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什么是瘦肉精及检测的重要性？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
瘦肉精是一类药物，而不是某一种特定的药物，任何能够促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的物质都可以叫做“瘦肉精”。在中国，通常所说的瘦肉精是指克伦特罗(Clenbuterol)，而普通消费者则把此类药物统称为瘦肉精。当它们以超过**剂量5-10倍的用量用于家畜饲养时，即有显着的营养“再分配效应”——促进动物体蛋白质沉积、促进脂肪分解抑制脂肪沉积，能显着提高胴体的瘦肉率、增重和提高饲料转化率，因此曾被用作牛、羊、禽、猪等畜禽的促生长剂、饲料添加剂。 此类药物主要是肾上腺类，β激动剂，因为能够促进瘦肉生长、抑制动物脂肪生长，所以统称“瘦肉精”。瘦肉精让猪的瘦肉率提高，带来更多经济价值，但它有很危险的副作用。早报道的瘦肉精中毒事件是1998年供港活猪引起的，所以瘦肉精检测比较重要的呢。 瘦肉精胶体金快速检测卡，用于定性检测饲料、肉、尿液中瘦肉精-盐酸克伦特罗残留,沙丁胺醇残留，莱克多巴胺残留,整个检测过程（包括样本前处理）需要约5-10分钟，检测尿液的检测限为3ppb,饲料的检测限为30µg/L(30ppb)。试剂盒灵敏度：0.1-0.2ppb(µg/kg)，提供提取液，使用方便。
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27个细胞传代培养常见问题
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
1、一般拿到细胞后，应该注意什么? 收到细胞先不开盖,用酒精将整个细胞瓶外壁进行消毒，放在培养箱静置若干小时后(看细胞密度而定)在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照(建议收细胞时的培养基拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各两张)，排除细胞本身污染的情况。 2、何时须更换培养基? 视细胞生长密度而定，常规细胞2-3天更换培养基。 3、细胞何时进行传代较好? 一般情况下细胞生长至完全汇合后就应该传代，所有细胞生长都有一个要求不宜生长过密(也就是常说的长老了)，但有接触抑制的细胞，在汇合前就必须进行传代，这类细胞一般在密度70-80%就进行传代，否则会引起细胞分化。 4、贴壁细胞如何进行传代? 去掉原T25培养瓶里面的培养基，T25瓶加3-4 ml PBS洗1-2次;弃PBS，再加1.5 ml的Trypsin-EDTA (1X)消化液消化细胞，显微镜下观察，待细胞变圆，细胞间隙明显，部分细胞刚开始脱离瓶壁，加4 ml左右完全培养液混匀终止消化，将细胞小心吹打下来，1000 rpm/min室温离心5min;弃上清，细胞沉淀用完全培养液重悬，按要求分瓶(视细胞密度而定1:2-1:3，1:3-1:6，1:6-1:8)，每T25瓶补足培养基至5-6 ml，37℃、5%CO2孵箱培养。 5、悬浮性细胞应如何传代处理? 一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，将细胞悬液移入离心管中，1000 rpm/min 室温离心5 min。弃上清，细胞沉淀用完全培养液重悬，按要求分瓶(视细胞密度而定1:4-1:8)，每T25瓶加完全培养液至4-5 ml，37℃、5%CO2孵箱培养。有些悬浮细胞趋于成团生长，此时细胞生长状态良好，当补液时，需避免反复吹打。 6、贴壁细胞传代如何使用胰酶? 一般使用trypsin-EDTA浓度为0.25% trypsin-0.53 mM EDTA.2Na或0.05%trypsin-0.02 mM EDTA.2Na。消化液浓度过高时，易造成培养基中细胞碎片增多，黑渣子增多，常规细胞传代时建议用0.05%的胰酶进行消化
