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安装气体流量计应检查以及安装要求
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
气体流量计安装前应检查以下几项是否符合要求: (1)检查管道直径是否符合设计要求。 (2)检查气体流量计口径是否符合设计要求。 (3)气体流量计用的垫圈内径不得小于管径，可比管径大2-3 mm. (4)气体流量计用法兰焊接后必须与管道垂直，不得歪斜。法兰中心与管道中心应重合，要求焊缝必须平趋光滑。 (5)气体流量计的管道前后，至少有2倍以上管道直径的距离内无明显不光滑的凸块.无电、气焊的熔渣，露出的管接头等。 (6)环室取压时，环室内径不得小于管道的直径，可比管道直径稍大些。 (7)流量计、环室及法兰等在安装前应清除积垢和油污，并注意保护开孔锐边不得碰伤。 气体流量计安装应在管道吹洗干净后及试压前进行，以免管道内污物将气体流量计损坏或将取压口堵塞。 具体安装施工时有以下要求: (1)气体流量计安装的方向必须使流量计的圆柱形锐孔迎着流动的方向.气体流量计取压口的方位应符合设计要求。 (2)气体流量计与垫圈的中心必须与管道的中心重合，其偏心度不得超过有关规定. (3)在靠近气体流量计的引压短管上，必须安装切断阀。此阀门不得装在隔离罐或冷凝罐的后面。 (4)气体流量计安表属于隐蔽工程.应有隐蔽工程施工记录。 (5)气体流量计的设计及变更的计算数据应有完整的原始资料。 量中用气体流量计安装差压变送器 (1)安装前对变送器外观检查.检查差压变送器外壳有无损伤、腐蚀和其他故障.发现问题，及时处理.对变送器内部检查，检查变送器接插件是否清洁.元器件、零配件、连接件有无 缺损、断裂、变形、腐蚀和密封不良等情况，发现问题及时修复更换处理. (2)变送器与外界连接检查，检查变送器引入接口情况，接线盒内接线板、接线螺丝、螺孔、接线盒密封件以及变送器盖密封等有无碎、裂、缺损、老化失效等悄况.发现问题及时 处理。 (3)对变送器线路检查，用500 V兆欧表检查变送器接线端子与外壳间绝缘电阻，该电风值应在20 MΩ以上. 最后校验合格后，方可正式安装。 其导压管线安装要求有: (1
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V锥流量计安装直管段的要求说明
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
V锥流量计安装直管段的要求说明：首先注意传感器本身不能作为荷重支撑点，它不能支撑比邻的工作管道，应有夹持它的管道承重。为获得正常测量精确度，V锥流量计上游也要有一定长度直管段，但其长度与大部分其它流量仪表相比要求较低。90º弯头、T 形管、同心异径管、全开闸阀后要离传感器进口端法兰连接面 5 倍直径（5D）长度的直管段，不同开度的阀则需要 10D；下游直管段为（2～3）D；但要防止蝶阀阀片伸入到传感器测量管内。各标准或检定规程所提出上下游直管段长度亦不一致，有的超声波流量计要求比通常要求高。这是由于为保证达到当前0.5级精度仪表的要求。 V锥流量计安装位置和流动方向，传感器安装方向水平、垂直或倾斜（流体必须水平或倾斜向上方向流动）均可，不受限制。在传感器邻近管道进行焊接或火焰切割时，要采取隔离措施，防止衬里受热，且必须确认仪表转换器信号线未连接，防止损坏转换器水平安装时要使电极轴线平行于地平线，不要处于垂直于地平线，因为处于地部的电极易被沉积物覆盖，顶部电极易被液体中偶存气泡擦过遮住电极表面，使输出信号波动。负压管系的安装，氟塑料衬里传感器须谨慎地应用于负压管系；正压管系应防止产生负压，例如液体温度高于室温的管系，关闭传感器上下游截止阀停止运行后，流体冷却收缩会形成负压，应在传感器附近装负压防止阀，有制造厂规定 PTFE 和 PFA 塑料衬里应用于负压管系的压力可在 200C、1000C、1300C 时使用的绝对压力必须分别大于对于不导电管道，接地法兰夹装在传感器法兰和管道法兰之间。但要保证测量管与工艺管道同轴。其轴线偏离不得超过 2MM。V锥流量计测量固液两相流体**垂直安装特别是在污水流量计量中，自下而上流动。这样能避免水平安装时衬里下半部局部磨损严重，低流速时固相沉淀等缺点。
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中华白海豚面临的现状及保护对策
