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如何选择流式细胞术常用的荧光素？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
流式细胞仪测定常用的荧光染料有很多种，我们如何来选择流式细胞仪测定的常用荧光染料呢？以下简单介绍了荧光素选择的几个原则。 1. 抗原的密度 ① 高表达的抗原可选择几乎所有的荧光素； ② 低密度表达的抗原需要可提供较高S/N比值的荧光素如PE/APC。 2. 自发荧光 ① 每种细胞群都有不同水平的自发荧光； ② 所有的荧光通道均可观察到自发荧光，但自发荧光强度在波长较长时迅速降低； ③ 对自发荧光较强的细胞，选择发射波长较长的荧光素（如APC）可得到较好的S/N比值； ④ 对自发荧光比较弱的细胞，发射波长较长的荧光素对S/N提高没有明显的改善。可选用FITC。 3. 非特异结合 ① 许多荧光抗体可产生低水平的非特异结合，使阴性细胞群的荧光超出自发荧光； ② 非特异结合由下列因素引起： 单克隆抗体的同型抗体：一些IgG同型抗体可能与一些细胞上的Fc受体结合； 所用的荧光素：羰花青染料（如CY3、CY5、CY5.5、CY7）和Tex-Red直标的抗体及一些复合染料标记的抗体在标记某些亚群的细胞时有时会提高结合率；对CY5来说，是因为该染料与低亲和力Fc受体的极低亲和力相互作用。这也是复合染料PE-CY5的特性。 4. 复合染料：小心信号衰退 ① 复合染料因为光、固定剂或温度升高会致信号衰退，是复合染料在上一级染料处发光。该种现象从一小部分亚群开始，导致APC或PE染色细胞群假阳性； ② 减少样本暴露于光、高温或固定剂，可很大程度上避免这一问题； ③ 选择染料时需要考虑：复合染料的信号衰退会不会降低APC或PE的灵敏度。如果是，就要选择另外的试剂搭配； ④ 如果样本需要固定，要选择稳定的固定剂，可有效阻止复合染料的信号衰退。 5. 荧光信号之间的干扰，会增加信号检测背景 ① 荧光信号强细胞群体的SD比荧光信号弱的细胞群体大； ② 多色分析时，一种荧光素（如FITC）的光会漏入相邻的荧光素（如PE）的检测器。漏入的光越多，需要补偿的越多，对分辨率的影响就越大。尤其
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细胞冻存与复苏的正确操作方法
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
细胞冻存与复苏，是细胞培养过程中的常见工作。 细胞冻存，是指将细胞贮存在超低温环境中，使细胞暂时“冬眠”的技术，在需要的时候再进行复苏。 细胞复苏，是把冻存在-80℃冰箱或液氮中的细胞快速解冻，并使细胞重新恢复生长的技术。 本文将为大家介绍细胞冻存与复苏的技术要点和操作步骤。 细胞冻存篇 冻存原则 冻存原则为“慢冻”，即让细胞在缓慢降温的条件下逐渐冷冻。 如果直接将细胞悬液放在超低温下快速冷冻，细胞会受到冷冻损伤而死亡。在冻存液中添加的保护剂（如DMSO、甘油）和在冻存盒中添加的异丙醇，都起到程序性降温的作用。 DMSO使用注意事项 DMSO能够快速穿透细胞膜进入细胞中，延缓温度下降速度，减少细胞内冰晶的形成，从而起到保护细胞的作用。 需注意的是，DMSO溶于培养基时，将释放大量热量，所以冻存液需提前配制，不能直接将DMSO加入含有细胞的培养基中，避免烫伤细胞。 另外，DMSO属于致癌物质，使用时应戴好手套，规范操作。 程序冻存液配方 程序冻存液成分一般由基础培养基、胎牛血清、DMSO组成。血清比例为10%~90%，DMSO比例为5%~10%。根据普诺赛实验室经验，推荐冻存液配比：55%基础培养基＋40%胎牛血清＋5%DMSO，难养细胞可用90%胎牛血清＋10%DMSO冻存。 