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蛋白质技术专题：血浆游离血红蛋白测定
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
实验原理 血红蛋白具有类过氧化物酶活性，可催化H2O2释放新生态氧，使邻甲联苯胺氧化发生颜色变化，由无色最终变为蓝紫色。根据显色深浅与标准进行比较，可测出其含量。 实验方法 材料： 1．2g/L邻甲联苯胺溶液 2．1%H2O2 3．10%醋酸溶液 4．分光光度计 方法： 1.抽取静脉血2-3ml，枸橼酸钠抗凝，离心分离血浆。 2．按下表进行操作，用分光光度计，波长为530nm，以空白管调零，测定测定管的吸光度。 试剂 （ml） 测定管 空白管 2 g/L邻甲联苯胺溶液 0.5 0.5 患者血浆 0.02 / 1% H2O2 0.5 0.5 混匀后室温放置10min 10%醋酸溶液 5.0 5.0 室温放置10min 3.计算公式 血浆游离Hb(mg/L)=测定管吸光度/标准管吸光度×100 实验结果计算 参考范围：0-40mg/L 注意事项 1.一切容器避免血红蛋白污染； 2.采血要顺利，器皿要干燥，检测血浆要新鲜，及时分离，防止人为溶血； 3.邻联苯胺溶液具致癌性，检测时要小心，废液要妥善处理，以免污染； 4.双氧水要新鲜配置，浓度要准确。
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一种针对细胞表面受体进行抗体筛选的多重分析方法[创新技巧]
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
本文以人EGFR抗体与细胞表面EGFR抗原结合为例，描述TTP Labtech的mirrorball仪器作为一种“mix-and-read”方法在在抗体筛选中的应用。EGFR配体的蛋白家族参与了细胞迁移，粘附和分化等活动，包括乳腺癌，肺癌，结肠癌在内的许多疾病都和EGFR的过度表达有着密切的关系。 不同靶蛋白的单克隆抗体的应用领域不断扩大，可以用于不同疾病的**和诊断（譬如癌症，自身免疫性疾病）。单克隆抗体是特定细胞系针对特定抗原的分泌到细胞培养基中的生物蛋白，而高通量筛选是抗体开发的重要组成部分。 ELISA和Mix-and-read 利用传统ELISA技术在进行抗体筛选时有许多局限性，由于ELISA技术依赖于微孔板上包被的抗原，所以该方法不适合检测低溶解性的抗原（譬如细胞表面受体）。由于ELISA的操作方式，使得ELISA很难进行识别细胞表面抗原天然构象的抗体的筛选。即使对于可溶性抗原抗体筛选，由于微孔板对检测抗体的吸附从而改变蛋白构象，继而无法识别抗原特定抗原表位。 一种“mix-and-read”分析方法在生物制药行业的单克隆抗体筛选领域得到广泛应用。这种”mix-and-read”分析方法是将所有分析组分加到一个孔中，继而孵育从而使得结合达到平衡。对于抗体筛选，该方法可以利用包被抗原的珠子或者表达抗原的细胞进行分析，抗原抗体的相互作用可以通过结合在珠子或者细胞的荧光标记的偶联物的荧光强度进行检测。结合的荧光可以利用细胞技术仪无需洗涤进行分析，以达到区分测试孔中结合和游离的荧光。Lee等在发明FMAT时，详细介绍了相比传统ELISA方法细胞计数仪的优势。相对于传统的ELISA分析方法，利用该技术分析“mix-and-read”实验可以提高检测的灵敏度和分析的通量，同时也提高抗体的识别和检测。 高速的多重分析 TTP LabTech的mirrorball非常适合这种“mix-and-read”实验的分析，由于其灵敏度很高，从而可以检测低丰度表达的细胞膜蛋白。该仪器不仅能够快速进行单激光扫描，而且可以同时进行405,488,640nm激光扫描，因
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恒流泵在喷绘机中输送墨水的应用
