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实验过失好避免,还您实验一片春天

实验过失好避免,还您实验一片春天

作者:德尔塔 日期:2022-04-02

昨日,浙江大学孙老师打询问实验中出现一些小失误,导致实验结果很不准确,钱随即让技术人员给孙老师去了,事后,就孙老师的问题,钱整理了能够避免实验过失的方法,让您的实验能够更加准确的进行。*:检验技师应具备从事实验室操作的基本素质和实践经验。能熟练操作实验仪器、器械,具有一定总结和分析问题的能力,对实验中出现的意外情况能及时妥善解决。第二:操作前仔细阅读说明书,严格按照说明书要求进行规范化操作。不同批号的试剂不可混用。值得改进的地方,反复试验确定成立后才能改进,比如洗板次数的掌握等。第三:评估试剂的实用性,试剂的稳定与否,对准确率的高低到头重要。在试剂启用前,应进行阴、阳对照及样品反复比照试验,判定试剂符合要求后方可使用。第四:加样要准确、快速。加样不准确,酶生成物的量不能确定,直接影响显色结果。另外,显色的深浅及A值的测定与加入显色剂和终止液的量有关,所以加样应慎重。要求在一定时间内加样完毕的实验,如果加样迟缓,便出现误差,而且试剂长时间暴露在外,尤其室温过高时,保存期会缩短甚至失效。第五:使用校对过的微量移液器,排除自然误差。移液器准确与否对定量检测尤为重要第六:严格掌握显色时间,显色时间过短,加入终止液反应终止后,底物结合物的量过少,易出现假阴性。超过显色要求时间后显色,应判为假阳性,这可能与试剂本身有关。加显色剂后立即显色,不可报阳性,这可能是本底显色的结果。第七:洗涤彻底,洗板不彻底,酶结合物本底显色会呈现假阳性。另外,洗涤液要新鲜,现用现配,陈旧的洗涤液会出现本底增高现象,也可能出现假阳性。第八:严控反应时间,反应时间过长,酶失活;反应时间过短,酶结合物不能与血清中的微生物抗原抗体充分结合,生成物结构松散不牢固,容易洗掉,都可能造成假阴性。

8月总结尾:猪ELISA试剂盒的影响

8月总结尾:猪ELISA试剂盒的影响

作者:德尔塔 日期:2022-04-02

ELISA诊断试剂经历了从合成肽向基因工程抗原的过渡。由于历史的原因,人们往往以反应本底的好坏来衡量ELISA反应试剂盒,因此有些厂家为了保持较好的本底采用了单片段基因工程抗原及合成肽包被,该类 试剂 盒的流行病学敏感度不够,稳定性也成问题。                       也有厂家坚持试剂盒高的流行病学敏感度,科学地对待反应结果。基因工程抗原较合成肽抗原有*的优越性,就HCV-ELISA试剂盒来讲,*代产品为合成肽抗原,主要是HCV 特异性抗原决定簇的肽片段;第二代产品包被的抗原既有基因工程抗原又有合成肽,只是当时的基因工程抗原不全,仅包括了HCV的核心区片段;第三代产品基本上采用了基因工程抗原,而且这些抗原包括更多、更稳定、纯度更高的HCV特异性抗原。第三代试剂的敏感度大大提高了。                  基因工程抗原与合成肽抗原的区别如下:     基因工程抗原是抗原基因在质粒载体中原核或真核表达的蛋白质抗原,多以大肠杆菌或 酵母 菌为表达系统。该类抗原与合成肽相比具有以下特点: ·分子量大     合成肽采用化学方法制备,由于工艺的局限,合成数量有限,只能达到数百个氨基酸;而利用基因工程制备的抗原,分子量更大。 ·稳定性好     包被的抗原的稳定性可使 试剂 盒的效期得到保证,早期以合成肽为包被抗原的 试剂 盒效期只有3-4 个月,采用基因工程抗原后效期大大延长了。 ·基因工程抗原将特异性抗原决定簇基因融合表达,表达产物包含更多的抗原决定簇,可提高 试剂 盒的灵敏度,提高检出率。 ·纯化难度大     基因工程抗原的纯化技术难度较大。     合成多肽抗原是根据蛋白质抗原分子的某一抗原决定簇的氨基酸序列人工合成的多肽片段。合成肽抗原有以下特点:① 分子量太小;② 一般只含有一个抗原决定簇;③ 纯度高;④ 稳定性差。                          国内乙肝两对半试剂厂家较多;不同厂家出产的试剂灵敏度与特异性存在一定的差别,资料显示,不同厂家试剂的特异性和敏感性分别为89.4%—99.3%,