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WB，IP，IHC，IF，ChIP，FC所用的抗体有什么区别？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
生物医学科研工作者的科研基本离不开抗体，WB（western blot）,IP(immunoprecipitation), IHC(immunohistochemical 免疫组化),IF(immunofluorescence 免疫荧光),ChIP(Chromatin immunoprecipitation)，FC(flowcytometry 流式细胞) 都需要用到抗体，那么这几种实验方法中的抗体有什么区别呢？ 我们在CST上面找p53的抗体，得到了如下的页面 可以看出p53抗体有很多种，并且每种抗体能做的实验还都不一样，那么为什么不同的抗体能做的实验不一样呢？这要从抗体是如何制备的开始。 1. 如何才能成为一个优秀的抗原？ 制备抗体之前最重要的是如何制备抗原。一个良好即优秀的抗原应该具备的素质是 a. 分子足够大。 我们知道抗原与抗原之间的区别是由抗原决定族决定的，抗原决定族又叫做表位（epitope），这些表位通常是由6-8个氨基酸组成的。而且要5-10kD才有一个表位，所以一些分子量太小的蛋白质或者多肽很难有一个表位的，也很难作为一个合格优秀的抗原。注意表位有两种形式，一种是线性表位，即由氨基酸的序列决定的。另外一种是构象表位，是由氨基酸的空间结构决定的。两个相隔很远的氨基酸序列在空间结构上靠在一起可以形成一个结构表位。 b. 外源性强。我们常常将抗原注射到动物内体得到抗体，因此抗原必须要与该动物体内的成分区别性大，因为动物对自身的物质形成了免疫耐受，如果抗原与动物自身的物质非常相似，则很难引起强烈的免疫应答，也很难得到好的抗体。 c. 结构尽量复杂。有些物质即使分子量很大也不能算是一个合格的抗原，比如明胶分子量特别大，也属于外源性强的物质。但是明胶的氨基酸基本上是直链的氨基酸，在体内容易被降解，类似的淀粉、核酸、多聚赖氨酸也是一样，不是一个合格的抗原。 2. 制备抗体中常用获得抗原的方式有哪些？ a. 人工合成多肽。很多家族蛋白相似度很高，比如actin家族中 a-actin, b-actin, r-actin三者之间非常相似，基本上只差几个氨基酸，而这些差别的氨基酸往往还被包
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细菌污染的原因有哪些？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
污染向来是在细胞培养中的大问题。预防或治理污染是细胞培养成功的关键因素。我们在细胞培养时，在开始阶段就要十分重视污染问题，否则会功尽弃，这样不仅浪费时间，也会浪费人力、物力。 (一) 有哪几类污染？ 在细胞培养过程中的污染不只是指微生物，而且还包括所有混入培养环境中的、对细胞生存有害或造成细胞不纯的物质，包括生物和化学物质。 1、细菌污染 细菌污染是实验室细胞培养中常见的污染，即使在细胞培养液中加入了抗菌素，也可能因为操作不慎而引起污染。见的有革兰氏阳性菌，如枯草杆菌以及大肠杆菌、假单胞菌等革兰氏阴性菌，其中又以白色葡萄球菌较常见。培养细胞受细菌污染后，会出现培养液变混浊，pH改变。污染后细胞发生病理改变，胞内颗粒增多、增粗，后变圆脱落死亡。 2、真菌污染 真菌污染是细胞培养过程中见的一种，的真菌有烟曲霉、黑曲菌、孔子霉、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌。培养细胞受真菌污染后，可见培养液中漂浮着白色或浅黄色的小点，有的散在生长，培养液一般不发生混浊；倒置显微镜下可见丝状、管状或树枝状的菌丝纵横交错在细胞之间或培养基中，有的呈链状排列。真菌污染后，细胞生长变慢，但后由于营养耗尽及毒性作用而使细胞脱落死亡。 