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CRISPR其实没那么神?

CRISPR其实没那么神?

作者:德尔塔 日期:2022-04-01

新兴基因编辑技术CRISPR成为热门话题,许多人相信CRISPR会为基因疗法注入新的活力。那么,CRISPR真的进入黄金期了么?  CRISPR如何起作用?  传统基因疗法是通过无害病毒或一些其它载体将“正版”基因送入细胞,补偿致病的缺陷基因。而CRISPR能用正确序列替换“坏”基因,直接修复细胞的基因缺陷。这种方式减少了外源基因进入错误位点的可能,原则上优于传统的基因疗法。此外,CRISPR修补的基因受到天然启动子的控制,蛋白质产物不会过多也不会太少。 CRISPR发展到了什么地步?  现在研究者们已经用CRISPR成功**了患有遗传性肝病和肌营养不良的动物,本周ASGCT年会还将出现有更多这样的临床前成果。 为什么说CRISPR还没准备好?  在安全有效的修复人类基因之前,CRISPR还有一段很长的路要走。对于绝大多数人类疾病(比如肌营养不良和囊性纤维化)来说,把细胞取出来修好再放回去并不现实,因为回到体内的细胞极少能够存活。我们需要CRISPR在体内发挥**作用,在这种情况下,基因导入遇到的障碍依然挡在CRISPR面前。举例来说,研究者们必须找到有效途径将活性CRISPR送入人体的特定组织。 你真的需要CRISPR么?  传统的基因疗法在不少疾病领域已经走了很长一段路,没有必要再用CRISPR从头来一遍。欧洲已经批准了一种**于罕见代谢病的基因疗法。美国一家公司今年也在申请批准,希望用他们的基因疗法**Leber先天性黑朦(LCA)。还有不少研究者准备在本次ASCGT年会上公布传统基因疗法取得的喜人成绩。鉴于CRISPR等基因编辑技术的效率还远远赶不上基因导入,不少人表示并不打算换用这些新技术。 CRISPR还存在什么问题?  用CRISPR删除基因相对来说比较容易,但它矫正基因的效果并没有那么好。因为CRISPR校正DNA需要通过同源介导修复(HDR),这一过程只在分裂中的细胞激活。不幸的是,机体内绝大多数细胞(肝细胞、神经元、肌细胞、眼细胞和造血干细胞)一般都没在分裂。 研究者们正在积极解决这一问题。Broad 研究所的CR

原代细胞实验中样本的处理方法

原代细胞实验中样本的处理方法

作者:德尔塔 日期:2022-04-01

原代细胞实验中样本的处理方法 1. 血清:全血标本于室温放置2小时或4℃后于1000×g离心20分钟,取上清即可检查,搜集 血液的试管应为一次性的无热原,无内毒素试管。   2. 血浆:抗凝剂举荐运用EDTA.Na2,标本搜集后30分钟内于1000×g离心15分钟,取上清即可 检查。防止运用溶血,高血脂标本。   3. 安排匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲刷安排,以去掉残留血液(匀浆中裂解的红细胞 会影响测量效果),称重后将安排剪碎。将剪碎的安排与对应体积的PBS(一般按1:9的分量体积比,比方1g的安排样本对应9mL的PBS,详细体积可依据试验需求恰当调整,并做好记载。举荐在PBS中参加蛋白酶抑制剂)参加玻璃匀浆器中,于冰上充沛研磨。为了进一步裂解安排细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或重复冻融。zui终将匀浆液于5000×g 离心5~10分钟,取上清检查。   4. 细胞培养上清:取细胞培养上清于1000×g离心20分钟,除掉杂质及细胞碎片。取上清检查。  5. 其它生物标本:1000×g离心20分钟,取上清即可检查 6. 标本应清澈通明,悬浮物应离心去掉。   7. 标本搜集后若不及时检查,请按一次运用量分装,冻存于-20℃/-80℃冰箱内,防止重复冻融, 1-6月内检查,4℃保留的应在1周内进行检查。    8. 如果您的样本中检查物浓度高于标准品zui高值,请依据实际情况,做恰当倍数稀释(主张先做 预试验,以判定稀释倍数)。 原代细胞HMEpiC cDNA   上皮细胞cDNA    20 reactions HMF cDNA  成纤维细胞cDNA    20 reactions HUVEC cDNA    人脐静脉内皮细胞cDNA    20 reactions HUAEC cDNA    人脐动脉内皮细胞cDNA    20 reactions HUVSMC cDNA    人脐静脉平滑肌细胞cDNA    20 reactions HUASMC cDNA    人脐动脉平滑肌细胞cDNA    20 reactions HBMEC tRNA    人脑微血管内皮细胞总RNA    10 µg HBVSMC tDNA    人脑血管平滑肌细胞总RNA    10 µg HBVC tRNA    人脑血管周细胞总RNA    10 µg HCPEC tRNA    人脉络丛内皮细胞总RNA    10 µg HCPEpi