水解乳清蛋白——微生物培养基

水解乳清蛋白——微生物培养基

作者:德尔塔 日期:2022-04-02

水解乳清蛋白 应用:富含必须氨基酸,是组织培养基(生产病毒疫苗)和发酵培养基的添加剂;色氨酸含量很高,可以用于吲哚试验;配制杆状病毒无血清培养基生产重组蛋白;生产乳酸杆菌;特殊膳食的补充剂;能够做为底物培养许多微生物。   货号:(RM012) 规格:500g/瓶   化学分析: 总氮量          不低于12.0% 氨基氮          不低于5.0% 氯化钠          不高于5.0% 水分     不高于5.0% 灰分     不高于7.5% PH值:5.90-6.90 保存条件和有效期:30℃以下保存,有效期内使用。

ATCC菌种培养技巧

ATCC菌种培养技巧

作者:德尔塔 日期:2022-04-02

ATCC菌种是一些单细胞真菌,目前已知有1000多种酵母。酵母可以通过出芽进行无性生殖,也可以通过形成子 囊孢子进行有性生殖。无性生殖即在环境条件适合时,从母细胞上长出一个芽,逐渐长到成熟大小后与母体分离。 在营养状况不好时,一些可进行有性生殖的酵母会形成孢子,在条件适合时再萌发。      培养酵母zui适pH 值为pH4.5-5.0。zui适生长温度一般在28℃~30℃之间。 用到的培养基有: 酵母完全培养基YPD:酵母提取物10g,蛋白陈20g,葡萄糖20g,定容至1L。加入1.5%琼脂粉则成为固定培养基。 SC(合成完全培养基)培养基(用于筛选酵母转化子):YNB(不含氨基酸的酵母氮源) 6.7g,葡萄糖20g,加入相应的 氨基酸,定容至1L。加入1.5%琼脂粉则成为固定培养基。      由于葡萄糖和氨基酸,灭菌是用115度,30min的灭菌条件。      液体摇菌时一般在30度下摇24-30min,就可以,固体培养一般在30度下要3-5天。      ATCC菌种落主要的形态特征是:圆形光滑圆润且比较有粘性。做酵母菌培养的时候要看到培养的哪种酵母菌属。 植物维生素B6(VB6)ELISA 试剂盒    组装/原装    96T/48T    试剂盒 植物维生素B12(VB12)ELISA 试剂盒    组装/原装    96T/48T    试剂盒 植物维生素A(VA)ELISA 试剂盒    组装/原装    96T/48T    试剂盒 植物渗调蛋白(Osmotins)ELISA试剂盒    组装/原装    96T/48T    试剂盒 植物脯氨酸(proline)ELISA 试剂盒    组装/原装    96T/48T    试剂盒 植物茉莉酸甲酯(MeJA)ELISA 试剂盒    组装/原装    96T/48T    试剂盒 植物茉莉酸(JA)ELISA试剂盒    组装/原装    96T/48T    试剂盒 植物激素脱落酸(ABA)ELISA 试剂盒    组装/原装    96T/48T    试剂盒 植物过氧化物酶(POD)ELISA试剂盒    组装/原装    96T/48T    试剂盒 植物果胶酶(Pectinase) ELISA试剂盒    组装/原装    96T/48T    试剂盒 植物钙调素(CAM)ELISA 试剂盒    组装/原装    96T/48T    试剂盒 植物钙调磷酸酶(CaN)ELISA试剂盒