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
可以精确的输送高粘的各种墨水，其吸程和杨程都可以超过5米以上，并且恒流泵可以随意变换输送方向还具有截止阀的功能，可以取消管路中单向阀的配置，输送的精度可以达到1%，调速非常方便，因此做为墨泵使用，恒流泵是非常理想的选择。 喷绘机在高速喷绘的过程中，需要将墨水不断的输送到喷头，墨盒里的墨水会不断减少，为了保证墨水的连续供应，通常将墨管插入外置的墨桶之中用泵将墨水输送到副墨盒里中转。喷绘机比较常采用隔膜泵做为墨水输送泵，或者用隔膜泵收集排出废墨。这种泵虽然便宜，但是对于一些溶剂型的墨水或者是粘性较高的墨水，在输送的过程中就会造成泵的损坏或者流量的不稳定，同时也会带来泵内墨水死角残留等问题。 104K/ZL是一种定速微型恒流泵，靠12V或者24V直流电源驱动，流量大小可以选择（选择不同转速的电机）。104K/ZL恒流泵配备的是直流减速齿轮电机，因而确保了104K/ZL恒流泵在输送墨水的过程中始终保持超高的可靠性和稳定性，不会因为泵管的磨损而造成泵不出液体或者抽不上墨的现象。 有一些没有带减速箱的恒流泵靠电机轴外面包围3个轮子，轴很小，轮子大，轴高速转动，带动3个轮子做行星运转，全靠轴跟轮子之间的摩擦力实现传动。如果泵管受到磨损和轮子受到磨损，泵就会停止出液，甚至当出口阻力增大，也会停止出液。
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蛋白质技术专题：血清蛋白琼脂糖凝胶电泳
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
【原理】 琼脂糖（agarose）是经过挑选，以质地较纯的琼脂（agar）作为原料而制成的。琼脂在化学上是由琼脂糖和琼脂胶组成的复合物。琼脂胶是一含有硫酸根和羟基的多糖，它具有离子交换性质，这种性质会给电泳及凝胶过滤以不良的影响。琼脂糖是直链多糖，它由D－半乳糖和3,6－脱水－L－半乳糖的残基交替排列组成。 琼脂糖主要通过氢键而形成凝胶。电泳时因凝胶含水量大（98－99%），近似自由电泳，因为固体支持物的影响少，故电泳速度快，区带整齐。而且由于琼脂糖不含带电荷的基团，电渗影响很少，是一种较好的电泳材料，分离效果较好。 血清中脂类物质与血清载脂蛋白结合成水溶性的脂蛋白（lipoprotein）形式存在。各种脂蛋白中所含载脂蛋白的种类及数量不同，各种脂蛋白颗粒大小也相差很大，因此，以琼脂糖凝胶为支持物，在电场中可使各种脂蛋白颗粒分离开来。 琼脂糖凝胶电泳分离血清蛋白方法简单。将血清脂蛋白用脂类染料苏丹黑（或油红等）进行预染。再将预染过的血清加样于琼脂糖凝胶板加样槽中，通电后可以看到脂蛋白向正极移动，并分离出几个区带。 正常人血清脂蛋白可出现三条区带，从阴极到阳极依次为β－脂蛋白（最深），前β－脂蛋白（最浅）及α－脂蛋白（比前β－脂蛋白略深些），在原点处应无乳糜微粒。有时前β－脂蛋白也显示不出来。 琼脂糖主要通过氢键而形成凝胶。电泳时因凝胶含水量大（98－99%），近似自由电泳，因为固体支持物的影响少，故电泳速度快，区带整齐。而且由于琼脂糖不含带电荷的基团，电渗影响很少，是一种较好的电泳材料，分离效果较好。 血清中脂类物质与血清载脂蛋白结合成水溶性的脂蛋白（lipoprotein）形式存在。各种脂蛋白中所含载脂蛋白的种类及数量不同，各种脂蛋白颗粒大小也相差很大，因此，以琼脂糖凝胶为支持物，在电场中可使各种脂蛋白颗粒分离开来。 琼脂糖凝胶电泳分离血清蛋白方法简单。将血清脂蛋白用脂类染料苏丹黑（或油红等）进行预染。再将预染过的血清加样
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蛋白质技术专题：磷酸氨基酸分析实验
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