3、支原体污染 支原体是介于细菌与病毒之间能独立生活的小微生物，小直径0.2μm，一般过滤除菌无法去除它，光镜下难以看清它的形态结构。开始不易发现，能在偏碱条件下生存，对青霉素有抗药性。多吸附于细胞表面或散在于细胞之间。 培养细胞受支原体污染后，部分敏感细胞可见细胞生长增殖变慢，部分细胞变圆，从瓶壁脱落。但多数细胞污染后无明显变化，或略有变化，若不及时处理，还会产生交叉污染。 4、非同种细胞污染 由于细胞培养操作时各细胞株所需的器材和溶液没有严格分开，往往会使一种细胞被另一种细胞污染。目，上已有几十种细胞都被HeLa细胞所污染，致使许多实验宣告无效
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从成年骨骼肌分离和培养成肌细胞的方法步骤
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
材料与仪器 D-PBSA 转运培养液 生长培养液 链酶菌蛋白酶液 尼龙网 手术刀 锋利的长剪刀 Petri培养皿 培养瓶 20ml离心管或一般容器 血细胞计数板 步骤 一、分离 1. 用手术刀切除活检组织块上的非肌性组织，然后用 D-PBSA 浸洗。 2. 称重前，与肌纤维平行将切除活检组织切成片，用冲洗。 3. 将组织片平行放入 Petri 培养皿盖内，切成较薄的柱状组织块，然后切成 1 mm3 小块。不要挤压组织。也可在试管内用长剪刀将组织剪成小块，应避免挤压组织。 4. 用 D-PBSA 浸洗组织块，静置后吸去上清液。 5. 在 37°C 条件下，用链酶菌蛋白酶液（0.15 % 链酶菌蛋白酶（Sigma P-6911）、0.03% EDTA（Merck 8418）、20 IU/ml 青霉素和 20 μg/ml 链霉素（0.4% Eurobio PES3000），用 Ham F12 或 D-PBSA 配制，100ml）消化组织块 1 h。每 1~3 mg 组织块用 15 ml 链酶菌蛋白酶液。每间隔 10~15 min 轻轻摇晃试管。 6. 孵育后用吸管研磨组织块。由于越来越多的细胞分离下来，培养液会逐渐变得浑浊。 7. 让组织块沉到试管的底部，形成沉降的组织块（P1 ) 和上清液（S1）。 8. 用孔径为 100 μm 的尼龙网将 S1 滤入 20 ml 离心管。轻轻摇晃或用吸管吹打上清液，使细胞混悬。 9. 离心（350 g，8~10 min）后，吸去上清液。 10. 准确加入 10 ml 生长培养液（Ham F12，添加 20 % FBS （Gibco 011-06290），200 ml），用带有橡皮吸头的吸管很轻微地混悬细胞。然后，用血细胞计数板计数细胞。 11. 用生长培养液稀释细胞悬液，以约 1.5×104 个/ml 的细胞密度将细胞接种于培养瓶。从 1 g 健康供体活检组织约获得 1~2×105个细胞。 12. 将 15 ml 消化液加入 P1，在 37°C 水浴中孵育组织块 30 min，并定时摇晃。 13. 用吸管吹打细胞悬液，使细胞分散。然后，用尼龙网过滤细胞悬液。用 20 ml 生长培养液浸洗滤网。 14. 离心（350 g，8~10 min）后，计数细胞，按上述方法接种细胞。 15. 将培养瓶移入湿润的培养箱，在 37°C 和 5 % CO2 的条
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从骨骼肌分离和培养单肌纤维的方法步骤
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