ELISA试剂盒科研实验操作中常见问题明细

ELISA试剂盒科研实验操作中常见问题明细

作者:德尔塔 日期:2022-04-02

血清标本可按常规方法采集,应留意避免溶血,红细胞溶解时会开释出具有过氧化物酶活性的物质,以HRP为标记的ELISA测定中,溶血标本可能会增加非特异性显色。如在冰箱中保留过久,其中的可发生聚合,在间接法ELISA中可使本底加深。本文将叙述板式ELISA试剂盒各个操纵步骤的留意要点,珠式、管式及磁性球ELSIA,国外试剂均与特殊仪器配合应用,严格遵照划定操纵,必能得出正确的结果。加样时应将所加物加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并留意不可溅出,不可产气愤泡。有此测定(如间接法ELISA)需用稀的血清,可在试管中按划定的稀释度稀释后再加样。    在ELISA试剂盒中一般有3次加样步聚,即加标本,加酶结合物,加底物。冻结血清融解后,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混匀宜轻缓,避免气泡,可上下倒置混和,不要在混匀器上强烈振荡。制备血浆标本需借助于抗凝剂,而血清标本只要待血清天然凝固、血收缩后即可取得。也可在板孔中加入稀释液,再在其加入血清标本,然后在微型震荡器上震荡1分钟以保证混和。一般说来,在5天内测定的血清标本可放置于4℃,超过一周测定的需低温冰存。可用作ELISA测定的标本十分广泛,体液(如血清 )、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、粪便)等均可作标本以测定其中某种抗体 或抗原成份,ELISA试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保留。      ELISA试剂盒的操纵因固相载体的形成不同而有所差异,海内医学检修一般均用板式点。除特殊情况外,在医学检修中均以血清作为检测标本。加酶结合物应用液和底物用液时可用定量多道加液器,使加液过程迅速完成。如有细菌污染,菌体中可能含有内源性HRP,也会产生假阳性反应。每次加标本应更换吸嘴,以发生交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加样。的试剂,良好的仪器和准确的操纵是保证ELISA试剂盒检测结果正确可靠的必要条件。ELISA顶用的蒸馏 水或去离子水,包括用于洗涤的,应为新鲜的和高质量的。有些标本可直接进行测定(如

水解乳清蛋白微生物培养基

水解乳清蛋白微生物培养基

作者:德尔塔 日期:2022-04-02

应用:富含必须氨基酸,是组织培养基(生产病毒疫苗)和发酵培养基的添加剂;色氨酸含量很高,可以用于吲哚试验;配制杆状病毒无血清培养基生产重组蛋白;生产乳酸杆菌;特殊膳食的补充剂;能够做为底物培养许多微生物。   货号:(RM012) 规格:500g/瓶   化学分析: 总氮量          不低于12.0% 氨基氮          不低于5.0% 氯化钠          不高于5.0% 水分     不高于5.0% 灰分     不高于7.5% PH值:5.90-6.90 保存条件和有效期:30℃以下保存,有效期内使用。

对于ELISA试剂盒血清标本的保存您知道几点?

对于ELISA试剂盒血清标本的保存您知道几点?

作者:德尔塔 日期:2022-04-02

ELISA试剂盒能检测各种样本,比如血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等。其中,血清是zui常见的检测标本之一,根据上海德尔塔生物技术员对ELISA试剂盒血清标本的保存建议有以下几点:   1.样本的采集及血清分离中要注意尽量避免细菌污染,一则细菌的生长,其所分泌的一些酶可能会对抗原抗体等蛋白产生分解作用;二则一些细菌的内源性酶如大肠杆菌的β-半乳糖苷酶本身会对用相应酶作标记的测定方法产生非特异性干扰。   2.血清标本如是以无菌操作分离,则可以在2~8℃下保存一周,ELISA如为有菌操作,则建议冰冻保存。样本的长时间保存,应在-70℃以下。   3.冰冻保存的血清标本须注意避免因停电等造成的反复冻融。标本的反复冻融所产生的机械剪切力将对标本中的蛋白等分子产生破坏作用,从而引起假阴性结果。此外,冻融标本的混匀亦应注意,不要进行剧烈振荡,反复颠倒混匀即可。   4.要注意避免出现严重溶血。血红蛋白中含有血红素基团,其有类似过氧化物的活性,因此,在以HRP为标记酶的测定中,如血清标本中血红蛋白浓度较高,则其就很容易在温育过程中吸附于固相,从而与后面加入的HRP底物反应显色。   5.标本在保存中如出现细菌污染所致的混浊或絮状物时,应离心沉淀后取上清检测。                                                                    您可以通过网页本公司的了解更多产品的详细信息,至善至美的服务是我们永无止境的追求,欢迎新老客户放心选购自己心仪产品,我们将竭诚为您服务!

干燥颗粒培养基制备学要哪些条件?

