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ELISA试剂盒2种洗涤方式介绍
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
ELISA试剂盒靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质，以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。今天给大家介绍两大洗涤方式，跟着小编一起来看看！ 1、流水冲洗式 开始用于小珠载体的洗涤，洗涤液仅为蒸馏水甚至可用自来水。洗涤时附接一特殊装置，使小珠在流水冲击下不断地滚动淋洗，持续冲洗 2分钟后，吸干液体，再用蒸馏水浸泡2分钟，吸干即可。浸泡式犹如盆浴，流水冲洗式则好比淋浴，其洗涤效果更为彻底，且也简便、快速。已有实验表明，流水冲洗式同样也适用于微量滴定板的洗涤。洗涤时设法加大水流量或加大水压，让水流冲击板孔表面，洗涤效果更佳。 2、浸泡式 ①吸干或甩干孔内反应液; ②用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后，即甩去); ③浸泡，即将洗涤液注满板孔，放置1-2分钟，间歇摇动，浸泡时间不可随意缩短; ④吸干孔内液体。吸干应彻底，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液体后在清洁毛巾或吸水纸上拍干; ⑤重复操作c和d，洗涤3-4次(或按说明规定)。在间接法中如本底较高，可增加洗涤次数或延长浸泡时间。
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动物免疫抗体监测的重要意义
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
动物的免疫抗体监测是控制动物疫情发生关键性工作。通过免疫抗体监测得到的数据，进行分析评估，提前预知畜、盒的机体免疫状况，及时学握疫情动态，指导动物疫病防疫，制定合理的防控措施是动物免疫抗体监测的意义所在。在实际的畜、盒饲养管理过程中有的养殖专业技术人员忽略了这项工作重要性，错误的认为只要将疫苗打进动物体内就万事大吉，之后再也不问疫苗在动物体内否产“生免疫抗体，更不做免疫抗体监测，等到因免疫失败造成动物疫情发生后此时已为时晚矣。还有拒绝监测的，错误地认为采样会伤害了动物，影响到动物的生长等等现象经常发生。做动物的免疫抗体监测能让你及时掌握自己所养畜、盒的免疫效果，意义深远。 1.动物的免疫抗体监测能及时阻断境外动物传染病的侵入。随着国际间交流日益增多，动物产品和活体动物贸易更加频繁，大量引进境外畜盒种源，动物疫病随着人员、物资、动物及动物产品的入境，-些我国原来没有的动物传染性疾病相继侵入，给养殖业带来了巨大的经济损失。如果我们在引进前做好各项动物疫病的抗体监测，根据监测结果判断确定被引进动物是否健康，再行决定引进措施就能严格控制和阻断境外畜禽传染病的侵入。 2.免疫抗体监测能为广大养殖专业户提供科学有效的防治依据。定期做好动物疫病免疫抗体监测，为广大养殖专业户提供科学的数据。养殖户就可以依据监测到的结果制定出适合本场的免疫防治计划，适时防治，可以防止疫病发生，提高成活率，降低饲养成本,减少损失。
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细胞消化知多少？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