鉴定蛋白质中磷酸化的氨基酸残基是很有意义的。磷酸化作用发生在蛋白质的丝氨酸、苏氨酸和酩氨酸时，通过部分的HCl水解及接着进行双向薄层电泳，可以便利地鉴定 标记的磷酸氨基酸。 实验方法 酸水解法 实验步骤 1. 放射性标记的磷酸化蛋白质在SDS-聚凝胶上进行制备电泳。电转移至PVDF膜上，用水洗膜数次，不要让膜变干。 2. 用30~50 ml 印度墨汁染色液染膜5~10 min，轻摇至条带出现。也可在作好放射性或磷光位置标记后，用塑料膜包住膜，进行放射性自显影。 3. 用干净刀片切下含目的条带的膜，用甲醇将膜重新润湿1 min，再用多于0.5 ml 水的润湿。置于带螺口盖的微量离心管。 4. 加入足够量的6 mol/l HCl，淹没膜，拧紧管盖，在110℃烤箱温育60 min。5. 自然冷却，高速离心2 min，将液相的水解物移至一个新的微离心管中，真空干燥2 h。 6. 加入6~10 μl 水，在旋涡混合器上剧烈振荡以溶解样品，高速离心5 min。7. 取25%~50%的样品点样于20 cm×20 cm×100 μm 纤维素薄层色谱板的样品孔。分小份点样，毎次点加0.25~0.5 μl，在每次点加之间，用通过塞有棉花的巴斯德吸管所送出的压缩空气吹干加样点。8. 取1 μl 非放射性的磷酸氨基酸标准混合物（含磷酸丝氨酸，磷酸苏氨酸和磷酸酪氨酸）点在每个样品之上，如上分次点加，每次0.25~0.5 μl。 9. 在大的玻璃托盘或塑料盒内，用pH1.9电泳缓冲液浸湿大的吸水纸（带4个孔），缓缓倒干多余的缓冲液。将此大吸水纸转移覆盖在已加样的薄层色谱板上，使得色谱板上的4个加样点位干大吸水纸的四个洞的中央，轻压吸水纸以润湿纤锥素和样品，当色谱板均匀润湿后，移去吸水纸。10. 将薄层色谱板置于电泳装置内，在板的左右两俩0.5 cm 边缘用Whatman 3MM 纸搭接，如果有气泡，将其弄平排出。盖上盖子，开始电泳。在HTLE 7 000电泳仪用双层厚的Whatman 3MM 纸搭接时，载4个样品的薄层板在1.5 KV 电泳20 min。 图1 磷酸氨基酸在pH1.9进行第一
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蛋白质技术专题：TNF-α生物学活性检测方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
基本原理 TNF的生物学活性之一是能直接杀伤肿瘤细胞。TNF与相应受体结合后向细胞内移，被靶细胞溶酶体摄取导致溶酶体稳定性降低，各种酶外泄，引起细胞溶解。肿瘤细胞株对TNF-α的敏感性有很大的差异，用放线菌素D、丝裂酶素C、放线菌酮等处理肿瘤细胞，可明显增强TNF-α杀伤肿瘤细胞活性。 材料和试剂 1，完全培养基（1）10%FCS-DMEM培养液（V/V）。 2，完全培养基（2）3%FCS-DMEM培养液（V/V）0.5-1μg/ml放线菌素-D。 3，0.05%结晶紫溶液： 取50mg结晶紫，用20ml无水乙醇溶解后，加水定容至100ml，室温保存。 4，脱色液： H2O 50mg 无水乙醇 50ml 乙酸 0.1ml 混匀即可。 5，TNF标准品：由中国药品生物制品检定所提供。 实验操作 1，此实验在无菌环境下进行，实验前超净工作台应用紫外灯照射30分钟以上。 2，用完全培养基（1）将生长状态良好的小鼠L929细胞调至1×105/ml的细胞悬液，100μg/孔加入96孔细胞培养板，5%CO2，37℃培养过夜。 3，标准品稀释：用完全培养基（2）将标准品进行10倍稀释至100IU/ml为起始浓度，再做4倍稀释上板。 4，待检样品稀释：用完全培养基（2）将待检样品进行10倍稀释至一定范围，再做4倍稀释准备上板。 5，弃96孔细胞培养板上清，将标准品及待检样品按100μl/孔加入96孔细胞培养板，同时设对照组和空白组，5%CO2，37℃培养16小时。 6，镜检后，弃上清，每孔加30μl 0.05%结晶紫染色3~5分钟，用流水小心冲去结晶紫，甩干培养孔中的残余水份，加入脱色液100μl/孔，用酶标仪测定570nm的光密度值。 结果计算 1，在座标纸上以OD570比色值（双孔比色值的平均值）对稀释倍数作图，以标准品的最纸、最高平均值作平等于X轴的直线，以各相应样品曲线与该直线的交点，在X轴读出半效量的稀释度。 2，计算公式： TNF活性（IU/ml）=标准品效价×样品预稀释倍数/标准品预稀释倍数×标准品半效量稀释度/样品相当于标准品半效稀释度。
