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生产牛血清的方法

生产牛血清的方法

作者:德尔塔 日期:2022-04-02

牛血清是一种很复杂的混合物,其组成成份虽大部分已为人所知,但还有一部分尚不清楚,而且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。1. 牛血清的来源:健康的不受感染的牛群及新生牛出生后及时采血,这是制备新牛血清的首要保证。 2. 采血要求:采血技术人员须经专业培训:采血所需的工艺、设备能保障牛血不受外源性污染;严格无菌的采血操作规范;洁净的采血环境,这是使采集的血液不受污染的必要保证。 3. 加工工艺与设备:符合GMP要求的洁净车间;精密的过滤系统;独特的制备工艺;严格的血清加工操作规范,这是生产牛血清的关键所在。 4. 质量检验:高等专业技术人员;先进的检验设备;完善的检验指标与检测方法,这是确保牛血清质量的重要保证。 5. 产品监制:中国药品生物制品检定所对本公司牛血清产品进行监制;每年按生产批数的一定比例进行抽检,这是牛血清质量的zui终保障。

到底是进口ELISA试剂盒好还是国产ELISA试剂盒好呢?

到底是进口ELISA试剂盒好还是国产ELISA试剂盒好呢?

作者:德尔塔 日期:2022-04-02

规格:96T/48T 包装:盒装   到底是进口试剂盒好还是国产试剂盒好?   目前国内的的试剂盒质量已经很成熟了,进口原装的试剂盒的价格是国产试剂盒的好几倍,国内的技术水平还是比较的。   二、测试注意事项:   1、实验严格按照说明书的操作进行,实验结果判定必须以酶标仪读数为准。   2、酶标包被板开封后如未用完,应立即装入密封袋中加干燥剂保存。   3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测,取平均值,以减小实验误差。   4、试剂盒保质期内使用,不同批号的试剂不得混用。   elisa试剂盒质量保证是一个复杂的过程,许多重要的环节都影响到检测的质量:   三、标本复查   ELISA手工检测过程复杂,影响因素较多,即使室内质控在控,也可能因孔间差异而造成结果的差异,因此加大复查力度是保证结果准确性的可靠方法,比如对HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等项目的可疑、弱阳性标本及少见模式的检测结果进行复查。   四、结果判断和报告   常用下列几种方法表示结果:   1.定性测定   2.半定量测定结果一般以滴度表示。   3.定量测定即用已知量的标准品作一系列稀释后进行ELISA测定,绘制标准曲线,结果以量或单位表示。在ELISA定量检测中每一块反应板都必须绘制相应的标准曲线。   4.结果报告以上作为参考.

ELISA原理与分类

ELISA原理与分类

作者:德尔塔 日期:2022-04-02

一、ELISA的原理 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。 二、ELISA的类型 ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。在这种测定方法中有三个必要的试剂:(1)固相的抗菌素原或抗体,即"免疫吸附剂"(immunosorbent);(2)酶标记的抗原或抗体,称为"结合物"(conjugate);(3)酶反应的底物。根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件,可设计出各种不同类型的检测方法。用于临床检验的ELISA主要有以下几种类型: 1.双抗体夹心法测抗原 双抗体夹心法是检测抗原zui常用的方法,操作步骤如下: 1)将特异性抗体与固相载体联结,形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。 2)加受检标本,保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合,形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。 3)加酶标抗体,保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。 4)加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产物。通过比色,测知标本中抗原的量。 在临床检验中,此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原,例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要获得针对受检抗原的异性抗体,就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。