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
中华白海豚是世界上七十八种鲸类品种之一；为统一起见，各地学者都称它们 为「印度太平洋驼背豚」(学名为Sousa chinensis)，而「中华白海豚」只是中国及居民给它们的本地称号。中华白海豚属于鲸类的，是及杀人鲸的近亲。很多市民及渔民均以为中华白海豚是一种，其实它们以及其他及海豚都是，和人类一样能够恒温、用肺部呼吸、怀胎产子及用乳汁哺育幼儿。 中国也有部分认为，产于和水域的白海豚，背鳍基部并无隆起，也不驼背，应废弃使用印度驼背海豚或太平洋驼海豚等名称。 外形特征 中华白海豚身体修长呈纺锤型，喙突出狭长，刚出生的白海豚约1米长，性体长2.0～2.5m，最长达2.7m，体重200～250kg；背鳍突出，位于近中央处，呈后倾三角形；胸鳍较圆浑，基部较宽，运动极为灵活；尾鳍呈水平状，健壮有力，以中央缺刻分成左右对称的两叶，有利于其快速游泳。眼睛乌黑发亮，上、下颌的每侧都有32～36枚圆锥形的牙齿，齿列稀疏。吻部狭、尖而长，长度不到体长的十分之一。喙与额部之间被一道“V”形沟明显地隔开。脊椎骨相对较少，椎体较长。鳍肢上具有5指。全身都呈色或乳白色，背部散布有许多细小的灰黑色斑点，有的略带粉红色，短小的、细而圆的和匀称的三角形都是近似淡红色的棕灰色[1]。 白海豚身上的粉红色并不是色素造成的，而是表皮下的所引致。这与调节体温有关。一般会从初生的深灰色慢慢褪淡为成年的粉红色。除了母亲及幼豚，白海豚组群不会有固定的成员。它们的群居结构非常的有弹性，而组群的成员也时常更换。根据记录，组群最多可有23条白海豚，而平均为4条。 呼吸系统 中华白海豚与一样肺部发达，用肺呼吸。外呼吸孔呈半月形开放于头额顶端，呼吸时头部与背部露出水面，直接呼吸空气中的氧气，并发出“Chi-Chi-”的喷气声。 定位系统 中华白海豚眼睛较小，位于头中华白海豚部两侧，眼球黑色，视力较差，其辨别物体的位置和方向主要靠回声定位系统，在鼻孔下有一气囊，靠鼻塞肉的开闭发声，这种声线在前
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高低温试验箱工作程序介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
工作一般分为两个程序，即恒温工作和循环工作，如有需要，试验程序可根据实际需要设定。 恒温工作的试验步骤： 1、按工作技术状态安装好试件。 2、调节试验箱内的空气温度使之达到所要求的恒定温度（适用时还有湿度）。 3、在试件温度达到稳定后继续保持试验箱内条件至少2h。若内部元件的温度无法测量，则应根据热分析确定额外的热浸时间，以确保整个试件的温度都达到稳定。 4、尽可能目视检查试件，记录检查结果，并与试验前的数据进行比较。 5、使试件工作，并使其温度重新稳定。根据技术文件的要求对试件进行工作性能检测，记录检测结果并与试验前的数据进行比较。 6、使试件停止工作，将试验箱内的空气温度调节到标准大气条件，并保持该条件直到试件温度达到稳定。 7、按技术文件的要求对试件进行全面的目视检查和工作性能检测，记录检查和检测结果，并与试验前数据进行比较。 循环工作的试验步骤： 1、按工作技术状态安装好试件。 2、调节试验箱内的空气温度使之达到技术文件规定的工作循环初始条件，并保持此条件直至试件温度达到稳定。 3、将试件暴露至少3个循环，或为确保达到试件的最高响应温度所需要的循环数。循环暴露期间尽可能对试件进行全面的目视检查，并记录检查结果。 4、在暴露循环的最高温度响应时段使试件工作（由于试件的热滞后效应，最高温度响应时段与温度循环的最高温度时段可能不一致）。 5、使试件停止工作，将试验箱内的空气温度调节到标准大气条件，保持该条件直到试件温度达到稳定。 6、按技术文件的要求对试件进行全面的目视检查和工作性能检测，记录检查和检测结果，并与试验前数据进行比较。
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PCR技术专题：分子标记——AFLP原理和操作步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
