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杂质的分离技术介绍
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
杂质的分离方法介绍 通常需要分离杂质。但是，如果使用仪器方法，则可以避免杂质的分离，因为它直接表征了杂质。通常，色谱和非色谱技术用于表征之前分离杂质。术语“色谱反应器”是指使用分析规模的色谱柱，既用作流通式反应器，又用作反应物和产物的分离介质。高效液相色谱（HPLC）和色谱反应器方法，具有溶液相水解动力学，可用于aprepitant（EmendTM）前药和fosaprepitant二聚甲胺。在氯雷他定中，发现的杂质是氟氯雷定； 其他例子包括塞来昔布和丁胺卡那霉素。 根据当前的FDA和EMEA指南，杂质的结构（原料药和药物产品中未知的降解产物）必须阐明其含量是否超过0.1％。分析服务提供了用于结构解析的最新分析技术（例如高场NMR，LC-MSMS，GC-MS和MALDI-TOF）以及未知杂质的制备性分离（例如半制备和完全制备HPLC）。光谱预测的软件工具支持我们专家的研究. 1、固相萃取方法 固相萃取（SPE）是一种越来越有用的样品制备技术。使用SPE，可以防止许多与液-液萃取相关的问题，例如不完全的相分离，回收率低于定量，使用昂贵的易碎特种玻璃器皿以及处置大量有机溶剂。 SPE比液体–液体萃取更有效，可进行定量萃取，该萃取易于执行，快速且可实现自动化。减少了溶剂的使用和实验室时间。 SPE非常常用于制备液体样品并提取半挥发性或非挥发性分析物，也可与预提取到溶剂中的固体一起使用。 SPE产品非常适合样品提取，浓缩和净化。它们可用于多种化学，吸附剂和尺寸。为每种应用和样品选择最合适的产品很重要。 2、液体–液体提取方法 液-液萃取，也称为溶剂萃取和分配，是一种根据化合物在两种不同的不混溶液体（通常是水和有机溶剂）中的相对溶解度来分离化合物的方法。它是一种物质从一种液相到另一种液相的提取。液体–液体萃取是化学实验室中的一项基本技术，使用分液漏斗进行。这种类型的过程通常在化学反应后进行，作为后处理的一部分。 3、加速溶剂萃取方法 加速溶剂萃取（ASE）是一种在
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什么是肽？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
肽是短的氨基酸串，通常包含2-50个氨基酸。 氨基酸也是蛋白质的组成部分，但蛋白质中却含有更多氨基酸。 肽比蛋白质更容易被人体吸收，因为它们比蛋白质更小且分解程度更高。 它们可以更轻松地穿透皮肤和肠道，从而帮助它们更快地进入血液。 补充剂中的肽可能来自植物或动物的蛋白质来源，包括： 蛋、肉、鱼和贝类、豆和小扁豆、黄豆、燕麦、大麻种子、小麦 科学家对生物活性肽或对人体有益并可能对人体健康产生积极影响的生物活性肽最感兴趣。不同的生物活性肽具有不同的性质。 它们对人体的作用取决于它们所含氨基酸的序列。 一些最常见的肽补充剂是： 胶原蛋白肽，可能有益于皮肤健康并逆转衰老的影响。 肌酸肽，可以增强力量和肌肉质量。 有些人可能会服用其他肽和肽激素来增强运动能力。 但是，世界反兴奋剂机构已禁止其中许多药物，包括卵泡抑素（一种增加肌肉生长的肽）。
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药物杂质研究（药物杂质介绍,有机类药物杂质,无机类药物杂质,对映体药物杂质,加工中的药物杂质）
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