金秋时分,分享操作ELISA试剂盒的实验重要点

金秋时分,分享操作ELISA试剂盒的实验重要点

作者:德尔塔 日期:2022-04-02

ELISA试剂盒应严格遵照规则操作,必能得出的成果。首先应选取的试剂,杰出的仪器和正确的操作是确保ELISA实验成果牢靠的必要条件。所以ELISA试剂盒的购买试剂质量的确保以及实验前实验仪器的查看都是很重要的。一、标本的收集及保存1、血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应防止重复冻融。2、血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本收集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应防止重复冻融。3、细胞培养物上清或其它生物标本:请1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应防止重复冻融。4、样本处理:血清或血浆标本推荐稀释10,000倍。注:以上标本置4℃保存应小于1周,-20℃或-80℃均应密封保存,-20℃不该超越1个月,-80℃不该超越2个月;标本溶血会影响终究检测成果,因而溶血标本不宜进行此项检测。二、试剂的预备 按试剂盒说明书的要求预备实验中需用的试剂. ELISA试剂盒中用的蒸馏水或去离子水,包括用于洗刷的,应为新鲜的和高质量的.自配的缓冲液运用pH计丈量较正.从冰箱中取出的试 验用试剂应待温度与室温平衡后运用.试剂盒中本次实验不需用的部分应及时放回冰箱保存。 三、加样:别离设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其他各步操作相同)、规范孔、待测样品孔。在酶标包被板上规范品加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终究稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,悄悄晃动混匀。四、温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。五、洗刷:当心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗刷液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。六、显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,悄悄震动混匀,37℃避光显色15分钟.七、测定:以空白空调零,450nm波长依序丈量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加停止液后

迎国庆特别篇之ELISA试剂盒实验思路分析

迎国庆特别篇之ELISA试剂盒实验思路分析

作者:德尔塔 日期:2022-04-02

今天是新的一周开始。迎国庆,上海劲马公司为您带来了迎国庆特别篇之ELISA试剂盒实验思路分析。        我公司当下客户来自*,也有不少是实验新手,甚至是学生。根据客户的地域、时间、实验方法的不同要求,我公司专业的技术人员会积极调整,配合客户。        近年来,科研市场上各种迎合消费趋势的产品层出,但是据有关调查统计,在这些纷繁复杂的试剂产品背后,却体现的是产品质量的问题。 在产品就是实力的科研市场上,无论是品牌建设还是渠道拓宽,的产品都是非常重要的。上海劲马不光强调形式,还非常注重本质的发展模式。        对于ELISA的实验思路,我公司技术员对实验的可验证性做出一番讲说:现代科研的基本模式是假说驱动的,无法验证的假说难以进入科研活动过程,当然从大的历史条件下,如果只是因为技术上的困难而无法实现的假说另当别论。但是即使是这样,假说也必须具有理论上的可验证性。在科学发展的相对低级阶段,可验证性更为必要,尤其是作为普通科研人员,没有可验证性的思路往往难以产生发展的动力,更不要说有效的推广和应用。        ELISA试剂盒主要影响免疫测定技术的基础在于抗原抗体之间的特异结合反应,所以任何的诊断试剂离不开的原料,以前用于免疫测定的抗原通常为各种纯化抗原,而抗体则为纯化抗原免疫动物后获得的多克隆抗体和使用杂交瘤技术得到的单克隆抗体,而抗原或抗体的标记物如酶标结合物则通过各种化学合成方法制备。        曾经有过日本小保方STAP细胞论文被撤回的事件,仔细考虑就属于这种问题。其实这个想法具有新奇性,甚至具有逻辑合理性,但是缺乏可验证性,至少现在看是这样的。如果她足够威武,能给大家一个流畅的验证方案,拿出铁的证据证明其思路的正确性,仍然属于一个好思路,好研究,甚至可引起一场干细胞研究的革命。        在【ELISA试剂盒实验思路】中,具体正确性也需要更多研究来验证的。而ELISA实验的技巧、经验、步骤方法等可验证性也是非常重要的,