材料与仪器 Matrigel DMEM L-谷氨酰胺 Ⅰ型胶原蛋白 青霉素和链霉素混合液 鸡胚提取液 马血清 胎牛血清 接种培养液 增殖培养液 Petri培养皿 改良Pasteur吸管 24孔培养板 钻石笔 透照立体解剖显微镜 步骤 1. 处死动物后立即切除肌肉。注意夹持肌腱，以减少对肌纤维的损伤。 2. 将肌肉放入 0.2 % Ⅰ型胶原蛋白酶液（W / V，用 DMEM 配制），在 35°C 条件下用摇动水浴箱孵育 60~90 min。较大肌肉需要较长消化时间，一般情况下取自 6~8 周大鼠的趾长伸肌需消化 60 min 。 3. 准备盛肌纤维的 Petri 培养皿，即用马血清浸洗培养皿，以免肌纤维黏附于培养皿底壁上。然后，加入 20 ml DMEM。 4. 消化后将肌肉移入盛有 DMEM 的 Petri 培养皿。 5. 在透照立体解剖显微镜下，用改良 Pasteur 吸管（将 Pasteur 吸管割断，用钻石笔将开口弄大。然后，用火使锯齿状边缘变光滑，以免损伤肌纤维）研磨肌肉，使单肌纤维分散。 用 10 % 马血清（用 DMEM 配制）浸蘸吸管，以免肌纤维黏附吸管。 6. 肌纤维被分散时，肌肉的直径变小。逐渐用口径小的 Pasteur 吸管。 7. 当分离 20~30 条肌纤维时，将肌肉移入另一 Petri 培养皿，继续分离，直至分离得到足够的肌纤维。 8. 较大肌肉需要第二次消化，以分散位于中央处的肌纤维。表浅的肌纤维被分离后，将剩余的肌肉放人胶原蛋白酶液，进一步消化。 9. 将肌纤维放入涂有 Matrigel （1 mg/ml，用 DMEM 配制）的培养皿。 (a)将单肌纤维放于培养皿中央，让其贴于 Matrigel。为了培养纯单肌纤维，只放入未损伤的肌纤维，除去较皱缩部分。这些部分可能有污染的附着细胞，多为微血管段； (b)慢慢加入接种培养液（DMEM，添加 10% 马血清、0.5% 鸡胚提取液、4 mmol/L L-谷氨酰胺、100 U/ml 青霉素和 100 μg/ml 链霉素），注意勿移动接种的肌纤维。 10. 将培养皿放入培养箱，在 37°C 和 5 % CO2 条件下培养。 增殖 培养 12~24 h 后，卫星细胞开始从肌纤维迁出。至 3~4 天，每条肌纤维周围有 5
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细菌污染有哪几类？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
污染向来是在细胞培养中的大问题。预防或治理污染是细胞培养成功的关键因素。我们在细胞培养时，在开始阶段就要十分重视污染问题，否则会功尽弃，这样不仅浪费时间，也会浪费人力、物力。 (一) 有哪几类污染？ 在细胞培养过程中的污染不只是指微生物，而且还包括所有混入培养环境中的、对细胞生存有害或造成细胞不纯的物质，包括生物和化学物质。 1、细菌污染 细菌污染是实验室细胞培养中常见的污染，即使在细胞培养液中加入了抗菌素，也可能因为操作不慎而引起污染。见的有革兰氏阳性菌，如枯草杆菌以及大肠杆菌、假单胞菌等革兰氏阴性菌，其中又以白色葡萄球菌较常见。培养细胞受细菌污染后，会出现培养液变混浊，pH改变。污染后细胞发生病理改变，胞内颗粒增多、增粗，后变圆脱落死亡。 2、真菌污染 真菌污染是细胞培养过程中见的一种，的真菌有烟曲霉、黑曲菌、孔子霉、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌。培养细胞受真菌污染后，可见培养液中漂浮着白色或浅黄色的小点，有的散在生长，培养液一般不发生混浊；倒置显微镜下可见丝状、管状或树枝状的菌丝纵横交错在细胞之间或培养基中，有的呈链状排列。真菌污染后，细胞生长变慢，但后由于营养耗尽及毒性作用而使细胞脱落死亡。 3、支原体污染 支原体是介于细菌与病毒之间能独立生活的小微生物，小直径0.2μm，一般过滤除菌无法去除它，光镜下难以看清它的形态结构。开始不易发现，能在偏碱条件下生存，对青霉素有抗药性。多吸附于细胞表面或散在于细胞之间。 培养细胞受支原体污染后，部分敏感细胞可见细胞生长增殖变慢，部分细胞变圆，从瓶壁脱落。但多数细胞污染后无明显变化，或略有变化，若不及时处理，还会产生交叉污染。 4、非同种细胞污染 由于细胞培养操作时各细胞株所需的器材和溶液没有严格分开，往往会使一种细胞被另一种细胞污染。目，上已有几十种细胞都被HeLa细胞所污染，致使许多实验宣告无效。 细胞培养
