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BCA蛋白定量方案—最便宜的BCA蛋白定量分析试剂盒技术说明
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
精确的蛋白质定量是蛋白质相关实验所必需的，这些实验涉及分子生物学，细胞生物学，生物化学，发育生物学和神经科学的研究课题。 最常用的蛋白质定量分析方法主要是BCA法和Bradford法。 基于Bradford法的原理，会由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同，导致不同蛋白质测定时有较大的偏差，而且容易受到去污剂（Triton X-100、SDS…）的干扰。所以更多的权威机构和客户会选择BCA法检测蛋白浓度，例如，FDA指定BCA试剂盒为新药申报材料中蛋白质检测的唯一标准试剂。 BCA法实验原理：碱性条件下，蛋白质分子中的肽键结构能与Cu2+结合生成紫色络合物，同时将Cu2+还原为Cu+。BCA试剂可灵敏特异的与Cu+结合，形成稳定的有颜色的络合物，562nm处有最高的吸收值，可在540-595nm测定其吸收值，颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。 Biovision的常规BCA蛋白定量试剂盒的优点： · 实验操作简单，便捷； · 灵敏度高，检测浓度下限达到25μg/ml； · 测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的去污剂等化学物质的影响，可以兼容SDS、Triton X-100以及Tween 20等； · 在20-2000μg/ml浓度范围内有良好的线性关系； · 检测不同蛋白质分子的变异系数小于Bradford法蛋白定量； · 性价比无与伦比，单次实验费用比国产试剂盒更低。 产品名称及描述 品牌 货号 产品说明 BCA Protein Assay Kit II Biovision K813-5000 当然BCA法也有其不足之处，就是容易收到略高浓度还原剂的干扰，如：DTT、TCEP 和β-mercaptoethanol等。为此，作为全球生命科学公司的领导者，Biovision经过探索攻坚，彻底完善了BCA的不足，推出市面上唯一一款可兼容高浓度还原剂的BCA试剂盒，。可兼容：TCEP (20 mM), DTT (10 mM), β-ME (35 mM) 图1. 高浓度还原剂条件下，Biovision试剂盒（）的优异表现 产品名称及描述 品牌 货号 产品说明 BCA Protein Assay Kit - Reducing Agent Compatible Biovision K818-1000
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【锐赛小课堂】WB生物样本总蛋白抽提
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
锐赛小课堂1222-158 一、贴壁细胞蛋白提取 A 1..将水浴锅的温度调至100℃，等水浴锅达到100℃温度后，取出需要收样的细胞的培养皿或者孔板。 2.将缓冲液（1Xloading buffer）置于100℃水浴锅中预热10min。 （loding buffer： 是5Xloding buffer用纯水稀释到1Xlodingbuffer。厂家：碧云天；货号： P0015L） 3.弃去细胞培养基，用PBS洗两遍。 4.取预热好的缓冲液1X loding加入到去除细胞培养液的细胞中，用细胞刮将细胞挂下收集到EP管。 （加入loding buffer的体积建议量，以细胞密度长到70%-80%，6孔板每孔加入120ul；150px皿200ul；250px皿300ul） 5.将收集好的细胞液转移到EP管中，立即放入100℃煮15min。 6. B 1.倒掉培养液，并将瓶倒扣在吸水纸上使吸水纸吸干培养液（或将瓶直立放置一会儿使残余培养液流到瓶底然后再用移液器将其吸走）。 2.每瓶细胞加 3 ml 4℃ 预冷的 PBS（0.01M pH7.2～7.3）。平放轻轻摇动 1 min 洗涤细胞，然后弃去洗液。重复以上操作两次，共洗细胞三次以洗去培养液。将 PBS 弃净后把培养瓶置于冰上。 3.按 1 ml 裂解液加 10 μ PMSF（100 mM），摇匀置于冰上。（PMSF 要摇匀至无结晶时才可与裂解液混合。） 4.