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ELISA试剂盒实验中需留心的细节
作者：德尔塔 日期：2022-04-01
为了确保实验的成功，ELISA试剂盒实验中需留心下列的细节 1. 严格按照规定的时刻和温度进行温育以保证成果。一切试剂都必须在运用前到达室温20-25℃。运用后当即冷藏保存试剂。 2. 洗板不正确能够导致不的成果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔枯燥掉。 3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。 4. 底物显色液应呈无色或很浅的色彩，现已变蓝的底物液不能运用。 5. 防止试剂和标本的穿插污染以免形成错误成果。 6. 在储存和温育时防止强光直接照射。 7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。 8. 任何反响试剂不能触摸漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会损坏试剂盒中反响试剂的生物活性。 9. 不能运用过期产品。 10. 假如可能传播疾病，一切的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测设备。
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敌草快纯度检测方式
作者：德尔塔 日期：2022-04-01
一、概 述 本标准物质主要用于生产部门和检测实验室对产品质量的控制、环境和食品领域相应残留检测、分析仪器的校准、检测方法确认评价等。 二、原材料来源和制备工艺 本标准物质候选物是通过定制相应纯品，并根据其物化特性，通过重结晶、柱层析等方法进一步纯化后制得，经定性和定量分析满足要求后，进行干燥分装(CAS号：6385-62-2)。 三、认定值和不确定度 编号 名称 标准值（%） 扩展不确定度（%）（k=2) SPL-BG-083 敌草快纯度标准物质 99.0 0.5 四、均匀性和稳定性检验 参照JJG1006-94《一级标准物质技术规范》，随机抽取分装后的样品，小取样量为3-5mg，采用差示扫描量热法（DSC）对纯度进行均匀性检验、稳定性考察。检测结果表明均匀性和稳定性良好。 经标准物质稳定性跟踪考察，有效期为自定值日期起2年。研制单位将继续检测该标准物质的稳定性，有效期内如发生量值变化将及时告知用户。 五、特性量值的测量方法 采用差示扫描量热法（DSC）和色谱归一法进行测量。 六、溯源性描述 经中国上海测试中心行业测试点对其定值，通过使用满足计量学特性要求的测量方法和计量器具，保证其溯源性。 七、正确使用说明 用前必须在干燥其中恢复至室温后方可称量：样品开封后，应尽快恢复密封状态，在规定条件下保存。 八、运输和贮存 本纯度标准物质采用5mL棕色螺口玻璃瓶包装。低温（0-8℃）、避光、干燥条件下保存。 九、安全 本标准物质属于有毒有害物质，使用时应注意防护，避免吸入或皮肤接触。
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敌草快纯度标品的出来流程
作者：德尔塔 日期：2022-04-01
一、概 述 本标准物质主要用于生产部门和检测实验室对产品质量的控制、环境和食品领域相应残留检测、分析仪器的校准、检测方法确认评价等。 二、原材料来源和制备工艺 本标准物质候选物是通过定制相应纯品，并根据其物化特性，通过重结晶、柱层析等方法进一步纯化后制得，经定性和定量分析满足要求后，进行干燥分装(CAS号：6385-62-2)。 三、认定值和不确定度 编号 名称 标准值（%） 扩展不确定度（%）（k=2) SPL-BG-083 敌草快纯度标准物质 99.0 0.5 四、均匀性和稳定性检验 参照JJG1006-94《一级标准物质技术规范》，随机抽取分装后的样品，小取样量为3-5mg，采用差示扫描量热法（DSC）对纯度进行均匀性检验、稳定性考察。检测结果表明均匀性和稳定性良好。 经标准物质稳定性跟踪考察，有效期为自定值日期起2年。研制单位将继续检测该标准物质的稳定性，有效期内如发生量值变化将及时告知用户。 五、特性量值的测量方法 采用差示扫描量热法（DSC）和色谱归一法进行测量。 六、溯源性描述 经中国上海测试中心行业测试点对其定值，通过使用满足计量学特性要求的测量方法和计量器具，保证其溯源性。 七、正确使用说明 用前必须在干燥其中恢复至室温后方可称量：样品开封后，应尽快恢复密封状态，在规定条件下保存。 八、运输和贮存 本纯度标准物质采用5mL棕色螺口玻璃瓶包装。低温（0-8℃）、避光、干燥条件下保存。 九、安全 本标准物质属于有毒有害物质，使用时应注意防护，避免吸入或皮肤接触。
