧化磷酸化（OXPHOS）和糖酵解ATP的产生。 常见问题 如果检测液中含有不同的氧化底物（不同的P/O值），mitoATP产生速率如何计算？ 为了将ATP偶联的呼吸转换为线粒体的ATP产生速率，在电子传递链末端每还原一个氧原子，ADP磷酸化为ATP的化学计量学必须得到确定。不同的底物理论上最大的P/O值不同，并且依赖于化学计量学/底物氧化通路，以及F1F0 ATP合酶的效率。在标准的XF实验条件下，细胞被供给底物混合物（主要是葡萄糖，丙酮酸和谷氨酰胺），且通常内源性底物储备（糖原，脂肪酸，其他氨基酸）可用于线粒体氧化。因此，用几种细胞系进行了测试并确认P/O值2.75准确代表了外源性和内外源性氧化底物混合物的平均P/O值。 当进行诱导的XF实时ATP速率测定时，诱导的速率是如何计算和报告的？ 在XF实时ATP速率诱导实验中Summary Printout和Measure Sheet中的 Average Assay Parameter Calculations显示的Induced Rate(s)是用急性注射和寡霉素注射之间所有测量的平均值计算的。然而，每个时间点的诱导速率可以从Kinetic Rate Data（Measure Sheet）中获得。 XF实时ATP速率测定中定义的XF ATP速率指数是什么？ XF ATP速率指数是mitoATP产生速率与glycoATP产生速率的比值（即mitoATP rate/glycoATP rate）。这个比值是一个细胞代谢表型的定量指标。代谢指数大于1代表大于50%的细胞ATP来自线粒体的ETC/氧化磷酸化，而指数小于1表示大于50%的总ATP是糖酵解途径产生的。因为代谢指数是比值测量，所以它对于代谢表型的改变或
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细胞能量代谢服务Seahorse XF实验中常见问题之一
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
Qustions&解答Answers Seahorse XF 实验常见问题及解答 01可以使用超出保质期的探针板或重复使用探针板吗？ Agilent 无法保证因使用超出保质期的探针板或重复使用探针板而得到的实验数据质量(有效性)，为得到最佳的、最真实的数据，请使用有效期内的探针板及其它消耗品。 02探针板水化超出水化时间怎么办？ Agilent建议将探针板放入37℃无CO2培养箱中水化过夜以得到最优结果。最短水化时间是37℃水化12小时。探针板最长水化时间是37℃水化72小时，但由于液体蒸发需要补充(或更换)校准液，因此37℃无CO2培养箱务必放置水盘保证湿度。 03Fluxpak各种探针板有什么区别？ 探针板是Fluxpak的组成部分，一个Fluxpak包含探针板、水化板、校准液和细胞培养微孔板。以上各消耗品数量因所购Fluxpak类型而不同。探针板不能单独订购，必须通过订购Fluxpak来购买，但细胞培养板和校准液可单独购买。订购前，需要了解使用机器的型号及所需要的实验次数，订购与之配套的Fluxpak。 04计划明天做实验，我今天要做些啥？ 实验前一天，打开主机，打开电脑，同时点开Wave软件，确保是Connected的状态，水化探针板，贴壁细胞提前接种到Seahorse的细胞培养板里。 05探针板水化听说有二步，是这样吗？ 是的，96孔探针板，实验前一天，用无菌水；第二天做实验前，弃去无菌水，更换上37℃预热好的校准液，再放置无CO2恒温箱孵育1小时，这样二步法水化，避免了探针头上的小气泡；24机型探针板一步法水化即可，但是还是建议用之前手动排一下气泡； 06一次实验可以只使用探针板其中的一部分吗？ 为了将所有药物或化合物成功地注入细胞培养孔中，Agilent建议水化整个探针板并因需要将相同字母标注的全部加药孔注入药物（请参考实验流程中关于加载药物的注意事项）。背景孔的加药孔也必须加上药物，保证所有的A加药孔体积一致，B、C、D孔同理，否则会造成打药失败； 07实验中为何必须设置背景
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细胞能量代谢服务Seahorse XF实验中常见问题之三
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