每个做细胞实验的人，不管去哪“浪”，心里都会有个牵挂：我的细胞，过两天要传代！ 大部分组织细胞离体培养时，会以贴壁的形式生长（除了取自血、脾或骨髓的细胞）;完全培养基中的血清，含有许多带阳性电荷的促细胞附着因子（层黏连蛋白 Laminine、纤维链接蛋白 Fibronectin 等胞外基质），能帮助细胞附着于带阴性电荷的底物上（玻璃或塑料培养容器），并形成键结、贴壁伸展。 ▲ 阳性电荷的促细胞附着因子，能帮助细胞附着于带阴性电荷的底物上 所以当细胞长满需要分盘的时后，就要想办法让细胞和培养底物说 再见！也就是所谓的细胞消化（Cell Detachment）。 常见细胞消化法有以下三种： 1、物理机械法 直接用液体吹打或用刮刀，施予外力让细胞与培养底物分离；适用于贴壁性弱的细胞传代，但相较于其它消化方法，这种外力无法量化控制，细胞分散效果差，且可能会造成大量细胞破损，使内容物释放到培养基，进而影响细胞传代状态。 ▲细胞刮勺 2、离子螯合法 细胞膜表面蛋白大多需要钙、镁离子来维持与胞外基质的稳定键结，当然也包含各种黏附蛋白（例：整合素、钙黏着蛋白、桥粒等），螯合剂会在不破坏细胞膜表面蛋白的状况下，抽离这些离子，使黏附蛋白失活而减少细胞-细胞间及细胞-底物间的连接作用，让细胞较容易在施予外力时，脱离培养底物并促进细胞分散。 0.02% EDTA是细胞传代较为常用的离子螯合剂，在37℃作用效果较为佳（消化较敏感的细胞可在4℃作用），适用于消化一般贴壁性细胞或细胞表面标记实验细胞。 但EDTA无法用血清终止其反应，所以在消化细胞后必须用缓冲盐溶液（如：PBS）清洗离心，以免影响后续细胞贴盘效果。 ▲ EDTA（黑）能螯合二价离子（红） 3、酶消化法 用蛋白水解酶消化连接细胞及培养底物的蛋白质，适用于消化贴壁性稍强的细胞。 （１）胰蛋白酶（Trypsin） 为一种来自于胰腺的丝氨酸蛋白酶；能辨识并剪切胜肽链中的赖氨酸（Lys）和精氨酸（Arg）羧基端（两者之一紧跟
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PROTAC分子丨各种疾病研究相关
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
根据霍华德休斯医学研究所 Dr. Brent Stockwell教授的一项调查，所有FDA（美国食品药品监督管理局）批准的组合药，仅与人体细胞中2%的蛋白相互结合。而许多重大疾病，比如癌症、自身免疫性疾病和神经变性疾病，都是由“不可成药”蛋白所引起，人体中多达85%的蛋白引起的疾病，无法用传统药物进行**。 PROTACs作为一种新型成药技术，可以让药物选择性结合致病蛋白质，并通过“泛素-蛋白酶体”系统在细胞内自然降解，因而克服了传统药物抗药性的问题。 如图所示，PROTAC充当连接器，帮助E3连接酶标记要降解的靶蛋白。整个过程就好像把你需要扔进垃圾桶的废品打上一个便签，这样的话，凡是打上了便签的靶蛋白，细胞统统都会处理掉。这也正是“泛素-蛋白酶体”系统的工作原理：给需要降解的靶蛋白贴一个“便签”，然后降解掉。PROTAC无疑简化了这个过程并J大的提高了效率。 PROTAC的一项重要应用与癌症有关。KRAS是一种重要的致癌基因，本质上是一种细胞生长的“开关”。当KRAS基因突变时，开关被开启，会导致细胞不受控制的生长，即所谓癌细胞。这种突变存在约25%的肿瘤细胞中，并导致32%的肺癌、40%的结直肠癌和85%-90%的胰腺癌病例。通常来说，KRAS被认为是“不可成药”，因为这种蛋白质非常小，很难结合。然而，PROTAC技术打破了这层壁垒，通过泛素介导靶蛋白的降解，使**成为可能。目前，许多科学家正积J研究和优化这种新方法。 另一项有前景的应用发生在自身免疫疾病领域。IRAK4作为IL-1R和TLR信号通路中zui上游的激酶，可参与先天免疫反应。某些情况下，这种信号通路可能会失调，使得促炎分子（细胞因子）的过度表达，从而导致类风湿性关节炎、湿疹和慢性皮肤病等自身免疫疾病。由于在IL-1R/TLR信号通路中设计“可成药”**方案存在困难，因此目前还没有好的**方法。利用PROTAC介导IRAK4降解，可以为**自身免疫疾病找到一种有效途径。 此外，对各类神经退行性疾病，比如阿尔兹海默症、帕金森症和亨廷顿症，PROTAC也
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原代细胞的取材很重要
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