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H9c2（2-1）-LUC大鼠心肌细胞-荧光素酶标记 培养步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-01
细胞名称 ： H9c2(2-1)-LUC大鼠心肌细胞-荧光素酶标记 培养步骤 组织 大鼠乳腺癌细胞系 母细胞来源 客户 转染方法与标记过程的描述 慢病毒转染Hygromycin筛选 1.质粒部分 1.酶切载体：pGL4.10（luc2）由酶切获得1400bp的luc2基因片断；EGFP和mCherry片段由PCR扩增获得700-800bp左右片段；pSin-hyg-T2A载体酶切线性化。 2.电泳和胶回收：上述酶切产物DNA电泳，TAKARA试剂盒胶回收，回收产物取少量电泳鉴定。 3.连接载体与目的片段:使用Invitrogen T4连接酶连接luc2、EGFP或mCherry片段和pSin-hyg-T2A线性化载体，连接使用20ul体系，25℃，10min。 4.转化：感受态菌One Shot Stbl3在冰上融化后，加入连接产物，静置25min后在水浴42℃，45sec热休克，后加入250ul无抗培养基225转摇菌1h，将转化的菌铺于有氨苄抗性平板37度过夜。 5.挑取单克隆：观察平板后挑取15个单克隆至含2ml氨苄抗性 LB培养基摇菌管中，255转摇菌6.5h。 6.小抽质粒与鉴定：使用碱裂解法小抽，质粒用25ul含RNA酶ddH2O溶解；酶切鉴定: 重组质粒用通过酶切鉴定。 7.荧光素表达鉴定: 重组质粒pSin-hyg-GFP/luc2（以下简称Gluc）或pSin-hyg-mCherry/luc2（以下简称Mluc） 转染293T细胞：DNA定量后，使用PEI转染Gluc或Mluc至24孔板已预铺的293T细胞中。转染采用脂质体法转染，试剂采用JetPEI (Polyplus公司)。两管EP管中分别加入50ul生理盐水，其中一管加入1ug量的质粒（DNA体积=1ug/DNA浓度），轻轻震荡混匀，再轻微离心；在另一管中加入PEI 2ul轻轻震荡混匀，轻微离心，然后把PEI管中的溶液加入含有的质粒管中，室温孵育20min。将脂质体包绕DNA的混合液加入需要转染的24孔内，37 ℃、5 % CO2条件下培养，8小时后换培养液。 8.报告基因检测：Passive Lysis Agent裂解细胞，加入荧光素酶作用底物，将转染质粒的细胞与阴性，阳性对照共同进行单报告基因检测。培养步骤： 1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合
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逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）
作者：德尔塔 日期：2022-04-01
原位杂交实验 1 探针的设计与合成 1) 根据实验室已有的p8 基因cDNA全长序列，用premier primer5.0设计引物p81和 p82，以卤虫 cDNA 为模板，PCR 扩增得到 346bp 的产物，用 Takara 胶回收试剂盒 回收纯化。 引物编号 引物序列 长度 p81 TGCGGACGAAACAGGAAG 18 bp p82 GCTCAAACAGTGATGCCAGT 20 bp 2) 目的片段克隆 a. 在无菌离心管中加入连接载体的各种成分，载体与片段的摩尔比控制在1:3-1:8，根据凝 胶电泳检测后的浓度及载体与片段分子大小来计算摩尔比。加入成分及比例如下： 目的PCR片段 5 μl pGM-T载体（约50ng/uL） 1 μl 10×T4 DNA Ligation Buffer 1 μl T4 DNA Ligase（3U/uL） 1 μl 无菌去离子水 3 μl 总体积 10 μl b. 