Qustions&解答Answers Seahorse XF 实验常见问题及解答 29 Seahorse数据分析软件Wave可以免费下载安装吗？ 是的，可在安捷伦找到Wave软件下载，并且免费下载安装。 30 Seahorse XF 仪器模板选项中没有想检测试剂盒的模板怎么办？ 可在桌面板wave软件中将相应实验模板先导出到 U 盘中，再导入XF 仪器模板库即可。 31 Seahorse数据分析软件导出选项中没有对应的report generator？ 当软件导出选项中无相应的report generator时，请移步到Agilent细胞分析软件下，下载最新wave分析软件，也可以在对应试剂盒的菜单中下载对应的report generator。 32 Seahorse Wave 分析软件，我的电脑怎么都安装不上，怎么办？ 当软件无法安装时，可采用 Seahorse Analytics云分析， 这是一款网页形式的 Seahorse XF 数据分析软件，用户可以通过任何一台电脑安全地存储、访问和分析数据。极大地简化了用户的数据分析流程 33 Seahorse XF 实验后，是否需要做归一化处理呢，有哪些方法呢？ 功能生物数据的归一化是原始数据展示和后续分析工作流程中的关键因素，以确保对结果的准确一致的解析。XF 代谢分析在这方面也是如此，大多数实验需要进行某种形式的归一化。无论是比较不同的细胞类型、基因修饰还是化合物处理，都必须根据共同的参数将数据归一化以便正确比较。 常用的方法，蛋白定量，细胞成像计数，核DNA的检测等。 34 购买的Fluxpak包装，为啥细胞板总是多几块呢？ Agilent 充分考虑到实验中的各种情况，如果你发现细胞种的过密了或者发生了污染，那么就需要更换新的细胞板重新铺板。 35 Seahorse相关试剂存储条件是怎么的呢？ Agilent 基础培养基类，请4℃避光保存，避免冻结。FAO和谷氨酰胺需要存放在-20℃；板子及常见的试剂盒，室温存储即可。 36 Seahorse XF 相关试剂盒的说明书在哪呢，有中文的吗？ Agilent 一直提倡遵循环保理念，当您收
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常见问题解惑---慢病毒
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
常见问题解惑---慢病毒 一、慢病毒是什么？ 慢病毒是逆转录病毒的一种，具有逆转录病毒的基本结构和特性：整合入宿主细胞基因组，长期表达，可用于转基因动物制备；但也有不同于逆转录病毒的组份和特性：比逆转录病毒具有更高的滴度，不仅可以感染分裂期细胞，更重要的，还能感染非分裂期的细胞。 吉凯提供的慢病毒为“zx”性病毒，即病毒感染目的细胞后不会再感染其他细胞，也不会利用宿主细胞产生新的病毒颗粒。慢病毒中的毒性基因已经被剔除并被外源性目的基因所取代，属于假型病毒。但该病毒仍然具有可能的潜在的生物学危险 二、慢病毒如何稀释？ 慢病毒使用时，先将病毒从-80℃冰箱取出，冰浴融化，可使用D-hanks，PBS，生理盐水或培养基进行稀释。 三、慢病毒生物安全性如何？ 重组慢病毒的生物安全等级被确定为II级，需要在生物安全级II级的条件下进行慢病毒操作实验。 四、慢病毒如何保存？慢病毒的滴度单位是什么？ 慢病毒长期保存则需放置于-80℃或更低温度的环境中。在-80℃环境中慢病毒可以稳定存放6个月以上。尽可能避免反复冻融，否则会降低病毒滴度。亚载提供的慢病毒的滴度单位是TU/ml (transduction units/ml) ，即每毫升中含有具有生物活性的慢病毒颗粒数。如：慢病毒滴度为 1E+8 TU/ml，即每毫升病毒液中含有1E+8个具有生物活性的慢病毒颗粒。 五、慢病毒使用安全注意事项有哪些？ 1.病毒操作时建议使用生物安全柜。 如果使用普通超净工作台操作病毒，请不要打开排风机； 2.病毒操作时请穿实验服，带口罩和手套；操作病毒时特别小心不要产生气雾或飞溅。如果操作时超净工作台有毒污染，请立即用1%的SDS溶液擦拭干净； 3.如需要离心，应使用密封性好的离心管，或者用parafilm膜封口后离心，而且尽量使用组织或细胞培养室内的离心机； 4.用显微镜观察细胞感染情况时应遵从以下步骤：拧紧培养瓶或盖紧培养板，用70%乙醇清理培养瓶外壁后拍照，离开显微镜实验台之前，用70%乙醇清理显微镜载物台