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细胞生长缓慢的原因
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
一.个别人的培养体系出现问题 1.检查你所培养的细胞是否存在污染。 (a) 如果培养细胞未添加抗生素(必须添加!),细胞污染则是不可避免的。 1)用肉眼和显微镜进行检查 2)如果细胞被污染则要弃掉。 (b)由于支原体污染不容易觉察到，因此必须定期检测 (c)检测可能污染的途径和原因 2.检查你用于培养细胞的培养基和血清(例如:是否批次不同或厂商不同)。如果你常规使用的是粉剂或10X储存液，而现在购买的培养基更换为1X液体，而随后证明问题就出自于此，处理方法请参见下则分享内容。 3.如果问题与培养基无关，那么很可能还是细胞的问题。 (a)复苏另一支冻存的细胞，并且与正在培养的细胞加以比较。两种细胞的培养应分开，以免在培养之初就产生污染。随后按(b) ~ (d) 步的方法做排查: (b)对传代培养的细胞进行计数，并绘制生长曲线与以前培养该细胞的资料进行比较，检在是否有下列改变: 1)传代时是否接种密度过低。 2)细胞传代是否过于频繁。 3)传代前细胞平台期是否过长。 (c)是否更换了胰蛋白酶或其他分离剂的批号?检查批号和供应商。 (d)是否细胞分离过程中严重损伤了细胞?应检测: 1)胰蛋白酶(其他消化试剂)消化时间是否过长。 2)消化液的浓度和活性是否过高、过强。 3)胰蛋白酶消化时、孵箱温度是否过高。 4)吹打消化细胞时是否过于用力。 5)细胞是否对EDTA过于敏感(如果添加了EDTA)， 6)胰蛋白酶稀释是否有误。 7)是否使用了一批劣质的胰蛋白酶消化液。 二.问题较为普遍，其他人也遇到同样的困难 检查共用的设备和试剂 温室和孵箱温度 1.温度和温度设定不准。 (a)自动调温器损坏。 (b)开关孵箱门过于频繁。 (c)孵箱门未关紧。 (d)风扇损坏造成散热不均。 用便携式温度表重新标定孵箱温度。 2.孵箱湿度不能维持 (a)水盘中未加水， (b)孵箱有渗漏。 (c)开关孵箱门过于频繁， (d)在Petri培养皿中放置一定量的PBSA,每日称重，以检查蒸发率。 3.孵箱的C02浓度不准 (a)开
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如何选择安全的胎牛血清？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
血清可以为细胞生长提供必要的营养支持，大部分的细胞培养都需要用到血清。很多朋友日常的工作学习都在与这些动物血清打交道，那么你有没有关注过这些产品的生物安全问题呢？ 血清，指血液凝固后，在血浆中除去纤维蛋白原及某些凝血因子后分离出的淡黄色透明液体或指纤维蛋白原已被除去的血浆。其主要作用是提供基本营养物质、提供激素和各种生长因子、提供结合蛋白、提供促接触和生长因子使细胞贴壁免受机械损伤、对培养中的细胞起到某些保护作用。 但是作为血清制品，难以避免的就是面临生物安全相关的问题。 近些年来，生物安全问题受到广泛关注。我国《生物安全法》已于2021年4月15日起施行，该法令的的颁布对实验室生物安全，具有重大指导意义。 我们知道，很多病毒是动物来源的，比如疯牛病、牛病毒性腹泻病毒、牛细小病毒、狂犬病毒等。胎牛血清作为动物源的生物制品，产品安全和质量问题应当引起每一个相关从业人员的注意。未经检疫或检验检疫不合格的血清制品一旦流入市场，可能携带的传染性物质，将会对人、对于环境都造成重大威胁。另外，从实验本身考虑，不合格的血清也会严重影响实验的重复性、稳定性以及真实性。 （1）质检不合格的的血清存在支原体、病毒等污染，这对细胞培养的实验结果会造成严重不良影响； （2）采血工艺不符合规定，很容易造成溶血，进而引起血清中胞内产物增加，对细胞产生影响，最终导致实验的稳定性和数据的真实性； （3）血清批次不稳定，实验结果难以重复。 所以在挑选血清的时候，要留心品牌的资质、货源、口碑等一些列信息。 资质 合格的血清都需要经过严格的质检，购买时需要特别关注血清的相关质量合格证明，查看有害微生物，如细菌、真菌、支原体、病毒等指标是否符合规定。 货源 血清作为畜牧业的副产品，虽然有很多血，但科研用的胎牛血清，实则产量比较有限：正规胎牛血清来自5-8月龄胎牛，需要剖腹产将胚胎取出，对胎牛进行采血，并且优质的胎牛血清对于