轻轻弹动离心管以混合内容物，短暂离心。置于 PCR 仪中 16℃过夜连接，反应结束后 将离心管置于冰上。 c. 向铺好的含有氨苄青霉素的固体平板表面加入16 μl的IPTG （50mg/ml）、40 μl的X-gal （20mg/ml），使用无菌的弯头玻璃棒将其均匀的涂开，避光置于 37℃培养箱 1-3 小时， 使溶解X-gal的二甲基甲酰挥发干净。 d. 将10 μl的连接产物加到100 μl DH5感受态细胞中，轻弹混匀，冰浴半小时，将离心 管置于 42℃水浴 90 秒，取出管后立即置于冰浴上放置 2-3 分钟，其间不要摇动离心管。 向离心管加入500 μl 37℃预热的LB（不含抗生素）培养基，150rpm摇床37℃振荡培养 45分钟。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。将菌液于4000g下离心 10分钟，去掉上清，加入100 μl培养液重溶并加入到配制好的LB固体培养基上，用无菌 的弯头玻璃棒轻轻将细胞均匀涂开。待平板表面干燥后，倒置平板，37℃培养12-16小时。 e. 挑取白色菌落直接进行PCR检测，筛选转化子。 f. 将转化子接种于LB液体培养基中培养24小时，吸取1mL菌液送至大连宝生物公司进行 序列测序。 3) 重
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Cell警示：基于身高或智商等特征的胚胎选择并不现实
作者：德尔塔 日期：2022-04-01
一直以来，“设计婴儿”的想法一直存在，特别是体外受精和用于筛查遗传性疾病的胚胎技术出现之后。虽然近期人类胚胎CRISPR编辑婴儿引发了的探讨，但对胚胎进行遗传“增强”的实用方法还是对IVF胚胎进行植入前遗传筛选。 然后，11月21日Cell杂志上的一项研究指出，通过多基因（而不是由单一突变引起的遗传性疾病）筛选性状特征其实比大多数人意识到的要复杂得多。 文章作者，耶路撒冷希伯来大学Shai Carmi说：“对胚胎进行基因组测序，现在肯定比五年前要容易得多，而且我们也知道更多与某些性状有关的基因变异。但是选择具有特殊性状的胚胎非常有争议，除非它与像囊性纤维化这样的严重疾病有关，因此这引发了许多与优生学和机会不平等有关的问题。” 结果发现这些理论后代的预期优势相对较小。就智商而言，它增加到高于胚胎平均水平的高点是3分。而对于高度来说，它增加到高于平均高度的大高度为3厘米。Carmi的团队模拟分析了根据智商和身高等多个基因导致的性状来筛选胚胎的可行性，结果发现我们目前对这些类型的性状的遗传学知识可能不足以在IVF胚胎选择中大幅增加所需的性状。 在这项研究中，研究人员利用真实人的基因组序列进行了计算机模拟，模拟假想的胚胎基因组图谱，这些假想的胚胎是由一些是实际的夫妇，或者人工配对的进行筛选。在模拟中，他们假设每对夫妇将有十个胚胎可供选择。然后根据模拟胚胎基因组中的基因变异，预测每个后代的智商或成年身高。这一实验是基于选择得分高的胚胎进行植入这一假说进行的。 Carmi说：“这些特征有很多是无法预测的。如果有人选择了一个智商比平均水平高出两点的胚胎，那不能保证它会真正导致智商的提高。因为在已知的基因变异中并没有考虑很多变化性”。 Carmi指出还存在其他一些局限性，这使得准确筛选具有所需性状的胚胎非常困难。 研究人员使用每对夫妇的十个胚胎进行了模拟，但实际上，许多夫妇在进行体外受精时获得的存活胚胎要少得多。例如，对于五个胚胎，增益将降低
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MLPA在研究和诊断中的力量
作者：德尔塔 日期：2022-04-01