胎牛血清解决方案

胎牛血清解决方案

作者:德尔塔 日期:2022-04-02

胎牛血清解决方案 1、 如何储存和解冻血清才不会使产品质量受损? 将血清从冷冻箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室温下使之全融。但必须注意的是,融解过程中必须规则地摇晃均匀。 长时间储存在2-8℃时,血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此,推荐在-20℃以下储存血清,并避免反复冻融。 我们建议血清应保存在-2O℃。若存放于4℃时,请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶,建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。 2、血清中包含絮状沉淀,它们是什么,怎么处理? 沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性,不会影响产品性质。要除去沉淀,离心血清(400g,1-2分钟)或者简单的让其沉淀在瓶子底部,将血清小心的转移到另一个无菌瓶里(一般不建议采用过滤的方法除去沉淀,因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤)。大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。所以,使用产品时要摇动并加热血清至37℃,沉淀会自然消失。 3、实验室如何选择适合的血清? 国内一致认为HYCLONE的血清是的,但是根据我在北美的经历,国外一般认为GIBCO比HYCLONE好,所以并不是价格决定质量,但是总的来说这两种价格普遍偏贵,一般不是太娇气的细胞,国产的就够用了。此外,由于国内HYCLONE,GIBCO并没有生产线,我们只能从代理商那里买,而代理商又鱼龙混杂,所以买到假货的可能性也很大。所以,我一般会从直销员那里买血清,有的国外生物公司由于刚刚进入中国,度不高,但是其实在国外已经做得很不错了,如Wisent等,他们在国内有办事处,我会从那里拿,血清的品质和HYCLONE不相上下,但价格相对优惠很多。 胎牛血清解决方案 4、 如何避免血清中产生沉淀? 按如下操作可避免沉淀的产生: (1)解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。 (2) 血清分装冻存时,须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一。 (3) 勿直接由-20℃

标准新生牛血清解决方案

标准新生牛血清解决方案

作者:德尔塔 日期:2022-04-02

标准新生牛血清解决方案 1、 如何储存和解冻血清才不会使产品质量受损? 将血清从冷冻箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室温下使之全融。但必须注意的是,融解过程中必须规则地摇晃均匀。 长时间储存在2-8℃时,血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此,推荐在-20℃以下储存血清,并避免反复冻融。 我们建议血清应保存在-2O℃。若存放于4℃时,请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶,建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。 2、血清中包含絮状沉淀,它们是什么,怎么处理? 沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性,不会影响产品性质。要除去沉淀,离心血清(400g,1-2分钟)或者简单的让其沉淀在瓶子底部,将血清小心的转移到另一个无菌瓶里(一般不建议采用过滤的方法除去沉淀,因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤)。大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。所以,使用产品时要摇动并加热血清至37℃,沉淀会自然消失。 3、实验室如何选择适合的血清? 国内一致认为HYCLONE的血清是的,但是根据我在北美的经历,国外一般认为GIBCO比HYCLONE好,所以并不是价格决定质量,但是总的来说这两种价格普遍偏贵,一般不是太娇气的细胞,国产的就够用了。此外,由于国内HYCLONE,GIBCO并没有生产线,我们只能从代理商那里买,而代理商又鱼龙混杂,所以买到假货的可能性也很大。所以,我一般会从直销员那里买血清,有的国外生物公司由于刚刚进入中国,度不高,但是其实在国外已经做得很不错了,如Wisent等,他们在国内有办事处,我会从那里拿,血清的品质和HYCLONE不相上下,但价格相对优惠很多。 标准新生牛血清解决方案 4、 如何避免血清中产生沉淀? 按如下操作可避免沉淀的产生: (1)解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。 (2) 血清分装冻存时,须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一。 (3)