药物杂质介绍 药品中的杂质不仅可以归因于用于配制药品的原料药或惰性成分，还可以归因于药品。但是它们也可以通过配制过程或与包装中存在的各种杂质接触而带入药品中。 “药品的任何不是化学实体的成分都定义为药品或药品中的赋形剂。” （ICH Q6A：规格）。[1]重要的是要更多地考虑这些有害杂质。通常，这些杂质大多数是小分子。在固体剂型中尤其如此，其中受限的迁移率限制了较大分子的反应性。对于大多数药物而言，反应性物质包括水（可水解某些药物或影响剂型性能），小型亲电试剂（例如醛和羧酸衍生物），过氧化物（可氧化某些药物）和金属（可催化氧化和其他药物降解途径）。另外，一些杂质会引起毒理学问题。这些有害化学物质的存在，即使少量也可能影响药物产品的功效和安全性。杂质分析（即药物中的杂质的身份和数量）现在正受到监管机构的高度重视。诸如BP（英国药典），USP（美国药典），IP（印度药典）等不同的药典正在慢慢纳入对活性药物成分（API）或制剂中允许的杂质含量的限制。药物发现中正在研究的大量化合物对单独的化合物的检测，定量和表征提出了重大的分析挑战。 [2]在图1中，我们总结了所有类别的杂质。 根据国际协调会议（ICH）指南，与API相关的杂质以不同的方式分类。 1、有机类药物杂质 有机杂质是每个API中最常见的杂质，除非在整个多步合成过程中每个涉及的步骤都采取适当的措施。 尽管最终产品总是用溶剂洗涤，但除非制造商非常注意杂质，否则总有可能残留未反应的残留原料。 在扑热息痛中，对氨基苯酚有一个极限测试，对氨基苯酚可能是一个制造商的起始原料或其他制造商的中间体 氧化降解 氢化可的松，甲氨蝶呤，阿达那唑仑，直接与芳环键合的羟基（例如苯酚衍生物，如儿茶酚胺和吗啡），共轭二烯，杂环芳环，亚硝基和亚硝酸盐衍生物以及醛（例如黄酮）都易被氧化 降解。 脱羧 在鲁氟沙星发生光反应的情况下，某些溶解的羧酸（例如对氨基水杨酸）在加热时会从羧基上失
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以冻干保护剂为稳定剂的壬二酸前体的稳定性知识分享
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
水溶性差的壬二酸使得难以配制用于局部使用的壬二酸。通过皮肤局部使用药物成为一个障碍，因为人类皮肤的角质层外层是人体的主要屏障。通过简单的方法将壬二酸乙醇酶体配制为将水相添加到浓度为20％至45％v / v的磷脂酰胆碱（5％，w / w）和壬二酸（0.2％，w / w）的乙醇溶液中，药物释放速率比壬二酸脂质体制剂快，乙醇浓度越高，壬二酸释放越快。 质体作为药物载体系统具有长期暴露的物理（颗粒或融合颗粒）和化学（活性成分在储存过程中发生化学相互作用）。 Celia等人的研究。报告说，在26°C保存10天后，制备310.8、311.4和313.1 nm时，三种配方的囊泡尺寸随囊泡尺寸的增加而增加– 315.2、314.6和316.7 nm。制备后的脂质体制剂的包封率（EE）为57.2±4.1％，储存180天后降至55.4±3.9％。[4]据报道，从冰箱中的球形和内在完整性来看，在保存60天和275天后，在将冰箱中的脂质体储存在29°C时，其稳定性比在29°C下储存更好。此外，在冰箱中也观察到了更好的囊泡分布，表明没有絮凝，尽管悬浮液上出现了乳霜，但颗粒还是容易摇动分散。 克服这种不稳定性的另一种方法是应用冷冻干燥工艺或冻干工艺，该工艺能够通过升华和真空脱附去除样品中的水分。冷冻干燥形式可以通过防止颗粒聚集，防止形成囊泡的聚合物降解以及防止活性物质从囊泡释放而提供更好的稳定性。此外，冻干形式能够在极端储存条件下在纳米囊泡中提供长达6个月的稳定性。在冷冻干燥过程中，它涉及在冷却和干燥阶段施加各种压力的过程，因此它需要冻干保护剂来保护脂质体免受冷却和脱水过程的影响。众所周知，在冷却过程中会发生相分离，因此有必要添加冻干保护剂，以增加储存期间的稳定性。冻干过程中冻干保护剂有多种用途，其中包括糖类，例如海藻糖，蔗糖，葡聚糖，葡萄糖和甘露醇。海藻糖是一种冻干保护剂，由于其低吸湿性，不存在氢内部键而无法使用，这使得冻干过程中氢键的形成更加灵活，化学反应性极低以及其较高的玻璃化转变温度。
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生物化学产品硒化氢
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