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一次性病毒采样管的组成和应用
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
病毒采样管主要包括以下几部分：用一次性无菌塑料棒/人造纤维取样。装3ml病毒保持溶液的无菌采样管(庆大霉素和两性霉素B用于更好地抑制样品中的真菌。为避免传统采样溶液中青霉素可能引起的人致敏性。)，其他部件，例如压舌板和生物安全袋。那么一次性病毒采样管被广泛应用到哪些地方呢? 1、一次性病毒采样管用于疾病操控部分和临床部分对传染性病原微生物的监测和采样。适用于流感病毒(一般流感、甲型H1N1流感病毒等)的采样。)、手足口病病毒和其他类型的病毒。它也用于支原体、衣原体、解脲支原体等的采样。 2、一次性使用病毒采样管用于将鼻咽拭子标本或特定部位的组织标本从采样点运送到检测实验室进行聚合酶链反应提取和检测。 3、病毒采样管用于保存鼻咽拭子样本或特定部位的组织样本，以进行必要的细胞培养。 4、病毒采样管是微生物采样运送管中用于流感病毒，手足口病毒等病毒的一套完好的采样和运送离心管。也被称为标本运送管，它现已成为一种商业产品。
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细胞培养需要哪些条件因素？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
1．无菌环境 无毒和无菌是体外培养细胞的要条件。细胞在活体内，解毒系统和免疫系统可抵抗微生物或其他有害物质的入侵，但细胞在体外培养的过程中，缺乏机体免疫系统的保护而丧失对微生物的防御能力和对有害物质的解毒能力。为保证细胞能在体外环境中生长繁殖，必须要确保无菌工作区域、良好的个人卫生、无菌试剂和培养基以及无菌操作。 常见的微生物污染有支原体、细菌、真菌。支原体无致死毒性，可与细胞长期共存，对细胞有潜在影响，但体积小，不易鉴别，可借助于地衣红或Hoechst33342染色来进行检测。细菌增殖快，在短时间内即可大量扩增，并产生毒素杀死细胞。真菌的种类繁多，肉眼可见，漂浮于培养液面上，可呈丝状、管状或树枝状等。 2.合适的温度 般哺乳类与禽类细胞在体外培养的适宜温度是37～38℃，不适宜的环境温度会影响细胞的生长。细胞对低温的耐受能力要强于对高温的耐受能力，在低温下，细胞的代谢活力及核分裂能力降低。若温度不低于0℃，虽然细胞代谢受到影响，但无损伤作用；25～35℃时，细胞以缓慢的速度生长；但若被置于40℃数小时，则不仅不利于细胞生存、生长，甚至可导致其死亡。 3．气体环境与pH 细胞的体外培养需要理想的气体环境，氧气、二氧化碳是细胞生存的必要条件。氧气参与细胞的三羧酸循环，为细胞生存、代谢与合成提供能量；二氧化碳既是细胞的代谢产物，是细胞生长的必需成分，又与维持培养液的pH有关。大多数细胞适宜的pH范围往往是7.2～7.4。在开放式培养中，以5%的二氧化碳气体比例为宜。 4.适宜的渗透压 高渗溶液或低渗溶液会引起细胞发生褶皱、肿胀、破裂。因此，渗透压是体外培养细胞的重要条件之。多数体外培养的细胞对渗透压都有定的耐受能力，实际应用中，260～320mmol/L的渗透压可适用于大多数细胞。
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科研血清实验技能
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