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Western blot检测样本收集运送注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
样本运输条件及保存条件 组织样本: 1. 组织样本应立即放置-20℃。 2. 运输过程采用液氮，干冰，市内运输可选用冰袋。 3. 样本量不低于100 mg。 4. 请告知组织种属和类型，如肝,脾等。 细胞样本 1. 有严格时间节点的实验需客户自行裂解样本，提取蛋白，采用干冰运输。 2. 客户离心搜集好的细胞、悬浮细胞、贴壁细胞都需用冰袋维持4℃运输，不可使用干冰和液氮。 3. 所提供细胞量不低于106。 特殊样本 1. 全血采用冰袋维持4℃运输，严禁用干冰和液氮运输，血清和血浆可采用液氮，干冰，冰袋运输。 2. 植物组织应采用干冰或液氮运输，防止植物褐化，氧化。 3. 客户处理好已经变性的样本，液氮，干冰，冰袋均可运输。
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黄连解毒汤对Aβ1-42诱导AD大鼠学习记忆能力
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
目的 ：探讨黄连解毒汤对 β淀粉样蛋白（β）诱导阿尔茨海默病（）模型大鼠学习记忆能力和胆碱能系统的影响。结果 ： 与正常组比较，模型组动物脑组织皮质区神经元坏死、海马区锥体细胞或颗粒细胞坏死、排列紊乱和炎性细胞浸润等病理改变明显，大鼠逃避潜伏期延长、逃逸平台次数降低、有效区域停留时间、有效区域游泳路径均减少（P，P），血清中 ，浓度降低（P），海马中 ，，含量，α蛋白，α表达降低（P）；与模型组比较，黄连解毒汤中剂量组逃避潜伏期变短（P），逃逸平台次数、有效区域游泳路径、有效区域停留时间增加（P，P），血清 ，含量和海马AchE，，α表达上升（P），海马 α蛋白表达升高明显（P）；高剂量组有效区域有效区域停留时间延长（P）；逃逸平台次数增加，血清 ，含量和海马 ，，α蛋白，α表达上升（P）。结论：黄连解毒汤可显著改善 β诱导 大鼠学习记忆能力，其作用机制可能与改善 β所导致的胆碱能系统损伤，增强胆碱能系统功能有关。
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细胞收样注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
客户提供细胞需满足以下要求： (1)需要我公司进行传代培养的细胞，需告知细胞名称、培养条件等信息，目前我公司对无细胞名称的细胞将不提供冻存服务，无培养条件的细胞将无法提供及时的传代培养等操作，敬请知晓； (2)客户提供的可直接进行实验的细胞，需保证细胞量，具体细胞量可根据实验咨询技术人员，流式检测样品需提供荧光信息； (3)寄送冻存细胞需用液氮或者干冰保存运输； (4)寄送培养细胞需拧紧培养瓶，封口膜封好，常温运输，严禁冰冻，长途运输需装满培养基； (5)客户提供的细胞需保证细胞的生长状态，细胞状态以我公司技术人员收到细胞后的观察状态为准，敬请知晓。 客户提供实验中的相关试剂，需提供以下信息： (1)提供厂家货号、保质期、保存条件等信息； (2)客户配制好药品需提供名称、浓度、安全性等信息； (3)请告知具体的实验方案要求； (4)分组明确（具体分组、作用时间、浓度）； (5)具体实验内容要明确（处理之后的细胞做何种检测）； (6)细胞和试剂的来源备注明确。 客户提供组织进行细胞分离需满足以下要求： (1)组织分离需提前告知，并预约时间； (2)确保提供组织样品必须新鲜（当天取材，一般从取材到运输到我公司的时间不超过4 h为宜）； (3)组织样本只能在常温或4度条件保存或运输，严禁冰冻； (4)需提供足够的组织量； (5)有特定分离方法要求的需提供说明； (6)血液样本需用抗凝管保存； (7)提供的血样或者组织需提供来源说明（特别是病人组织，我公司暂不能接受具传染性的样本）。
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如何正确的操作细胞冻存？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
