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消化道平滑肌的生理特性及其影响因素实验
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
消化道平滑肌的生理特性及其影响因素实验 一．基本介绍：消化道平滑肌的生理特性及其影响因素 二．实验目的 1.观察生理特征，例如收缩力，自动节律和消化道平滑肌的可拉伸性。 2.了解胃肠道推进运动的实验方法，并观察药物对其的影响。 3.了解离体消化道平滑肌的实验方法，观察理化因素和药物对离体消化道平滑肌特征的影响，并分析其作用机理。 三．实验原理 胃肠道平滑肌具有肌肉的一般特征，例如兴奋性和收缩性，以及其自身的特殊性。它具有自动律动和伸展功能，可以产生推进动作。它可以改变化学物质，温度和拉伸。刺激的影响更为敏感，并且还受到神经和液体因素的调节。副交感神经末梢释放的神经递质乙酰胆碱和抗胆碱能酶新斯的明等可增强肠胃蠕动，而M受体阻滞剂阿托品抑制肠胃蠕动。肾上腺素和交感神经末梢释放神经递质去甲肾上腺素可抑制胃肠蠕动。去甲肾上腺素从内脏神经的大多数神经末梢释放，通过减慢胃肠道基本电节律的频率和传播速度，可以减慢胃肠运动并减缓胃肠平滑肌的收缩。在动物实验中，木炭被用作标记物，以测量木炭在胃肠道中每单位时间的距离，这可以反映出胃肠道前进的能力和速度。 小肠分离后，将其置于模拟人体内部环境的液体环境中，以使营养液的离子成分，渗透压，pH，温度，氧分压和营养成分类似于内部环境，可以在一段时间内维持肠道。平滑肌的正常活动和功能。药物可以通过与肠平滑肌上的受体相互作用来影响离体的肠平滑肌。 四．实验试剂及设备 序号 产品 cas号 货号 备注 1 乙酰胆碱 66-23-9 SC0410 2 新斯的明 114-80-7 JQ2762 3 阿托品 51-55-8 FF0438 4 肾上腺素 51-43-4 YZM003350 5 酚妥拉明 73-05-2 LSH58052 6 普萘洛尔 14556-46-8 DBK501834 7 台氏液
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细胞计数实验
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
细胞计数实验 一．实验目的 1.把握细胞计数方法。 2.了解区分细胞存活状态方法。 二．实验用品 0.4％台盼蓝溶液，无水乙醇或95％乙醇溶液，脱脂棉 普通显微镜,试管,稻草,毛细稻草,细胞计数板,绸布。 序号 产品名 货号 CAS 备注 1 0.4％台盼蓝溶液 SX0153 72-57-1 2 乙醇 JT26000 64-17-5 三．实验原理 在细胞内培养在工作中，通常有必要了解细胞的生命状态并确定细胞死亡，确定细胞接种的浓度和数量，并了解细胞活力和增殖，例如通过酶消化鉴定细胞悬液中的细胞活力，恢复后冷冻的细胞进行活力测试等。制备细胞悬液后，通常用生命染料台盼蓝将细胞染色，然后进行细胞计数。锥虫蓝无法穿透活细胞的正常细胞膜，因此活细胞不会被染色。死亡细胞的细胞膜通透性增加，使染料进入细胞并使细胞着色（蓝色）。对于细胞计数，通常根据白细胞计数方法使用血细胞计数板进行计数，这便于确定细胞的生存条件。 四．实验内容与方法 （一）动物细胞悬液的制备 将动物细胞用生物盐水准备适当浓度的细胞悬液，以备将来使用。 （二）细胞计数 1.柜台板加工 用无水乙醇或用95％乙醇溶液擦拭计数板然后，用丝布擦拭盖玻片一件，盖上计数板上的盖板。 2.染色 用滴管画0.4％台盼蓝染料溶液，以1：1的比例添加到细胞悬液中。从计数板的边缘缓慢滴落以填充计数板和盖板之间的间隙。注意不要让液体流入相邻的凹槽或携带气泡，否则会重做。片刻后，将计数板放在低倍镜下（10×10倍）以观察计数。 3.计数方法 根据该图，计算计数板的四个大正方形（每个大正方形分为16个小正方形）中的像元数。计数时，仅对完整的细胞进行计数，如果将细胞聚集在一起，则将对一个细胞进行计数。在大正方形中，如果行上有单元，通常将较低的行单元不计为较高的行单元，将左侧的行单元不计为右的行单元。第二次重复计数的误差不应超过±5％（图7-1）。在显微镜下观察到，折射力强