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蛋白质技术专题:多肽的固相合成、切割及纯化
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
固相肽合成（solid phase peptide synthesis, SPPS）技术是现代蛋白质化学的一项关键技术，也是对现代分子生物学和基因工程研究具有重大影响和重要意义的技术。它的基本过程为：1、偶联保护氨基，即将第一个保护氨基以共价键偶联外固相载体上（在合成过程中始终不能脱落）。2、脱保护，在侧键基团保持稳定条件下脱去氨基上的保护，暴露出自由氨基，例如脱去Fmoc。3、偶联，将下一个已活化的氨基酸与结合于固相的前一个氨基酸缩合形成肽键。4、肽键延长，反复进行脱保护与偶联两步使肽键延长到设计长度。5、切割，将合成的肽由固相载体上切割下来并脱去侧链保护。6、纯化，切割后的肽进行纯化、鉴定。下面以合成的huBPP为例，简介在Pioneer上的合成切割及纯化过程： 一、huBPP的合成 （一）仪器及试剂 Pioneer肽合成仪、氩气，纯度99.99%、二甲基甲酰胺（DMF）、哌啶、HATU、二异丙基乙胺、 甲醇、TFA（三氟乙酸）、合成需要的侧键保护氨基酸、树脂 Fmoc-PAL-PEG-PS 注：Fmoc-芴甲氧羰基（Fluoreny lmethyl oxoxy carbonyl） PEG-聚乙二醇 PAL-肽酰胺接头（peptide amide linker） PS-树脂（polystyrene） （二）合成原理 （三）合成过程 准备气体→冲洗管路→检查管路→合成准备（装试剂、输入序列等）→合成→合成结束 （四）操作程序 1．开机及调节气压、检查是否漏气 1）依次打开电源开关、UPS开关、计算机 2）安装所有的瓶子（空） 3）检查氦气罐内气体量（保证剩余量>200PSI），输出压力为20PSI 4）打开合成仪电源，等待仪器进入主菜单 5）按Tools-Ding-I/O1 6）打开气体阀Gas Valve(4) ON回主菜单 7）按Manul-Fluidie System 1 -Wash 8）调节压力到6±0.2PSI，回主菜单 9）按Tools-Diag-Leak-Start，回主菜单 2．冲洗系统管道 1）按Tools-Bottle 2）在Wash瓶内装入2L DMF 3）主菜单中按Prime-Prime Individual，回主菜单 4）按Prime-More-Start up/Shut Down-Column 1 5）对Column2重复上一步操作 6）回主菜
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蛋白质技术专题：高效液相色谱之高效排阻液相色谱
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
高效液相色谱（High Rerformance Liquid Chromatography, HPLC）又叫高压、高速、近代液相色谱，通常叫做高效液相色谱。它是60年代中期才建立的一种高效快速分离化合物的方法，到了70年代后期才广泛用于蛋白质的分离纯化方面，现已成为分离纯化蛋白质非常有效的方法之一。 和经典常压色谱相比它有以下特点： 1、HPLC分离、纯化蛋白质的速度快。通常半小时左右可进行一次，大大缩短了纯化蛋白质的时间； 2、分辩率高。