一、原理 AFLP也是通过限制性内切酶片段的不同长度检测DNA多态性的一种DNA分子标记技术。但AFLP是通过PCR反应先把酶切片段扩增，然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶上进行电泳，多态性即以扩增片段的长度不同被检测出来。实验中酶切片段首先与含有与其共同粘末端的人工接头连接，连接后的粘末端顺序和接头顺序就作为以后PCR反应的引物结合位点。实验中，根据需要通过选择在末端上分别填加了1～3个选择性核苷的不同引物，可以达到选择性扩增的目的。这些选择性核苷酸使得引物能选择性地识别具有特异配对顺序的内切酶片段，进行结合，导致特异性扩增。 二、实验试剂 Taq酶、EcoRI/ MseIEcoRI/MseI接头、E+A引物M+C引物、T4DNALigaseE和M引物、琼脂、过硫酸胺、、尿素、硝酸银、甲酰胺、 dNTPs、 二甲苯青、冰醋酸、玻璃硅烷、50bpMark 三、操作步骤 （一） 基因组DNA提取和纯化 A 、参考实验一的大量提取DNA实验方法， B、DNA的纯化：用0.8%琼脂糖凝胶（含EB0.5μg/ml）电泳检测片段大小，取出其中的1/3已提取的基因组DNA进行纯化，首先用TE缓冲液补满至总体积50ul，再等体积苯酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）、氯仿/异戊醇（24∶1）各抽提一次，离心吸上清液于Eppendorf管中，加入1/10体积的NaAC和二倍体积预冷的无水乙醇，－20℃放置2h以上，10000g离心10min，用70%的乙醇漂洗DNA沉淀2次 ，风干后溶于30μlTE缓冲液中，UV-2401PC（岛津）紫外分光光度计检测A260、A280值并定量，再用0.8%琼脂糖凝胶（含EB0.5μg/ml）电泳检测片段大小。 注：0.1-0.2g组织可用100ul溶液E溶，0.5g组织，溶液E可增加至300ul，此时DNA浓度大约为100ng/ul。 （二）限制性酶切及连接 在0.2ml离心管中加入：模板量约为250ng，2.5μl 10×酶切缓冲液， 2.5μl 10×T4DNA连接酶切缓冲液，5U EcoRⅠ，5U MseⅠ，2U T4连接酶，50pmol MseⅠ接头（序列见表2），双蒸水补至25μl。用PE公司PCR扩增仪设定37℃过夜反应后，于65℃20min灭酶活，－20℃保存
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PCR技术专题：PCR法检测乙肝病毒（HBV）
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
多聚酶链反应(polymerase chainreaction，PCR)是一种模拟天然DNA复制过程，在体外扩增特异性DNA（或RNA）片段的新技术。本实验是将待检双链DNA经94℃高温变性成单链作模板，然后加入一对人工合成的寡核苷酸引物，引物分别与待扩增DNA片段的两端互补，经55℃低温退火，引物与模板互补结合。在72℃条件下，结合于模板上的引物在DNA聚合酶的催化下，利用反应体系中的4种dNTP为原料，按碱基互补配对的方式延伸合成两条新的DNA链。所扩增的DNA可作为下一轮扩增反应的模板。重复上述循环过程，经过20～30个周期后，特异的目的DNA可扩增百万倍以上。 PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后即可观察到特异的扩增条带。 PCR方法操作简便，灵敏度高，可检测出少至0.1pg的目的DNA。目前已广泛应用于多种病原微生物的检测。 乙肝病毒（HBV）感染引起的乙型肝炎，在我国发病率很高，而且HBV与肝硬化、原发性肝癌关系密切，因此，HBV的诊断极为重要。PCR检测HBV-DNA敏感性明显高于传统的血清学方法，且能显示HBV在体内复制情况，直接反映患者血液的感染性，并对模棱两可的或与临床表现不符的血清学结果，PCR技术有助于明确诊断。 【材料】 待检血清、HBV-PCR反应液 20管（20μl/ 管）、HBV-DNA裂解液、阳性模板、溴化乙锭、PCR扩增仪、电泳仪、紫外线分析仪。 【方法】 1、标本处理： 取混匀的血清20μl加20μl裂解液，搅匀后100℃沸水浴10分钟，最后15000rpm/分钟离心3分钟，取4μl上清待检。 2、加样及PCR： 取反应液一管（使用前稍加离心），加4μl待检上清或阳性对照于底层反应液中，混匀后高速离心片刻，然后置94℃预变性2分钟，再按94℃/30秒、55℃/30秒、72℃/60秒扩增35个循环。 3、电泳与结果判断： 取15μl 反应液，经2%琼脂糖凝胶电泳（5V/cm）30分钟后，在紫外灯下观察结果，若410bp处出现橙黄色带，则HBV为阳性。 【注意事项】 1、反应管中加好所有试剂后，应立即上机扩增，以免形成过多的二聚体。 2、阳性模板可用阳性血清代替，处理