细胞冻存密度 细胞冻存和复苏过程中，不可避免会损失部分细胞，所以冻存的密度不能太低。提高冻存密度有助于提升复苏存活率，推荐密度为100~300万细胞/mL。 冻存操作方法 方法一：使用程序冻存盒 使用程序降温盒是较为常用的冻存方法。市面上的降温盒有些需要添加异丙醇，有些则不需要。 降温盒须恢复室温后再使用。 根据普诺赛实验室经验，使用程序冻存盒冻存效果良好，没有冻存盒的同学可以参照下文方法二和方法三。 操作步骤 步骤1：配制程序冻存液，放在室温备用或放在4℃预冷 步骤2：离心收集对数生长期的细胞（贴壁细胞消化下来离心，
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细胞坏死和细胞凋亡的区别在哪里？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
细胞程序死亡概念： 细胞程序死亡(programmed cell death，PCD)也常常被称为细胞凋亡，是生物体发育过程中普遍存在的，是个由基因决定的细胞主主动的有序的死亡方式。具体指细胞遇到内、外环境因子刺激时，受基因调控启动的自-杀保护措施，包括些分子机制的诱导激活和基因编程，通过这种方式去除体内非必需细胞或即将发生特化的细胞。 而细胞发生程序性死亡时，就像树叶或花的自然凋落样，凋亡的细胞散在于正常组织细胞中，无炎症反应，不遗留瘢痕。死亡的细胞碎片很快被巨噬细胞或邻近细胞清除，不影响其他细胞的正常功能。 细胞凋亡的主要特征： ①染色质聚集、分块、位于核膜上，胞质凝缩，后核断裂，细胞通过出芽的方式形成许多凋亡小体; ②凋亡小体内有结构完整的细胞器，还有凝缩的染色体，可被邻近细胞吞噬消化，因始终有膜封闭，没有内溶物释放，故不会引起炎症; ③凋亡细胞中仍需要合成些蛋白质，但是在坏死细胞中ATP和蛋白质合成受阻或终止; ④核酸内切酶活化，导致染色质DNA在核小体连接部位断裂，形成约200bp整数倍的核酸片段，凝胶电泳图谱呈梯状; ⑤凋亡通常是生理性变化，而细胞坏死是病理性变化。 理论意义： 程序性细胞死亡在生物发育和维持正常生理活动过程中非常重要.在发育过程中，细胞不但要恰当地诞生，而且也要恰当地死亡。 例如，人在胚胎阶段是有尾巴的，正因为组成尾巴的细胞恰当地死亡，才使我们在出生后没有尾巴.如果这些细胞没有恰当地死亡，就会出现长尾巴的新生儿.从胚胎、新生儿、婴儿、儿童到青少年，在这系列人体发育成熟之的阶段，总体来说细胞诞生得多，死亡得少，所以身体才能发育.发育成熟后，人体内细胞的诞生和死亡处于个动态平衡阶段，个成年人体内每天都有上万亿细胞诞生，同时又有上万亿细胞“程序性死亡”.两者处于种动态平衡中，使人体器官维持合适的细胞数量得以正常运作的，正是“程序性细胞死亡”机制。 实践意义： 如果调节细胞“自-杀”的基因出了问题，该死亡的
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动物实验操作-动物给药
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
动物实验操作-动物给药 动物给药项目介绍 灌胃法：此法给药剂量准确，是借灌胃器将药物直接灌到动物胃内的一种常用给药方法 口服给药：是把药物混入饲料或溶于饮水中让动物自由摄取。此法优点是简单方便，缺点是剂量不能保证准确，且动物个体间服药量差异较大。 注射给药法：注射给药剂量准确、作用快，是动物实验中常用的给药方法，给药时应注意针头的选择，通常包含以下几种方法： 1. 皮下注射法 2. 皮内注射法 其他给药法：除上述较常用的给药途径外，还有其他一些给药方法，如呼吸道给药、皮肤给药、脑内给药、直肠内给药、关节腔内给药等等 案例展示