一根长10cm的色谱柱可分离十几种以上的物质； 3、适应面广，灵活性强，几乎所有的蛋白质根据它们的性质差别（等电点、疏水性、分子量、电荷分布等）都可以用不同HPLC方法进行分离提纯； 4、灵敏度高。HPLC现已广泛采用多种高灵敏度的检测器，如紫外、荧光、电导等。荧光的灵敏度可达10-9g； 5、重复性好，在作分析蛋白质分析试验时，误差一般不超过5%。 因此，HPLC在蛋白质分离纯化方面具有极其重要的位置。 当然HPLC也有它的缺点，例如，仪器设备价格昂贵，虽然已有制备柱使用，但制备量还是受到限制，在某些方法中，由于使用有机溶剂，对蛋白质的活性会有一定影响。 高效液相色谱仪是高效液相色谱的专用仪器，有很多种类，从类型看分为综合型高效液相色谱仪和专用型仪器，从功能上分为分析型、制备型、分析和制备兼用型。 一般高效液相色谱仪主要有以下部分组成： 1、输液泵，为色谱柱输送液体； 2、进样器； 3、色谱柱，对样品进行分离； 4、检测器，对分离后样品进行检测； 5、记录器（数据处理和打印部分），对检测到的信号进行处理和记录； 6、程序控制器，对各部分进行程序控制，例如输入色谱条件、参数等。另外，常配有贮液装置、脱气装置、分部收集器等。 根据分离模式的不同，高效液相色谱通常分为以下几种模式： 1、高效排阻液相色谱，按蛋白、多肽分子量大小进行分离； 2、高效离子交换液相色谱，按蛋白质、多肽带电不同而进行分离； 3、高效反相液相色谱，按蛋白质、多肽的疏水性不
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蛋白质技术专题：离子交换色谱
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
4，洗脱方式的选择, 离子交换色谱洗脱方式有三种：一是改变缓冲液pH，使蛋白质从吸附状态变为解吸附状态。如在阴离子交换色谱中，通过降低流动相pH使吸附在柱子上的带负电荷的蛋白质带正电，从而达到解吸附，在阳离子交换色谱中则是通过升高流动相pH的方法达到解吸附；二是增加缓冲液的离子强度，将吸附强的分子从离子交换剂上替换下来；三是缓冲液pH和离子强度同时改变。无论哪一种方法，都可用阶段洗脱和梯度洗脱两种方式进行。 阶段洗脱是用几个不同pH缓冲液或几个不同盐浓度的缓冲液逐步进行洗脱。即pH和离子强度变化不连续。而在梯度洗脱中，缓冲液的洗脱能力是连续增加的，由于后者分辨率更好，因此被广泛采用。 在经典色谱中需用梯度混合器来制造线性梯度，梯度混合器是由两个容器构成，两个容器安放在同一个水平上，一个盛起始缓冲液，另一个盛含较高离子强度或不同pH的缓冲液。二者用管子相连，以保持溶液的流体静力平衡。当缓冲液从第一个容器流入柱内，第二个容器的缓冲液进入第一个容器自动补足，使缓冲液形成梯度。 现在许多中低压色谱仪器（如Waters，Pharmacia等公司的一些产品）和高效液相色谱一样可以用计算机控制双泵自动配制流动相，很容易地获得直线或非直线、连续或非连续的梯度模式，以满足不同的分离需要。 通常对线性梯度的要求是： （1）洗脱液的总体积应足够大，一般梯度至少要四倍床体积，使分离的各个峰有较好的分辨率； （2）梯度上限要有足够强的洗脱能力，使吸附的最紧密的物质也能够从柱子上被洗脱下来； （3）梯度的斜率不应太大，以确保各峰能够分开，但又不应太小，以免峰形过宽甚至形成拖尾；一般认为，梯度体积越大，梯度变化越缓，则分辨率越好。 实验操作 1．填料的预处理 2．装柱 离子交换色谱不同于凝胶色谱，柱子通常较为短小，对于一般工作，通常选长度为10-40cm的柱已足够。柱的直径按照欲分物质的数量来选定。对于很复杂的混合物和进行精细分析是用细长的柱，分
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蛋白质技术专题：蛋白质的提取及粗分离实验
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