1.冷冻保存方法: (1)传统方法:冷存管置于4C10分钟-->-20C30分钟-->-80C 16~ 18小时(或隔夜)-->液氮槽vaporphase长期储存。 -20C不可超过1小时，以防止胞内冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80C冰箱中，惟存活率稍微降低些。 (2)程序降温:利用已设定程序的等速降温机以-1~-3C/分钟之速度由室温降至(-80C以下) -120C，再放在液氮槽vaporphase长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。 (3)HAKATA无血清细胞冻存： 加入HAKATA无血清细胞冻存液制成悬液，直接冻于-80°C，可保存≥5年。 2.操作步骤: (1)冷冻24-48小时更换半里或全里培养基，使细胞处于指数生长期。 (2)配制冷冻保存溶液(使用配制):另取离心管，加入培养基、血清，逐滴加入二甲基亚矾(DMSO)至20%浓度，即制成双倍的冻存液，置于室温下待用。 (3)离心收集培养之细胞，用加血清的培养基重悬起细胞，取少里细胞悬浮液(约0.1m1)计数细胞浓度及冻存活率。 (4)取与细胞悬液等里的冻存液，缓慢逐商加入细胞悬液，并晃动试管，制成细胞冻存悬液( DMSO醉后浓度为5~ 10%)，使细胞浓度为1~5x 10*cells/ml，混合均匀，分装于已标示完全之冷冻保存管中，1~ 2nl/mal,并取.少里细胞悬浮液作污染检测。严密封口后，注明细胞名称、代数、日期。然后进行冻存。
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您的细胞养得好吗？怎样才能养好呢？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
细胞培养是实验室里最常见和最基本的实验了。您的细胞养的好吗？您对细胞培养体系了解吗？培养基对细胞培养影响大吗？…… 细胞培养，蕴含着大学问。有时候细胞状态不好，转染 、药筛这些实验根本就没办法做。影响细胞培养的因素很多，让我们先从培养基和血清说起。 培养基 细胞培养基是人工模拟细胞在体内生长的营养环境，是提供细胞营养和促进细胞生长增殖的物质基础。培养液或培养基的含义几乎相同，英文都是medium。当它是粉剂时，倾向性地称为培养基，而将粉剂配成液体后，多称为培养液。培养液中常常补加血清、抗生素等成分。培养基主要包括天然细胞培养基、合成细胞培养基和无血清细胞培养基等。 经典的培养基有很多种，Invitrogen (GIBCO)、Thermo Fisher(HyClone)、Sigma、Procell（普诺赛）等公司都可以提供。其中DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12都是应用最广泛的培养基。其他如M199、IMDM、L15培养基等也用于某些细胞的培养。 培养基种类及介绍(部分） MEM 是由Eagle’s基础培养基(BME)发展而来的，其中增加了组分的范围及浓度。 DMEM Dulbecco改良的BEM(DMEM )培养基是为小鼠成纤维细胞设计的，现在常用于贴壁细胞的培养。DMEM的氨基酸浓度是MEM的两倍，维生素浓度是MEM的4倍，采用双倍的HCO3-和CO2浓度起到更好的缓冲作用。最初的配方中葡萄糖含量为1000 mg/L，后来为了某些细胞的生长需要，将葡萄糖含量又调整为4500 mg/L，这就是大家常说的低糖和高糖了。 RPMI 1640 是专为淋巴细胞培养 而设计的，现在已广泛应用于悬浮细胞的培养。 MEMα 含有附加的氨基酸、维生素以及核苷和脂肪酸，它可广泛应用于各种细胞类型，包括对营养成分要求苛刻的细胞。 Ham’s F12 是为在低血清浓度下克隆CHO细胞而设计的，现在也广泛应用于克隆形成率的分析及原代培养。F12还可以与DMEM 等体积混合使用，得到一种高浓度与成分多样化相结合的产物，这种培养基已应用于许多原代培养及更难养的细胞系的
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细胞培养问题集锦问与答（四）
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