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如何培养冻存的原代细胞？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
原代细胞（primary culture cell）是指从机体取出后立即培养的细胞。有人把培养的第1代细胞与传10代以内的细胞统称为原代细胞培养。原代细胞不仅广泛应用于分子、细胞生物学和生物医学基础研究，如蛋白质组学、基因组学、细胞株（系）研究、DNA，RNA和遗传学研究等。 Ⅰ、冻存原代细胞的培养 1.将管细胞从液氮罐中取出，注意保护手和眼睛。 2.将冻存管快速的放入37℃水浴中，轻轻握住并旋转，直到管内物体完全融化。 3.将冻存管立即从水浴中拿出，擦干，转入无菌环境。 4.用70％的酒精冲洗冻存管，然后擦去多余酒精。 5.打开盖子，注意手指不要碰到里面的螺纹（注意，由于冻存管有负压，开盖时可能会有少量溢出，这是正常现象）。 6.用多聚赖氨酸包被培养瓶。多数细胞推荐的接种密度为每平方厘米5000个细胞。 7.盖好培养瓶的盖子，轻轻摇晃培养瓶以使细胞分布均匀。若需要气体交换可打开盖子。 8.将培养瓶放入培养箱中。 9.放入培养箱后第6-16小时更换次培养基，以去除残留的二甲基亚枫和未贴壁的细胞。 Ⅱ、原代细胞的组织块培养法： 1.组织块接种后的3天，在观察和移动的过程中，注意不要引起液体的振荡。要避免经常翻动和振动，否则组织块不易附着于瓶壁上或附着后也会脱落飘起。 2.加入的培养液不宜过多，避免浸泡的组织块受轻微的波动而脱落下来。 3.当细胞向外迁徙出来后要注意记录并去除漂浮的组织块和残留的细胞，它们产生的有毒物质会影响原代细胞的生长。 4.为促进组织块尽快粘贴在培养瓶皿上，可以在种植先将胶原薄层涂在培养瓶底壁上。
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影响细胞株生长的因素有哪些？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
细胞株在体外进行培养,失去了机体的调节和控制,因此,除满足营养的要求外,还必须使细胞生存环境昼接近活体的环境.外环境的培养条件如温度、渗透压、酸碱度等均能影响细胞的生长. 一、温度： 一般哺乳类及禽类细胞体外培养的适宜温度是37~38℃.温度过高或过低都会影响到细胞的生长.细胞耐受低温的能力比抗热的能力强,在低温下,细胞的代谢活力及核分裂降低.温度低于0℃时,虽影响细胞代谢,但并无伤害作用.把细胞置于23~25℃时,细胞仍能生存和生长,但速度减缓,不过,鱼类细胞的适宜培养温度为23~25℃.若温度过低,在降到冰点以下时,细胞因胞外水和胞质结冰而受损死亡,但若向培养基中加入甘油或二甲基亚砜（DMSO）等保护剂,封入安瓿中后,置于液氮或低温冰箱（-70℃）中,可起保护作用,此时细胞可而耐受-70℃以下温度,能长期储存,解冻后细胞复苏,仍能继续生长增殖,细胞物性状不受任何影响.此为保存细胞的主要手段. 高温对细胞培养不利.细胞在39~40℃培养1h,会受到一定损伤,但仍有可能恢复,但不能忍受温度再升高2℃,持续数小时,即在41~42℃培养1h,细胞操作严重,温度到43℃以上时细胞多数被杀死.高温主要引起酶的灭活、类脂质破坏、核分裂的破坏,产生凝固酶使细胞发生凝固,另外使蛋白质变性.因此,体外培养细胞时一定要避免高温. 二、渗透压： 细胞在高渗透溶液中低渗溶液中,可以立即发生皱缩或肿胀、破裂.所以,渗透压是体外细胞培养的重要条件.哺乳动物和其他动物组织细胞体外孙女培养的渗透压的维持主要与NaCl有关,但不能忽视其他电解质与渗透压的关系,渗透压与单位体积溶剂内溶质的分子数和离子娄成正比.为此,按一定比例控制培养基中离子平衡,维持正常渗透压是很重要的.这不仅是为了维持细胞张力,而且是为了调节细胞的代谢.因为细胞外离子输送和离子浓度改变着其他营养物质的输送（如氨基酸、糖等）,直接影响细胞基本合成系统.理想的渗透压因细胞的类型及种族而异,人血浆渗透压为290mmol/L,被视为是体外培养人类细胞的理想