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PCR-SSP分析实验
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
PCR-SSP分析实验 一、实验简介 PCR序列特异性引物（SSP）分析方法是通过使用可以特异性鉴定特定等位基因的引物通过PCR扩增来检测序列多态性的方法，也称为等位基因特异性引物PCR方法。本实验采用PCR-SSP法检测MN的基因型。 二、实验方法原理 根据确定的某个等位基因的性质，设计其3'端第一个碱基与每个等位基因的特定碱基匹配的序列特异性引物。在PCR反应期间，只有引物3'末端。只有当第一个碱基与确定特定等位基因的碱基互补时，DNA片段才能完全复制，并且根据PCR产物的存在或不存在对等位基因进行分型。 三、实验材料 PCR扩增仪， 电泳仪， 电泳槽， 引物1：5'-GCATCAAGTACCACTGGT-3'； 引物2：5'-GCATTAAGTACCACTGAG-3'； 通用引物：5'-GAGAAGTTGAGAAAGGGGT-3'。 模板DNA， Taq聚合酶， 丙烯酰胺， 电极缓冲液， 加载缓冲液等 序列 产品名 货号 CAC 备注 1 丙烯酰胺 LSH54449 2 IEF电极缓冲液 HC1773 四、实验程序 1.PCR扩增PCR反应系统为20μl（2个系统，分别为引物1和引物2），包含模板2μl（约50ng），引物1.5μl，dNTP1.6μl（0.4mM），10×缓冲液2μl， Taq酶1.0 U，加双蒸水至20.0μl; PCR反应条件为94℃4min，94℃1.5min / 52℃2.0min / 72℃2.0min，30个循环。 2.PCR扩增产物的检测取2μlPCR扩增产物，进行6％聚丙烯酰胺凝胶电泳（T = 6％，C = 3.3％，凝胶规格为82mm×64mm×0.75mm）。电极缓冲液为1×TBE。将添加有1/5体积上样缓冲液的消化产物在220 v电压下电泳2至3小时。银染显色。 五、结果判断 根据电泳条带的等位基因类型的确定，只有一个系统将该条带检测为对应的特定引物的对应类型（M或N），并且两个系统都将该条带检测为MN类型。 六、实验讨论 1.注意事项①如果引物结合序列存在碱基变异，则可能没有扩增产物，导致类型判断错误； ②只有根据对照样品的准确分类，才能判断结果。 2.方法评估该方法操作简便，并且需要较
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平板细胞克隆形成试验
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
一、平板细胞克隆形成实验简介： 细胞克隆形成率即细胞接种存活率，表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量。贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆，而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。 二、平板细胞克隆形成实验基本步骤： 1、取对数生长期的各组细胞，分别用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞，并把细胞悬浮在10%胎牛血清的DMEM培养液中备用。 2、将细胞悬液作梯度倍数稀释，每组细胞分别以每皿50、100、200个细胞的梯度密度分别接种含10mL 37℃预温培养液的皿中，并轻轻转动，使细胞分散均匀。置37℃ 5% CO2及饱和湿度的细胞培养箱中培养2～3周。 3、经常观察，当培养皿中出现肉眼可见的克隆时，终止培养。