每瓶细胞加 400 μ 含 PMSF 的裂解液，于冰上裂解 30 min，为使细胞充分裂解培养瓶要经常来回摇动。 5.裂解完后，用干净的刮棒将细胞刮于培养瓶的一侧（动作要快），然后用枪将细胞碎片和裂解液移至 1.5 ml 离心管中。（整个操作尽量在冰上进行。） 6.于 4℃ 下 12000rpm 离心 5 min。（提前开离心机预冷） 7.将离心后的上清分装转移倒 0.5 min 的离心管中放于-20℃ 保存。 （个人感觉上述方法可操作性有待加强，细胞中蛋白本来就很少，一瓶 50 ml 的细胞有时按照实验要求只能加 100-200μ 的裂解液，按照上述操作，直接用 200μ 裂解液进行裂解，根本就不够瓶壁上沾的。本人是先用预冷的 PBS（一般数毫升）加入后，用细胞刮刮下细胞，转移至试管中，如果数瓶细胞是收集同一蛋
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DC-CIK的制备方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
【背景】 CIK 是「Cytokine-Induced Killer Cells」的缩写，中文全称为「细胞因子诱导的杀伤细胞」。 CIK 是单个核细胞在 CD3 单抗和多种细胞因子 （包括 IFN-γ, IL-2 等） 的作用下培养获得的一群以 CD3+CD56+细胞为主要效应细胞的异质细胞群， 其既具有 T 淋巴细胞强大的抗肿瘤活 性，又具有 NK 细胞 （自然杀伤细胞） 的非 MHC （主要组织相容性抗原） 限制性肿瘤杀伤能力。 CIK 细胞具有杀瘤活性高、杀瘤谱广，对正常组织毒性低，体外可高度扩增等特点，是目前 临床上广泛使用的过继性免疫**细胞。 DC 是「Dendritic Cells」的缩写，中文全称为「树突状细胞」，因其成熟时伸出许多树 突样或伪足样突起而得名。DC 是由 2011 年诺贝尔奖获得者、加拿大籍科学家 Ralph M. Steinman 于 1973 年发现的，是目前发现的功能最强的抗原递呈细胞 （Antigen Presenting Cells, APC）。已证实，DC 是唯一能够显著刺激初始 T 细胞 （Naïve T cells） 增殖的 APC,而其它 APC （如单核巨噬细胞，B 细胞等） 仅能刺激已活化的或记忆性的 T 细胞。DC 是机体适应性 T 细胞免疫应答的始动者，在肿瘤免疫中具有极其重要的作用。 DC-CIK 即 DC 和 CIK 细胞在体外共培养，然后回输给患者。严格的说，最终的效应细 胞是经 DC 体外活化的 CIK 细胞。多项研究表明，DC 与 CIK 具有协同作用，共同孵育后， DC 表面共刺激分子的表达及抗原递呈能力均明显提高，而 CIK 的增殖能力和体内外细胞毒 活性也得以增强，因此 DC-CIK 较单独的 CIK **更为有效。若将肿瘤抗原负载的 DC 与 CIK 共培养，可刺激产生肿瘤抗原特异性的 T 细胞，这样的 DC-CIK **则兼具特异性和非 特异性双重肿瘤杀伤作用，比未负载肿瘤抗原的 DC 刺激活化的 CIK 活性更强，常被用于 临床和科研。 【培养原理】 1.DC 培养用细胞因子： GM-CSF （粒细胞巨噬细胞集落刺激因子）： GM-CSF 是一种造血生长因子，在体外可刺激中性粒细胞和巨噬细胞的集落形成， 并具有促进早
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三种流式方法检测细胞凋亡
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
一、检测原理 细胞发生凋亡时，其细胞膜的通透性也增加，但其程度介于正常细胞和坏死细胞之间。利用这一特点，被检测细胞悬液用荧光素染色，利用流式细胞仪测量细胞悬液中荧光强度来区分正常细胞、坏死细胞和凋亡细胞。 流式细胞仪检测有下列特点 1、检测的细胞数量大，因此其反映群体细胞的凋亡状态比较准确 2、可用许多相关分析 3、结合被测细胞DNA含量分析，可确定凋亡的细胞所处的细胞周期。但该法周样也具有标本制作复杂。非原位检测，不易与变性细胞鉴别等因素的限制。 二、检测方法 1、检测形态学及细胞膜完整性的Hoechs-PI双染色法 细胞发生凋亡时，其细胞膜的通透性也增加，但其程度介于正常细胞和坏死细胞之间，利用这一特点，被检测细胞悬液用荧光素染色，采用流式细胞仪测量细胞悬液中细胞荧光强度来区分正常细胞、坏死细胞和凋亡细胞。 常用Hoechs-PI染色法，正常细胞对染料有拒染性，荧光着色很浅，凋亡细胞主要摄取hoechs-PI染料，呈现强蓝色荧光，而坏死细胞主要摄取碘化丙啶（PI）而呈红色荧光。 