1、生物学中的硫属元素概述 硫属元素是元素周期表第16组中的化学元素。该族也称为氧族，由氧（O），硫（S），硒（Se），碲（Te）和放射性元素po（Po）组成。 O，S和Se是生命必不可少的，尽管在一个典型的70公斤成年人中硒仅需要约15 mg的痕量[1]。氧气在有氧呼吸和光合作用（O2），水（约占人体的65 wt％）以及无数的含氧生物有机分子（氨基酸，核苷酸等）中的常规作用可能与之相反。有时会破坏生物活性氧的性质（ROS：OH•，O2-•，H2O2等）[2,3,4]。同样，硫在氨基酸（例如Cys和Met）和生物活性硫（RSS：H2S，OSCN- [5,6]，多硫化物等）中起常规作用[7,8,9,10 ，11,12,13]。硒虽然有毒，但对动物来说是必需的微量营养素[14,15,16,17]。在植物中，它有时以有毒的量作为草料发生，例如疯草[18]。硒是氨基酸硒代半胱氨酸（Sec，“第21个氨基酸”）[19]和硒代蛋氨酸（SeM）[20]的组成部分。根据蛋白质组学，在人类中，Sec被掺入至少25种不同的蛋白质中[21,22,23]。鉴定出的蛋白质，包括谷胱甘肽过氧化物酶和某些形式的硫氧还蛋白还原酶，将Sec掺入其活性位点，而SeM被随机掺入蛋白质[21,22,24,25,26]。由于硒化合物通常比相应的硫衍生物具有更高的反应性（见下文），有人可能会争辩说，所有生物学上相关的硒化合物都是“反应性硒物种”。本综述着眼于硒化氢（H2Se），通常是生物环境中硒最不稳定的氧化态，以及导致所有已知含硒生物分子的推定反应物。 2、化合物硫与硒 硫在人体中的含量约为硒??的105倍，但为某些生物学功能选择了后者[27]。尤其值得注意的是，由于没有其他两个主族元素显示出更相似的物理和化学特性，因此可以实现这一点[28]。但是，硒的选择性使用最终必须取决于元素的独特化学性质。尽管事实上Se的平均原子质量是S的两倍，但由于d嵌段收缩[29]，原子半径非常相似，在主族化合物中观察到的键长也是如此（表格1）。此外，这两种元素的电负性是可比的，并且与元素周期表中的任何其他元素相比，两者
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肿瘤相关巨噬细胞（TAM）介导的免疫抑制机制介绍
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
肿瘤相关巨噬细胞（TAM）介导的免疫抑制机制。 单击下面探索路径下方左侧列出的肿瘤相关巨噬细胞（TAM）介导的免疫抑制的机制，以查看每种机制中涉及的特定TAM相关分子，并解释它们如何负面调节免疫反应。 肿瘤相关巨噬细胞（TAM）介导的免疫抑制机制。 肿瘤相关巨噬细胞（TAM）是异质性细胞群体，根据肿瘤的类型及其在肿瘤微环境（TME）中的位置，其表现出多种表型。 TAM通常是大多数肿瘤中最丰富的浸润白细胞，主要被认为具有促肿瘤作用。除了促血管生成和转移作用外，这些还包括免疫抑制作用。已经描述了TAM介导免疫抑制的机制。 肿瘤相关巨噬细胞的氨基酸耗竭和免疫抑制代谢产物的产生 肿瘤相关巨噬细胞（TAM）通过多种机制抑制抗肿瘤免疫反应。一种机制是通过氨基酸的消耗和免疫抑制代谢产物的产生。与肿瘤细胞和髓样抑制细胞（MDSC）一样，几种类型的人类肿瘤中的TAM也已过表达吲哚胺-2,3-二加氧酶（IDO），该酶催化L-色氨酸降解的初始限速步骤。通过犬尿氨酸途径。 L-色氨酸的降解以及犬尿氨酸及其衍生物的存在抑制了CD4 +和CD8 + T细胞和自然杀伤细胞的增殖和活性，并促进了调节性T细胞（Tregs）的分化。此外，鼠类TAM还表达精氨酸酶1（ARG1），导致L-精氨酸的摄取增加，从而降低TCR-CD3 Zeta链在T细胞上的表达并导致增殖停滞。尽管TAM似乎通过在鼠肿瘤模型中表达ARG1来介导免疫抑制，但人类TAM中ARG1对L-精氨酸的代谢尚未被确定地证明是在人类肿瘤中抑制T细胞功能的机制。 非经典HLA I类分子的肿瘤相关巨噬细胞的表达。 TAM抑制抗肿瘤免疫应答的第二种机制是通过表达非经典人白细胞抗原（HLA）I类分子，例如HLA-E和HLA-G。 HLA-E和HLA-G均为HLA Ib类分子，它们通过与免疫细胞表面表达的特异性抑制受体相互作用而抑制不同免疫细胞类型的活性。 HLA-E与自然杀伤（NK）细胞或CD8 + T细胞上表达的抑制性CD94-NKG2A受体的亲和力比与CD94-NKG2C激活受体的亲和力高六倍，因此，它可以抑制增殖和这些细胞的细胞毒性。