分离纯化蛋白质，首先要从原材料中提取目的蛋白，然后通过粗分离的方法除去大量杂质，最后进行精细分离，得到目的蛋白。本实验以新型基因重组人TNF为例阐明重组蛋白TNF的提取及初步分离。 实验方法 硫酸铵盐析法 实验方法原理 分离纯化蛋白质，首先要从原材料中提取目的蛋白，然后通过粗分离的方法除去大量杂质，最后进行精细分离，得到目的蛋白。本实验以新型基因重组人TNF为例阐明重组蛋白TNF的提取及初步分离。 TNF的提取是将发酵菌体裂解，在一定的条件和溶液中，使被提取的TNF充分释放出来，经离心收集混合液中提取的TNF成份的过程。含有TNF的提取溶液中，含有大量的杂蛋白，由于蛋白质在水溶液中的溶解度主要取决于蛋白质分子表面的水分子数目，即蛋白质表面亲水基团与水分子形成水化膜的程度和带电荷的情况，当中性盐如硫酸铵等加入蛋白质溶液时，由于中性盐对水分子的亲和力大于蛋白质，使蛋白质分子周围的水化膜减弱或消失，蛋白质溶解度降低，同时由于中性盐的加入，蛋白质溶液的离子强度发生了改变，蛋白质表面电荷被大量中和，更加导致蛋白质溶解度降低，使蛋白质分子之间互相聚集而发生沉淀。不同的蛋白质由于其带电性，亲水性等性质的不同，会在不同浓度的盐中形成沉淀。依此原理可对混合蛋白质进行粗分离。该实验中利用硫酸铵盐析除去大部分杂蛋白从而使TNF得到初步纯化。 实验材料 试剂、试剂盒 仪器、耗材 实验步骤 一、试剂配制 1. STE（25%蔗糖 10 mmol/L Tris-HCl pH 8.5 1 mmol/L EDTA） 蔗糖 250 g 1 mol/L Tris.HCL 10 ml 0.5 mol/L EDTA 2 ml，加水至1 000 ml 115℃，20 min高压灭菌 2. 1mol/L MgCl2 取 MgCl2 203.30 g，加水至1 000 ml 3. Tris-HCL pH8.5 取Tris 121.14 g 用HCL调pH至8.5，加水至1 000 ml （12 mol/L HCL约30 ml） 4. 0.5 mol/L EDTA pH8.5 乙二氨四乙酸二钠 186.12 g NaOH 20 g，加水至1 000 ml
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冷热冲击试验箱维修时最重要的两点
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
你有没有在设备处故障时手忙脚乱，乱了分寸？不知道首先应该干什么，第二步应该怎样做。 任何设备的维护和保养都非常重要，但其出现故障时，更要及时的进行故障排除和维修，否则更加严重的故障或者毁坏性就会随之而来。下面就冷热冲击试验箱维修时最重要的两点做个讲解。 首先要明确冷热冲击箱的故障点。无论是冷热冲击试验箱哪里出现了问题，我们在进行维修之前一定要找出它们的故障点，这是确保整个维修流程，维修模式安全并且有效。在寻找故障点的时候首荐排除法，以便在具备安全的同时，更为便捷的找到故障点。 第二步进行专业的维修。我们在冷热冲击试验箱维修的时候，要注意维修不能够让非专业人员来进行，同时也不能够以非专业的维修理念来进行维修，不然将会造成极为严重的后果。此试验箱的维修一定要以专业人员，专业模式来进行，只有这样，我们才能够更好的掌握故障点的问题以及再次使用的安全性和有效性。 以上两点便是我们在进行冷热冲击试验箱维修时需要确认的，这两步是确保整个维修模式的有效方式，同时也是恢复此试验箱正常工作的主要模式。如果您冷热冲击试验箱设备出现了问题，一定要按照步骤来维修。
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高低温试验箱假期维护
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