随上海恒远一起来为进口标准品做一个分类吧!

随上海恒远一起来为进口标准品做一个分类吧!

作者:德尔塔 日期:2022-04-01

近日,有几位购买了我公司进口标准品的客户到了一个分类的问题,对此,上海恒远的技术人员做出了一个分类总结,下面我们一起来看一看吧。    *,我们可以按照它的技术特性来分类:    1、化学成分标准物质,具有确定的化学成分,并用技术上正确的方法对其化学成分准确的计量,用于成分分析仪器的校准和分析方法的评价。    2、物理化学特性标准物质,具有某种良好的物理化学特性,并已经过准确计量,用于物理化学特性计量器具的刻度校准或计量方法的评价。    3、工程技术特性标准物质,具有某种良好的技术特性并经准确计量,用于工程技术参数和特性计量器具的校准、计量方法的评价及材料或产品技术参数的比较计量。    第二,还可以按照学科或专业分类:可分为地质学、物理化学等十几类,Iso采用这种方法汇编了标准物质指南。        上海恒远进口标准品提供实验技术指导,您收到产品之后,如果有什么技术方面需要咨询的问题,我们随时可以给您去的。上海恒远欢迎您

威正翔禹生物科普:关于胎牛血清知识问答(二)

威正翔禹生物科普:关于胎牛血清知识问答(二)

作者:德尔塔 日期:2022-04-01

胎牛血清在细胞培养中受到很多实验人的青睐,今天小编把关于胎牛血清的保存使用做一个整理,希望对于初次接触细胞培养的你能够有所裨益哦! 1、胎牛血清有必要做热灭活吗?   答:实验显示,胎牛血清是不需要做热灭活的。 (1)首先将胎牛血清置于50℃以上的温度长达30分钟是完全没有必要的。尽管如此,有些实验室还是把胎牛血清的热灭活作为常规来执行。事实上, 热灭活目的是为了去除血清中补体等对热敏感的物质,但是在胎牛血清中对补体的灭活则明显没有必要。(2)Triglia和Linscott曾对商业胎牛血清中的补体成分进行测定,他们发现胎牛血清中含有的C1,C6仅达成年动物血清的1-3%,而其它补体成分仅有成年动物的5-50%,至于补体的主要成分C3在胎牛血清中则几乎不能检出。Pinyopummintr等证明血清去除灭活步骤不影响牛胚胎的发育分化。又有研究结果证实热灭活步骤减弱了胎牛血清和小牛血清对细胞的促粘附作用。(3)此外,热灭活经常给血清产品带来负面的影响,对血清的加热经常导致血清中沉淀的产生,导致很多营养因子的损失。因此,胎牛血清已无需再灭活。 总之,经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或完全没有任何作用,甚至通常因为高温处理影响了血清的质量,而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清,沉淀物的形成会显著的增多,这些沉淀物在倒置显微镜下观察,像是“小黑点”,常常会让研究者误以为是血清遭受污染,而把血清放在37℃环境中,又会使此沉淀物更增多,使研究者误认为是微生物的分裂扩增。若非必须,可以不需要做热处理这一步。不但节省时间,更确保血清的质量!   2、细胞培养中出现黑点是污染吗?如何处理?   答:一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成,首先,要肉眼观察培养基是否混浊,然后,在镜下观察培养细胞生长的状态,黑点是否游动。如果细胞被污染,微生物则会大量繁殖,培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。如果在镜下观察细胞,生长