细胞培养系列第四期，继续为大家分享细胞培养中遇到的问题集锦。 16、 问：买的无血清冻存液说明书上写的直接放入-80度 答：那是直接冻存的，大多数冻存液都是梯度冻存 17、 问：初学细胞培养，养的是hepG2，每次到3天的时候培养基就会发黄，镜下看到像是死细胞聚集成团的大片东西，请问这种情况是染菌了吗？请问如何处理?那种像死细胞聚集成团的感觉是绿色，请问这是染菌吗？（不是每次这样，之前都很好，现在三瓶里有一瓶出现这种情况） 答：绿色的感觉像真菌，也有可能是细胞密度高了，细胞代谢物多。 18、 问：有用清除剂处理过一礼拜，看着挺干净，但是一礼拜培养三代又出来了，这种是没清除干净还是，可能环境有污染重复的染到了？ 答：这个污染比较顽固，至少要杀2周，甚至一个月 19、 问：真菌污染一般原因是什么啊 答：真菌里的根霉一般是环境 20、 问：贝克曼细胞计数仪中DT值是啥意思？转染后DT值会增加吗？为什么会增加呢？ 答：是群体倍增时间，就是细胞数增长一倍需要的时间，一个常用的评价细胞生长的指标。我们接触的一般是增加的。大量表达外源蛋白，会占用细胞生长的资源，这个可能是主要因素。外源基因插入基因组可能也有影响。 以上就是本期的内容，更多资讯，欢迎点击安培生物关注更多技术交流。 安培生物科技有限公司介绍： 安培生物坚持为生命科学研究、活体动物转染、大规模生物生产、基因和细胞**领域客户，提供独特细胞体内可代谢的核酸转染试剂；inviCELL™Platelet lysate无动物血清产品旨在支持广泛的细胞扩增和生产，包括培养间充质干细胞和多种免疫细胞系等，为制药公司或者生物技术公司提供无血清细胞培养规模生产服务；提供以植物生物为平台基因序列全人源化、独特的细胞培养可分解3D基质胶产品；提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、对细胞无毒性影响、高纯度的一型胶原蛋白产品。安培生物专注为生物医药领域提供优质的产品和技术服务，努力发展为基因**
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细胞培养出现小黑点是什么原因 如何解决？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
在细胞培养中常可见到细胞及培养液中有一些大小不等、形态不同的黑色未知颗粒，去网上查询得到的答案也多种多样。 那么这些小黑点究竟是什么？我们又该怎么去应对这种情况？ 非生物类 细胞碎片类 在细胞培养的时候， 由于细胞代谢、物质交换、周边环境变化，尤其是在从37度培养箱中拿出来观察的过程中，由于液体培养基的比热较大，液内温度高于外界温度，造成冷热交换、小范围内形成液体流动加剧，当然这些小碎末就会被搅动起来形成似乎“游动”的感觉；随着细胞培养的继续，部分细胞开始衰亡，细胞膜结构破裂，破裂之后的细胞内容物泄露到培养液中。尤其是溶酶体的破坏，连续性地造成其他细胞和细胞器的损伤，如果换液不很勤，又会出现进一步破坏和残渣的出现； 再者，“小黑点”问题是很多细胞培养者已经发现的问题，但到目前为止尚未找到其监测和排除的试剂和手段，这首先是由于所谓“小黑点”病原体根本难以收集和捕捉， 这也从另一个侧面证明了“小黑点”问题的难以确定性；再说任何一种外来的微生物在培养基中都会有生命活动的反应和表现，而不是简单地运动那样的外观性表现。 举一个例子：如果“小黑点”的运动状况已经到了用显微镜已经可以观察出的程度，其营养代谢和能量需求也就可想而知。这样，培养液中的影响消耗、酸碱含量程度等都要发生明显变化。 比如说：迅速的、大含量的沉淀， pH值的迅速下降，细胞大量破碎死亡、引发其它类型微生物侵染等等。而这些状况，在所谓的“小黑点”感染中，是很难观察到的。同时“小黑点”的出现而影响细胞状态似乎得不到有力的证据。倒是细胞状态下降的时候，“小黑点”明显增多了。很有可能是细胞状态下降时，细胞衰亡产生的细胞碎片。所以小黑点属于细胞碎片是比较可能和合理的。 玻璃培养瓶中的类似氧化硅的东西 网上有一篇文章说，小黑点其实不是一种生物，是无机物，其本质是玻璃培养瓶里的硅颗粒。可影响细胞生长，细胞状态好时，不明显。细胞状态较差，数量少时才容易看到
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细胞培养常遇问题集锦（六）