每逢节假日，大家都放假了，厂里基本没人了，有没有想过怎么保养机器？当高低温试验箱预计长时间不使用的情况下，在放置之前应对设备进行日常维护，这样可以延长的寿命，并降低维修率。日常用维护如下： 一、长期停机不使用时应定期每半月给产品通电，通电时间不小于1小时。 二、运行设备，烘干试验区 将高低温试验箱的测试孔开，控制器设定一个温度，如85℃，运转机器后，箱内剩余的水分在高温下将会从测试孔中跑出，最终达到烘干试验箱的目的; 三、关闭总电源开关(漏电断路器)，并切断供应电源。 1、合上总电源开关(漏电断路器); 2、如果试验室门发出轻微的爆裂声，并且试验正在进行，为了不使运行中断或出现报警，改变设置是必要的; 3、选择运行模式; 4、然后，在定值模式下按“运行”按钮，并且在接下来的确认信息框按下“执行”按钮，关上门，让高低温试验箱运行60min; 5、返回步骤C将设备的设定更改为初始状态。 6、关闭总电源(漏电断路器)，再切断供应电源。 由于高低温试验箱基本由电气、制冷和机械多个系统组成，因此一旦设备出现问题，应全面地对整个设备系统进行检查和综合分析。一般来说分析判断的过程可以先外后里，即先排除外部因素后根据故障现象对设备进行分析。在没弄清故障原因前，切不可盲目拆卸或更换零部件，以免造成不必要的麻烦。
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恒温恒湿箱在冬季保养策略
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
转眼已入冬，我们熟知常温下的恒温恒湿箱如何保养，那么在寒冷的冬季，恒温恒湿箱该怎样保养？宝昀通为您揭秘！ 一、恒温恒湿试验箱安装场地： 安装措施合理选择安装地点：干燥、无雨雪滴漏的地方。 点检措施有条件时由专人每日对保温材料的是否破损、蒸汽管路的是否堵塞进行技术确认与技术处置。 报警措施有条件的可加装蒸汽泄露或断电状态的声光报警小装置，以方便保温防冻措施隐患的发现与及时整治。 二、恒温恒湿箱的保温部位 1、选带保温装置型仪表。 根据仪表的类别用途及拟安装地理位置，提出该仪表的保温防冻需求，再提交与厂家来处理。 北方有的地方昼夜温差太大，夜间可以到达－20多度。 2、用保温材料保温 即用保温材料将仪表易冻或怕冻的部位包起来。 冬季来临时要检查、经常排污，防止包装的保温材料破损。 3、伴热措施 蒸汽伴热措施即使用管蒸汽暖气保温。冬季保温送汽之前要检查一下蒸汽保温管路是否畅通或堵塞。 三、恒温恒湿箱保温保护箱措施 电加热带措施：电伴热保温技术是一种新型的由电能直接转化为热能的供暖技术。加装保温电缆，将伴热带，缠绕在仪表上，或粘在仪表柜内部。 四、恒温恒湿箱的维护措施 1、固定每3个月清洗一次冷凝器：对于压缩机采用风冷冷却的，应定期检修冷凝风机并对冷凝器进行去污除尘以保证其良好的通风换热性能;对于压缩机采用水冷冷却的，除须保证其进水压力与进水温度外，还必须保证相应流量。并定期对冷凝器内部进行清洗除垢以获取其持续的换热性能。 2、循环风叶、冷凝器风机清洁和平衡：与清洗蒸发器相似，因试验箱的工作环境各异，循环风叶和冷凝器风机上会凝聚很多尘埃等小颗粒物体，应定期进行清洗。水路与加湿器清洗：若水路不畅、加湿器结垢易导致加湿器干烧，可能损坏加湿器，所以必须定期对水路与加湿器进行清洗。 3、坚持每次试验完毕后将温度设定在环境温度附近，工作30分钟左右后再切断电源，并擦干净工作室内壁。 4、巡检措施
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蛋白质技术专题：豆粕中尿素酶活性的测定
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