弃去上清液，用PBS小心浸洗2次。加4%多聚甲醛固定细胞5mL固定15分钟。然后去固定液，加适量GIMSA应用染色液染10～30分钟，然后用流水缓慢洗去染色液，空气干燥。 4、将平皿倒置并叠加一张带网格的透明胶片，用肉眼直接计数克隆，或在显微镜（低倍镜）计数大于10个细胞的克隆数。最后计算克隆形成率。 克隆形成率 =（克隆数/接种细胞数）×100% 平板克隆形成试验方法简单，适用于贴壁生长的细胞。适宜底物为玻璃的、塑料瓶皿。试验成功的关键是细胞悬液的制备和接种密度。细胞一定要分散得好，不能有细胞团，接种密度不能过大。 三、平板细胞克隆形成实验所需材料 序号 产品名 货号 CAS 备注 1 胰蛋白酶 SS2236 9002-07-7 2 PBS HC2031 3 多聚甲醛 JT12020 30525-89-4
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ELISA实验(简介,概念,原理,操作步骤)
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
ELISA实验 一、ELISA实验简介 ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。此项技术自70年代初问世以来，发展十分迅速，目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。 二、ELISA实验原理 ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、牽9体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。 由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。在实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。 三、ELISA实验操作步骤 方法一 用于检测未知抗原的双抗体夹心法: 1. 包被：用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。 2. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。 3. 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。 4. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。 5. 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。 6. 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测O·D值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，若大于规定的阴性对照OD值
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噬菌体滴度的测定实验（实验介绍;所需试剂;实验步骤）
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