干燥颗粒培养基制备学要哪些条件?

作者:德尔塔 日期:2022-04-02

干燥颗粒培养基: ①要有适宜的营养物质和水分; ②具有适宜的PH值; ③配制后应经灭菌呈无菌状态。土壤是微生物生活的大本营,为了获得某种微生物的纯培养,一般是根据该微生物对营养、酸碱度、氧等条件要求不同,而供给它适宜的培养条件,或加入某种抑制剂,淘汰其他一些不需要的微生物,再用各种方法分离、纯化该微生物,直至得到纯菌株。 干燥培养基: 制备培养基不仅要考虑它所需要的含碳化合物、含氮化合物、矿物盐类、生长因子,还要考虑水与pH环境,同时还应考虑它们培养方式是固体培养还是液体培养。因此,可以把按菌类生长发育需要比例配制的灭菌营养基质,称为培养基。 换言之,颗粒培养基必须具备三个条件:含有菌株生长发育所需要的营养物质;具有菌类生长环境条件;经过灭菌,并保持无菌状态。在整菌种制备过程中,从母种到原种、栽培种,各个阶段的目的要求有所不同,所选用的培养基的配比也应有所区别。一般母种初生菌丝较嫩弱,分解养分能力差,要求营养丰富、完全,氮源、维生素的比例应高。须选用易于被菌丝吸收利用的物质,如葡萄糖、蔗糖、马铃薯、蛋白胨、无机盐类及生长素等为等而原种、栽培种所需数量较多,且菌丝分解能力强,可利用大量农作物秸秆、粪草、棉籽壳、麸皮、米糠等原料作为培养基。 小鼠氧化型谷胱甘肽(GSSG)ELISA Kit    ELISA.    96T/48T 小鼠氧化低密度脂蛋白抗体(OLAb)ELISA Kit    ELISA.    96T/48T 小鼠烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)ELISA Kit    ELISA.    96T/48T 小鼠血小板因子3(PF-3)ELISA Kit    ELISA.    96T/48T 小鼠血小板衍生生长因子可溶性受体α(PDGFsR-α)ELISA Kit    ELISA.    96T/48T 小鼠血小板衍生生长因子AB(PDGF-AB)ELISA Kit    ELISA.    96T/48T 小鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)ELISA Kit    ELISA.    96T/48T 颗粒培养基

血清中胎牛血清和小牛血清它们区别在哪?

血清中胎牛血清和小牛血清它们区别在哪?

作者:德尔塔 日期:2022-04-02

血清的类别很多,有胎牛血清、透析型胎牛血清 、天然低IGG胎牛血清 、干细胞培养胎牛血清 、特殊用途胎牛血清 、活性炭/葡萄糖处理胎牛血清 、胎牛血清替代物 、小牛血清 、新生牛血清 、加强型小牛血清 、补铁小牛血清 、成牛血清 、供体马血清 、兔血清 、鸡血清 、猪血清 、马血清 、其他动物血清 、合成血清替代品。如果胎牛血清和小牛血清两种可选,更多的研究生物细胞培养员会选择胎牛血清,这是为什么呢?使用胎牛血清和小牛血清的区别在哪里?下面上海德尔塔生物公司为大家详细介绍: 一、来源不同胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS)是在屠宰怀孕母牛的时候,通过心脏穿刺采血获取的胎牛的血清,新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14天的小牛。 二、组份与比例不同两者所含的促细胞生长因子、促贴附因子、激素及其他活性物质等组份与比例不同,用途与用法不同:某些细胞必需胎牛血清才能生长,而有些细胞只需小牛血清即可,使用浓度不同,一般在5%-10%,有特殊要求的浓度在20%。                       三、总体分析胎牛本身生活在一个洁净环境当中,其血清与外界隔绝,只要生产工艺科学规范,其质量肯定要比后两者好。上海德尔塔生物建议一般选用血清种类可以根据ATCC及实验需要来选择。其实,除了一些比较娇贵的细胞,如干细胞之类的,其余的大部分细胞培养,用国产的足以。     上海德尔塔生物为您提供的血清产品质量100%保证,口碑好、性能稳定,如有所需,欢迎您我司业务员咨询。