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肿瘤标志物有哪些特点？又有什么作用呢？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
肿瘤标志物又称肿瘤标记物，是指特征性存在于恶性肿瘤细胞，或由恶性肿瘤细胞异常产生的物质，或是宿主对肿瘤的刺激反应而产生的物质，并能反映肿瘤发生、发展，监测肿瘤对**反应的一类物质。肿瘤标志物存在于肿瘤患者的组织、体液和排泄物中，能够用免疫学、生物学及化学的方法检测到。 特点有： ①肿瘤标志物非常之多，单个标记物的敏感性或特异性往往偏低，不能满足临床要求，理论上和实践上都提倡一次同时测定多种标志物，以提高敏感性和特异性。 ②肿瘤标志物不是肿瘤诊断的惟一依据，临床上需结合临床症状、影像学检查等其他手段综合考虑。肿瘤确诊一定要有组织或细胞病理学的诊断依据。 ③因患者个体差异、患者具体临床情况等因素，肿瘤标志物的分析要结合临床情况，从多个角度比较，才能得出客观真实的结论。 ④某些肿瘤标志物在某些生理情况下或某些良性疾病也可以异常升高，需注意鉴别。 那么肿瘤标志物到底有什么作用呢？ 1、辅助判断 通过肿瘤标志物可以辅助检查肿瘤，而且对于一些特别的癌症参考价值比较高，如果肿瘤标志物出现问题，接下来还需要通过活检来进一步确定。 2、制定**方案 癌症患者在制定制作方案之前，往往需要进行肿瘤标志物检查，通过这种检查可以反应疾病的症状可以帮助医生制定**方案。 3、监测**效果 通过肿瘤标志物可以判断**期间的症状，通过肿瘤标志物可以判断一段时间内的**效果，如果肿瘤标志物没有发生一点变化，那么多数情况下也代表着**效果不明显。 4、检查复发情况 通过肿瘤标志物还可以检查肿瘤的复发情况，可以以此作为肿瘤是否复发的基础检测。
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AnaeroPack日本三菱厌氧产气袋2.5L产品特点
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
国内货号：C-1 包装规格：10只/包 产品用途：配合密封罐使用，用于厌氧微生物的培养。本品可吸收容器中的全部O2，同时产生约21%的CO2。 每一个铝塑包装中含有一片纸袋（厌氧产气袋）。 产品特点： 操作简便——不用加水、不用催化剂，只需把药剂(产气袋)外袋剪开放入容器内,密封后即可形成适宜的厌氧、微需氧、二氧化碳培养环境。 适用广泛——培养容器内不会产生压差，不会产生高温。同型号的培养容器可通用，废弃物处理方便，不污染环境。 高效经济——无须使用昂贵且占空间的大型设备，无须使用危险气体，性能价格比更经济实惠。 针对性强——厌氧、微需氧、二氧化碳系列产品，根据培养量选择适合的容器，产气量稳定准确有保障。 使用方法： 1、将铝塑包装上侧剪开，取出纸袋，纸袋不需要打开。 2、立即将纸袋放入密封罐中，将密封罐盖上。接触空气后将即刻吸收O2，产生CO2。不需要加水或使用催化剂。 3、每袋AnaeroPackTM-Anaero 用于2.5 升培养罐，对于大于2.5 升的培养罐，根据培养罐的体积用2~3 包，当使用多袋AnaeroPackTM- Anaero 时，不要叠放在一起。 4、用完的厌氧产气袋可能会因为剩余反应而产生热量，请等它们变冷以后再丢弃。且不要跟易燃物丢在一起。 5、AnaeroPackTM- Anaero 用于45℃以下培养使用。 储藏方法： 密封，置阴凉干燥处保存。 保存期： 在铝塑袋的右下角印有批号及失效期，请在失效期之前使用。