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PCR技术专题：限制性片段长度多态性（RFLP）分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
限制性片段长度多态性（restriction fragment lengthpolymorphism,RFLP）分析技术是分子生物学的重要分析方法之一，用于检测DNA序列多态性。PCR-RFLP 是将PCR技术、RFLP 分析与电泳方法联合应用，先将待测的靶DNA 片段进行复制扩增，然后应用DNA限制性内切酶对扩增产物进行酶切，最后经电泳分析靶DNA 片段是否被切割而分型。 本实验将应用RFLP 分析技术检测NMDA 受体中的GRIN2A 亚基基因3 号内含子中的2 个SNP 位点rs17750303（A→C）和rs837690（A→G）。 [实验原理] DNA 限制性内切酶具有识别特定的DNA 序列并在特定的部位切断DNA 双链的活性功能，DNA分子由于突变（核苷酸的置换、插入或缺失）改变（或形成）了限制性内切酶识别序列，使DNA 限制性内切酶不能（或可以）将靶DNA片段切断，电泳检测时，存在相应DNA 限制性内切酶识别序列者原DNA 片段变成短片段；不存在相应DNA 限制性内切酶识别序列者原DNA 片段长度将不发生变化。 [实验器材] PCR 扩增仪、电泳仪、电泳槽、微波炉、恒温箱或恒温水浴等。 [实验试剂] 限制性内切酶BstNI、模板DNA、Taq聚合酶、PCR引物（上游引物:5－CTAAGCCTTCCCTTTATCACC－3’；下游引物：5－TTCACAGTCGTGCTTGTTTCT－3’）、、酶消化缓冲液、电极缓冲液、上样缓冲液等。 [实验方法] 1.PCR扩增：PCR反应体系为20μl，含模板2μl(约50ng)，引物各1.6μl，dNTP1.6μl(0.4mM)，10×Buffer缓冲液2μl，Taq酶0.5U，加双蒸水至20.0μl；PCR反应条件为95℃2min，94℃30sec/64℃30sec/72℃30sec(5个循环)，94℃30sec/63℃30sec/72℃30sec(5个循环)，94℃30sec/60℃30sec/72℃25sec(23个循环)，94℃30sec/60℃30sec/72℃1min。 2.PCR 扩增产物的检测：取PCR 扩增产物2μl，以1%的琼脂糖凝胶潜水电泳法检测靶DNA 片段的扩增产物。 3.酶消化反应：取PCR 产物约2.0μl，加限制性内切酶BstN I1U，10×酶消化反应缓冲液1.0μl，蒸溜水补至10.0μl 置试验管中。37℃温箱中孵育4h。 4.酶切产物电泳分型：6%聚凝胶电泳（T=6%
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PCR技术专题：巢式PCR
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
标签： 巢式 PCR 巢式PCR是一种变异的聚合酶链反应（PCR），使用两对（而非一对）PCR引物扩增完整的片段。第一对PCR引物扩增片段和普通PCR相似。第二对引物称为巢式引物（因为他们在第一次PCR扩增片段的内部）结合在第一次PCR产物内部，使得第二次PCR扩增片段短于第一次扩增。 实验方法 基本方案 实验方法原理 由于巢式PCR反应有两次PCR扩增，从而降低了扩增多个靶位点的可能性（因为与两套引物都互补的引物很少）增加了检测的敏感性；又有两对PCR引物与检测模板的配对，增加了检测的可靠性。 由于第二套引物位于第一轮PCR产物内部，而非目的片断包含两套引物结合位点的可能性极小，因此第二套引物不可能扩增非目的片断。这种巢式PCR扩增确保第二轮PCR产物几乎或者完全没有引物配对特异性不强造成的非特异性扩增的污染。 