一、实验目的 掌握测定尿素酶活性的各种方法的基本原理及方法步骤。 二、实验原理 将粉碎的大豆制品与中性尿素缓冲溶液混合，在30℃保持30min后，尿素酶催化尿素水解产生氨的反应。用过量的盐酸溶液中和所产生的氨，再用氢氧化标准溶液回滴。 三、实验设备 1、样品筛：孔径200μm； 2、酸度计：精度0.02pH，附有磁力搅拌器和滴定装置； 3、恒温水浴：可控温30±0.5℃； 4、试管：直径18mm，长1 50mm，有磨口塞子； 5、精密计时器； 6、粉碎机：粉碎时应不生强热（如球磨机 7、分析天平．感量0.1mg； 8、移液管；10mL。 四、实验内容 1、称取约0.2g已粉碎的试样，称准至0.1mg，转入试管中，（如活性很高的样品，可只称0.05g试样），移入10ml尿素缓冲溶液，立即盖好试管并剧烈摇动，马上置于30±0.5℃恒温水浴中，准确计时保持30min。即刻移人10m1盐酸溶液，迅速冷却到20℃。 2、将试管内容物全部转入烧杯，用5ml水冲洗试管两次，立即用氢氧化钠标准溶液滴定到pH4.70 。 3、另取试管作空白试验，移人10ml尿素缓冲液，10ml盐酸溶液。称取与上述试样量相当的试样，也称准至0.1mg，迅速加入此试管中。立即盖好试管并剧烈摇动，将试管置于30±0.5℃的恒温水浴，同样准确保持20min，冷却至20℃，将试管内容物全部转入烧杯，用5mL水冲洗试管两次，并用氢氧化钠标准溶液滴定至pH 4.70。 4、以每分钟每克大豆制品释放氨的mg量来表示尿素酶的活性（UA），可按下式计算： 若试样经粉碎前的预干燥处理时，则其计算如下： 由一个分析人员用相同方法，同时或连续两次测定结果之间的相差，应不超过平均值的10％，以其算术平均值报告结果。
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蛋白质技术专题：免疫筛选实验
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
根据抗原-抗体相互作用的原理从群体中选出目的物的技术。如用抗体检测表达型的基因文库所合成的蛋白质，从而筛选出目的基因的克隆。 实验方法 基本方案 实验材料 cDNA 试剂、试剂盒 BHI 氯霉素 NaOH SSC 氯仿 异戊醇 TES SDS mRNA 甲硫氨酸 乙醇 乙酸钠 免疫沉淀缓冲液 仪器、耗材 转子 硝酸纤维滤膜 离心管 微量多孔洗涤仪 实验步骤 1. 往微量滴定板的每孔中加入250 μl 含适当抗生素的选择性BHI培养液，并分别接种独立的cDNA克隆，37℃温育过夜。 2. 在250 ml 烧瓶中加入50 ml BHI/抗生素培养液，以10个克隆过夜培养液为一组， 从每个微孔中取100 μl 培养液，混合后接种到烧瓶中。 3. 37℃培养至A590=0.7，然后加入氯霉素继续于37℃温育过夜；对每组10个过夜的克隆重复培养。 4. 2 000 g 4℃离心10 min，制备质粒DNA。 5. 将制得的约50 μg 质粒DNA溶于1.5 ml TE缓冲液中，移入15 ml无菌、带盖的玻璃培养管中。 6. 沸水浴10 min立即加入1.5 ml 1 mol/l NaOH，室温放置10 min。 7. 加 9 ml 中和液，混匀后置于冰浴，检测pH只值应在6.5~7.5之间。 8. 将0.45 μm 孔径的硝酸纤维素滤膜放在一个连于真空泵的多孔滤器上。 9. 以1 ml/min 的速率加入第4步得到的变性DNA液，待所有液体被吸干后继续抽吸3 min。 10. 取出滤膜用50 ml 6×SSC洗涤，然后于80℃真空烤箱中烤膜2 h。 11. 用无菌的单孔打孔器在滤膜上打出直径为5 mm 的圆形小块滤膜，分别用圆珠笔作好标记。 12. 将盛于无菌带盖的塑料管的含10~50 μg poly（A）+ RNA的0.3 ml 杂交液在70℃预热10 min。 13. 然后将10片小滤膜放入杂交液中，在50℃温育2 h。 14. 将小滤膜转移到50 ml 的试管（每管最多可装20片膜）中，每次用225 ml TES/0.5%SDS冼液于65℃旋转振荡洗涤30 s，共10次，吸去上请。 15. 然后每次用25 ml TES液干65℃洗膜，共2次。 16. 将每片小滤膜分别转移到无菌、硅化的1.5 ml 微量离心管中，每管加入0.3 ml 水、2 μl 10 mg/ml 的
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