2、DNA片段原位标记 凋亡细胞DNA片段原位末端检测技术是指在细胞（或组织）结构保持不变的情况下，用荧光素、地高.辛或生物素标记的脱氧尿三磷酸（deoxyuridinetriphate，UDTP）和末端脱氧核苷酸转移酶（terminal deoxynucleotidy1 transferase，TdT）相反应与凋亡细胞裂解后3'的羟基（-OH）端相结合经显色反应后检测DNA裂解点的技术。 DNA片段原位标记法有两种 （1）原位缺口转移（in situ nick-translation，ISNT）技术，该技术是1994年由Fehsel等提出，它是利用DNA多聚酶I将标记的核苷酸接到断裂的3'-OH端 （2）原位缺口末端原位标记技术（in situ end labelling technique，ISEL）， 该技术即TUNEL法，于1993年由Wijsman等提出， 它是利用TdT将标记DUTP接到3'-OH端。研究证明，TUNEL的敏感性远高于尤其对早期凋亡的检出TUNEL更为适用。其原因可能是凋亡发生时DNA大多是双链同时断裂而单链
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lncRNA启动子DNA甲基化/羟甲基化测序分析综述
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
技术优势： ● 专注非编码RNA领域，完善的lncRNA启动子分析流程 ● 可与lncRNA表达谱芯片联合应用，实现平台间无缝对接 ● 可视化数据展示，提供paper级结果图表 ● 优化的IP实验方法，可信赖的检测平台及数据结果 介绍： 人类基因组中仅有约2%的DNA序列最终编码生成蛋白质，其余绝大部分区域转录形成长链非编码RNA。随着lncRNA的生物学功能的发现，这些原先被认为是“junk DNA”的区域的其eferenceseq研究地位上升为“暗物质”。lncRNA的转录受到严格的调控，其表达谱细胞特异性和组织特异性甚至高于蛋白编码基因。寻找和发现疾病过程中LncRNA表达变化的原因，了解lncRNA上游调控机制，是lncRNA研究领域重要组成部分，而表观遗传学正是从基因组层面研究RNA转录调控的重要领域。 启动子区域的DNA的甲基化对RNA的转录起抑制作用。研究发现，在肝癌以及精神分裂患者样品中转录形成LncRNA MEG3的基因组区域发生DNA甲基化修饰程度的异常改变；食管癌具有特征性lncRNA启动子DNA甲基图谱，其区分癌与癌旁组织的效果要优于mRNA启动子；乳腺癌中高达57.18%的lncRNA发生启动子DNA甲基化水平的改变，lncRNA启动子的甲基化程度和lncRNA的表达水平显著相关。 康成生物在MeDIP-seq数据中加入lncRNA启动子DNA甲基化分析，客户可以同时得到lncRNA，mRNA的DNA甲基化相关数据，可与Arraystar lncRNA芯片联合应用，实现两个平台的无缝对接。lncRNA启动子分析同样适用于hMeDIP-seq平台，可以快速便捷地确定DNA羟甲基化修饰在lncRNA启动子区域的分布。 图1. 甲基化/羟甲基化测序lncRNA启动子分析流程 重要数据结果展示： 1. 两组/个样品的lncRNA启动子差异（羟）甲基化分析 康成生物使用最新软件分析两组/个样品间的差异(羟)甲基化区域。与传统的先合并reads，再计算差异富集区，或者先分别计算差异富集区，再合并的方法相比，这种方法更加稳健，能够更好地利用重复数据
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三种萃取设备（萃取槽，萃取塔和离心萃取机）的比较
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
萃取设备是一类用于萃取操作的传质设备，能够实现料液所含组分的完善分离。萃取设备可按结构分为混合澄清器（萃取槽）、萃取塔和离心萃取机。 萃取设备又称萃取器，一类用于萃取操作的传质设备，能够使萃取剂与料液良好接触，实现料液所含组分的完善分离，有分级接触和微分接触两类。在萃取设备中，通常是一相呈液滴状态分散于另一相中，很少用液膜状态分散的。 萃取设备类型很多，按设备结构分为三类： 1.混合澄清器（萃取槽） 由混合室和澄清室两部分组成,属于分级接触传质设备。混合室中装有搅拌器，用以促进液滴破碎和均匀混合。有些搅拌器能从其下方抽汲重相，借此保证重相在级间流转。澄清室是水平截面积较大的空室，有时装有导板和丝网，用以加速液滴的凝聚分层。