(1)取材要注意新鲜和保鲜 新鲜组织易于培养成功，取材时应尽量在4~6h内能制作成细胞，尽快入箱培养，若不能即时培养，应将组织浸泡于培养液内，于4℃存放。若组织块较大，应在清除表面坏死组织、脂肪和结缔组织后，切碎于培养液内4℃存放，但时间不能超过24h。对于已切碎的组织或血液、淋巴组织应加入含10%二甲基亚砜的培养基，按细胞冻存方式于液氮中冷冻保存。 (2)取材应严格无菌 所取标本材料应在无菌条件下进行，为了确保无菌，对所取材料若疑有污染的可能，应将所取组织在含高浓度抗菌素(400单位/mL)甚加入适量的两性霉素B或10%达克宁液的培养液内于4℃下存放2小时以上，再用PBS洗2~3次，以确保所取材料无菌。要用无菌包装的器皿或事先消毒好的带少许培养液(内含400单位/mL抗菌素)的小瓶等便于携带的物品来取材，所取材料应避免接触有毒有害的化学物质，如碘、汞等。 (3)取材和原代细胞制作时，要用锋利的器械，如手术刀或剃须刀片切碎组织，尽可能减少对细胞的机械损伤。 (4)要仔细去除所取材料上的血液、脂肪、坏死组织及结缔组织，切碎组织时应避免组织干燥，可在含少量培养液的器皿中进行。 (5)取材应注意组织类型、分化程度、年龄等，一般来讲，胚胎组织较成熟个体组织容易培养，分化低的较分化高的组织容易生长，肿瘤组织较正常组织容易培养。取材时应尽量选用易培养的组织进行培养。 (6)原代细胞取材时要同时留好组织学标本和电镜标本。对组织的来源、部位、包括供体的一般情况要做详细的记录，以备以后查询。
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唾液睾酮含量与儿童攻击行为的关系
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
儿童攻击行为导致的校园暴力事件近年来常见于报端,正在逐步引起公众的广泛关注。校园暴力的原因既有学生本身的原因也有家庭和学校的因素，研究显示：睾酮、皮质醇等情绪激素与儿童攻击行为有明显相关，本文将重点介绍唾液睾酮检测在儿童攻击行为研究中的应用。 睾酮概念及作用睾酮（一种19C的类固醇激素）是雄性激素中最有效的天然激素。睾酮具有促进青春期发育，提高脑部兴奋度，欲维持等功能。在体液循环中，大部分睾酮都结合到血浆蛋白上，如性激素结合蛋白（SHBG）和清蛋白。仅1-2%的睾酮是以游离形式存在，并具生物活性。 唾液睾酮与攻击行为的关系有研究发现有攻击行为的初中生体内睾酮明显高于无攻击行为的初中生，任云兰等在研究儿童体内睾酮水平与力量素质和攻击行为的关系时，相关的研究数据显示：儿童口头攻击高睾酮组＞中睾酮组＞低睾酮组；愤怒或身体攻击都是高睾酮组或中睾酮组＞低睾酮组。这说明儿童睾酮与攻击行为呈正相关且具有统计学意义。 情绪激素水平的调节：睾酮、皮质醇、5-羟色胺等情绪激素在内分泌中互相影响，研究表明具有高水平皮质醇的人很可能是小心谨慎的，对惩罚敏感并且会考虑别人的观点，而低皮质醇水平的男性青少年可能在应激状态下具有低的自我控制能力，因而可能表现出攻击行为。有关人类睾酮对攻击行为的影响的原因可能与5-羟色胺功能失常有关。 唾液睾酮的检测游离睾酮可以通过唾液腺释放到唾液中，唾液中的游离睾酮浓度可以反映出血浆中游离睾酮的水平，由于唾液取样更简单而且无需反复静脉穿刺取样，所以唾液中游离睾酮的检测是一种非常简便、实用的方法。由德国IBL诊断公司出品，并深圳科润达生物工程公司总经销的唾液睾酮试剂盒，在历年的科研实践中具有显著的表现，取得丰硕的研究成果。
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总结Hyclone胎牛血清的相关知识点
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