解析原代细胞的基本特征

解析原代细胞的基本特征

作者:德尔塔 日期:2022-04-02

原代细胞是原始且未特化的细胞,它是未充分分化、具有再生各种组织器官的潜在功能。干细胞存在所有多细胞组织里,能经由有丝分裂与分化来分裂成多种的特化细胞,而且可以利用自我更新来提供更多干细胞。干细胞主要具有以下三个特征:  (一)细胞的更新 干细胞能通过有丝分裂产生子代干细胞。干细胞的分裂过程与普通的体细胞有所不同。高等动物的成体干细胞通过不对称分裂产生非对称的细胞决定子分割,使得一部分子代获得维持干细胞状态所必需的信息而成为子代干细胞,另外一部分子代细胞则不得不走向分化。也就是说,一个干细胞的后代中,只有一部分子代细胞可能保持与父代细胞相同的干细胞特征,另外一部分则丧失了干细胞的功能。  (二)细胞的多向分化 干细胞是一群非特化、无具体功能的细胞。干细胞的一个根本属性便是其不拥有任何组织特异性结构,也不产生特定的功能。也就是说,通常条件下干细胞不能像心肌细胞一样完成泵血功能,也不能像红细胞一样完成氧传递功能,更不能像神经细胞一样处理神经信号。但是,这种非特化的细胞能演变为多种特化的细胞,形成相应的组织,这便是分化。分化是一个复杂的过程,目前尚未清楚其全部的机制。  (三)干细胞分裂和分化的调控 干细胞分裂和分化的调控机制十分复杂,目前仅对其有初步的了解。干细胞启动不对称分裂的调控机制在于:由外来信号启动特定因子的自分泌过程,包括细胞不对称分裂存在的反应蛋白、控制基因表达的核内因子,干细胞与非干细胞子代细胞的染色体修饰,以及在瞬时扩增过程中控制细胞分裂周期时钟的启动因子等。 同时,原代细胞的分裂和分化还受诸多外在调控因素的影响。控制干细胞发展“命运”的外在因素统称为干细胞微环境,即通常所说的生态位。对于不对称分裂及群体不对称分裂的干细胞,生态位同样显得极其重要。这其中涉及干细胞与干细胞之间、干细胞与非干细胞子代细胞之间以及其与周围细胞之间复杂的近距及远程信号作用机制。主要包括多种细胞因子、细胞膜

Reh细胞使用小妙招

Reh细胞使用小妙招

作者:德尔塔 日期:2022-04-02

Reh细胞使用小妙招: 细胞培养液中添加的血清有牛血清、马血清、人血清等,其中牛血清是zui常用的血清,分为胎牛血清和新生小牛血清。胎牛血清是从母牛破腹取出的胎牛中分离出的血清,价格昂贵。新生小牛血清是从刚出生的尚未哺乳的小牛中分离出来的血清,如厂家能做到这一点,新生小牛血清的质量与胎牛血清的质量相差不大。如小牛出生后已哺乳,从这种小牛中取出的血清中可能含有较多的生物活性物质,其质量明显不如前两种。血清的质量,种类及使用的浓度都有可能影响细胞的生长,而不同批次的血清支持细胞生长的能力也不同,尤其是对克隆细胞的生长,某些批次血清可能含有毒性或抑制细胞生长的物质。因此,在购买大量血清之前,必须对血清支持细胞生长能力进行检测,然后再,然后大量购买质量好的同一批号的血清,并注意以下几点: Reh细胞如何灭菌 (1)需要长期保存的血清必须储存于-20℃ – 70℃ 低温冰箱中。4℃冰箱中保存时间切勿超过1 个月。由于血清结冰时体积会增加约10%,因此,血清在冻入低温冰箱前,必须预留一定体积空间,否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。 (2)一般厂商提供的血清为无菌,无需再过滤除菌。如发现血清有悬浮物,则可将血清加入培养液内一起过滤,切勿直接过滤血清。 (3)瓶装血清解冻需采用逐步解冻法:-20℃ 至-70℃ 低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1 天。然后移入室温,待全部溶解后再分装。在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沉淀的发生。切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻,这样因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集而出现沉淀。 (4)热灭活是指56℃, 30 分钟加热已完全解冻的血清。加热过程中須規則搖晃均勻。此热处理的目的是使血清中的补体成分(complement)灭活。除非必须,一般不建议作此热处理,因为热处理会造成血清沉淀物显著增多,而且还会影响血清的质量。补体参与反应有:细胞毒作用, 平滑肌细胞收缩, 肥大细胞和血小板释放组胺,