人血清应该在什么样的条件下保存

人血清应该在什么样的条件下保存

作者:德尔塔 日期:2022-04-01

人血清组织样品采集: 1.首先准备好用于包装样品的铝箔或冷冻保存管,并且用油性记号笔在铝箔或冻存管外表多处写明样品编号。 2. 准确切除所需组织。 3. 离体新鲜组织,立即剔除结缔组织和脂肪组织等非研究所需的组织类型。 4. 在RNase-free 的0.9%生理盐水中漂洗样品,以去除血污和污物。 5. 用准备好的铝箔或冷冻保存管装载包裹组织,迅速投入液氮冷却。 6. 把样品袋(纱布袋等)放入液氮中冷冻一下,而后将液氮冷却的组织放入样品袋(每个样品袋只保存同样的组织,样品较多时应分装至多个小袋,不要在一只样品袋中放过多的样品以防无法放入液氮罐或无法从液氮罐中取出),袋口留一根编号绳,绳上粘2 张标签纸(标签上注明:客户名、样品名称、编号、日期,粘2 张标签纸是为了防止标签脱落造成样品混乱),迅速转入液氮罐。 7. 填写样品登记单,写明样品名称、组织类型、编号、取样日期、样品处理过程等情况。   人血清注意事项: 1. 对肿瘤组织的取材,应尽可能准确地判定肿瘤组织和正常组织,如果有可能请根据冰冻切片报告的结果来判定要进行研究的取材部位。 2. 不要用 Eppendorf 管保存组织样品,因为 Eppendorf 管从液氮中取出时极易发生爆裂而造成样品损失。 3. 步骤 2~5应在冰上尽可能快速进行,时间过长会导致样品RNA降解 。 4. 在临床手术过程中采集的病理或正常样品,如果没有条件立即从手术室中取出进行后续处理,请在切除后立即转移到液氮中保存。

威正翔禹生物科普:关于胎牛血清知识问答(三)

威正翔禹生物科普:关于胎牛血清知识问答(三)

作者:德尔塔 日期:2022-04-01

胎牛血清是指怀孕5-8个月的母牛被屠宰后,发育未完全的胎牛心脏穿刺采血后,通过一系列工艺处理zui终获得。此时胎牛血中含有特殊的生长发育因子,一旦胚胎发育完全这些因子自动消失。那么,面对如此珍贵的胎牛血清,实验人该如何防治黑点生成、如何储存使用血清呢? 1、 细胞培养中如何防止黑点生成?   答:(1) 尽可能地减少血清冻融次数。  (2) 培养基无需37℃水浴。   (3) 培养基保持*PH值7.0- 7.2。   (4) 严格控制配制培养基的水质,容器定期刷洗。   (5) 掌握细胞传代的*时机,细胞切勿生长过老。  2、如何储存使用血清? 答:储存条件:血清一般储存于-20℃,同时应避免反复冻融。购买大包装的血清后,需要分装成小包装,储存于-20℃,使用前融化。关于血清融化,我们推荐以三步来进行(详细可参阅《关于胎牛血清知识问答(一)》)。例如,500ml的胎牛血清,首先在室温条件下放置90min,然后再20℃水浴放置25min,zui后在37℃水浴放置35分钟即可。 使用浓度:自从有了合成培养基,血清就是作为一种添加成分与合成培养基混合使用,使用浓度一般为5-20%,zui常用是10%。过多血清容易使培养中的细胞发生变化,特别是一些二倍体的无限细胞系,迅速生长之后容易发生恶性转化。  Ausbian血清品牌,是来自于*品质的血清生产厂,又经严格的检测筛选,*,为中国科研项目提供细胞培养的支持工作。Ausbian胎牛血清精选内毒素极低,产量大于1600瓶(500毫升)的血清批次,满足干细胞、基因敲除、原代培养、细胞典藏、长期传代等各类细胞的培养要求;完整的检测报告,及灭病毒服务,为各类临床相关项目的申报提供完整支持。

胎牛血清在实验中的作用如此大!