巢式PCR反应模式图 实验材料 试剂、试剂盒 仪器、耗材 实验步骤 1. 目标的DNA模板蓝色的第一对引物结合。第一对引物也可能结合到其他具有相似结合位点的片段上并扩增多种产物。但只有一种产物是目的片断（图中未显示可能的多种产物）。 2. 使用图中红色标记的第二套引物对第一轮PCR扩增的产物进行第二轮PCR扩增。 第一轮 1. 大小：1192 bp 2. 初始孵育：94℃4分钟 3. 变性：94℃45秒 4. 退火：58摄氏度45秒 5. 聚合：72摄氏度45秒 6. PCR循环：36 第二轮 1. 大小：271 bp 2. 初始温育：95℃2分钟 3. 变性：95℃45秒 4. 退火：60℃下45秒 5. 聚合：72摄氏度30秒 6. PCR循环：36 收起 注意事项 1. 引物设计原则：每个特异性引物为24~26个碱基，Tm：64-65%，GC：44-55% 。这样你可以同时做多个不同的TAIL PCR。 2. 在第一轮PCR结束之后，将PCR产物稀释1 000倍（视情况而定）作为第二轮PCR的模板，第二轮PCR的产物同样稀释1 000倍（视情况而定）作为第三轮PCR的模板，这样依次类推。实际操作中可以搞3轮甚至更多，当然做3轮是比较合适了，这个时候PCR的产
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PCR技术专题：菌落PCR
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
标签： 菌落 PCR 菌落PCR（Colony PCR）可不必提取基因组DNA，不必酶切鉴定，而是直接以菌体热解后暴露的DNA为模板进行PCR扩增，省时少力。建议使用载体上的通用引物。通常利用此方法进行重组体的筛选或者DNA测序分析。最后的PCR产物大小是载体通用引物之间的插入片断大小。 实验方法 基本方案 实验方法原理 直接挑取菌落进行PCR，PCR的95℃加热可以破胞，释放基因组DNA或质粒，成为PCR体系的模板，然后进行链式扩增。 实验材料 试剂、试剂盒 仪器、耗材 实验步骤 1. PCR混合液的制备 （1）Taq buffer（10×） 180 ul （2）dNTP（2.5 mM） 20~25 ul （3）Primer Forward（引物浓度在10 Pmol） 5 ul （4）Primer Reverse（引物浓度在10 Pmol） 5 ul （5）ddH2O 147 ul （6）Taq（2 U/ul） 12~15 ul 2. 常温下随机挑选转化板上的转化子，用灭菌的牙签或枪头挑取单个菌落（强调单个，不能是双克隆），在LB琼脂糖平板上轻点，做一拷贝。3. 然后将沾有菌体的牙签或枪头置于相应的装有PCR管中或者96空pcr反应板（管子做好记号，如平板上点的是1#，则管子上也标1#，以便筛选到克隆后的扩到培养）。4. 挑好单克隆菌落后将之前配制好的PCR混合液加入体系是30 ul。 5. 将混有菌体的PCR混合物置于PCR仪中，按常规条件扩增。 6. 将扩增出来的反应液中加入溴酚蓝或是其他染料，电泳检测是否得到目的片断。如有则为阳性克隆。 7. 将已经接种有菌落的平板置37℃培养箱培养过夜，使菌落扩增。8. 次日挑选阳性克隆做进一步筛选或培养。步骤2也可以不点板，直接接种摇菌，如果早上做PCR的话，下午就可以提质粒，得到重组载体。 收起 注意事项 1. 设计引物很关键。一般如果是定向克隆，用载体上的通用引物即可；如pET系列可用T7通用引物。如果是非定向克隆（如单酶切或平末端连接），一条引物用载体，一条引物用目的基因上的，这样就可以比较方便的鉴定了，而且错误概率很低。PCR条件的选择接近最佳，
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质粒DNA提取实验步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