亮发光杆菌低温冷冻保藏技术

亮发光杆菌低温冷冻保藏技术

作者:德尔塔 日期:2022-04-02

1、 亮发光杆菌安瓿管或冻存管的准备 用圆底硼硅玻璃制品的安瓿管,或螺旋口的塑料冻存管。注意玻璃管不能有裂纹。将冻存管或安瓿管清洗干净, 121℃下高压灭菌15-20分钟,备用。 2、  保护剂的准备 保护剂种类要根据微生物类别选择。配制保护剂时,应注意其浓度,一般采用10-20%甘油。 3、  微生物保藏物的准备 微生物不同的生理状态对存活率有影响,一般使用静止期或成熟期培养物。 分装时注意应在无菌条件下操作。 菌种的准备可采用下列几种方法: 刮取培养物斜面上的孢子或菌体,与保护剂混匀后加入冻存管内; 接种液体培养基,振荡培养后取菌悬液与保护剂混合分装于冻存管内; 将培养物在平皿培养,形成菌落后,用无菌打孔器从平板上切取一些大小均匀的小块(直径约5-10毫米),真菌取菌落边缘的菌块,与保护剂混匀后加入冻存管内; 在小安瓿管中装1.2-2毫升的琼脂培养基,接种菌种,培养2-10天后,加入保护剂,待保藏。 4、  预冻 预冻时一般冷冻速度控制在以每分钟下降1℃为好、使样品冻结到-35℃。 目前常用的有三种控温方法: ——  程序控温降温法,应用电子计算机程序控制降温装置,可以稳定连续降温,能很好地控制降温速率。 ——  分段降温法:将菌体在不同温级的冰箱或液氮罐口分段降温冷却,或悬挂于冰的气雾中逐渐降温。一般采用二步控温,将安瓿管或塑料小管,先放-20℃至-40℃冰箱中1-2小时,然后取出放入液氮罐中快速冷冻。这样冷冻速率大约每分钟下降1-1.5℃。 ——  对耐低温的微生物、可以直接放入气相或液相氮中。 5、  保藏 将安瓿管或塑料冻存管置于液氮罐中保藏。一般气相中温度为-150℃,液相中温度为-196℃。 6、  亮发光杆菌保藏周期 一般10年以上。 7、复苏方法 从液氮罐中取出安瓿管或塑料冻存管,应立即放置在38℃-40℃水浴中快速复苏并适当摇动。直到内部结冰全部溶解为止,一般约需50秒-100秒。开启安瓿管或塑料冻存管,将内容物移至适宜的培养基上进行培养。 Panaxtriol    含量:    进口/国产    人

别告诉我血清和血浆您还分不清?

别告诉我血清和血浆您还分不清?

作者:德尔塔 日期:2022-04-02

很多的科研朋友认为血清和血浆没有区别,针对这个问题,我司钱在询问技术部后,为您带来的简单分析。   其实血清和血浆是有很大的区别的,血浆里含有纤维蛋白原,血清中没有。血液凝固后1~2小时,血凝块会发生回缩,并释出淡黄色的液体,称为血清。血浆是血液除去血细胞后的成分。其组成绝大部分是水,其次是各种血浆蛋白。血清与血浆的区别,在于前者缺乏参与凝血过程被消耗掉的一些凝血因子和纤维蛋白,但增添了少量血液凝固时由血管内皮细胞和血小板释放出来的化学物质,血清不可以再凝。        血浆:离开血管的全血经抗凝处理后,通过离心沉淀,所获得的不含细胞成分的液体,即血浆。    血清:离体的血液凝固之后,血凝块聚缩释出的液体,即血清。        其实粗略的说,血清与血浆的区别,主要在于血清不含纤维蛋白元。纤维蛋白原能转换成纤维蛋白,具有凝血作用血浆一般是大面积烧伤的病人使用,而血清可以用来检验血型。   我司是一家专业从事“产品研发生产、市场销售、技术服务”为一体的高科技生物技术公司,公司生产的产品质量有保证,含量高,能够给实验带来准确的结果。同时试剂随货附带质检报告和图谱,能为用户更好的解决各种疑难问题。如有需要可我司销售人员,我们将竭诚为您服务。