根据分离要求，混合澄清器可以单级使用,也可以组成级联。当级联逆流操作时,料液和萃取剂分别加到级联两端的级中，萃余液和萃取液则在相反位置的级中导出。混合室的工作容积可从料液和萃取剂的总流量乘以萃取过程所需时间算出。澄清室的水平截面积，可从分散相液体的流量除以液滴的凝聚分层速度算出。这些操作参数须经实验测定。一般认为单位体积混合室消耗相同的搅拌功率时，级效大致相等。因此，在放大设计时，可按实测的萃取时间与分层速度设计生产设备。混合澄清器结构简单，级效率高，放大效应小，能够适应各种生产规模，但投资和运转费用较大。 2.萃取塔 用于萃取的塔设备，有填充塔、筛板塔、转盘塔、脉动塔和振动板塔等。塔体都是直立圆筒。轻相自塔底进入，由塔顶溢出；重相自塔顶加入，由塔底导出；两者在塔内作逆向流动。除筛板塔外，各种萃取塔大都属于微分接触传质设备。塔的中部是工作段，两端是分离段，分别用于分散相液滴的凝聚分层，以及连续相夹带的微细液滴的沉降分离。在萃取用的填充塔和筛板塔中，液体依靠自身的能量进行分散和混合，因而设备效能较低，只用于容易萃取或要求不高的场合。 常用的萃取塔型有： ①转盘塔 在
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高压蒸汽灭菌中湿泡产生的原因及防范措施
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
采用高压蒸汽灭菌时，在灭菌过程中容易出现湿包，压力蒸气灭菌器灭菌后出现湿包，不仅影响灭菌质量，潮湿的灭菌包可发生二次污染，故防范湿包极为重要。 有哪些因素可能会引起湿包呢？ ❶ 蒸汽质量差：压力蒸汽灭菌时必须保持蒸汽的质量，即饱和蒸汽。蒸汽不饱和，含水分过多，灭菌时容易产生湿包；蒸汽过饱和，含水分过少，释放潜热小，不利于蒸汽穿透。 ❷ 排水管道原因: 灭菌前管道内冷凝水未彻底排空，排出冷凝水不畅，如疏水阀、排水阀故障，未及时清除过滤网中的纤维和沉淀物，使排气孔滤网堵塞，影响冷凝水和真空速率，排水管道安装不合理。 ❸ 灭菌器性能原因： 灭菌器使用年限长，性能有所改变，如灭菌器压力表指针恢复不到“0”，灭菌柜门密封老化。灭菌器未预热或物品干燥时间短。 ❹ 干燥系统原因： 干燥系统出现故障或干燥时间不足。 ❺ 包装前准备不当： 待灭菌的物品在包装前准备不当，过分潮湿，导致灭菌后干燥效果差。 ❻ 装载问题: 如包裹放置过密、包裹之间没有间隙，灭菌包过大、过重。 ①包外潮湿可由以下情况造成：装载车上滴下的冷凝水或灭菌物品紧贴着腔内壁，被内壁冷凝水沾湿；排出蒸汽管路有歪曲或阻塞。 ②包内潮湿可由以下情况造成：灭菌物过多，产生的冷凝水多，不易汽化；物件装载或卸载时操作不当，使湿气不能脱离包装；织物包装过紧，纸塑包装装载未安要求。 ❼ 物品灭菌后存放方法不正确： 存放环境未能达到相应的温度、湿度、环境温度、湿度变化过大，可使织物包装的包表面产生湿气的凝结，造成污染。无菌物品存储架离墙壁距离未能达到5~10cm，墙面材料宜受湿度和温度的影响，从而产生真菌等。 ❽ 突然停水、停电：灭菌器内蒸汽不能及时排除，导致灭菌器腔体内温度下降，蒸汽转变为水滴将灭菌包打湿。 干燥度的检测方法 验证时选最大(最重)的灭菌物，将灭菌后的物品冷却30min，打开器械包检查包内物品是否有水分，内包布是否潮湿。托盘内拐角处是否有可见的水珠。若有湿气或者水珠
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对临床实验室痰液标本质量控制的感想
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
在临床微生物这个圈也混了好多年了，对高大上的东西虽然不怎么够得上，但还是比较注重临床工作中的一些细节；虽然眼光比较低浅，但平时也偶有所思、偶有所想，今天从某个角度说说痰液标本质量的控制，与大家分享，欢迎拍砖。 有些实验室由于对痰液标本质量控制意识比较淡漠，对培养出的自认为有“价值”的细菌的临床价值评估不足，不管三七二十一，对这些细菌直接上“板条”或“上机”鉴定和药敏试验，这样处理的报告存在没有临床价值的风险，或称假阳性风险。也许报告审核者发现结果没有价值或不能确定检出的是否为病原体，但是试剂已经消耗、患者的费用已收，心甘吗？结果报还是不报？是报一种还是两种、三种？纠结啊！有的人更是一不做、二不休,“管它的，有什么就报什么，让临床医生自己去猜吧！” 目前，痰标本在临床微生物实验室中所占比重最大，是检验肺部感染病原体的最佳标本。