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酶抑制剂知识分享
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
酶抑制剂代表了分离粗匀浆中特定酶活性的强大工具（例如，蛋白酶; Berges和Falkowski，1996），验证测定方法并确定是否存在替代的代谢途径。它们还可以提供一种手段来区分执行相同反应的不同分类单元的角色。例如，蓝细菌同化硝酸盐还原酶与真核生物形式截然不同，因此，使用精心选择的抑制剂可以区分两组对总硝酸盐同化的相对贡献。已知的特异性抑制剂很少（例如，硝酸盐还原酶的钒酸盐，GS的蛋氨酸亚砜亚胺[MSX]，谷氨酸合酶的氮杂嘌呤），因此其使用受到限制。 为了有效使用，需要了解酶抑制剂发挥作用的机制。例如，竞争性抑制剂与生理底物竞争结合位点。它们的作用取决于底物和抑制剂的相对浓度，抑制的程度取决于抑制剂相对于代谢底物占据的活性位点的数量。相反，非竞争性抑制剂与酶的除底物结合位点以外的部分结合，因此酶抑制程度仅取决于抑制剂，而不取决于底物浓度。这种类型的抑制作用通常是不可逆的，并减少了可用于催化特定反应的总酶量。当抑制剂与酶-底物复合物结合并阻止反应被催化时，就会发生非竞争性抑制。 也有影响酶合成的抑制剂。转录抑制剂（例如二溴胸腺醌[DBMIB]）和翻译抑制剂（例如环己酰亚胺[CHX]）是可用的，但是它们并不特定于特定的酶。此外，由于蛋白质合成发生在真核生物的叶绿体和线粒体内，因此可能需要原核蛋白合成抑制剂（例如氯霉素[CAP]）来区分原核和真核活性（例如Segovia和Berges，2005年）。 抑制剂|信号通路|代谢酶/蛋白酶|Metabolic Enzyme/Protease
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化学试剂（通用化学试剂,分析化学试剂,有机化学试剂）
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
化学试剂定义通常称为试剂。化学试剂是一类具有各种标准纯度的纯化学物质，可用于教育，科学研究，分析和测试以及某些新型工业材料所需的功能材料和原材料。化学试剂种类繁多，全球已达数几十万种，在中国的日常生活中，也有成几万种化学试剂被使用。 化学试剂按照化学品的分类迄今在全球仍然没有统一的国际规则。按照通常按实际应用进行划分。它分为十二类和七十类，而在大多数国家中，它是根据应用范围来划分的，在本文中将试剂主要分为四类： 1.通用化学试剂：一般是指可以达到标准纯度的无机试剂和有机试剂。它通常用于科学研究，分析和测试以及合成反应，并用作新材料。 2.分析化学试剂：专用于分析和测试的试剂，可以分为两个子类别： （1）化学分析试剂：用于化学反应分析的检测项目。 基线试剂：纯化合物直接用于标准溶液的配制和体积分析。 指示剂：可用于指示滴定剂的??终点，可分为pH指示剂，氧化还原指示剂吸附指示剂，金属指示剂，荧光指示剂等。 （2）仪器分析试剂：专用于仪器分析的高纯度化合物。 光谱纯化学试剂：通常在SP中表示为光谱分析试剂的光谱纯化合物。 色谱纯化学试剂：专用于气相色谱分析和液相色谱分析的试剂。 氘化化学试剂：决定对试剂进行核磁共振分析。 3.电子工业用化学试剂：专用于电子工业的特殊化学产品。 MOS化学试剂：微粒浓度符合ASTM“ O”标准，是微电子化学专用试剂。 高纯化学试剂：也称为超高纯试剂，如纯度为99.99％，称为4N，99.999％称为5N。它们通常用于科学研究和理化痕迹分析，光纤通信，微电子，半导体，激光器等。 此外，还有光学纯化学试剂，光致抗蚀剂和其他各种特殊性质的精细化工产品。 4.生化试剂：它们是从活生物体中提取或化学合成的基本化学物质，是一种重要的试剂，是用于生物成分研究和分析和鉴定的重要试剂，包括临床免疫学试剂，基因工程试剂，细胞培养试剂，激素-类物质，毒物致癌研究试剂和防霉杀虫剂研究试剂。简而