如何为即用型平板培养基灭菌

如何为即用型平板培养基灭菌

作者:德尔塔 日期:2022-04-02

我公司即用型平板培养基的三大优势: 1. 快速、简便、节省时间; 2. 结果直观,一目了然(根据颜色判定结果)。 3. 灵敏度高、特异性强,大大减少了后续的鉴定步骤(确证试验)。  如何为培养基灭菌?     在加热灭菌前,成分应边搅拌边溶解于水中。高压灭菌的时间取决于培养基中微生物的含量,容器的大小,每个容器中物质的体积和灭菌锅内容器的空间。     在制备时,由于污染的微生物的含量通常很低,所以影响高压时间的主要变量取决于上述其他的几个因素。灭菌时间通常要在121℃下保持15~20min,这个时间从中心温度达到121℃开始计算。可以将热电偶放人灭菌锅内部中心进行测定。     lOOmL的瓶子或烧杯单独放在髙压锅中达到121℃大约需要10min,如果多个瓶子紧挨着放满灭菌锅内的丝悬筐中,瓶子中的物质需要 20min才能达到121℃如果培养基或稀释液的体积很大时,则需要更长的时间;例如单独使用1L的瓶子温度达到121℃时需要20min,如果许多这样的瓶子紧挨着放满灭菌锅内的丝悬筐中,则中心温度要达到121℃需要30mm或更长的时间。为了达到灭菌的目的,它和稀释液进行高压灭菌时,即用型平板培养基惟一正确的方法是将热电偶放入灭菌锅中测定。     分装在大的容器中时,可能会因为延长灭菌加热时间而造成 热降解。因此在高压灭菌前,先将培养基成分溶解后分装到较小的容器中。     由于配制的原料不同,使用要求不同,而贮存保管方面也稍有不同。一般在受热、吸潮后,易被细菌污染或分解变质,因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。一些需严格灭菌的需要较长时间的贮存,必须放在2~6℃的冰箱内。 Chrysin    含量:    进口/国产    白杨素    20mg/支    英文名称    HPLC≥98%    规格:     含量:    进口/国产    白杨素-6-C-葡萄糖基-8-C-阿拉伯糖甙    20mg/支    英文名称    HPLC≥98%    规格: Camptothecine    含量:    进口/国产    喜树碱    20mg/支    英文名称    HPLC≥98%    规格: Euhorbiasteroid    含量

山羊血清解决方案

山羊血清解决方案

作者:德尔塔 日期:2022-04-02

山羊血清解决方案 1、 如何储存和解冻血清才不会使产品质量受损? 将血清从冷冻箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室温下使之全融。但必须注意的是,融解过程中必须规则地摇晃均匀。 长时间储存在2-8℃时,血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此,推荐在-20℃以下储存血清,并避免反复冻融。 我们建议血清应保存在-2O℃。若存放于4℃时,请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶,建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。 2、血清中包含絮状沉淀,它们是什么,怎么处理? 沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性,不会影响产品性质。要除去沉淀,离心血清(400g,1-2分钟)或者简单的让其沉淀在瓶子底部,将血清小心的转移到另一个无菌瓶里(一般不建议采用过滤的方法除去沉淀,因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤)。大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。所以,使用产品时要摇动并加热血清至37℃,沉淀会自然消失。 3、实验室如何选择适合的血清? 国内一致认为HYCLONE的血清是的,但是根据我在北美的经历,国外一般认为GIBCO比HYCLONE好,所以并不是价格决定质量,但是总的来说这两种价格普遍偏贵,一般不是太娇气的细胞,国产的就够用了。此外,由于国内HYCLONE,GIBCO并没有生产线,我们只能从代理商那里买,而代理商又鱼龙混杂,所以买到假货的可能性也很大。所以,我一般会从直销员那里买血清,有的国外生物公司由于刚刚进入中国,度不高,但是其实在国外已经做得很不错了,如Wisent等,他们在国内有办事处,我会从那里拿,血清的品质和HYCLONE不相上下,但价格相对优惠很多。 山羊血清解决方案 4、 如何避免血清中产生沉淀? 按如下操作可避免沉淀的产生: (1)解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。 (2) 血清分装冻存时,须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一。 (3) 勿直接由-20℃