北京华新康信生物科技有限公司代理MRC-Holland品牌。北京华新康信生物科技有限公司是MRC-Holland品牌代理商。 TR118-200 MRC-Holland 大量现货，欢迎电联，真诚合作共赢。 BP1511 BCP MRC-Holland 大量现货，欢迎电联，真诚合作共赢。 MRC-Holland MRC-Holland 北京代理，MRC-Holland 北京总代理，MRC-Holland华北代理，MRC-Holland华东代理，MRC-Holland华南代理， MRC-Holland华中代理，MRC-Holland代理，MRC-Holland 代理，MRC-Holland产品，MRC-Holland现货，MRC-Holland各系列产品，MRC-Holland知识介绍，MRC-Holland技术服务，MRC-Holland咨询服务，MRC-Holland合作服务，欢迎电联，真诚合作，合作共赢。 MRC-Holland代理 北京华新康信生物科技有限公司 北京华新康信生物科技有限公司专注于生命科学领域，由丰富从业经验的技术团队和管理团队组建而成，主营生物化学试剂，仪器，实验耗材等。 1广泛的产品辐射领域，试剂，耗材，仪器等。 2产品种类齐全，北京华新康信与国外诸多生命科学领域*合作众多，代理品牌Glycan Therapeutics，Intact Genomics，Integral Molecular，Medkoo，Niomech，Terragene，Anshlabs wako，EZbioscience，CMCTAG，Anatrance ，Favorage ，Affinity，Advanced biomatrix，bioplastics，天地人和，TRC，凯杰，义翘，sciencell；价格优势品牌：seracare，Streck，Toxin，Zeptometrix，sigma，ForteBio，CanSyn，MRC-Holland，santa，chormsystems，bethyl ，moltox， permagenlabware ，bioflux，Bio－Rad， coriell， listlabs， ZYMO ， ABclonal ， EY laboratories ，greatcellsolar ， agdia ， beckman ， Bioxcell，，biomax ，usascientific ， TRC ，MRC-Holland ，americanelements，cayman ， Fisher ，thermofisher ， nanopore， 日立， 三菱株式会社 ，RD， takara等，紧跟生命科学的发展，不断满足客户的需求，为各位的科研之路上添砖加瓦！ 3 一手货
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细胞凋亡检测实验（Annexin V/PI 双染色法）
作者：德尔塔 日期：2022-04-01
细胞凋亡检测可以：（1）用于肿瘤细胞和组织在内的不同种类病理标本研究；（2）应用 于临床诊疗，新药研制、生物制品开发、肿瘤放化疗、以及从促凋亡角度探索肿瘤的基因治 疗；（3）对相关疾病的早期发现、放化疗的疗效评价具有举足轻重的地位。 1、实验方法和原理 细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面，目前早期识别仍有困难。这些细胞膜表面的改变之一 是磷脂酰丝氨酸（PS）从细胞膜内转移到细胞膜外，使 PS 暴露在细胞膜外表面。PS 是一 种带负电荷的磷脂，正常主要存在于细胞膜的内面，在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂 分布的不对称性被破坏而使 PS 暴露在细胞膜外。 Annexin V 是一种 Ca+依赖的磷脂结合蛋白，初发现是一种具有很强的抗凝血特性的血 管蛋白，Annexin V 具有易于结合到磷脂类如 PS 的特性。对 PS 有高度的亲和性。因此， 该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的 PS。 PS 转移到细胞膜外不是凋亡所独特的，也可发生在细胞坏死中。两种细胞死亡方式间的差 别是在凋亡的初始阶段细胞膜是完好的，而细胞坏死在其早期阶段细胞膜的完整性就破坏了。 因此，可以建立一种用 Annexin V 结合在细胞膜表面作为凋亡的指示并结合一种染料排除 试验以检测细胞膜的完整性的检测方法。 2、实验材料、试剂、仪器和耗材 细胞； HEPES 缓冲液、NaCl、CaCl2、PI、ANNEXIN V-FITC 试剂盒； 流式细胞仪。3、实验步骤 一、试剂与仪器 1. 孵育缓冲液：10 mmol/L HEPES/NaOH，pH7.4，140 mmol/L NaCl，5 mmol/L CaCl2。 2. 标记液：将 FITC- Annexin V（宝灵曼公司产品）和 PI 加入到孵育缓冲液中，终浓度均 为 1 ug/ml。 3. 流式细胞仪。 二、实验步骤 1. 细胞收集：悬浮细胞直接收集到 10 ml 的离心管中，每样本细胞数为（1~5）×106/mL 500~1 000 r/min 离心 5 min，弃去培养液。 2. 用孵育缓冲液洗涤 1 次，500~1 000 r/min 离心 5 min。 3. 用 100 ul 的标记溶液重悬细胞，室温下避