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TE 缓冲液
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
TE缓冲液（是Tris-EDTA缓冲液的简称）是用于重悬和存储核酸（尤其是DNA）的常用缓冲液。 Tris溶液使DNA保持在水中，而EDTA（阳离子如镁的螯合剂）则保护核酸免于酶促降解。 BIOFOUNT教您如何配制TE缓冲溶液(100 mL )： 配制TE缓冲液的材料 所需量 最终浓度 1M Tris-Cl (pH 8.0) 1 mL 10 mM 0.5M EDTA (pH 8.0) 0.2 mL 1 mM Distilled H2O 98.8 mL 如何制作TE缓冲液？ 在容量瓶中量取1 mL 1M Tris-Cl（pH 8.0） 100 mL； 量取0.2 mL 0.5M EDTA（pH 8.0）并加至容量瓶中； 添加98.8 mL蒸馏水将溶液加至100 mL； 将盖子盖在瓶子上，翻转几次以混合； 要灭菌，请在液体循环状态下高压灭菌溶液（在15 psi下20分钟）； TE缓冲液的保存； 将TE缓冲液保存在室温下（+ 15oC – + 25oC）。 TE缓冲液使用注意安全事项： TE缓冲液不是危险类试剂， 但在使用前，请务必阅读TE缓冲器安全数据表，做好安全防护。 序号 产品名 货号 PH值 1 Tris-EDTA缓冲液 HC2036 HC2036 Tris-EDTA缓冲液,0.1mM EDTA,pH8.0 2 Tris-EDTA缓冲液 HC2040 HC2040 Tris-EDTA缓冲液,1×TE,pH7.0-9.0 3 Tris-EDTA缓冲液 HC1975 HC1975 Tris-EDTA缓冲液,1×TE,pH7.0-9.0,RNase free 4 Tris-EDTA缓冲液 HC2021 HC2021 Tris-EDTA缓冲液,1×TE,pH7.4 5 Tris-EDTA缓冲液 SS6153 SS6153 Tris-EDTA缓冲液,1×TE,pH8.0 6 Tris-EDTA缓冲液 HC1339 HC1339 Tris-EDTA缓冲液,1×TE,pH8.0,RNase free 7 Tris-EDTA缓冲液 HC2085 HC2085 Tris-HCl缓冲液,0.1mol/L,pH7.0-9.0,无菌 8 Tris-EDTA缓冲液 H
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如何配制LB培养基
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
LB medium is the most commonly used medium in microbiology experiments. It is used to cultivate bacteria and other bacteria. It is divided into liquid phase or solid medium made by adding agar. Antibiotic-added LB medium can be used to select clones that host antibiotics. LB培养基，是微生物学实验中最常用的培养基，用于培养细菌等细菌，其分为液相LB培养基,琼脂制成的固态LB培养基。加入抗生素的LB培养基可用于筛选以抗生素为主机的克隆。 一般LB培养基的名称被广泛称之为Luria-Bertani 培养基，根据该培养基的发明人贝尔塔尼(Giuseppe Bertani)的解释，这个名字来源于英语的 lysogeny broth，即溶菌肉汤。 