胎牛血清在实验中的作用如此大!

作者:德尔塔 日期:2022-04-01

要说为什么很多细胞培养的科研人都用到胎牛血清,那就不得不说说胎牛血清那极为重要的作用。 1.提供维持细胞指数生长的激素,基础培养基中没有或量很少的营养物,以及主要的低分子营养物。 2.提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他激素等,能结合或调变它们所结合的物质活力。 3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到解毒作用。 4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。 5.起酸碱度缓冲液作用。 6.提供蛋白酶抑制剂,使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤害。 胎牛血清是高品质的,因为胎牛还未接触外界,血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分zui少。 什么是质量好的胎牛血清? 选购胎牛血清主要通过外观(透明清亮)、总蛋白含量(胎牛血清一般范围是30-40mg/ml)、血红蛋白(不高于20mg/dl)、PH(国产血清,大多高于7.5,进口胎牛血清,大多低于7.5)、微生物、免疫球蛋白(进口胎牛血清,不含IgM,IgG的含量也较低)、抗生素含量等方面来筛选!其中,小编为大家推荐一款正在各大实验室悄然流行的胎牛血清吧,这款血清精选内毒素极低,产量大于1600瓶(500毫升)的血清批次,满足干细胞、基因敲除、原代培养、细胞典藏、长期传代等各类细胞的培养要求;完整的检测报告,及灭病毒服务,为各类临床相关项目的申报提供完整支持。它就是血清——Ausbian胎牛血清!

血清市场局势分析

血清市场局势分析

作者:德尔塔 日期:2022-04-01

在解析血清现状之前,先给大家科普一些常识——什么是血清?什么是胎牛血清?国内口碑不错的胎牛血清有哪些?血清指血液凝固后,析出的淡黄色透明液体。在凝血过程中,纤维蛋白原转变成纤维蛋白块,所以血清中无纤维蛋白原,这一点是与血浆zui大的区别。据1997年出版的Medical and healthcare marketplace guide估测,欧美市场每年用于生物药物和疫苗生产的胎牛血清为50万升,价值10亿美元,而使用胎牛血清后所产出的产值为40亿美元,目前的生物技术产品和病毒性疫苗的生产大多数仍依靠细胞培养来表达产物和扩增病毒。牛血清的需求量以每年25%的速度增长。来自澳大利亚的 Ausbian胎牛血清,以其“精选内毒素极低,产量大于1600瓶(500毫升)的血清批次,满足干细胞、基因敲除、原代培养、细胞典藏、长期传代等各类细胞的培养要求;完整的检测报告,及灭病毒服务,为各类临床相关项目的申报提供完整支持”核心优势迅速占领国内血清市场,堪称有口皆碑。Ausbian血清目前在中国市场主要为澳洲血源的产品,广泛应用于中科院,医科院,军科院,细胞库,北大,清华,复旦,浙大等科研院所及大学的重点细胞实验室。

使用血清细胞培养实验高手的操作技巧

使用血清细胞培养实验高手的操作技巧

作者:德尔塔 日期:2022-04-01

血清是我公司的主营产品之一,主要用于细胞培养实验,产品种属有牛(胎牛/小牛/成牛)、人(混合血型/AB血型)、马、驴猪鸡等。今天,为大家带来了使用血清细胞培养实验高手的操作技巧,主要有: 1.保存在-5℃至-2O℃。若存放于4℃时,请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶,建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。  2.将血清从冷冻箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室温下使之全融。但必须注意的是,融解过程中必须规则地摇晃均匀。  3.一旦在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时,应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。  4.解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。  5.勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清会变得混浊,同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害,而影响血清的质量。  6.血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。  7.若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。     咨询订购血清产品,欢迎您与我公司业务员取得。质量保证,价格优惠。