问题一：如何贮存和冻结血清才不会使产品质量受损? 答：将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但有必要注意的是，融解过程中有必要规矩地摇晃均匀。长时刻贮存在2-8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等）可能聚集而构成沉积或可见的混浊。因而，推荐在-20℃以下贮存血清，并防止反复冻融。主张血清应保存在-2O℃。若存放于4℃时，请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶，主张无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。 问题二：血清中包含絮状沉积，它们是什么，怎样处理？ 答：沉积包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性，不会影响产品性质。要除掉沉积，离心血清（400g，1-2分钟）或许简单的让其沉积在瓶子底部，将血清当心的 转移到另一个无菌瓶里（一般不主张选用过滤的办法除掉沉积，由于沉积会堵塞滤膜而无法过滤）。大多情况轻轻摇动沉积并加热至37℃就会再溶解。所以，运用 产品时要摇动并加热血清至37℃，沉积会天然消失。 问题三：如何防止血清中发作沉积？ 答：按如下操作可防止沉积的发作： （1）冻结血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，削减沉积的发作。 （2）血清分装冻存时，须规矩摇晃均匀（当心勿形成气泡），使温度与成分均一。 （3）勿直接由-20℃直接至37℃冻结，因温度改变太大，简单形成蛋白质凝结而发作沉积。 （4）勿将血清置于37℃太久，否则血清会变得污浊，一起血清中许多较不稳定的成份也会因而受到破坏，从而影响血清的品质。 （5）血清的热灭活非常简单形成沉积物的增多，若非必要，能够无须做此步骤。 （6）若有必要做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时刻过久或摇晃不均匀，都会形成沉积物的增多。
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靶向唾液酸化**中枢神经系统疾病
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
唾液酸结合免疫球蛋白型凝集素(Siglecs)是一种膜受体，优先在免疫细胞上表达，识别唾液酸化的蛋白质、脂质和rna。唾液酸和通过SIGLECs的信号在免疫系统动态平衡以及神经系统发育、可塑性和修复中的重要作用被越来越多地认识到。唾液酸化功能失调和Siglec功能障碍导致中枢神经系统(CNS)的几种慢性疾病，目前的**选择非常有限。 虽然目前只有几种针对SIGLEC的疗法正在进行临床试验，但该领域已成为糖生物学和药物开发中活跃和活跃的领域之一。该综述重点介绍了近年来唾液酸和Siglec在中枢神经系统病理中的作用，并阐明了以唾液酸为基础和Siglec为靶向的神经疾病**方法的发展面临的机遇和挑战。 哺乳动物细胞的糖萼上装饰着末端唾液酸或神经氨酸，它们组成了一个具有九个碳骨架的单糖家族。它们的命名与他们的发现有关：Gunnar Blix于1936年从唾液粘蛋白中分离出它们，Ernst Klenk于1941年从中枢神经系统糖脂中分离出它们。布利克斯在希腊语中唾液(σίαλον)一词之后引入了“唾液酸”一词，而克伦克则创造了“神经氨酸”一词来表示唾液的神经元来源。当他们的关系变得清晰时，这两个术语都已经确立了，现在这两个术语可以互换使用。唾液酸化模式的生理作用是复杂的，但可以广泛地归因于结构和受体结合功能。 首先，低聚物和唾液酸化糖结构聚合物的高度负电荷和亲水结构形成水合壳，其增加其载体分子的流体动力学体积并防止细胞的不希望的相互作用。这种水合壳功能使细胞运动和可塑性。唾液酸暴露在末端糖萼上，带着高度的负电荷，也支持了对细胞膜表面分子的掩蔽，从而调节了组织对免疫细胞的识别位置。 其次，唾液酸化的糖蛋白和糖脂本身是几种受体的配体，其中许多受体具有信号功能，如SIGLECs。大多数这些特定的相互作用受取代基对唾液酸基,具体联系唾液酸的定义潜在的糖链或潜在的唾液酸分子之间和唾液酸的形式,即N-acetylneuraminic酸(Neu5Ac)(见术语)o r N-glycolylneuraminic酸(Neu5Gc),以及o -乙酰化衍生物。 人类只