痰标本的采集通常是患者（儿童和不能自主呼吸者除外）自己从深部咳出，但是咳出时要经过了上呼吸道和口腔，而上呼吸道和口腔有许多定植菌和污染菌，这里统称为“杂菌”。这些“杂菌”附着在痰液标本的表面，污染了痰标本。如果不对咳出的痰标本做进一步处理，去除“杂菌”，试想培养出来的细菌是杂菌还是病原菌呢？能够分得清楚吗？显然是猜不出来的；而且“杂菌”的过度生长还会掩盖真正病原菌尤其是苛养菌的生长，从而导致假阴性。有人会说，“选择性培养基可以抑制杂菌的生长”，但从客观上讲，抑制作用是有局限性的。 请问，痰标本中培养出的鲍曼不动杆菌，究竟有多大意义？临床医生对此质疑过。院感统计分析和耐药性统计分析中也有较多水分，需要挤一挤吧。如果将痰液标本洗涤，除去“杂菌”、然后消化洗涤后的痰标本，这样就可能培养得到很纯的病原菌菌落，不需要传代纯化就能直接做鉴定和药敏试验，这样不就澄清了上述疑问，而且提高了TAT吗？ 首先需要树立和强化痰液标本质量控制意识，积极采取措施控制标本质量，从我（实验室）做起。有人说那
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人抗核周因子抗体（APF）试剂盒技术原理
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
人抗核周因子抗体（APF）试剂盒技术原理 本试剂盒仅供研究使用。 ELISA试剂盒价格：欢迎来电询价 保存条件及有效期： 1．试剂盒保存：2-8℃。 2．有效期：6个月 检测范围： 48T 25 ng/L -800 ng/L 使用目的： 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本抗核周因子抗体类（APF）含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人抗核周因子抗体类（APF）水平。用纯化的人抗核周因子抗体类（APF）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入抗核周因子抗体类（APF），再与HRP标记的抗核周因子抗体类（APF）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的抗核周因子抗体类（APF）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人抗核周因子抗体类（APF）浓度。 试剂盒组成 1 20倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7 终止液 3ml×1瓶 2 酶标试剂 3ml×1瓶 8 标准品（1600ng/L） 0.5ml×1瓶 3 酶标包被板 12孔×4条 9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶 4 样品稀释液 3ml×1瓶 10 说明书 1份 5 显色剂A液 3ml×1瓶 11 封板膜 2张 6 显色剂B液 3ml×1/瓶 12 密封袋 1个 标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 800 ng/L 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 400 ng/L 4号标准品 150μl的5
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细胞凋亡检测操作流程2--BrdU检测凋亡细胞DNA断裂片段
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
凋亡检测操作流程 二、 BrdU检测凋亡细胞DNA断裂片段 相关试剂及组分： 一步法: APO-DIRECT试剂盒（货号：556381）： PartA（4°C保存） PartB（-20°C保存） PI/RNase A Solution FITC-dUTP Reaction Buffer TdT Enzyme Rinsing Buffer Negative Control Cells：已固定细胞 Wash Buffer Positive Control Cells：已固定细胞 二步法: APO-BRDU™试剂盒（货号：556405）： PartA（4°C保存） PartB（-20°C保存） FITC-Labeled Anti-BrdU mAb Br-dUTP PI/Rnase staining buffer Reaction Buffer TdT Enzyme Rinsing Buffer Negative Control Cells：已固定细胞 Wash Buffer Positive Control Cells：已固定细胞 实验操作（适用于APO-DIRECT试剂盒）： 1. 