LB培养基的主要成分： 序列 成分 货号 用量 1 胰蛋白胨(tryptone) SS2171 10g 2 酵母提取物(yeast extract) 5g 3 氯化钠(NaCl) JT0001 10g 4 琼脂粉 灰分ash ≤1.5%，Low gel strength(900-1000) SW0006 15-20g 5 琼脂粉 灰分ash ≤1.5%，Low gel strength(1200-1400) SW0007 备注：加双蒸水至1000mL, 用5mol/L NaOH（约0.2ml）调pH至7.2，121℃灭菌30min LB培养基的配制方法： （1）称量：分别称取所需量的胰化蛋白胨、酵母提取物和NaCl，置于烧杯中。 （2）溶化：加入所需水量2/3的蒸馏水于烧杯中，用玻棒搅拌，使药品全部溶化。 （3）调节pH：用1mol/L NaOH溶液调pH至7.2。 （4）定容：将溶液倒入量筒中，加水至所需体积。 （5）加琼脂：加入所需量琼脂，加热融化，补足失水。 （6）分装、加塞、包扎。 （7）高压蒸汽灭菌100Pa灭菌约20min。
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细胞凋亡检测（实验简介,实验目的,实验原理,实验所需试剂,方法步骤）
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
细胞凋亡检测实验简介 凋亡检测主要用于以下实验过程：1.研究不同类型的病理标本，包括肿瘤细胞和组织； 2.从促进肿瘤细胞凋亡基因**的角度进行临床诊断和**，新药开发，生物制品开发，肿瘤放疗和化疗以及探索； 3.进行相关疾病的早期发现以及放疗和化疗效果评估等实验。 1.凋亡检测实验的目的： 1.掌上细胞凋亡细胞的形态特征 2.通过实验通过用荧光探针对细胞进行双重标记来检测正常的活细胞，凋亡细胞和坏死细胞的方法。 2.细胞凋亡检测实验的实验原理： 根据其性质，来源和生物学意义，细胞死亡可分为凋亡和坏死不同的两种类型。细胞凋亡在生活过程中无处不在，在生物个体和生存中起着非常重要的作用。它是在某些生理条件下顺序发生的一系列事件的组合。它是一种自主控制，细胞可以根据某些法律程序终止其生命。细胞凋亡具有可识别的形态和生化特征。 从形态上可以看出，凋亡细胞与周围细胞脱离，然后变成圆形，细胞膜向内收缩，细胞质浓缩，内质网扩张，细胞核收缩破裂，分布是块状或新月形。网状细胞和细胞膜的进一步融合将细胞分为许多完全包裹的凋亡小体，最终被吞噬细胞吞噬并消化。在细胞凋亡过程中，细胞内容物不会在细胞外释放，不会影响其他细胞，因此不会引起炎症反应。 在生物化学中，在大多数细胞凋亡过程中，内源性核酸内切酶被激活，其活性增加。核DNA在核小体的连接处被酶随机切割，并降解为180-200bp的多个片段或其倍数。如果对核DNA进行琼脂糖电泳，则可以显示出以180-200bp为碱基的DNA阶梯的特征。 相反，坏死是当细胞受到严重损害时发生的细胞死亡。在坏死的早期，细胞失去质膜的完整性，各种细胞器肿胀，质膜塌陷释放出内含物，引起炎症反应。尽管在坏死过程中核DNA也被降解，但是由于存在各种长度的DNA，碎片无法形成梯形条纹，而是分散的。 一些轻度的损伤刺激和一些抗肿瘤药物可以诱导细胞凋亡。通常，这些因素还可以在诱导细胞凋亡的同时诱导细胞坏死
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细胞凋亡检测（DNA ladder法检测）实验
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