Hyclone胎牛血清使用方法： 在细胞培养过程中，经常加入5%-20%的Hyclone胎牛血清澳洲，常使用的Hyclone澳洲胎牛血清浓度是10%。高浓度的血清可能改变细胞的基因表达谱，影响后续实验的结果，我们在实验中使用10%的Hyclone澳洲胎牛血清培养293T细胞，效果非常好。但是有些细胞也会使用5%的Hyclone FBS或者20%的Hyclone胎牛血清，要根据具体细胞选择合适的胎牛血清浓度。 HyClone胎牛血清保存方法： (1)长期保存的血清必须储存于-20℃ - 70℃ 低温冰箱中.4℃冰箱中保存时间切勿超过1个月.由于血清结冰时体积会增加约10%,因此,血清在冻入低温冰箱前,必须预留一定体积空间,否则易发生污染或玻璃瓶冻裂. (2)一般厂商提供的血清为无菌,无需再过滤除菌.如发现血清有悬浮物,则可将血清加入培养液内一起过滤,切勿直接过滤血清. (3)血清解冻：瓶装血清解冻需采用逐步解冻法:-20℃ 至 -70℃ 低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室温,待全部溶解后再分装.在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沉淀的发生.切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻,这样因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集而出现沉淀。 如何避免HyClone胎牛血清中产生沉淀? 按如下操作可避免沉淀的产生： (1)解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。 (2)血清分装冻存时，须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一。 (3)勿直接由-20℃直接至37℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。 (4)勿将血清置于37℃太久，否则血清会变得浑浊，同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏，从而影响血清的品质。 (5)血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。 (6)若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。
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医疗耗材管理这三大痛点有多少人知道？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
试剂耗材因为其分类多，用量大，想管理好比较难，尤其是医院的试剂耗材管理。医院试剂耗材也叫医疗耗材，又分为高值耗材、低值耗材、体外诊断试剂等。为乐小编就这三个医疗耗材管理，给大家简单说下其中存在的痛点和难点。 一、高值耗材 1 灰色库存 灰色库存意思即无人监管的库存。由于高值耗材实际需求的不确定性，导致医院基本采用简单粗放的事后管理模式。而事后管理模式就是没有验收、出入库等管理，容易造成出现无人监管的“灰色库存”现象。 2 监管缺失 由于植入、介入高值耗材属于高风险产品，其质量监管严格，要求全流程一码溯源。但现有很多医院采用的“跟台带货式”或“寄售式”的粗放式管理容易出现相关的质量管理漏洞，从而带来使用上的安全隐患。 3 管理混乱 因为高值耗材品类繁多，专业性要求高，容易出现退换货现象，而传统的人工登记、手动记录、纸质翻查等管理模式和手工结算方式容易导致购销存退混乱。如果没有实现基础数据库统一、信息互联互通，在高值耗材申购、采购、使用、出库等各个环节很难实现规范管理，可能就会导致出现经济损失和质量等安全风险。 二、低值耗材 1 以领代支 相关耗材领用以领代支，无法准确统计出实际消耗数量。另外，像耗材积压、过期、丢失等现象发生后难以管控。 2 供需矛盾 耗材需求计划不准确，采购供应速度不匹配，从而导致有些耗材库存积压、有些耗材紧缺等问题，产生需求与供应出现结构性矛盾。 3 信息交互 与供应商信息交互出现问题，在采购、验收、入库、出库等环节的信息化、智能化程度低，容易出现库存积压、出错率高，运营效率偏低等问题。 三、体外诊断试剂 1 冷链管理 体外诊断试剂在储运条件上的要求比较苛刻，大部分要求 2-8摄氏度的仓储运输条件，目前存在冷链信息不对称，全程质量监管不完善等问题。 2 有效期管理 体外诊断试剂的有效期一般都比较短，特别是进口试剂类，对物流管理要求高。所以这类试剂