一、噬菌体滴度测定实验介绍 噬菌体滴度测定实验中在宿主细胞过多的情况下，噬菌斑的数目随着噬菌体的增加而线性增加。因此，在感染前，应稀释噬菌体，而不是宿主细胞。低MOI（感染重复性）的平板还可确保每个噬菌斑仅包含一个DNA序列。 二、噬菌体滴度测定实验所需试剂 序号 产品 cas号 货号 备注 1 LB培养基 HC1007 2 顶部琼脂糖凝胶 HC1421 1、微波炉 2. LB / IPTG / Xgal培养板 3. LB培养基 4.顶部琼脂糖凝胶 三、噬菌体滴度测定实验步骤 1.在5~10ml LB培养基中接种一个ER2537克隆，并摇动孵育直至对数中期（OD600~0.5）。 2.随着细胞的生长，将顶部琼脂糖凝胶微波加热并分配到无菌培养管中，每管3ml。保持在45℃下使用。 3.将LB / IPTG / Xgal培养板在37°C下预热并放在一旁。 4.在LB培养基中将噬菌体稀释10倍。 推荐稀释范围：108-1011，用于扩增噬菌体的培养上清液； 101-104用于未放大筛选的洗脱液。每次稀释均使用新的吸头。**使用气溶胶屏障来避免交叉污染。 5.一旦ER2537培养物生长到对数生长期的中期，将其等分到微量离心管中，每管200ml。 6.将稀释的噬菌体上清液添加到装有细菌培养物的微量离心管中。仅将10 ml的一种稀释剂添加到微量离心管中，迅速涡旋，并在室温下孵育1-5分钟。 7.转移到装有45℃顶层琼脂糖凝胶的试管中，涡旋并快速混合，立即倒入预热的LB / IPTG / Xgal板上，然后轻轻摇动该板以均匀分布顶层凝胶。 8.将板冷却5分钟，然后在37°C下孵育过夜。 9.噬菌斑计数是基于噬菌斑计数约为100的培养皿。将噬菌斑计数乘以稀释液得到的滴度为每10毫升噬菌体噬菌斑形成单位（pfu）
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小鼠骨髓细胞微核试验（介绍,原理,步骤,结论）
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
一、小鼠骨髓细胞微核实验介绍 小鼠骨髓细胞微核实验中的微核是指存在于细胞主核之外的粒子，其大小相当于细胞直径的1/20至1/5。微核试验是一种快速检测化学毒物的方法，化学毒物会破坏染色体并干扰细胞的有丝分裂。它被认为是圆形或杏仁形，其染色与细胞核一致，并且在相间细胞中可以出现一种或多种。通常认为微核是细胞中的染色体断裂或纺锤体丝撞击，并在有丝分裂晚期停留在核外。因此，微核试验可以检测两种遗传学：由化学毒物或物理因素引起的染色体突变变化和染色体分离变化。结束。 微核可以出现在多种细胞中，但是在有核细胞中，将它们与正常细胞核的裂片和核突起区分开来更加困难。由于红细胞可以在成熟前最后一次分离后数小时排出主核，并且仍保留PCE细胞中的微核，因此通常要对PCE细胞中的微核进行计数。 二、小鼠骨髓细胞微核实验器械与试剂 序号 产品 cas号 货号 备注 1 甲醇 67-56-1 JT25999 2 甘油 56-81-5 JT26018 3 牛血清白蛋白96% 9048-46-8 SS2163 4 生理盐水 7732-18-5 5 吉姆萨染料 51811-82-6 SX0115 6 pH 6.8磷酸盐缓冲液 HC1980 7 磷酸二氢钾 7778-77-0 SS1343 8 磷酸氢二钠 7558-79-4 SS1345 1.设备手术刀，手术剪刀，无牙钳，弯曲小止血钳，干净的纱布，带橡胶头的移液器，台式离心机，离心分离管，胶片架，吹风机，玻璃蜡笔，玻璃染色筒，2ml注射器和针头，滑片和幻灯片，固定时钟，带油镜的显微镜，细胞计数器。 2.试剂甲醇（分析纯），甘油（分析纯），小牛血清，生理盐水和Giemsa储备溶液（取1g Giemsa染料，66ml和60ml甲醇。）先将染料放入研钵中，加少量将适量的甘油混合并研磨，然后将剩余的甘油分批浇注以继续研磨，然后将其转移到烧杯中，
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琼脂糖凝胶电泳常见问题与解决办法
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