胎牛血清的注意要求

胎牛血清的注意要求

作者:德尔塔 日期:2022-04-01

购买过胎牛血清的朋友都知道,血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物,其组成成份虽大部分已知,但还有一部分尚不清楚,且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等,这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。对血清的成分和作用的研究虽有很大进展,但仍存在一些问题。本章小编将为您具体解析主要是条件:   *:血清的成份可能有几百种之多,目前对其准确的成份、含量及其作用机制仍不清楚,尤其是对其中一些多肽类生长因子、激素和脂类等尚未充分认识,这给研究工作带来许多困难;   第二:血清都是批量生产,各批量之间差异很大,而且血清保存期至多一年,因此,要保证每批血清的相似性极为困难,从而使实验的标准化和连续性受到限制;   第三:不能排除血清中含有易变物质,这被认为是“瓶中恶化"的原因之一。    为您的科研实验选择的胎牛血清:从基础研究到特异性分析,包括干细胞研究、免疫分析、抗体生产。我司代理的胎牛血清品牌有NQBB、Gibco、invitrogen、BD等,血清主要产自于澳大利亚,血源以封闭的心脏穿刺方式采自8月龄胎牛,产品经3次100nm过滤,在净化车间过滤包装。经严格检测确保无支原体,细菌病毒检测依据美国药典(USP)和美国联邦法规第九篇(9CFR),符合检测标准。

威正翔禹生物教您挑选性价比高的胎牛血清

威正翔禹生物教您挑选性价比高的胎牛血清

作者:德尔塔 日期:2022-04-01

选择胎牛血清你还在关注其价格的高低吗?采购血清除了看血清的品质,血清的来源,价格上也是实验室采购血清的重要指标。价格的确有时会影响到产品的质量,价格越贵的越能保证产品的质量,但这并不是性价比高的选择。 作为肉类行业的副产品,FBS的生产在本质上会受到天气和食物供应、经济条件和牛群规模等各种因素的影响。如果病毒不定期再来捣乱一下,那么牛的数量必然下降,FBS的供应也势必减少。此外,由于干旱导致奶牛饲养费用较高,农民可能会将牛卖掉或屠宰,导致牛群数量下降。 值得一提的是,*对FBS的需求还在不断增加。每年,大约生产600,000 L的FBS,其中cGMP等级的不足200,000 L,而后者正是大多数工业生产公司的要求。随着大型制药公司的需求上升,FBS的价格也在持续上涨。 此时,找到一家可以提供同批次FBS的供应商是十分必要的,这既确保了产品供应,也在一定程度上避免价格波动。威正翔禹生物丨缔一生物提供的Ausbian胎牛血清,就做到了名副其实的同批号跟踪发货,确保实验数据连续稳定。 以Ausbian特级胎牛血清为例, 产品描述: 内毒素含量极低

上海恒远胎牛血清质量没话说 信得过!

上海恒远胎牛血清质量没话说 信得过!