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这三个管理要求是每个实验室工作人员都需要注意的！
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
要做好实验室管理要注意的地方太多，比如不但要做好仪器设备管理，还要做好实验室工作人员管理。但归根结底，想做好实验室管理，要看有没有制定规范化管理要求。今天为乐小编给大家整理了三点：1、实验室规范化管理要求；2、实验室环境管理；3、实验室环保要求。希望能对大家有所帮助。 一、规范化管理要求 1 要建立好严格的实验室安全管理制度，并明确好责任和要求，以防止操作人员违规操作； 2 要保持实验室干净整洁，做好实验室及设备日常清洁工作，严禁用扫帚扫地，尽量不用电风扇，避免扬尘和过分潮湿； 3 实验室相关工作人员进入操作间应更换衣帽鞋，严禁将无关物品带入实验室，避免污染和影响实验操作； 4 对于可能会相互产生交叉污染或干扰的项目做好分室进行； 5 做好人员管控，如有控制要求的区域不准随意进入，无关人员严禁随意进出实验室； 6 严禁不同项目的台面和物品混用，必须在通风柜内进行的实验操作要按规定严格执行。 二、环境管理要求 1 实验室的布局要合理并且便于工作，周围环境和测试项目间不会产生干扰和交叉污染； 2 对温度和湿度有严格要求的测试场所必须配置相应设施及监控设备，并对测试时的环境条件做好记录； 3 当电磁干扰、噪声或振动等环境因素对检测工作有影响时，要做好监控和采取措施；如对有振动要求和易产生较大振动的检测项目，要做好隔振防振措施等； 4 精密仪器不能与化学分析仪器混放，这样才能避免仪器可能会受酸碱等化学品腐蚀的可能； 5 实验与办公区域要适当分开，并对进入和使用可能会影响工作质量的区域进行限制和控制； 6 对于实验室内产生的废水、废气及其它有害物质要做好处理措施，并符合环境保护要求； 7 样品间要分别划出待检区、在检区、检毕区、留样区等，另外特殊区域要做好明显标识； 8 **有设置独立的纯水制备间。 三、环保管理要求 1 对于会产生辐射、危险化学品等专业技术部门，要独立配备实验室，
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化学室安全管理这8点你都知道吗？（一）
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
近些年来，海内外实验室安全事故频发，我国对实验室的安全管理也越来越重视，实验室种类较多，尤其是对化验室的管理尤为看重。而根据化验室的特点，化验室安全包括防水、防火、防毒、防腐蚀、防触电、防爆、防环境污染、防野蛮作业等8个方面。因篇幅所限，本篇讲解4个方面。 1、化验室防水 不管是化验室还是普通实验室，应都配有一次性水、纯水、高纯水或制水仪器，如蒸馏器、纯水机。相关作业人员在使用的过程中有忘记关水龙头的，或者是突然停水后打开水龙头忘记关闭，如果出水量过大，排水口又被堵住就会导致实验室漫水严重。这就需要我们督促或自觉关好水龙头，并且还要定期检查制水仪器，防止有漏水情况或出现浸水事件。 2、化验室防火 化验室有各种火具，如酒精灯、电炉和FID气相色谱仪会产生火的仪器等，这些都可能带来安全隐患。那么在使用这些仪器的时候，我们要注意燃烧的3要素，如着火源、可燃物、助燃物等，在使用火的时候就要消除火源附近的助燃物以免引起火灾事故。当发生火灾进行灭火时同样要结合燃烧的3要素，去掉其中1个就能阻止燃烧。火灾又分为A、B、C、D四类，每一类火灾使用的灭火器都要区分开而且每个实验室都必须配备相应的灭火器和灭火设备，且灭火设备要做好定期检查。 3、化验室防毒 在化验室使用有毒物质的时候，我们首先要了解有毒物质的理化特性、使用方法和应急措施。一切药品和试剂要有与其内容相符的标签，剧毒物品要严格遵守“五双”制度，如双人保管、双人发放、双把锁、双台帐、双人验收等。 举例说明：在配制硫酸溶液的时候，要戴好防腐蚀乳胶手套和防护眼镜；使用玻璃容器盛装，将酸加入水中而不是将水加入酸中，边加入边搅拌，待冷却后装入试剂瓶中；若硫酸溅到皮肤上要用抹布擦拭干净后再用大量水冲洗；像配制硫酸溶液这种，我们就要考虑作业前、作业中、作业后的各个注意事项。所以，在充分了解有毒物质的相关特征以及使用中要注意的哪些注意事项，否则很容易