一、琼脂糖凝胶电泳简单介绍： 琼脂糖凝胶是以琼脂糖为支持介质制备的凝胶。琼脂糖分为一般琼脂糖和经化学修饰后熔点降低的低熔点琼脂 糖，琼脂糖的熔点在62?65°C之间，融化后在37°C下可维持液态数小时，30°C时凝固成胶。多用于对染色体DNA在凝胶内进行原位酶切及DNA片段回收。琼脂糖凝胶 由于孔径大常用于大分子蛋白质、DNA的分离。 二、琼脂糖凝胶电泳凝胶制备 序列 产品名称 货号 CAS 备注 1 琼脂糖 SF0012 9012-36-6 1.当微波炉溶解琼脂糖时，胶水会在三角锥烧瓶上沸腾。微波炉加热时，胶水可能会剧烈沸腾。 （1）总液体体积不得超过三角烧瓶体积的50％。 （2）将2％或更多的胶水溶液设置为中火。 （3）当胶液剧烈沸腾时，停止加热，取下三角瓶，请戴上耐热手套，小心摇动三角瓶，然后再次加热，胶会沸腾直至胶变透明，确保琼脂糖完全溶解了 2.琼脂糖电泳图像的背景模糊：如果琼脂糖没有完全溶解，则电泳图像的背景将模糊。完全溶解的琼脂糖凝胶是透明的，并且锥形瓶的内壁上不应有琼脂糖颗粒粘附。 3.加热后，水蒸发。如有必要，应添加热蒸馏水以弥补原始重量并摇匀。 三、琼脂糖凝胶电泳 1. DNA条带模糊且拖尾。 （1）DNA降解。避免核酸酶污染。 （2）DNA负载过多。减少凝胶中DNA的负载量。 （3）过时的电泳缓冲液：多次使用电泳缓冲液后，离子强度降低，pH值升高，缓冲容量降低，影响电泳效果。建议经常更改运行缓冲区。 （4）电泳条件不合适。电泳时的电压不应超过20 V / cm，温度应低于30℃，巨大的DNA链应低于15℃。检查所使用的电泳缓冲液是否具有足够的缓冲能力。 （5）类DNA盐太高。游泳前，先用乙醇沉淀除去多余的盐。 （6）存在蛋白质污染。电泳前先提取蛋白质。 （7）DNA变性。电泳前无需加热，请用20 mM NaCl缓冲液稀释DNA。 2. DNA条带较弱或无DNA条带。 （1）DNA负载量不足：增加DNA负载量。 （2）DNA降解：避免DNA核酸酶污染。 （3）DNA脱离凝
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测定植物中的可溶性糖含量（蒽酮法）
作者：德尔塔 日期：2022-03-30
一、测定植物中的可溶性糖含量目的： 糖是植物的重要成分之一，也是代谢的主要原料和存储物质。不同的负载条件和不同的成熟度会影响水果和蔬菜中的糖含量。因此，测定水果和蔬菜中的可溶性糖可以了解和鉴定水果和蔬菜的质量。 二、测定植物中的可溶性糖含量原理 当糖用浓硫酸脱水以形成醛或其衍生物时，反应如下： 糠醛或羟甲基糠醛进一步与蒽酮试剂缩合生成蓝绿色物质，该蓝绿色物质在可见光区域中在620 nm波长处具有最大吸收，并且其光吸收值与糖含量在一定范围内成正比。 该方法可用于单糖，寡糖和多糖的测定，具有灵敏度高，简便，快速的优点，适用于痕量样品的测定。 三、测定植物中的可溶性糖含量实验材料，仪器和试剂 序号 产品 CAS号 货号 备注 1 葡萄糖 50-99-7 SC0001 2 蒽酮 90-44-8 JT25818 3 乙酸乙酯 141-78-6 JT11988 1.材料：大白菜叶，柑橘 2.仪器：分光光度计恒温水箱20ml刻度试管（3个）漏斗100ml容量瓶刻度试管试管架剪刀砂浆 3.试剂： （1）200μg/ ml标准葡萄糖：AR级葡萄糖100mg，溶于蒸馏水，定容至500ml。 （2）蒽酮试剂：将蒽酮1g溶于乙酸乙酯中，稀释至50ml，避光保存。 （3）浓硫酸。
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噬菌体培养方法(液体培养法,双层琼脂培养方法,琼脂表面培养方法)
作者：德尔塔 日期：2022-03-30
一、噬菌体培养菌液体培养法 1.在适当的温度下，通常在16至24小时内，以液体培养方法培养指定的宿主细菌。 2.将100μl噬菌体原液与300μl宿主细菌悬浮液混合，并使其感染15分钟。 3.将混合溶液连接到装有10 ml新鲜液体培养基的试管中，并在适当的温度下摇动并培养约8至24小时。培养时间取决于噬菌体。 4.将培养基转移到离心管中，并以10,000 rpm（5,000 g）离心10分钟以沉淀宿主细菌。 5.将上清液转移至新试管中，并用孔径为0.22μm的过滤器除去残留细菌，以获得不含宿主细菌的噬菌体原液。但是，由于噬菌体原液是透明的，因此不能用肉眼直接判断其增殖效果，因此应测定其效价以确认增殖培养的有效性。 