质粒DNA提取实验步骤 质粒DNA提取可以：(1)快速纯化质粒;(2)用于测序、体外转录与翻译、限制性内切酶消化、细菌转化等分子生物学实验。实验方法原理质粒多为一些双链、环状的DNA分子，是独立于细菌染色体之外进行复制和遗传的辅助性遗传单位。质粒是进行分子生物学实验操作，进行遗传工程改良物种等工作时最主要的DNA载体。 提取质粒的基本步骤分为三步： ①细菌的培养和质粒的扩增 ②细菌菌体的裂解 ③质粒DNA的纯化 实验材料 大肠杆菌 试剂、试剂盒 Tris-Hcl EDTA 葡萄糖 NaOH KAac NaAc 异丙醇 溶菌酶 酚:氯仿 无水乙醇 LB培养基 仪器、耗材 超净工作台 培养箱 摇床 恒温水浴锅 台式离心机 取液器 低温冰箱 冷冻真空干燥机电泳仪 水平电泳槽 紫外观测仪 实验步骤 一、材料与试剂准备 1. 材料：大肠杆菌。 2. 仪器：超净工作台，培养箱，摇床，恒温水浴锅，台式离心机，取液器一套，低温冰箱，冷冻真空干燥机，电泳仪，水平电泳槽，紫外观测仪。 3. 试剂： (1)Solution I ：25 mM Tris-Hcl(pH7.4)，10 mM EDTA(pH8.0)，50 mM葡萄糖，高压灭菌，4℃保存。 (2)Solution II ：0.2 M NaOH， 1%SDS 现配现用。 (3)Solution III ：5 N KAc pH4.8，高压灭菌，4℃保存。 (4)3 M NaAc pH5.2，高压灭菌，4℃保存。 (5)异丙醇，溶菌酶(8 mg/ml)，酚/氯仿，无水乙醇，70%乙醇，LB培养基，电泳试剂。 二、操作步骤 1. 细菌繁殖：LB培养基，2 ml/20 ml，37℃，200 rpm，摇一摇，过夜。 2. 离心10 min，5 000 rpm， 4℃;弃上淸液。 3. 沉淀(菌体细胞)预冷的TES缓冲液洗涤，离心10 min，5 000 rpm， 4℃，加入预冷的1 ml Solution I，冰浴10 min。 4. 重新悬浮，加入150 ul溶菌酶母液，室温放置5 min。 5. 加入1.2 ml Solution II， 冰浴5 min。 6. 加入0.9 ml预冷乙酸钾，混匀，离心10 min，12 000 rpm，4℃。 7. 加
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PCR技术专题：反向PCR （inverse-PCR）实验步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
inverse-PCR是克隆插入片段侧翼序列非常有效的方法。通常采用的Tail-PCR假阳性太多，而Inverse-PCR一般只要有特异条带，基本上就是目的片段。 基本步骤如下： 1、反向PCR（Inverse PCR）原理：反向PCR是克隆T-DNA插入位点侧翼DNA序列非常有效的方法。 a. 选择合适的限制性内切酶位点。并在T-DNA的边界（左边界、右边界均可）和酶切位点附近设计引物P1、P2； b. 回收DNA，T4连接酶连接，使酶切后的DNA片段环化； c. 回收连接后的DNA，用引物P1、P2做PCR，就可扩增到两端为T-DNA插入序列，中间为侧翼序列的片段。 2、限制性内切酶消化：选择合适的限制性内切酶，基因组一定要切成弥散性的条带。在酶切之前，应对基因组DNA定量。 根据T-DNA的左边界序列选择合适的酶切位点EcoRI，BamHI和HindIII/PstI，并在酶切位点上游附近设计引物Z1，Z2，Z3和Z4，然后用这些内切酶分别消化基因组DNA，酶切体系如下： Buffer for EcoR I 2μl Genomic DNA 3μl EcoR I 0.5μl （10u/μl） ddH2O 14.5 μl 20μl 37度 过夜，电泳检测酶切效果。 3、回收DNA ① 将酶切产物转到1.5ml离心管中，用ddH2O洗涤干净，并稀释到250μl； ② 加入等体积的酚和氯仿（V：V=1：1），涡旋混匀，室温静置1min； ③ 最大速度（13, 000 rpm）离心1min； ④ 将上清移到另一管中，加入等体积的氯仿，涡旋混匀，室温静置1min； ⑤ 最大速度（13, 000 rpm）离心2min； ⑥ 将上清移到另一管中，加入2.5倍体积的-20℃预冷的无水乙醇，0.1倍体积的3M 乙酸钠（pH=5.2），轻轻振荡混匀，室温静置5min； ⑦ 4℃最大速度（13, 000 rpm）离心10~15min； ⑧ 弃上清，尽量除去管壁上的液体； ⑨ 加入1ml -20℃预冷的70%乙醇，轻轻颠倒几次。最大速度（13, 000 rpm）离心5min； ⑩ 除去乙醇，在超净台上平放，将管壁上的乙醇挥发掉，20~40μl ddH2O溶解。-20℃保存。 4、连接。体系如下： DNA 2μl 10×buffer 10μl T4 ligase 1μl ddH2O 87μl 100μl 12-14℃ over