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怎么避免一些实验室常见的安全事故？看完这六点你就知道了
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
实验室安全事故频发，那分别是什么原因造成的？又能通过哪些方式能尽可能避免、减少安全事故的发生？下面为大家整理了六个方面的内容，帮助大家提高实验室安全认识，并能尽量避免实验室安全事故发生。 一、实验室存在的安全风险 主要包括：电器安全（如触电、自燃等）、火灾、化学品（如腐蚀性、中毒性、爆炸性、燃烧性等）、辐射高低温（烫伤、冻伤）、气瓶（如燃烧、爆炸、窒息、中毒等）、漏水、三废排放、致病菌、机械安全风险（砸伤、切割伤等）等其它安全风险。 二、实验室相关安全设备 主要包括：火灾报警器、辐射报警器、灭火器、消防沙、灭火毯、消防水泵、阻火门、警示标识、安全标识、洗眼器、喷淋装置、实验室排风、气体报警器、个人防护用品、应急医疗箱、化学品安全技术说明书等相关安全设备。 三、常见的不安全现象及后果 1、气瓶使用完毕忘记关；2、消防通道被堵塞；3、阻火门常开；4、水浴/油浴锅烧干；5、饮料瓶盛放液氮；6、普通冰箱放低闪点有机溶剂；7、水龙头炸裂；8、水管冻爆；9、冷却水忘了关；10、实验员偷偷外带试剂；11、金属钠扔马桶；12、乙（瞇）醚旋蒸太快导致闪爆；13、重物不慎落下；14、掉进样品池；15、电线老化引起火灾；16、电器过载引发火灾；17、老鼠咬电线；18、烘箱/马弗炉开着过夜；19、灭菌锅不用去离子水导致结垢太多；20、锅加热管炸裂；21、赶酸不开通风柜；22、通风柜同时做电热板或电炉加热试验和使用有机溶剂；23、酸液滴在脚面上；24、穿短袖、短裙、短裤、凉鞋、长发飘飘、戴隐形眼镜等；25、下水道随便倒等不安全现象和后果。 四、应组织的安全培训 主要包括：消防安全、消防演习、灭火器使用、电器安全、自然灾害、实验室其它相关的安全知识培训（如辐射、化学品、生物安全等）。 五、应有的灭火设施 主要包括：灭火器（干粉、二氧化碳、四氯化碳等）；消防水泵；烟感报警器；火灾报警器；消防毯；消防沙。
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细胞到货后应该如何处理呢？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
刚收到细胞未开封，疑似污染，应当如何处理？ 收到细胞后，请先观察外观是否存在漏液、破损等情况，并拍照（40X、100X、200X）。发现任何问题，都请及时联系我们的销售，并提供您细胞不同倍数的照片。如询问后确定无明显污染，请取出10ml培养基空培养，细胞按照说明书正常操作处理即可。 Q：刚收到细胞，显微镜观察细胞成片漂浮，该如何处理？ 除293系列、LNCAP、SH-SY5Y、MSTO-211H、INS-1、HT-22这些易漂浮的细胞外，大部分细胞在温度低时细胞回缩变圆，漂浮的可能性也会增大。建议延长稳定时间，约4小时后观察。若细胞仍不贴壁，取出所有灌装培养基，离心收集细胞，去上清将细胞弹散，在离心管中加入1ml胰酶轻轻混匀，将离心管平放（注意胰酶细胞悬液不要沾到瓶盖以免损失细胞），消化约3分钟后加入2~3ml终止液，1000rmp，5min离心，去上清将管底细胞团尽量弹散，加入完全培养基重悬（轻轻吹吸1~2次），均匀转入2个T25瓶中，摇匀后放入培养箱中培养。 Q：贴壁细胞传代2~3次后增殖变慢，有黑点，如何操作？ 