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针对这三大类型的抗体保存需区分对待
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
针对这三大类型的抗体保存需区分对待，对于您想了解的抗体信息，通蔚生物业务员会将产品说明书通过邮寄给您，让您一目了然，不再有选购的烦恼，欢迎广大老师们前来选购。 昨日刚过“大雪"，一年度的一个节气。虽然近期各地温度有所降低，但对于抗体的保存不能够因此忽略。在今天的内容中，主要涉及到单克隆抗体、多单克隆抗体、带标记的抗体，针对这三大类型的抗体保存需区分对待。 一、单克隆抗体 可以保存在50%的丙三醇存放于-20℃。也可以将其保存在饱和硫酸铵于4℃或-20℃保存。提供了一种替代的保存方法。在大多数情况下，虽然冷冻干燥有许多优点，它需要昂贵的设备和劳动力。 二、多克隆抗体 在血清中于即使没有冻融，其活性的损失也可以观察到，尽管其进程仍然非常缓慢。即使没有丙三醇，只要你*冻融，抗体也可以存储在-20℃几年甚至几十年。抗体另一个重要的事情是，因为稀的抗体容易失去活性而且容易造成物理吸附导致的损失。 三、带标记的抗体 一般储存在黑色容器中或者用锡箔纸盖住。 1.酶标记抗体 碱性磷酸酶和其他酶结合物对于冷冻特别敏感，一般应在4℃短期存储。 标记抗体长期保存是在终浓度为50%的丙三醇或乙二醇中于-20℃保存。虽然某些酶结合物 可在无保护剂的情况下于-20℃储存，但必须分装，以防止反复冻融。 2.荧光标记抗体荧光遇必须避光保存，其应该存放在4℃、避免让其凝固。 四、抗体浓度 抗体浓度过低(
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细胞的相关知识点 你都知道吗？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
细胞 (英文名:cell)并没有统一的定义，比较普遍的提法是:细胞是生物体基本的结构和功能单位。已知除病毒之外的所有生物均由细胞所组成，但病毒生命活动也必须在细胞中才能体现。 一般来说，细菌等绝大部分微生物以及原生动物由一个细胞组成，即单细胞生物，高等植物与高等动物则是多细胞生物。细胞可分为原核细胞、真核细胞两类，但也有人提出应分为三类，即把原属于原核细胞的古核细胞独立出来作为与之并列的一类。研究细胞的学科称为细胞生物学。 细胞体形微，在显微镜下始能窥见，形状多种多样。主要由细胞核与细胞质构成，表面有细胞膜。高等植物细胞膜外有细胞壁，细胞质中常有质体，体内有叶绿体和液泡，还有线粒体。动物细胞无细胞壁，细胞质中常有中心体，而高等植物细胞中则无。细胞有运动、营养和繁殖等机能。 01 细胞是一个生命体 细胞是构成生物体的基本单位，同时也是维持生命现象的小技能单位。只要条件完备，便能持续发挥细胞的功能，以及进行增殖，但若是再细分成更小的单位，便会失去生命。 02细胞与组织的关系 人类的身体约有200~300种不同的细胞。这些形形色色的细胞，并非是乱无章法地存在着，而是由具有相同功能的细胞聚在一起，构成组织。组织是由细胞和细胞间质所构成，可分成上皮组织、支持组织、肌肉组织、以及神经组织这四种。 尽管是相同的组织，但随着存在的位置及环境的不同（例如支持组织的骨骼组织和血液），有时看起来就像是不同的组织一般。 （▲细胞间质：填补细胞和细胞间空隙的物质，有胶原纤维、弹性纤维、网状纤维等纤维、以及填补中间空隙的不定形基质所构成。） 03 细胞的构造 细胞是由名为原形质的胶质状物体所组成，以细胞膜包覆，里头有细胞核，细胞核和细胞膜中间有细胞质，还有几个细胞小器官。 细胞膜将细胞与外界区隔，扮演着保有其内部恒定性的角色。细胞核是掌管细胞遗传情报的传达，以及蛋白质合成等代谢活动的司令部。细胞小器官负责细胞的生命活动所需