细胞固定：1) 用PBS洗细胞后，将细胞重悬于1%多聚甲醛的PBS溶液中，浓度为1-2x106/ml，冰浴30-60分钟。 2) 300xg离心5分钟，弃上清。 3) 用5ml PBS洗细胞两次，重悬于70%乙醇中，浓度为1-2x106/ml，冰浴30-60分钟。（70%乙醇 细胞悬液在-20°C放置12-18小时后进行细胞凋亡检测，得到的效果**。细胞可以在-20°C保存几 个月。） 2. 配制染色液，现用现配。 DNA标记液 1个测试 5个测试 10个测试 Reaction Buffer 10.00μl 50.00μl 100.00μl TdT Enzyme 0.75μl 3.75μl 7.50μl FITC-dUTP 8.00μl 40.00μl 80.00μl 蒸馏水 32.2500μl 161.25μl 322.50μl 总体积 51μl 255μl 510.00μl 3. 细胞染色： 1) 取离心管和Falcon试管，按标本顺序编号。 2) 取1x106细胞悬液加入离心管中，300xg离心5分钟，弃去乙醇，留下沉积细胞。 质控细胞（Negative Control Cells、Positive Control Cells）：混匀后取1ml（细胞数约 1x10^6/ml）加入离心管中，300xg离心5分钟，弃去乙醇，留下沉积细胞。 3) 每管各加入1.0ml Wash Buffer，洗细胞两遍，弃上清。 4) 加入DNA标记液50μl重悬细胞。 5) 37°C温育60分钟（或者室温过夜），每15分钟摇匀一次。（非质控
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RNA甲基化（m6A）研究—最前沿表观遗传研究热点
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
随着表观遗传学研究的不断深入，组蛋白修饰（甲基化，乙酰化，磷酸化…）和DNA甲基化修饰相关的高水平研究成果如雨后春笋般涌现，遍布Nature, Cell和Science等期刊杂志。在分子生物学的中心法则中，遗传信息从DNA、RNA流向蛋白。基因组DNA和组蛋白上都存在可逆的表观遗传学修饰，这些修饰可调控基因的表达，并由此决定细胞的状态，影响细胞的分化和发育。不禁让人疑问，那么RNA上也存在类似的调控机制吗？ 近两年，科学家们首次发现了一种可逆性的RNA甲基化—m6A。随后，研究人员陆续定位了哺乳动物转录组中的m6A，鉴定了这种动态修饰的“读”、“写”和“擦除”蛋白，解析了m6A在转录后调控中的一些功能。由此，RNA甲基化（m6A）研究在表观遗传领域开始崭露头角，成为最前沿的热点！ 图1：DNA, RNA, Protein的表观遗传修饰 N6-甲基腺嘌呤(m6A）是真核生物最常见和最丰富的RNA分子修饰。m6A修饰是METTL3甲基转移酶复合体催化的，而最近新发现的RNA去甲基化酶FTO 和ALKBH5 可以通过一种α-酮戊二酸和Fe2+依赖型的形式对m6A去甲基化。METTL3， FTO和 ALKBH5被证明在很多生物过程中起重要作用，从发育和代谢到生殖。m6A存在于很多物种质中，占到了RNA碱基甲基化修饰的80%。m6A主要分布在mRNA中，也出现在非编码RNA如tRNA， rRNA和snRNA。在转录成的RNA中相对高的m6A含量会影响RNA的代谢过程，比如剪切，核转运，翻译能力和稳定性，以及RNA转录。 图2：RNA甲基化修饰示意图 那么如何检测RNA的甲基化水平呢？ Epigentek推出市场上唯一一款RNA甲基化定量检测试剂盒： （比色法）是一组优化的、完整的的试剂组合，可以通过比色的方法定量RNA中N6-甲基腺嘌呤（m6A）。它可以直接检测哺乳动物，植物，真菌细菌和病毒的总RNA样本的m6A的甲基化程度。 产品名称及描述 品牌 货号 产品说明 EpiQuik M6A RNA Methylation Quantification Kit Epigentek P-9005 图3：RNA甲基化定量试剂盒实验流程以及结果展示 Epig
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PGE2定量分析试剂盒--前列腺素E2（PGE2）ELISA试剂盒原理介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
