噬菌体滴度的测定实验(实验介绍;所需试剂;实验步骤)
【产品介绍】:
一、噬菌体滴度测定实验介绍 噬菌体滴度测定实验中在宿主细胞过多的情况下,噬菌斑的数目随着噬菌体的增加而线性增加。因此,在感染前,应稀释噬菌体,而不是宿主细胞。低MOI(感染重复性)的平板还可确保每个噬菌斑仅包含一个DNA序列。 二、噬菌体滴度测定实验所需试剂 序号 产品 cas号 货号 备注 1 LB培养基 HC1007 2 顶部琼脂糖凝胶 HC1421 1、微波炉 2. LB / IPTG / Xgal培养板 3. LB培养基 4.顶部琼脂糖凝胶 三、噬菌体滴度测定实验步骤 1.在5~10ml LB培养基中接种一个ER2537克隆,并摇动孵育直至对数中期(OD600~0.5)。 2.随着细胞的生长,将顶部琼脂糖凝胶微波加热并分配到无菌培养管中,每管3ml。保持在45℃下使用。 3.将LB / IPTG / Xgal培养板在37°C下预热并放在一旁。 4.在LB培养基中将噬菌体稀释10倍。 推荐稀释范围:108-1011,用于扩增噬菌体的培养上清液; 101-104用于未放大筛选的洗脱液。每次稀释均使用新的吸头。**使用气溶胶屏障来避免交叉污染。 5.一旦ER2537培养物生长到对数生长期的中期,将其等分到微量离心管中,每管200ml。 6.将稀释的噬菌体上清液添加到装有细菌培养物的微量离心管中。仅将10 ml的一种稀释剂添加到微量离心管中,迅速涡旋,并在室温下孵育1-5分钟。 7.转移到装有45℃顶层琼脂糖凝胶的试管中,涡旋并快速混合,立即倒入预热的LB / IPTG / Xgal板上,然后轻轻摇动该板以均匀分布顶层凝胶。 8.将板冷却5分钟,然后在37°C下孵育过夜。 9.噬菌斑计数是基于噬菌斑计数约为100的培养皿。将噬菌斑计数乘以稀释液得到的滴度为每10毫升噬菌体噬菌斑形成单位(pfu)