植物α淀粉酶(AMS)试剂盒测定说明书

植物α淀粉酶(AMS)试剂盒测定说明书

作者:德尔塔 日期:2022-04-02

植物α淀粉酶(AMS)试剂盒测定说明书 本试剂盒仅供研究使用。 使用目的: 本试剂盒用于测定植物组织,细胞及其它相关样本中α淀粉酶(AMS)活性。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物α淀粉酶(AMS)水平。用纯化的植物α淀粉 酶(AMS)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入植物α淀粉酶 (AMS),再与HRP标记的α淀粉酶(AMS)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过 彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化 成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的植物α淀粉酶(AMS)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中植物α淀粉酶(AMS)活性浓度。 试剂盒组成 130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶 2酶标试剂6ml×1瓶8标准品(8U/mL)0.5ml×1瓶 3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶 4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份 5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张 6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个 标本要求 1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融 2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。 植物α淀粉酶(AMS)试剂盒操作步骤 1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。 4U/mL5号标准品150µl的原倍标准品加入150µl标准品稀释液 2U/mL4号标准品150µl的5号标准品加入150µl标准品稀释液 1U/mL3号标准品150µl的4号标准品加入150µl标准品稀释液 0.5U/mL2号标准品150µl的3号标准品加入150µl标准品稀释液 0.25U/mL1号标准品150µl的2号标准品加入150µl标准品稀释液 2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50µl,待测样品孔中先加样品稀释液40µl, 然后再加

ELISA测定中可能会出现的问题及解决方法

ELISA测定中可能会出现的问题及解决方法

作者:德尔塔 日期:2022-04-02

问  题 可能的原因 解决方法           1.非常弱的结果 (1)温育的时间或温度不够; 校正温育箱温度;校正定时钟准     (2)显色反应时间太短; 确定时;使用新鲜合格的蒸馏水;     (3)所用配制缓冲液的蒸馏水有问题; 按照说明书保存试剂盒和准确配     (4)加入抗体/酶的稀释液浓度太低; 制工作液;试剂室温平衡至少 20     (5)酶标仪滤光片不正确; 分钟,确保所有试剂已平衡至室     (6)不正确的试剂储存方式; 温(约 25℃);校正移液器,吸     (7)试剂盒没有充分平衡;     嘴要配套,装吸嘴时要紧密,吸     (8)移液器吸液量不足,吸嘴内壁挂    水太多或内壁不清洁。     嘴内壁要清洁,一次性使用。               2.标准曲线和测定的重复性差 这是典型的由测定操作引起的问题,包括 重复某一样品时,加样时间尽可     (1)加样本及试剂量不准;孔间不一致;   能与*次接近;重复测定标本,     (2)加样过快,孔间发生污染;   操作条件、人员等应尽可能与上     (3)加错样本;     次保持一致,以排除这些因素造     (4)加样本及试剂时,加在孔壁上部非    包被区;     成的不一致的可能性;样品稀释     (5)不同批号试剂盒中组分混用;     (6)温育时间、洗板、显色时间不一致; 前应充分混匀;尽可能使用同一     (7)孔内污染杂物; 移液器并装紧吸嘴。     (8)酶标仪滤光片不正确;       (9)试剂/样品没有混匀;       (10)血清标本未完全凝固即加入,    反应孔内出现纤维蛋白凝固或残留    血细胞,易出现假阳性反应等。             3.白板(阳性对照不显色) (1)漏加酶结合物; 请按说明书所示稀释倍数配制;     (2)洗板液配制中出现问题,    如

商品化细胞培养基中,为什么谷氨酰胺要后加?

商品化细胞培养基中,为什么谷氨酰胺要后加?