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高纯度exosomes分离方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
外泌体（Exosomes）是一种直径在40～100 nm的圆形单层膜结构，可由机体众多类型细胞释放，并广泛分布于唾液、血浆、乳汁、尿液等体液当中。外泌体可携带多种蛋白质、mRNA、miRNA，参与细胞通讯、细胞迁移、血管新生和肿瘤细胞生长等过程。2007 年，Valadi等发现细胞分泌的外泌体中含有生物学活性的mRNA、microRNA，使得研究人员对外泌体的研究热情激增。 传统的外泌体分离要涉及超速离心，操作繁琐、过程冗长，所得到的外泌体纯度较低。美国101Bio提供的系列外泌体分离试剂盒，可从细胞培养基或血清中富集大量完整的外泌体，试剂盒具有 ü 方便——无需超速离心； ü 快捷——不到2个小时即可完成外切体分离纯化； ü 高回收率——是超速离心的5~10倍； ü 高纯度——所得外切体纯度高达95% 以上； ü 仅需2ml的细胞培养基或200ul血清，即可获得足够的外切体用于下游研究。 PureExo®Exosomes Isolation Kit for Cell Culture Media 试剂盒组分 Solution A、Solution B、Solution C和PureExo® Columns 操作步骤 1. 无血清培养或血清饥饿48小时的细胞培养液于4℃ 600 g 离心10mins取上清； 2. 在玻璃管中按照比例加入细胞上清液及ABC混合液摇匀； 3. 于4℃孵育1h后出现分层； 4. 弃上层培养基，并将其余液体转移至EP管； 5. 1000g离心3mins，出现分层，弃上层培养基及下层无色澄清液体； 6. 上述步骤重复操作一次； 7. 室温干燥5~10mins后用1X PBS重悬； 8. 重悬液转移至纯化柱中，2000g离心5mins；9. 收集流出液即为外切体。
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阀门常见的十大问题解决方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
1.为什么切断阀应尽量选用硬密封？ 切断阀门要求泄漏越低越好，软密封阀的泄漏是最低的，切断效果当然好，但不耐磨、可靠性差。从泄漏量又小、密封又可靠的双重标准来看，软密封切断就不如硬密封切断好。如全功能超轻型调节阀，密封而堆有耐磨合金保护，可靠性高，泄漏率达10-7，已经能够满足切断阀的要求。 2.为什么双密封阀不能当作切断阀使用？ 双座阀门阀芯的优点是力平衡结构，允许压差大，而它突出的缺点是两个密封面不能同时良好接触，造成泄漏大。如果把它人为地、强制性地用于切断场合，显然效果不好，即便为它作了许多改进(如双密封套筒阀)，也是不可取的。 3.为什么双座阀小开度工作时容易振荡？ 对单芯而言，当介质是流开型时，阀门稳定性好；当介质是流闭型时，阀的稳定性差。双座阀有两个阀芯，下阀芯处于流闭，上阀芯处于流开，这样，在小开度工作时，流闭型的阀芯就容易引起阀的振动，这就是双座阀不能用于小开度工作的原因所在。 4.什么直行程调节阀防堵性能差，角行程阀防堵性能好？ 直行程阀门阀芯是垂直节流，而介质是水平流进流出，阀腔内流道必然转弯倒拐，使阀的流路变得相当复杂(形状如倒“S”型)。这样，存在许多死区，为介质的沉淀提供了空间，长此以往，造成堵塞。角行程阀节流的方向就是水平方向，介质水平流进，水平流出，容易把不干净介质带走，同时流路简单，介质沉淀的空间也很少，所以角行程阀防堵性能好。 5.为什么直行程调节阀阀杆较细？ 直行程调节阀门它涉及一个简单的机械原理：滑动摩擦大、滚动摩擦小。直行程阀的阀杆上下运动，填料稍压紧一点，它就会把阀杆包得很紧，产生较大的回差。为此，阀杆设计得非常细小，填料又常用摩擦系数小的四氟填料，以便减少回差，但由此派出的问题是阀杆细，则易弯，填料寿命也短。解决这个问题，**的办法就是用旅转阀阀杆，即角行程类的调节阀，它的阀杆比直行程阀杆粗2～3倍，且选用寿命长的石墨
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