百奥森关于ELISA实验操作的技巧分享

百奥森关于ELISA实验操作的技巧分享

作者:德尔塔 日期:2022-04-02

ELISA 注意事项 1) 确保所有的试剂在使用前已经达到室温(除非指明要保持低温的)。 2) 如果你不打算用完整块平板,确保剩余的8联管放回有干燥剂的平板袋中并密封,以防受潮使产品效果下降。 3) 对于不是一次性使用的标准品,把剩余的标准品小量分装并冻存。这使标准品免于反复冻融。 4) 多通道移液枪可使你的标准品和样品加样能力加快,并取得一致性更高的结果。 5) 移液操作进行放液时枪头与垂直方向偏离一点角度,不要触碰样品孔底部。 6) 复孔样品加样时不需要换枪头;为避免样品污染,取不同样品或标准品时要换枪头。 7) 如有可能尽量使用洗板机,不熟练的手工洗板可能导致高背景。 8) 在洗板时,无论是手工还是用洗板机,在两次洗涤中增加30秒的浸润时间,以确保洗涤的效果。 9) 注意孵育时间,通用的建议是每小时的孵育时间的误差要控制在+/-5分钟以内。 10) 如果实验要求在2-8度的低温孵育,而且你同时进行多块板的操作,不要把平板互相叠放,要并排分别放置。 抗原和抗体*工作浓度的确定   抗原抗体反应要求在zui适比例条件下进行,ELISA反应试剂多,其工作浓度不同对结果影响较大,因此必须对包被抗原(抗体)和酶标抗体(抗原)进行*工作浓度的滴定和选择,以达到*的测定条件。   方阵(棋盘)滴定法选择包被抗原的工作浓度 用包被液将抗原作一系列稀释(1:50~l:800)后,按行进行包被、洗涤。按列分别加入用稀释液1:100稀释的强阳性、弱阳性、阴性参考血清及稀释液(作空白对照),保温,洗涤。加工作浓度酶标抗体,洗涤,加底物显色,加酸终止反应后读取A值。选择强阳性参考血清A值;为0.8左右,阴性参考血清A值

抗凝兔血解决方案

抗凝兔血解决方案

作者:德尔塔 日期:2022-04-02

抗凝兔血解决方案 1、 如何储存和解冻血清才不会使产品质量受损? 将血清从冷冻箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室温下使之全融。但必须注意的是,融解过程中必须规则地摇晃均匀。 长时间储存在2-8℃时,血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此,推荐在-20℃以下储存血清,并避免反复冻融。 我们建议血清应保存在-2O℃。若存放于4℃时,请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶,建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。 2、血清中包含絮状沉淀,它们是什么,怎么处理? 沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性,不会影响产品性质。要除去沉淀,离心血清(400g,1-2分钟)或者简单的让其沉淀在瓶子底部,将血清小心的转移到另一个无菌瓶里(一般不建议采用过滤的方法除去沉淀,因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤)。大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。所以,使用产品时要摇动并加热血清至37℃,沉淀会自然消失。 3、实验室如何选择适合的血清? 国内一致认为HYCLONE的血清是的,但是根据我在北美的经历,国外一般认为GIBCO比HYCLONE好,所以并不是价格决定质量,但是总的来说这两种价格普遍偏贵,一般不是太娇气的细胞,国产的就够用了。此外,由于国内HYCLONE,GIBCO并没有生产线,我们只能从代理商那里买,而代理商又鱼龙混杂,所以买到假货的可能性也很大。所以,我一般会从直销员那里买血清,有的国外生物公司由于刚刚进入中国,度不高,但是其实在国外已经做得很不错了,如Wisent等,他们在国内有办事处,我会从那里拿,血清的品质和HYCLONE不相上下,但价格相对优惠很多。 抗凝兔血解决方案 4、 如何避免血清中产生沉淀? 按如下操作可避免沉淀的产生: (1)解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。 (2) 血清分装冻存时,须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一。 (3) 勿直接由-20℃