作者:德尔塔 日期:2022-04-02

细胞培养基中,L-谷氨酰胺是一种必需氨基酸,常用浓度在0.7~5 mmol/L之间。对于一些特定的细胞,也有相应的浓度要求。例如对于dhfr-CHO细胞,谷氨酰胺的浓度要达到4mmol/L时,方可满足细胞的正常生长。     谷氨酰胺不仅可作为培养细胞的能量来源,而且参与蛋白质的合成和核酸代谢。许多商品化细胞培养基都不含谷氨酰胺。谷氨酰胺作为一种添加剂,常常是在培养基使用之前,再临时加进去,这是什么原因呢?     图.谷氨酰胺分子式     原来,谷氨酰胺在细胞培养基中会发生自发分解。细胞培养基的储存温度越高,存放时间越久,谷氨酰胺分解的越快。谷氨酰胺分解后还导致氨的形成,而氨对于细胞具有毒性。     曾有人做过测试,添加了8mM谷氨酰胺的DMEM,在37℃存放7天后,谷氨酰胺的浓度就下降为原先的一半(见下图)。这也是为什么含谷氨酰胺的培养基要在2-8℃保存的原因。       又有人检测过11种商品化培养基中谷氨酰胺的浓度,发现实际检测的谷氨酰胺浓度均在标示的浓度之下。有人测过4℃下谷氨酰胺的降解速率。也是采用DMEM,培养时添加葡萄糖20mmol/L, 胎牛血清7%,发现在4℃下,大约32天后,谷氨酰胺即下降为原先浓度的一半。     同时,对于细胞培养来说,谷氨酰胺并非越高越好。当初始浓度低于5mmol/L时,谷氨酰胺的利用率大于80%,且初始浓度越低,利用率越高;随着初始浓度的升高,谷氨酰胺利用率逐渐降低,当大于10mmol/L后,利用率急剧降低。     那么,对于谷氨酰胺的降解,是否有相应的解决办法呢?可以使用谷氨酰胺二肽,如甘氨酰谷氨酰胺、丙氨酰谷氨酰胺等。二肽形式的谷氨酰胺十分稳定,不会发生水解和氨的毒性堆积,又可被细胞所利用。因细胞内的氨基肽酶能裂解二肽,逐渐释放细胞所能利用的丙氨酸和谷氨酰胺。丙氨酸谷氨酰胺的热稳定性解决了在培养基使用时才临时加入L-谷氨酰胺的问题,允许配好的液体培养基在4℃能放更长时间。     图 许多培养基都改为添加L-丙氨酰-

细胞培养新手必读!

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作者:德尔塔 日期:2022-04-02

在进行科学研究时,细胞培养作为一项基本的研究方法,经常会被用到。可细胞培养到底是什么样的过程呢?下面是我们的实验员培养细胞的心得体会:一养细胞深似海,从此自由是路人。开始养细胞之前就要做好随时照顾它的心理准备,三天打鱼两天晒网不仅无法养出状态的细胞,还有可能让娇贵的细胞宝宝全军覆没,那么,怎么才能培养出符合条件的细胞呢?     1、选择正确的培养基     在养细胞之前,就要了解,你所养细胞的来源以及种类和名称,查阅一定量的文献,确定所需培养液种类以及是否需要添加特殊成分,常用的细胞培养液有DMEM、RPMI1640、F12等等,一些常见的细胞基本可以使用这几种培养基中的一种来培养,有的需要加入一定其他成分,这需要根据不同的细胞类型,查ATCC细胞库或者查文献,才能找到所需*培养液。选择正确的培养液是养好细胞的*步。     2、了解细胞的生长习性     不同的细胞生长习性不同。如成纤维细胞是贴壁生长,有一定的密度依赖性,密度小可能会出现不增殖,状态差的情况,接种密度大时则需要隔天传代,频繁传代则影响细胞状态;再如RPMI-8226人多发性骨髓瘤细胞,是悬浮生长的,传代需离心弃去上清即可。总之,了解细胞生长习性,再加上正确的计数,才能掌握好传代的密度。       3、选择的血清     血清中含有细胞生长所必须的生长因子,作为哺乳动物细胞培养的附加物,血清的添加是十分重要的,因此,选择的血清,是细胞养殖成功与否的关键!     4、及时传代和更换培养液     在细胞增殖到一定的密度后,要及时传代,根据细胞的生长速度和密度,及时更换培养液。更换过勤,浪费培养液,更换不够及时,则细胞状态转差,一般需隔天更换培养液,具体可根据所养细胞种类予以调整。     5、的无菌意识     前面林林总总全部都注意好了,如果无菌意识差,细胞中混入了微生物,则千里之堤溃于蚁穴,细菌的生长速度和破坏力,将迅速占领培养皿,破坏细胞结构