可能是消化过度导致了部分细胞的细胞膜受损、凋亡，部分细胞膜受到破坏，导致细胞生长缓慢。若细胞形态有明显变化，且细胞表面有明显黑点，间隙间也有较多黑点，可能是支原体污染，建议空培养细胞培养基，观察黑点是否会增殖。 若还有保种细胞，请复苏靠前代次，并注意观察拍照，有任何问题可以及时联系我司销售处理售后（需提供细胞图片）。 Q：收到冻管复苏24小时，细胞不增殖，该如何处理？ 冻管到货时的剩余干冰情况、收货后的保存情况、使用的血清、培养基以及复苏操作不当等原因都可能影响细胞复苏情况。 贴壁细胞： 若复苏时离心，建议48h后换液，如密度达到10%，则继续按说明书正常操作培养；若复苏时没有离心，建议收集悬浮细胞后重新接种。若细胞依然无贴壁增殖，请及时反馈销售处。 悬浮细胞： 建议复苏48小时后观察拍照，若培养基没有变色，部分细胞仍然比较圆润，可继续放置
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细胞培养附着物知多少
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
在实验室中，我们一般会用聚丙乙烯制成的无菌培养瓶、培养皿或多孔板来培养细胞。它们透光性好、生长面平滑、能够提供质地均匀、重复性好的单层培养物。然而由于是人工合成的，因此聚丙乙烯是疏水性的，表面不适宜细胞生长，故用于组织培养的塑料，都要经过γ射线照射、化学处理或电离辐射，以产生亲水的带电表面，使细胞能够附着。附着遇到的最大困难是如何让细胞附着上去，而包被附着物有可能会促进细胞的粘附。 在很多时候，为了适应不同实验的需求、解决细胞贴壁不牢的问题，我们需要对培养器皿用不同的物质进行包被后使用。这些物质可以是胶原、纤连蛋白或一些其他基质产物，尤其在培养原代细胞及3D细胞培养中，运用更为广泛。 1聚合物 科学家们发现，在缺乏血清条件下，克隆细胞必须以浓度为1mg/ml的多聚赖氨酸包被培养皿，同样的技术也可以促进神经突触的生长。其中，多聚-D-赖氨酸（PDL）异构体优于多聚-L-赖氨酸（PLL），因为前者不容易被细胞外液蛋白酶水解，但目前两者都在使用。 Poly-L-lysine的中文名为多聚赖氨酸，简称PLL，是通过链霉菌属的细菌菌株自然发酵生产聚赖氨酸。 贴壁依赖性细胞，通过包被带正电的高分子多聚赖氨酸，可以提高无血清或低血清培养环境下的细胞贴壁率，加强培养器皿表面对血清蛋白和细胞外基质蛋白的吸附，加快细胞的增殖。 多聚赖氨酸（ScienCell，货号：0403/0413）包被多适用于神经元细胞、神经胶质细胞的培养，能够促进神经细胞分化和神经突的生长。 2胶原和明胶 胶原（collagen）是哺乳动物体内含量最多的一类蛋白质，广泛存在于从低等脊椎动物的体表面到哺乳动物机体的一切组织中。它是支持细胞和组织生长的重要胞外基质蛋白，其形成的胞外环境有利于多种细胞的粘附、生长、迁移和分化。用变性胶原处理后能改善多种细胞的附着能力，如上皮细胞；而天然未变性的胶原可能是细胞分化功能表达所必需的。 明胶是一种大分子非均质亲水胶体，是胶原部分水解后得到
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血清使用和处理中的常见问题
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
血清使用和处理中的常见问题 1.保存血清方法 建议血清应保存在-5℃至-2O℃。若存放于4℃时，请勿超过一个月。一次无法用完一瓶，建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。 2.如何解冻血清才不会使产品品质受损 将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。 3.血清解冻后发现有絮状沉淀物出现，该如何处理 血清中沉淀物的出现有许多种原因，但原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成，血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解冻后，也会存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但这些絮状沉淀物，并不影响血清本身的品质。 