前列腺素E2（PGE2）是花生四烯酸在很多细胞中代谢的主要产物。跟很多类花生酸一样，PGE2不会预先存在于细胞中。当细胞活化或是存在外源的花生四烯酸时，PGE2合成并释放到胞外。在体内，通过PG15脱氢酶通道，PGE2迅速转换为不活跃的代谢产物—13,14-dihydro-15-keto PGE2。在循环系统中，PGE2的半衰期为30秒，在正常胞浆内的浓度为3-12pg/ml。 图1：PGE2代谢图 PGE2作为一种重要的细胞生长和调节因子，由于其在扩血管、降血压、降通气阻力方面的作用及免疫抑制和抗炎作用，一直以来，受到国内外科研工作者的追捧！ 前列腺素E2（PGE2）检测试剂盒（货号：514010）采用竞争性ELISA方法检测样本中的PGE2的含量。 产品名称及描述 品牌 货号 产品说明 Prostaglandin E2 ELISA Kit - Monoclonal 开曼生物 514010 PGE2 ELISA试剂盒原理：样本中游离的PGE2与试剂盒中提供的乙酰胆碱酯酶（AChE）标记的PGE2示踪物竞争性的结合PGE2单克隆抗体，通过AChE底物与AChE的酶促反应，检测样本在412nm处的吸光值。 PGE2 ELISA试剂盒优点： . 检测样本多样化，适用于尿液、血液、胞浆、组织培养物等多种样本。 . 示踪物采用AChE标记，AChE稳定性强于其他酶类，无需终止液，即可检测；其PH耐受范围为5-10，不受盐溶液及防腐剂影响。 . 检测范围为7.8-1000pg/ml，灵敏度为15 pg/ml。 . 试剂盒中提供PGE2单克隆抗体，无需额外购买。 . 有96孔、480孔可拆卸及不可拆卸规格供选择。 图2：原理 由于PGE2代谢速度很快，如果样本在收集之前经历了大规模的代谢，导致样本PGE2含量很少，我们为您推荐前列素E代谢分析试剂盒514531，该试剂盒可将所有主要的PGE2代谢产物转变为易被ELISA检测的单一的、稳定的衍生物。前列素E代谢分析试剂盒和PGE2检测试剂盒原理相似，操作简便，检测范围为0.39-50pg/ml，灵敏度为2 pg/ml。 产品名称及描述 品牌 货号
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小鼠骨髓来源树突状细胞（BMDC）的培养
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
【经典的 BMDC 制备方法简图】 DC 是「Dendritic Cells」的缩写，中文全称为「树突状细胞」，因其成熟时伸出许多树突样或伪足样突起而得名。DC是由2011年诺贝尔奖获得者、加拿大 籍科学家 Ralph M.Steinman于1973年发现的[1],是目前发现的功能最强的抗原递呈细胞（Antigen Presenting Cells, APC）。已证实，DC是唯一能够显著刺激初始T细胞（Naïve T cells）增殖的APC,而其它种类的APC（如单核巨噬细胞，B细胞等）仅能刺激已活化的或记忆性的T 细胞，因此DC是机体适应性T细胞免疫应答的始动者，在肿瘤免疫中也发挥着极其重要的作用。 虽然DC存在于体内多种组织中，但含量很少，无法满足科学研究和临床**的需要， 所以人们尝试多种方法来体外培养和扩增DC。对于人，最常用的方法是从人外周血单个核细胞（PBMC）诱导DC的产生。而对于小鼠，最常见的方法是从骨髓细胞诱导产生DC,即骨髓来源的DC（Bone Marrow-Derived Dendritic Cells,BMDC）。 鉴于功能分析和分子生物学研究的需要，获得更高数量和更高纯度的BMDC是大家一直追求的目标，本文将与大家分享BMDC的经典制备方法和大量制备法，大家可根据自身需要选择使用。 另外，我们还备有实用的BMDC培养操作视频（内部交流，非商用），因文件比较大，若需要，可通过我们的企业QQ（号码为：800053055）向我们索取发送。 【BMDC培养的发展简史】 1973年---加拿大籍科学家Raplph M.Steinman在美国洛克菲勒大学（Rockefeller University）工作时从小鼠外周淋巴器官（脾、淋巴结和派氏集合淋巴结）中首次鉴定出树突状细胞（Dendritic Cells, DC）[1].Steinman 也因此获得了2011年诺贝尔生理学或医学奖。 1992年---日本京都大学（Kyoto University）的Inaba在添加GM-CSF（粒细胞/巨噬细胞集 落刺激因子）的情况下，分别成功从小鼠血液和骨髓细胞体外诱导出大量的 DC[2,3].因此，Inaba被认为是小鼠DC体外培养的创立者，且Inaba法被称为小鼠BMDC