流式细胞仪标本的制备

流式细胞仪标本的制备

作者:德尔塔 日期:2022-04-02

流式细胞仪(FCM)是八十年代集单克隆抗体、荧光化学、激光、计算机等高技术发展起来的一种先进仪器,已广泛应用于免疫学、生物化学、生物学、肿瘤学以及血液学等方面的研究和临床常规工作。其中检测人白细胞表面标志可对白血病、淋巴瘤作用迅速正确的诊断,对淋巴细胞群和亚群进行分类,还能分离纯化某一群或亚群细胞。活细胞免疫荧光技术是用于FCM检测的标本准备,染色后也能在荧光显微镜下进行观察,在某些实验条件下,活细胞免疫荧光染色后的特异性和敏感性要优于滴片固定的常规间接免疫荧光的 结果。   (一) 原理   活细胞表面保留有较完整的抗原或受体,先用特异性鼠源性单克隆抗体与细胞表面相应抗原结合,再用荧光标记的第二抗体结合,根据所测定的荧光强度和阳性百分率即可知相应抗原的密度和分布。   (二) 操作步骤      制备活性高的细胞悬液(培养细胞系、外周血单个核细胞、      胸腺细胞、脾细胞等均可用于本法)                  ↓          用10%FCS RPMI1640调整细胞浓度为          5×106~1×107/ml                  ↓         取40μl细胞悬液加入预先有特异性McAb(5~50μl)         的小玻璃管或塑料离心管,再加50μl 1∶20(用DPBS         稀释)灭活正常兔血清                  ↓4℃ 30min         用洗涤液洗涤2次,每次加洗涤液2ml左右               1000rpm×5min                  ↓          弃上清,加入50μl工作浓度的羊抗鼠          (或兔抗鼠)荧光标记物,充分振摇                  ↓ 4℃ 30min          用洗涤液洗涤2次,每次加液2ml左右               1000rpm×5min                  ↓          加适量固定液(如为FCM制备标本,

血清病护理的办法

血清病护理的办法

作者:德尔塔 日期:2022-04-02

严重掌握药品和血清免疫制品的使用指征,尽量少采取静脉给药的途径,如必须应用异种血清制品时,应先仔细询问有无过敏病史及既往血清应用史,然后必须作皮肤敏感试验,方法如下:    ①先以未稀释的血清一滴,置于前臂屈侧,再以针尖在血清滴内作划良数条(以不出血为度)。   ②观察半小时如无反应,再以1∶10稀释的血清0.1ml作皮内试验。   ③再观察20分钟,注射处未出现直径超过1cm的红斑或硬结者,或周围亦无伪足样丘疹者属阳性,此时方可把血清注入肌内。 若皮肤试验为阳性,则应尽量不用,必须应用血清者,可依下法脱敏:   ①先口服抗组胺药物25~50mg;   ②半小时后以稀释20倍的血清0.1ml皮下注射;   ③待20分钟后再以稀释10倍的血清0.1ml皮下注射;   ④20分钟后如仍无反蛞圆幌∈偷难??.1ml皮下注射;   ⑤再观察15分钟,确认无反应后即依次每15分钟皮下注射0.2ml,0.5ml0,1.0ml和2.0ml,zui后以剩余量皮下或肌肉注射。   在脱敏及注射血清时,必须准备好肾上腺素及肾上腺皮质激素等,以防诱发过敏的敏性休克,在脱敏过程中,随时可酌情应用0.1%肾上腺素0.1~0.3ml皮下注射,以对抗可能发生的反应,脱敏完成一次注入余量后,仍应严密观察1~3小时,以防迟发反应的出现。