欲去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管内离心，上清液即可接着加入培养基内一起过滤。不建议以过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞您的过滤膜。 4.为什么要热灭活血清 加热可以灭活补体系统。启动的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，启动淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究，培养ES细胞，昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。 5.有必要做热灭活吗 实验显示，经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的品质，而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，如同“小黑点”，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37℃环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。因此，除非必须，尽可能不需要做热处理这一步。 6.为什么储存在冰箱中的胎牛血清会出现沉淀 储存在2-8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀
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流式细胞术检测的工作原理
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
今天小编给大家简述一下流式细胞仪检测的工作原理，希望对您的实验工作有所帮助！ 仪器设备： 在流式细胞术中使用的仪器称为流式细胞分析仪，通常缩写为“细胞分析仪”。流式细胞分析仪由一个用于进行细胞处理的流体系统和一个包括数据采集信号检测器和处理器的光学系统组成。专为 FACS 设计的仪器还包含一个细胞分选组件，该组件可将细胞引导到不同的捕获容器中。 流体系统设计用于生成单细胞的均匀流，以确保当细胞被用于检测的光源照射时，能够进行适当分析。这通过使用加压管将细胞从样品管注入流室中来完成。从容器（通常是一根试管或一块多孔板）中抽取细胞样品，并将其注入流动液体（称为鞘液）层流中间的流室中。通过一个称为流体动力学聚焦的流程，鞘液可帮助缩窄细胞流，从而将细胞组织成一行大致单行的流线。 流式细胞分析仪的光学系统包括照明源、过滤器、透镜和收集光学器件。照明源常包括 1 个或多个激光束，且每个激光器发射的光波长不同。检测器不区分各种光波长，而是通过放置在光路径中的过滤器来将光限制在所需波长范围内。 相关试剂： 为了通过流式细胞术分析特定靶标，对细胞组分进行荧光标记。这可以通过使用单独的荧光分子（例如，细胞染料）或荧光团标记的抗体（直接偶联抗体或使用偶联二抗）来完成。 1.流式细胞术中抗体的使用 抗体是许多生物检测中的关键工具，在流式细胞术中也不例外。抗体具有特异性结合单个蛋白或蛋白修饰的能力，并且可作为一种方法来标记那些用于进行检测的靶标。通过标记目的靶标，研究人员可以评估各种细胞类型、疾病状态、**条件、发育阶段或其他生物模型中蛋白的丰度或活性。与不同蛋白结合的抗体不会相互干扰，因此，可以使用多种抗体同时检测多个靶标。这称为多重分析。抗体数量的限制是独立于其他抗体测定每种抗体的能力。在流式细胞术中，这种差分测定使用称为荧光团的荧光分子来完成。成功的实验要求具有高度特异性和经验证的抗体以及可靠的荧
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