序号 产品 CAS号 货号 备注 1 琼脂培养基 PYJH51095 2 90*15mm培养皿 FM-90-X 3 10ml离心管 F-EP100 二、噬菌体培养双层琼脂培养方法 1.在适当的温度下，通常在16至24小时内，以液体培养方法培养指定的宿主细菌。 2.将100μl噬菌体原液与300μl宿主细菌悬浮液混合，并使其感染15分钟。 3.将混合物加入5 ml冷却至45°C的0.7％琼脂培养基中，均匀混合，然后立即将其放在倒入的1.8％琼脂培养基板上。 4.板固化后，将其移至合适温度的培养箱中。培养时间通常为8至24小时。培养时间取决于噬菌体。 5.遵循与上述相同的步骤，制作另一个没有噬菌体的对照组。 6.将培养板的清晰度与对照组进行比较。通常，含有噬菌体的板是透明的，而仅含有宿主细菌的对照组是浑浊的。 7.将含有噬菌体的板在-20°C下放置4?5小时后，将其取出并在室温下融化。 8.将解冻的液体转移到离心管中，并以10,000 rpm（5,000 g）离心10分钟，以沉淀宿主细菌。 9.将上清液转移到新试管中，并用孔径为0.22μm的滤器除去残留细菌，以获得不含宿主细菌的噬菌体原液。 三、噬菌体培养琼脂表面培养方法 1.在适当的温度下，通常在16至24小时内，以液体培养
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聚丙烯酰胺凝胶(PAGE胶电泳)电泳与银染方法
作者：德尔塔 日期：2022-03-30
一、聚丙烯酰胺凝胶(PAGE胶电泳)电泳与银染实验简介： PAGE凝胶电泳（聚丙烯酰胺凝胶电泳）主要使用PAGE作为介质根据大小和电荷分离DNA分子。 PAGE凝胶电泳采用银染法进行显色。银染的原理：首先，银离子（通常为AgNO3）和DNA的结合；其次，还原剂甲醛将Ag +还原为银颗粒，最终DNA呈黑褐色。 聚丙烯酰胺凝胶电泳是使用聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的电泳方法。在这种支撑介质上，可以根据要分离的物质的分子大小和分子电荷对其进行分离。聚丙烯酰胺凝胶电泳适用于分离和鉴定低分子量蛋白质，小于1Kb的DNA片段和DNA序列分析。加载的样品很大，回收的DNA纯度很高，长度相差仅0.1％（即1000bp中为1bp）。酸分子可以分离。 聚丙烯酰胺凝胶由丙烯酰胺单体组成，在催化剂TEMED（N，N，N，N'-四甲基乙二胺）和过硫酸铵的作用下，丙烯酰胺聚合形成长链聚丙烯酰胺，在交联剂N的参与下， N'-亚甲基双丙烯酰胺（交联剂），聚丙烯胺链交联形成凝胶。聚丙烯酰胺凝胶的孔径取决于丙烯酰胺和交联剂的浓度和比例。下表显示了不同浓度下丙烯酰胺和DNA的有效分离范围。 丙烯酰胺（％）有效分离范围（bp）溴酚蓝*二甲苯绿* 3.5 100～2000 100 460 5.0 80～500 65 260 8.0 60～400 45 160 12.0 40～200 30 70 15.0 25～150 15 60 20.0 10～100 12 45 *表中给出的数字是双链DNA分子中包含的碱基对（bp）的数目，其等于指示剂的迁移率。 二、聚丙烯酰胺凝胶(PAGE胶电泳)电泳与银染实验所需试剂 序号 名称 货号 CAS 备注 1 聚丙烯酰胺 HCC340648 9003-05-8 2 丙烯酰胺 LSH54449 79-06-1 3 甲醇 JT25999 67-56-1 4 乙醇 JT26000 64-17-5 5 过硫酸铵 JT10928 7727-54-0 6 硼酸 JT0008 10043-35-3 1.电泳仪，立式电泳槽及其配件，玻璃板，常用实验室设备等。 2.玻璃板
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石蜡切片的骨相关酶（TRAP、ALP）的双重染色法(采用石蜡切片)
作者：德尔塔 日期：2022-03-30