一、细胞凋亡检测实验方法原理 当发生细胞凋亡时，内源核酸酶被激活，并在核小体之间切割染色体DNA链以形成180至200个碱基或其倍数的DNA片段，并提取这些DNA片段进行电泳，DNA阶梯带（DNA阶梯）可以获得。 二、细胞凋亡检测实验所学的材料 凋亡细胞 蛋白酶K、乙酸钾、白细胞裂解液、Tris-HCl、NaCl、 EDTA 、SDS、乙醇、琼脂糖、仪器，耗材、离心管离心机水浴电泳仪电泳槽 序列 产品名 货号 备注 1 蛋白酶K SS2244-25mg 2 乙酸钾 JT0883-500g 3 白细胞裂解液 4 Tris-HCl（无菌） HC2100-500ml 5 NaCl JT0001-500g 6 EDTA二钠 SS0008-100g 7 SDS HC1238 8 乙醇 JT26000-500ml 9 琼脂糖 SF0012-50g 10 10ul滤芯吸头 FT-10X-H 11 1.5ml离心管 F-EP015 三、细胞凋亡检测实验的流程 1.材料和试剂的制备 1.物质：凋亡细胞。 2.蛋白酶K（500μg/ ml），乙酸钾氯仿（8 mol / L），无水乙醇，70％乙醇，2％琼脂糖凝胶。 3.白细胞裂解液：pH 8.0、10 mmol / L Tris-HCl，10 mmol / L NaCl，10 mmol / L EDTA，1％SDS。 四、细胞凋亡检测实验操作步骤 1.收集凋亡细胞：取1?2×106细胞，离心后，用70％酒精（-20℃）固定2 h。 2.洗涤：取出用酒精固定的细胞，以1000 r / min离心5分钟，去除上清液，然后用PBS洗涤两次。 3.裂解细胞：加入400μl细胞裂解液，充分混合并加入100μl蛋白酶K，并在65°C水浴中消化2小时或过夜。 4.蛋白质处理：加入75μl8 mol / L乙酸钾，在4°C下放置15分钟，然后加入750μl氯仿，充分混合，以10000 r / min离心10分钟，然后将上清液转移至一支新的Eppendorf管。 5.沉淀DNA：添加750μl无水乙醇，轻轻颠倒混合，然后可以看到乳白色
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什么是抑制剂（酶抑制剂,化学抑制剂）
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
酶抑制剂： 酶抑制剂，也就是我们生物医疗领域，通常所说的抑制剂，是潜在的药物有效成分。 酶抑制剂是与酶结合并降低其活性的分子。抑制剂通过与酶的活性位点结合，抑制剂可降低底物与酶的相容性，从而抑制了酶-底物复合物的形成，阻止了反应的催化作用，并减少了反应产生的产物数量。 可以说，随着酶抑制剂的浓度增加，酶活性的速率降低，因此，产物的产生量与抑制剂分子的浓度成反比。 由于阻断酶的活性可以杀死病原体或纠正代谢失衡，因此许多药物都是酶抑制剂。 此类抑制剂也经常应用在杀虫剂中使用，当然并非所有与酶结合的分子都是抑制剂。 酶激活剂与酶结合并增加其酶促活性，而酶底物在酶的正常催化循环中结合并转化为产物。 抗感染类抑制剂；程序性死亡-1抑制剂 化学领域抑制剂： 化学领域抑制剂也称为慢白聚合剂，是阻止或者降低化学反应速率的化学物质，抑制剂的作用于负催化剂具有相反的作用。化学抑制剂不能停止聚合反应，但会减慢聚合反应的速度；抑制或减轻化学反应的物质。化学抑制剂有很多类型。 例如：催化反应的负催化剂，高分子化合物的阻聚剂，塑料，橡胶，油脂等的抗氧化剂，泡沫抑制剂，汽油的抗震剂，防腐缓冲液等。 化学抑制剂的案例：抗氧化剂是食品，橡胶和其他有机物质中的氧化反应；在食品中添加水杨酸可抑制腐烂；向某些聚合物中添加紫外线抑制剂（例如水杨酸甲酯等）可防止由于吸收紫外线而导致的劣化；有机磷酸酯是体内胆碱酯酶的抑制剂，在某些聚合物单体的储存和运输过程中，需要使用抑制剂来防止其自聚合。
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噬菌体的检测与效价测定
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