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Biozellen3D类器官培养基质胶使用步骤及成功案例
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
使用步骤 A、试剂制备 A基质胶：将A基质胶溶于37℃水浴槽回温10分钟， 确认完全融解. C缓冲溶液(1X)制备：使用前将10X C缓冲溶液用冰的无细胞培养液(例如： 无血清DMEM、opt-MEM) 制备成 1X C 缓冲溶液。(不要用 PBS 稀释 C 缓冲液) . D 缓冲溶液(1X)制备: 使用前用冷的 1x PBS 稀释 10X D 缓冲溶液至 1X D 缓冲溶液. B、Biozellen®3D类器官培养基质胶的制备 全部步骤需要在无菌环境内操作，操作步骤如下： 1. 将24孔培养板放置于冰上预冷。 2. 细胞计数后取 2×105~2×107 细胞与 0.5 毫升 37℃ 培养基均匀混合，并与0.5毫升37℃ A胶按照 1:1 等比例均匀混合，最终细胞密度105~107cells/mL。 注：请选择适当的培养溶液与条件进行试验，贴壁细胞应在~80% 汇合度下培养。 3.取 20-40 微升步骤 2 含细胞的混合 A 胶溶液滴于 步骤 1 预冷的培养板上，胶体将于 5 分钟内成胶。 注: 测试胶体是否成胶，可用微量吸管尖温和的触碰胶体表面进行确认。 4.待胶体成胶后，添加1毫升冰的1X C缓冲溶液，并盖过步骤3 的胶溶液，固定 15 分钟。 5.待15分钟固定后，小心的吸取 C 缓冲溶液并置换为适合此细胞生长之培养基溶液。 6.将含有细胞的胶于37°C 二氧化碳培养箱内进行7~14天的培养，并观察细胞球体的形成，按正常培养基更换频率进行更换操作。 C、溶胶与收集细胞球体准备程序 小心的将培养基吸取移除，并用1X PBS进行清洗。 小心的将 1X PBS 吸取移除，并添加 1 毫升冰的D缓冲溶液，盖过胶滴于室温反应 5分钟。 温和的用1毫升移液管吸取，直到胶滴完全溶解。 将含有细胞球体的溶液吸入1.5 毫升离心管，用1000 rpm的转速离心10分钟，移除上清液体并收集细胞球体做分析。 D、收集单颗细胞准备程序 在分离单细胞前，先按上述溶胶与收集细胞球体准备程序进行操作 1. 添加trypsin-EDTA并与收集的细胞球体于37°C混合反应。 2. 用1毫升移液管混合，直到细胞体完全分解。 3. 待细胞球体完全分解，加入3倍体积的1X PBS，并
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瘦肉精的检测限值是多少? 怎样检测呢？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
生物 体是一个高度统一的整体，而的主要对象是 生物 体内的各种细胞，很显然，在整体条件下研究单个细胞或某一细胞群在体内（in vivo）的功能活动是非常困难的。 细胞培养 的意义主要在于两点，其一是人工培养条件易于改变并能严格控制，便于研究各种因素对细胞的结构、功能和各种生命活动规律的影响；其二是细胞在体外培养环境中可以长qi存活和传代，可以比较经济地、大量地提供在同一时期、条件相同、性状相似的细胞作为实验样本。因此，大量生物医学研究工作依赖于 细胞培养 ，许多重要的发现都基于培养细胞的工作。 