一．骨相关酶（TRAP、ALP）的双重染色实验简单介绍 了解活骨代谢的状态是研究相关细胞生理活性的有效方法。可以用碱性磷酸酶（ALP）对骨组织进行染色以了解成骨细胞的骨形成，并且可以用抗酒石酸磷酸酶（TRAP）对骨组织进行染色以了解破骨细胞的骨吸收。如果您在同一部分上进行两次染色，则可以理解两者。另外，它具有的优点是，在脱钙的样本中，只要它可以被双重染色，就不需要特殊的设备，并且仅使用一般设备就可以容易地观察到骨代谢。在此前提下，我们需要研究二次染色的可行性。 二、骨相关酶（TRAP、ALP）的双重染色生产标准样品 序号 名称 货号 CAS 备注 1 碱性磷酸酶 HC1779 2 蔗糖 SS1498 57-50-1 3 柠檬酸三铵 LSH53568 7632-50-0 4 福尔马林-EDTA脱钙液 HC0733 将通过树脂包埋或冷冻切片制备的样品用作标准样品，并与脱钙石蜡切片进行比较。也就是说，用酒精固定鼠标肘关节后，将其嵌入乙二醇甲基丙烯酸甲酯（GMA）中，使用切片机将其切成2μm的硬组织切片，然后将TRAP和ALP染色。然后，制备脱钙的冷冻切片。之后，研究并改进了在固定，脱钙和染色阶段进行双重染色的可行性。这张照片是小鼠肘关节的染色标本，作为本实验的标准标本。使用它作为阳性对照，与脱钙的石蜡切片一起进行染色和可染色性评估。用30％蔗糖溶液浸泡柠檬酸钙化的脱钙小鼠的腰椎和右上肢，然后用OCT复合物包埋，冷冻Tissue-Tek PINO（Sakura Finetek Japan Co.，Ltd.的产品），Cryo 3（Sakura Finetek Japan） Co.，Ltd.产品）以获得5μm的冷冻切片。切片被酶染色。不仅TRAP染色和ALP染色是单次染色，而且是双重染色。 染色研究 ①第二次在没有福尔马林固定的情况下用酒精固定，ALP染色呈强阳性。 TRAP染色为阴性。 ②在福尔马林中固定16小时后，③在4天后，TRAP和ALP染色良好。但是，尽管福尔马林在1
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针式滤器知识大全
作者：德尔塔 日期：2022-03-30
针式滤器知识介绍 一、溶剂针式滤器 优质玻璃材料，玻璃光洁透明，无气泡，壁厚均匀； 采用特硬优质玻璃材料，抗极差温度变化达280℃； 具有良好的耐压性，可供高温高压灭菌使用； 本品流量快、磨口标准、密封性能好； 尺寸规格符合国际标准，能与国外多种品牌互配。 1.1产品介绍 溶剂过滤器是化学实验室常备的装置，是液相色谱分析中必不可少的专用设备。在色谱分析中可除去影响色谱柱寿命及系统检测精度的杂质，对保护色谱柱及色谱仪的使用具有重要的作用，被广泛用于实验室色谱分析。在过滤过程中它对液体的脱气效果也是非常明显的。根据试验要求，溶剂过滤采用不同种类的滤膜，并配以无油隔膜真空泵达到去除杂质，澄清过滤，提高过滤效率及分析精度，加强脱气效果的作用。本装置内衬微孔滤膜，可用于化学分析，仪器分析、卫生检验、制药工业、生物制品和农药、石油、环保监测等方面液体过滤，以监测和除去液体中的微粒和细菌。 1.2针式滤器的特点 优质玻璃材料，玻璃光洁透明，无气泡，壁厚均匀 采用特硬优质玻璃材料，抗极差温度变化达280℃ 具有良好的耐压性，可供高温高压灭菌使用 本品流量快、磨口标准、密封性能好 尺寸规格符合国际标准，能与国外多种品牌互配 1.3针式滤器的应用 针式滤器主要应用于水相、有机相及腐蚀性液体的过滤，用于特定污染物的分析，特别推荐用于HPLC流动相的过滤，有一定的脱气作用，以保证流动相的洁净、防止HPLC液路的堵塞。也可用于无菌试验，培养除菌过滤，热敏物的除菌过滤。 1.4针式滤器的组成部分 溶剂过滤器系统由溶剂过滤器组件加真空泵组成。 1.5其中过滤器包括 三角积液瓶 砂心过滤头 滤杯 固定夹 防尘盖 胶管 胶管链接器 1.6技术参数 二、微孔滤膜 直径：13mm；25mm；47mm；50mm；60mm；150mm；300mm； 孔径：0.2μm；0.45μm；0.8μm等（特殊材质规格订做可进行咨询）； 材质：尼龙66（Nylon66） 、聚醚砜（PES） 、混合纤维素（MCE）、