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如何延长对照品保存期？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
对于开封使用后的对照品要求是一次性使用的，但不同对照品，不同对待，开封后保存条件、使用时间都有限制。 开封后是否适合再使用，则需要看对照品的均匀性和稳定性，观察鉴定后对照品均匀，稳定性保持不变，那么这样的一般有效期较长，常见对照品保质期为3个月-1年左右。 如何延长对照品保存期？ 一、正确使用对照品 1、正确开启 大部分对照品都是使用玻璃安瓿保存，一般开启安瓿时可轻震敲，将内物尽量沉于底部，切割时应将安瓿平置或向下斜置，双手拇指顶住颈部发力，避免玻璃碎片混入对照品。 2、使用后密封 一般来说对照品使用后需要密封，根据对照品的区别在不同环境下密封，对于易吸潮的对照品，如奥美拉唑等，若用于含量测定，应启开后立即使用，剩余部分日后可用于鉴别，不过不建议进行含量测定。 3、过期后单独放置 对于过期的标准品、对照品，如欲继续保存，则需单独放置，以免混淆。必要时，亦可应急使用，可用于鉴别。如用于定量，则需有溯源核查数据保证。 二、合格贮存对照品 对照品的贮存环境很重要 常见的对照品一般都是选择在室温2-8摄氏度，低温下进行保存的，但一般对照品应按说明书规定的条件妥善保存，比如维生素E等需避光低温保存，暴晒过后就容易挥发以及不稳定。 要注意对照品的使用期限，过期、变质的对照品不宜再使用。开瓶后建议短期内用完，避免开瓶后长期不用，同时，在重复使用过程中应尽量避免对照品的分解、污染或吸潮。
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细胞培养中为什么要加入胎牛血清？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
一、胎牛血清的功能 血清的成分十分复杂，既有协助物质运输的蛋白、营养物质，还有促进细胞生长的激素和因子等，正因为血清这种天然成分的复杂性，使得血清在细胞培养过程中发挥了多种功能： 1.提供维持细胞生长的激素，促进所培养细胞的生长； 2.弥补基础培养基中没有或含量很少的营养物质； 3.提供结合蛋白，促进细胞识别和利用维生素、脂类和其他激素等； 4.某些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用； 5.促进细胞贴壁，提供可促进细胞铺展在塑料培养基质的因子； 6.起酸碱度缓冲液作用； 7.提供蛋白酶抑制剂，使细胞消化时残留的胰蛋白酶失活，保护细胞不受伤害。 二、胎牛血清有哪些重要的技术性指标？ 1.内毒素：标准为不高于10EU/mL。内毒素是细菌破碎后细胞壁的成分，因此内毒素含量的高低可表现出采血到生产系列过程中的无菌操作情况。 2.总蛋白含量：胎牛血清总蛋白含量般范围是30-50mg/mL，数值偏高，说明采血的牛龄偏大，不是胎牛，数值偏低，表明血清可能掺水了。 3.血红蛋白：标准为不高于30mg/dl，颜色越红，数值越高。 4.pH：7.0~8.0。 5.微生物：包括细菌、霉菌、支原体、噬菌体、各类病原性病毒等。 6.免疫球蛋白（IgG）：免疫球蛋白的数值能完全体现出采血时的牛龄情况，新生牛的血清中容易产生IgM，IgG的含量也偏高，进口胎牛血清不含IgM，另外IgG的含量也较低。
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