作者:德尔塔 日期:2022-04-01

现市场中的科研胎牛血清系列产品供应商繁多,产品多种多样,质量参差不齐。导致现在客户在挑选血清产品时犯了难(判断质量方法细节可以关注我司文章,或)。这周一过就是明年了,新的一年中,上海恒远向您自荐,胎牛血清质量保证,没话说,信得过!希望能够得到您的支持。   *、国产血清尚需改进的问题     1. 血清来源     主要是奶牛场淘汰下来的公牛犊,但各个奶牛场供应的淘汰小公牛非常分散,时间和数量不定,收集有一定的难度;动物健康状况追溯困难,难以对所有采集的动物进行良好的检测与检测,无法保证来自健康动物群体,难以对新生牛血清采集源头进行有效跟踪检测和动物健康质量控制,使采集的血清来源分散,质量良莠不齐。     2. 缺乏严格的行业监管        由于血清供应厂家的采血、收购多为分散收集的“粗血清”,并且范围和地点分散,不定,这使得国家兽药监督管理部门也很难监管。由于缺乏有效的行业监管,新生牛血清供应厂家多、乱、杂,且缺乏必要的检测手段和质量控制措施。          第二、我公司严把质量关      1. 发货前经多层检测,并发批次产品。     2. 定期对库房进行检查,防止漏水受潮 。     3. 对长时间放置的有异样的试剂盒要及时检测,停止发货。     4. 做到每年的质量检测达标。 第三、为血清的成分分类     1. 蛋白质类:包括白蛋白、球蛋白、α-巨球蛋白、胎球蛋白、 转铁蛋白、纤维粘连素等;     2. 多肽类:主要是一些促进细胞生长和分裂的生长因子,zui主要的生长因子是血小板生长因子,还有成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、神经细胞生长因子等,虽然在血清中含量很少,但对细胞的生长和分裂也起着重要作用;     3. 激素类 激素对细胞的作用是多方面的。        包括:        ① 胰岛素,促进细胞摄取葡萄糖和氨基酸,与促细胞分裂有关;        ② 类胰岛素生长因子,能与细胞表达的胰岛素受体结合,从而有胰岛素同样的作用:        ③ 促生长激素,促进细胞增殖的效应;  

牛血清的主要成分

牛血清的主要成分

作者:德尔塔 日期:2022-04-01

牛血清是一种成分复杂的混合物,其大部分成分已为人所知,但还有一部分仍不清楚,而且血清的组成及含量通常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而存在差异。牛血清主要成分有以下几类。 蛋白质类 包括白蛋白、球蛋白、α-巨球蛋白(抑制胰蛋白酶的作用)、胎球蛋白(促进细胞附着)、转铁蛋白(能结合铁离子,减少其毒性和被细胞利用)、纤维粘连素(促进细胞附着生长)等; 多肽类 主要是一些促进细胞生长和分裂的生长因子,zui主要的生长因子是血小板生长因子,还有成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、神经细胞生长因子等,虽然在血清中含量很少,但对细胞的生长和分裂也起着重要作用; 激素类 激素对细胞的作用是多方面的。包括: 胰岛素:促进细胞摄取葡萄糖和氨基酸,与促细胞分裂有关; 类胰岛素生长因子:能与细胞表达的胰岛素受体结合,从而有胰岛素同样的作用: 促生长激素:促进细胞增殖的效应; 血清中含有微量该成分,它可能具有促细胞贴附和增殖作用。但有人证明,在细胞密度较高时可能有抑制细胞生长和诱导细胞发生分化的作用。 其他成分 如氨基酸、葡萄糖、微量元素等。在合成培养基中这些成分的作用并不明显,与蛋白相结合的微量元素对细胞生长起促进作用。 以上就是牛血清的主要成分,在细胞培养中,很多实验人都在用Ausbian胎牛血清,目前此商标属上海威正翔禹生物科技有限公司*所有。这款血清来自澳大利亚,“低内毒素(细胞更健康)、同批号跟踪(实验数据更稳定)、全程无冻融(细胞表现更出色)”是很多人钟爱它的原因。

为什么ELISA样本值会低于空白值呢?

为什么ELISA样本值会低于空白值呢?