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细菌转化实验（原理,步骤,所需试剂,实验目的）
作者：德尔塔 日期：2022-03-30
一、细菌转化实验方法原理 细菌转化实验中质粒DNA粘附在细菌细胞的表面，并在42°C进行短时热休克处理，以促进DNA的吸收。然后将其在非选择性培养基中培养一代。质粒上携带的抗生素基因表达表达后，不含抗生素的培养基在培养基中生长。 二、细菌转化实验材料 涡旋混合器，微量移液器采样器，移液器吸头，1.5ml微量离心管架，双面微量离心管架，干燥的恒温气浴（或恒温水浴），制冰机，恒温摇床，培养皿（固体LB-Amp铺砌），超净工作台，酒精灯，玻璃涂层棒，恒温培养箱。培养基（不含抗生素），LB培养基（含抗生素），无菌ddH2O，IPTG，X-gal。 （注）准备：无菌ddH2O，将1.5ml离心管放入铝制饭盒中（灭菌），将移液器吸头插入相应的吸头盒中（灭菌），20％IPTG（M / V），2％X-gal（M / V，含N，N-二甲基甲酰胺）。 三、细菌转化实验所需试剂和耗材： 序列 产品名 货号 CAS 备注 1 10ul白吸头(灭菌) FT-10-H 2 200ul黄吸头（灭菌 FT-200-H 3 1000ul蓝吸头（灭菌） FT-1000-H 4 90mm*15mm 塑料培养皿(灭菌） FM-90-X 5 90mm*20mm 塑料培养皿(灭菌） FM-90-G 6 10*10cm方形塑料培养皿(灭菌） FM-100-F 7 N,N-二甲基甲酰胺 JSH68495 8 IPTG HC1600 四、细菌转化实验
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针式滤器、滤膜
作者：德尔塔 日期：2022-03-30
一、针式溶剂过滤器 优质玻璃材料，玻璃光洁透明，无气泡，壁厚均匀； 采用特硬优质玻璃材料，抗极差温度变化达280℃； 具有良好的耐压性，可供高温高压灭菌使用； 本品流量快、磨口标准、密封性能好； 尺寸规格符合国际标准，能与国外多种品牌互配。 1.1针式滤器产品介绍 溶剂过滤器是化学实验室常备的装置，是液相色谱分析中必不可少的专用设备。在色谱分析中可除去影响色谱柱寿命及系统检测精度的杂质，对保护色谱柱及色谱仪的使用具有重要的作用，被广泛用于实验室色谱分析。在过滤过程中它对液体的脱气效果也是非常明显的。根据试验要求，溶剂过滤采用不同种类的滤膜，并配以无油隔膜真空泵达到去除杂质，澄清过滤，提高过滤效率及分析精度，加强脱气效果的作用。本装置内衬微孔滤膜，可用于化学分析，仪器分析、卫生检验、制药工业、生物制品和农药、石油、环保监测等方面液体过滤，以监测和除去液体中的微粒和细菌。 1.2针式滤器的产品特点 优质玻璃材料，玻璃光洁透明，无气泡，壁厚均匀 采用特硬优质玻璃材料，抗极差温度变化达280℃ 具有良好的耐压性，可供高温高压灭菌使用 本品流量快、磨口标准、密封性能好 尺寸规格符合国际标准，能与国外多种品牌互配 1.3针式滤器的应用 主要应用于水相、有机相及腐蚀性液体的过滤，用于特定污染物的分析，特别推荐用于HPLC流动相的过滤，有一定的脱气作用，以保证流动相的洁净、防止HPLC液路的堵塞。也可用于无菌试验，培养除菌过滤，热敏物的除菌过滤。 1.4针式滤器的组成部分 溶剂过滤器系统由溶剂过滤器组件加真空泵组成。 1.5滤器包括有哪些 三角积液瓶 砂心过滤头 滤杯 固定夹 防尘盖 胶管 胶管链接器 1.6技术参数 二、微孔滤膜 直径：13mm；25mm；47mm；50mm；60mm；150mm；300mm； 孔径：0.2μm；0.45μm；0.8μm等（特殊材质规格订做可进行咨询）； 材质：尼龙66（Nylon66） 、聚醚砜（PES） 、混合纤维素（MCE）、聚丙
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