细胞培养技术也存在着一定局限性，主要是细胞离体以后失去与体内环境的密切联系，失去了神经体液的调节和不同细胞间的相互作用，特定分化基因的表达减弱或停止，而进化中保守的细胞生长和增殖活动却可维持，遂使体内外细胞出现了差异，这是应用细胞培养技术应该注意的问题。 细胞培养技术除经典地用于细胞形态结构、功能和细胞活动研究以外，还成为近年发展起来的细胞工程技术的基础，也就是说细胞培养技术重要应用就是各种细胞工程技术。 一般地，细胞工程指应用各种手段对细胞不同结构层次(整体、细胞器、核、基因等)进行改造，如进行细胞融合、核移植、基因转移等，以获得具有特定生物学特性的细胞。 （一）细胞融合 在细胞自然生长情况下，或在其他人为添加因素存在下，使同种细胞之间或不同种类细胞之间相互融合的过程，即为细胞融合（cell fusion）。通过细胞融合，可将来源于不同细胞核的染色体结合到同一个核内，结果形成一个合核体的za种细胞。在实际工作中常采用各种促融合手段，包括病毒类融合剂如仙台病毒、化学融合剂如聚乙二醇（PEG）及电激融合法等。在进行细胞融合反应和适当时间的培养后，需要通过一定方法对两种亲本细胞融合产生的具有增殖能力的za种细胞进行筛选。筛选方法主要包括药物抗性筛选、营养缺陷筛选和温度敏感性筛选等。 细胞融合典型的应用是单克隆抗体技术。1975
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细胞培养技术一般运用在哪些地方？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
原代细胞培养成功以后，需要进行分离培养，否则细胞会因生存空间不足或密度过大，营养障碍，影响细胞生长。细胞由原培养瓶内分离稀释后传到新的培养瓶中培养的过程称之为传代培养。传代细胞允许培养的细胞扩增(形成细胞株)，可以进行细胞克隆，易于保存，但可能丧失一些特殊的细胞和分化特征。传代细胞形成细胞株的da利处在于提供了大量持久的实验材料，便于实验。 1. 操作步骤 （1）吸掉或倒掉培养瓶内旧培养液。 （2）向瓶内加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量。以能覆盖培养瓶底为宜。 （3）置37℃孵箱或室温（25℃温度）下进行消化，2~5min后把培养瓶放在 倒置显微镜 下进行观察，当发现胞质回缩、细胞间隙增大后，应立即中止消化。 （4）吸出消化液，向瓶内加入Hanks液少量，轻轻转动培养瓶，把残留消化液冲掉，然后再加培养液。如果仅使用胰蛋白酶消化，在吸除胰蛋白液后，可直接加入少量含血清的培养液，终止消化。 （5）使用弯头吸管，吸取瓶内培养液，按顺序反复轻轻吹打瓶壁细胞，使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。吹打时动作要轻柔，以防用力过猛损伤细胞。 （6）用计数板计数后，分别接种于新的培养瓶中，置CO2培养箱中进行培养。 （7） 细胞培养 换液时间应根据细胞生长的状态和实验要求来确定。一般2～3d后应换一次生长液。待细胞铺满器皿底面，即可使用；也可继续传代扩大培养或换成维持液。 2. 注意事项 （1）掌握好细胞消化的时间，消化时间过短时，细胞不宜从瓶壁脱落，过长的消化会导致细胞脱落、损伤。 （2）掌握好消化浓度，当消化液浓度过高时，消化时间应缩短，过低时细胞消化时间相对延长。
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细胞传代培养的操作步骤和注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