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
26、 ▲问：有时候细胞和细胞之间就会出现这种小黑点，高倍镜下看少数在原地打转，但是培养液不浑浊。那其中不会动的是细菌吗？ 答：原地打转的可能为黑胶虫，会动的是细菌，细菌有鞭毛。黑胶虫是一种现象，身份可能是细菌，有鞭毛会游动。 27、 问：想问一下，已经使用三抗以及抗支原体的药物培养细胞一周，但还是有少量黑胶虫，但细胞生长状态还好，这样的话接下来还需要处理嘛？好像有一种有少量黑胶虫但不影响细胞状态可以不做处理的说法？ 答：一周，黑胶虫数量减少，已经见效了，但还是要继续处理，因为黑胶虫和细胞有此消彼长的特点，细胞复苏或刚传代时，因为此时细胞状态差，所以特别容易爆发黑胶虫，黑胶虫数量增多，当细胞复苏率增强时，黑胶虫数量会减少。 28、 问：话说养细胞的时候，一直加双抗，会对哪些实验有影响呢？之前听说做干扰的时候，要撤双抗。 答：一般做功能学实验，药理学，毒理学，信号通路都要撤掉双抗。 29、 问：Cho传代接种密度0.4 e5，4天才长到11e5，是怎么回事？DT从16.5变成20了。一直都用的一样的培养基，是不是冻溶会影响？是cho细胞，摇瓶培养。 答：检查一下营养体系是不是不适合，如不是，那就考虑是胰酶消化这一步是不是有问题。你这边是把cho贴壁驯化成悬浮了。 30、 问：请问怎么培养破骨细胞？怎么提取到培养的protocol？遇到一个情况，怎么消化也消化不下来，想从源头找一找，是什么原因？ 答：破骨细胞的培养方法主要有：骨髓机械分离法，骨髓细胞诱导法，脾干细胞诱导法，血液单核细胞诱导法，小鼠RAW264.7细胞系诱导法及骨巨细胞瘤分离法。 以上就是本期的内容，更多资讯，欢迎点击安培生物网站链接了解更多技术与产品资讯。 安培生物科技有限公司介绍： 安培生物坚持为生命科学研究、活体动物转染、大规模生物生产、基因和细胞**领域客户，提供独特细胞体内可代谢的核酸转染试剂；inviCELL™Platelet lysate无动物血清产品旨
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流式细胞术中如何辨别死细胞？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
流式样品中不可能完全去除死细胞，而在流式分析时又不希望有死细胞的干扰，所以如何在流式分析和流式分选时明确分辨死细胞就成为流式细胞术的一个重要研究内容。目前，有四种方法供流式分析者区分死细胞和活细胞。 （1）对角线死细胞 活细胞能产生非特异性荧光，只是非特异性荧光信号相对于荧光素发射的荧光信号较弱。死细胞也可以产生非特异性荧光，而且死细胞产生的非特异性荧光要明显强于活细胞，有的甚至强于荧光素产生的荧光信号。非特异性荧光产生的荧光波长没有选择性，并不是局限于某一荧光波长范围，而是处于连续的波长范围，所以一般所有的荧光通道都能够接收到死细胞产生的非特异性荧光信号，而且其在所有波长范围的荧光强度相差不多，各个荧光通道接收到的死细胞的荧光强度都是处于同一个等级的。在散点图上死细胞是位于对角线上的，而且不同的死细胞，其非特异性荧光的强度不同，且差异可能很大，强度大的可能是强度小的几十倍，甚至几百倍。所以从整体来看，死细胞的非特异性荧光强度呈现出从低到高的连续性分布，表现在散点图上死细胞刚好处于对角线上，如图A所示呈线型，与活细胞群体的圆形分布有明显区别。流式分析者可以根据死细胞的这一特点区分活细胞和死细胞。 死细胞位于散点图的对角线上，但是对角线上的细胞却并不一定都是死细胞，因为双阳性细胞如果在x轴和y轴的荧光信号相似时，也可以位于对角线上。所以，散点图对角线上的细胞可能是死细胞，也可能是双阳性细胞，但是这两种细胞的形状是不一样的，死细胞呈现连续的线型分布，而双阳性细胞群呈现圆形的群体分布，可以从对角线上的细胞群体的形状大致判断细胞的性质。圆形的双阳性细胞群和线型的死细胞群有时相互重合在一起，这时依靠散点图无怯区分双阳性细胞和死细胞。如图B所示，样品细胞为正常小鼠脾脏细胞，标记FITC抗CD3抗体和PE抗CD4抗体，FITC和PE双阳性的CD4+T细胞与死细胞也在一起，无法区分。 如上所述，死细胞的非特异性荧光
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