一、噬菌体的检测与效价测定实验简单介绍： 1. 了解噬菌体效价的含义及其测定原理。 2. 学会检查噬菌体的方法。 3. 掌握用双层琼脂平板法测定噬菌体效价的操作技能。 二、实验目的 目的：探讨该方法的临床效果了解噬菌体效价的含义及其测定原理。 2、学习如何检查噬菌体。 3、掌握双琼脂平板法测定噬菌体效价的操作技巧。 三、实验原则： 噬菌体是一种特别寄生于细菌和放线菌上的病毒。它的个体形状很小，用常规的微生物计数法无法测定其数量。当强毒噬菌体感染细菌时，会使敏感菌迅速裂解并释放大量的子代噬菌体，进而扩散感染周围细胞。最后，含有敏感菌的悬浮液会逐渐变得清澈，或者在含有敏感菌的平板上出现肉眼可见的菌斑。了解噬菌体的特性，快速检测、分离和测定噬菌体效价具有重要意义。 样品可以是发酵液、空气、污水、土壤等（对于不能取样但需要检验的对象，可以用用无菌水浸泡过的棉花表面作为检验样品）。为了便于分离，可通过增殖培养提高样品中噬菌体的数量。 用生物检测法检测噬菌体需要12小时左右，无法及时判断是否存在噬菌体污染。噬菌体污染可以通过快速检测大致确定，以便采取必要的预防措施。正常发酵（培养）液离心后沉淀，上清液蛋白质含量很小，加热后仍清晰可见；而离心后感染噬菌体的发酵（培养）液上清液中含有从热解菌中逸出的活性蛋白，但加热后蛋白质变性，有丁达尔效应，光照下不明显。该方法简便、快速、准确，可用于鉴定发酵液污染的噬菌体。但是，它不适用于致溶性细菌和嗜热噬菌体的诊断，也不适用于噬菌体感染较少的原代种子培养基。 噬菌体效价为1ml样品中感染性噬菌体粒子数。用双琼脂平板法测定效价。由于一个噬菌体通常在含有特定宿主菌的琼脂平板上产生一个噬菌体斑，因此噬菌体的效价可以根据一定体积的噬菌体培养基中的菌斑数量来计算。该方法形成的斑块形态大小一致，清晰度高，计数更准确，应用广泛。 四、实验所需材料： 序号 产品 CAS
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免疫荧光（Immunofluorescence, IF）(实验方法,简介,实验步骤,实验所需试剂)
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
免疫荧光（Immunofluorescence, IF）实验方法 一．免疫荧光实验简单介绍 免疫荧光技术正在免疫学,生物化学与显微镜以技术为基础的技术。它基于抗原抗体反应的原理是先用荧光团标记已知的抗原或抗体，然后使用该荧光抗体（或抗原）作为探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体）。利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质与定位，以及利用定量技术（比如流式细胞仪）含量测定。 免疫荧光实验的主要步骤包括细胞片制备,固定及通透（或称为透化）,封闭,抗体孵育及荧光检测等。细胞片制备（通俗的说法是细胞爬片）是免疫荧光实验的第一步，细胞片的质量对实验的成败至关重要，原因很简单，如果发生细胞掉片，一切都无从谈起。这一步关键的是玻片（Slides or Coverslips）的处理以及细胞的活力，有人根据成功经验总结出许多有益的细节或小窍门，非常值得借鉴。固定与通透步骤最重要的是根据所研究抗原的性质选择适当的固定方法，合适的固定剂与固定程序对于获得好的实验结果是非常重要的。免疫荧光中的封闭与抗体孵育与其它方法（如ELISA或Western Blot）中的相同步骤是类似的，最重要的区别在于免疫荧光实验中要用到荧光抗体，因此必须谨记避光操作，此外抗体浓度的选择可能更加关键。最后需要注意的是，标记好荧光的细胞片应尽早观察，或者用封片剂封片后在4℃或-20℃避光保存，以免因标记蛋白解离或荧光减弱而影响实验结果。 由于操作步骤比较多，同时在分析结果时无法像WB那样可以根据分子量的大小区分非特异性识别，所以要得到一个完美的免疫荧光实验结果，除了需要高质量的抗体，以及对实验条件进行反复优化外，还必须设立严谨的实验对照。总之，免疫荧光实验从细胞样品处理,固定,封闭,抗体孵育到最后的封片及观察拍照，每步都非常关键，需要严格控制实验流程中每个步骤的质量，才能最终达到你的实验目的。 二.免疫荧光实验步骤： （1）细胞制备。对于单层生长细胞，在传代中培养事先将
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