原代细胞培养成功以后，需要进行分离培养，否则细胞会因生存空间不足或密度过大，营养障碍，影响细胞生长。细胞由原培养瓶内分离稀释后传到新的培养瓶中培养的过程称之为传代培养。传代细胞允许培养的细胞扩增(形成细胞株)，可以进行细胞克隆，易于保存，但可能丧失一些特殊的细胞和分化特征。传代细胞形成细胞株的da利处在于提供了大量持久的实验材料，便于实验。 1. 操作步骤 （1）吸掉或倒掉培养瓶内旧培养液。 （2）向瓶内加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量。以能覆盖培养瓶底为宜。 （3）置37℃孵箱或室温（25℃温度）下进行消化，2~5min后把培养瓶放在 倒置显微镜 下进行观察，当发现胞质回缩、细胞间隙增大后，应立即中止消化。 （4）吸出消化液，向瓶内加入Hanks液少量，轻轻转动培养瓶，把残留消化液冲掉，然后再加培养液。如果仅使用胰蛋白酶消化，在吸除胰蛋白液后，可直接加入少量含血清的培养液，终止消化。 （5）使用弯头吸管，吸取瓶内培养液，按顺序反复轻轻吹打瓶壁细胞，使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。吹打时动作要轻柔，以防用力过猛损伤细胞。 （6）用计数板计数后，分别接种于新的培养瓶中，置CO2培养箱中进行培养。 （7） 细胞培养 换液时间应根据细胞生长的状态和实验要求来确定。一般2～3d后应换一次生长液。待细胞铺满器皿底面，即可使用；也可继续传代扩大培养或换成维持液。 2. 注意事项 （1）掌握好细胞消化的时间，消化时间过短时，细胞不宜从瓶壁脱落，过长的消化会导致细胞脱落、损伤。 （2）掌握好消化浓度，当消化液浓度过高时，消化时间应缩短，过低时细胞消化时间相对延长。
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细胞透射扫描电镜检测技术服务
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
透射电子显微镜在材料科学、生物学上应用较多。由于电子易散射或被物体吸收，故穿透力低，样品的密度、厚度等都会影响到*后的成像质量，必须制备更薄的超薄切片，通常为50～100nm。所以用透射电子显微镜观察时的样品需要处理得很薄。常用的方法：超薄切片法、冷冻超薄切片法、冷冻蚀刻法、冷冻断裂法等。对于液体样品，通常是挂预处理过的铜网上进行观察。扫描电镜主要用二次电子观察形貌，成像原理如图所示。在扫描电镜中，电子枪发射出来的电子束，经三个电磁透镜聚焦后，成直径为几个纳米的电子束。末级透镜上部的扫描线圈能使电子束在试样表面上做光栅状扫描。试样在电子束作用下，激发出各种信号，信号的强度取决于试样表面的形貌、受激区域的成分和晶体取向。设在试样附近的探测器把激发出的电子信号接受下来，经信号处理放大系统后，输送到显象管栅极以调制显象管的亮度。由于显象管中的电子束和镜筒中的电子束是同步扫描的，显象管上各点的亮度是由试样上各点激发出的电子信号强度来调制的，即由试样表面上任一点所收集来的信号强度与显象管屏上相应点亮度之间是一一对应的。因此，试样各点状态不同，显象管各点相应的亮度也必不同，由此得到的象一定是试样状态的反映。放置在试样斜上方的波谱仪和能谱仪是用来收集X射线，借以实现X射线微区成分分析的。值得强调的是，入射电子束在试样表面上是逐点扫描的，象是逐点记录的，因此试样各点所激发出来的各种信号都可选录出来，并可同时在相邻的几个显象管上显示出来，这给试样综合分析带来很大的方便。电镜标本要求1）透射电镜需客户提供1mm3 左右的组织块，取材部位要求尽量精准。2）扫描电镜，需客户提供10*10*5mm大小的组织块。3）如为细胞，细胞数需≥106
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