作者:德尔塔 日期:2022-04-01

做任何实验,都不可能完全没有误差,我们能做的就是尽zui大的努力减少实验误差。在ELISA试剂盒实验操作中,误差分有系统误差、偶然误差、过失误差,而一个小小的误差足以能够影响到实验,那么怎样才能缩小实验误差呢?除了需要细心之外,还有一些需要重点注意的地方。今天,上海恒远为您解析为什么ELISA样本值会低于空白值? *、基质效应      分析中,基质指的是样本中被分析物之外的组分,基质常常对分析物的分析过程有显著的干扰,并影响分析结果的准确性,这些影响和干扰被称为基质效应。ELISA试剂盒在开发过程中,标准品不能采用人或动物血清、血浆作为标准曲线的稀释液,只能采用其模拟物。模拟物与被测样本在蛋白丰度、复杂性、pH等因素都会存在差异。当样本的基质与其模拟物相比,降低抗原抗体的结合,便产生了样本值低于空白值的现象。造成样本值无法计算出数值,或者数值为负。     目前zui常用的去除基质效应的方法是,通过已知分析物浓度的标准样品,同时尽可能保持样本中的基质不变,建立一个校正曲线。     当单个样本或少量样本值低于空白值时,可能是误差原因,这时应增加重复,提高操作技能。当大量样本都低于空白值时,应考虑基质效应的影响,建立校正曲线予以修正。 第二、实验误差     误差分为三类,系统误差、随机误差和过失误差。这三类误差中,系统误差对样本值和空白值之间的差异无影响。ELISA样本值低于空白值在误差方面主要来源于随机误差和过失误差。     1.随机误差 Random Error     无法控制的变因,使测量值产生随机分布的误差,服从统计学上的正态分布。从统计学上来看,测量值有99%的置信限在±3SD之间,如果CV值是20%,随机误差的边界就是±60%,也就是说在CV值20%的状况下,样本值低于空白值60%之内,有可能是随机误差的影响,特别是空白值只有一个值时。     随机误差不可消除,只能通过多次测量获得的均值尽量逼近真值。降低随机误差的解决方案1是增加空白值的重复数量,一般认为

细胞样板处理注意事项

细胞样板处理注意事项

作者:德尔塔 日期:2022-04-01

细胞样板处理注意事项,随着诊断细胞学的迅速发展,使诊断细胞学的应用范围日益扩大,临床医生对细胞学诊断的要求和期望也不断增高。因此做好细胞学诊断,必须注意以下问题: 1.标本采集正确 标本采集是细胞学诊断的先决条件。只有采集到合格的标本,才能做出可靠的诊断,如宫颈癌绝大多数起源于宫颈口柱状上皮和鳞状上皮交界处,因此宫颈刮片应该从宫颈口两种上皮的移行带处采集,在涂片中除鳞状上皮细胞外,还应见到柱状上皮或化生的鳞状上皮细胞等。 2.保证制片各环节质量 质量好的涂片是细胞学诊断的基础。质量好的涂片应具 ①涂片厚薄适当,分布均匀。过厚的涂片细胞互相重叠;过薄的涂片,细胞数量少,均难以做出准确的诊断; ②固定及时,涂片染色后细胞结构清晰,胞核胞质色泽分明; ③涂片无人为的变化,即在制片过程中因处理不当而出现的一些不应有的变化; ④涂片中红细胞过多,应设法溶解红细胞,以使其他细胞更为突出、清晰。 3.阅片细致 细致阅片是诊断的关键。由于细胞学,尤其是脱落细胞学,是在大量正常的细胞中寻找数量相对较少的异常细胞或癌细胞,有时癌细胞数量很少或只局限于涂片的某一区域,因此观察涂片必须全面细致、耐心,不漏掉一个视野,不放过一个可疑的细胞。 4.加强学习,不断总结经验,提高细胞学诊断的准确性? 细胞学诊断只能根据对涂片进行全面、客观的观察,经过科学的思考、分析综合而得出正确的结论。在遇到疑难病例难以确诊时,应重复检查,进行动态观察,通过反复观察、比较,或做特殊染色或特殊检查,亦可建议做病理活检,zui后确定诊断,切不能因为病人家属、临床医生等急催报告而勉强诊断。有下列情况之一者应重复检查: ①涂片中只有少数异常细胞,难以做出结论性诊断的病例; ②细胞学诊断与临床诊断明显不符合的病例; ③标本中细胞坏死或变性严重,难以肯定诊断或分型的病例; ④涂片取材不当或制片技术不佳等。 5.加强与临床的 细胞学与实验室化验检查不同,临床病史