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人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽（CCK-8）试剂盒技术原理
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽（CCK-8）试剂盒技术原理 本文由：樊克生物专业技术人员提供！本试剂盒仅供研究使用。 检测范围： 48T 25 ng/L -800 ng/L 使用目的： 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本胆囊收缩素/缩胆囊素八肽（CCK-8）含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽（CCK-8）水平。用纯化的人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽（CCK-8）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入胆囊收缩素/缩胆囊素八肽（CCK-8），再与HRP标记的胆囊收缩素/缩胆囊素八肽（CCK-8）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的胆囊收缩素/缩胆囊素八肽（CCK-8）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽（CCK-8）浓度。 试剂盒组成 1 20倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7 终止液 3ml×1瓶 2 酶标试剂 3ml×1瓶 8 标准品（1600ng/L） 0.5ml×1瓶 3 酶标包被板 12孔×4条 9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶 4 样品稀释液 3ml×1瓶 10 说明书 1份 5 显色剂A液 3ml×1瓶 11 封板膜 2张 6 显色剂B液 3ml×1/瓶 12 密封袋 1个 标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，
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人谷胱甘肽（GSH）试剂盒技术原理
作者：德尔塔 日期：2022-04-24
人谷胱甘肽（GSH）试剂盒技术原理 本文由：樊克生物专业技术人员提供！本试剂盒仅供研究使用。 检测范围： 48T 25 ng/L -800 ng/L 使用目的： 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本谷胱甘肽（GSH）含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人谷胱甘肽（GSH）水平。用纯化的人谷胱甘肽（GSH）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入谷胱甘肽（GSH），再与HRP标记的谷胱甘肽（GSH）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的谷胱甘肽（GSH）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人谷胱甘肽（GSH）浓度。 试剂盒组成 1 20倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7 终止液 3ml×1瓶 2 酶标试剂 3ml×1瓶 8 标准品（1600ng/L） 0.5ml×1瓶 3 酶标包被板 12孔×4条 9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶 4 样品稀释液 3ml×1瓶 10 说明书 1份 5 显色剂A液 3ml×1瓶 11 封板膜 2张 6 显色剂B液 3ml×1/瓶 12 密封袋 1个 标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1. 标准品的稀释：本试
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