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抗肿瘤药物 5-氟尿嘧啶对肿瘤细胞迁移的影响 （细胞划痕法）
作者：德尔塔 日期：2022-04-01
实验导读 瘤组织的增殖失控、瘤细胞的分化异常、瘤细胞具有侵袭和转移的能力是恶性肿瘤基 本的生物学特征，而侵袭和转移又是恶性肿瘤威胁患者健康乃至生命的主要原因。因此研究 肿瘤侵袭和转移的规律及其发生机制，对恶性肿瘤的防治有重要意义。 肿瘤转移是指恶性肿瘤细胞从原发部位侵入淋巴管、血管或体腔，至靶组织或靶器官， 长出与原发瘤不相连续而组织学类型相同的肿瘤。前者称为原发瘤，后者称为转移瘤或继发 瘤。 图 1 肿瘤转移示意图 根据肿瘤异质性理论，大多数恶性肿瘤初虽属单克隆起源，但它在不断增殖演进至 临床明显的肿瘤时，由于瘤细胞遗传性状的不稳定性(来自基因突变或缺失等)而不断地变 异，造成该肿瘤内瘤细胞亚群表型的多样性，诸如瘤细胞的侵袭性、生长速率、转移能力， 核型乃至对激素的反应性和抗肿瘤药物的敏感性等，这些瘤细胞亚群具有被此不同的特性即 所谓异质性。异质性与肿瘤转移直接有关的就是癌细胞的转移潜能，癌细胞的转移潜能有高 低之分，具有高转移潜能的筋细胞易发生转移。 肿瘤细胞的运动性，来源于细胞运动“接触抑制”的概念。通过体外培养正常和恶性结 缔组织细胞，发现正常纤维母细胞在移动过程中引起的皱栖脑膜与其他细胞的表面接触时， 往往产生细胞膜活动的抑制和移动中细胞的缩短，然后停止。当纤维母细胞生长过程中在培养皿上融合形成一单层时，细胞运动即显著受到抑制。间变的肉瘤细胞则缺乏接触抑制，瘤 细胞的运动不会被正常纤维母细胞所抑制。 针对肿瘤转移这一复杂的过程，人们研制了各种抗转移药物，如血小板凝集抑制剂、血 管生成抑制因子、内皮稳定因子、干扰素－α 以及其他化学药物。 细胞划痕法是测定了肿瘤细胞的运动特性的方法之一。其借鉴体外细胞致伤愈合实验模 型，在体外培养的单层细胞上，划痕致伤，然后加入药物观察其抑制肿瘤细胞迁移的能力。 下图即为划痕实验的示意图，图中可见，在细胞层上出现一道空痕（A），当加入药物后，
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细胞周期测定实验
作者：德尔塔 日期：2022-04-01
细胞计数法： 实验方法原理 体外培养细胞 生长、分裂繁殖的能力，可用分裂指数来表示。它与生长曲线 有1定的联系，如随着分裂指数的不断提高，细胞也就进入了指数生长期。 分裂指数指细胞 群体中分裂细胞 所占的百分比，它是测定细胞 周期的1个重要指标，也 是不同实验研究选择细胞的重要依据。 实验材料 细胞 试剂、试剂盒 胰酶 甲醇 培养液 冰醋酸 Giemsa 染液 仪器、耗材 CO2 培养箱 普通显微镜 培养皿 盖玻片 吸管 实验步骤 1、消化细胞 ，将细胞 悬液接至内含盖玻片的培养皿中。 二、CO2 培养箱中培养 48 小时，使细胞长在盖片上。 三、取出盖片，按下列顺序操作： PBS 漂洗 3 分钟→甲醇：冰醋酸=3：1 固定液中固定 30 分钟→Giemsa 液染色 10 分钟→ 自来水冲洗。 四、盖片晾干后反扣在载玻片上，镜检。 五、计算 分裂指数=分裂细胞 数/总细胞 数×100% 展开 注意事项 1. 操作时动作要轻，以免使盖片上的细胞脱落。 其他 1、Giemsa 染液配制 称 Giemsa 粉末 0.5 g，加几滴甘油研磨，再加入甘油（使加入的甘油总量为 33 ml）。56℃ 中保温 90-120 分钟。加入 33 ml 甲醇，置棕色瓶中保存，此为 Giemsa 原液。使用时按要求用 PBS 稀释。1般稀释 10 倍。 BrdU 参入法 实验方法原理 细胞周期指细胞1个世代所经历的时间。从1次细胞分裂结束到下1次分裂 结束为1个周期。细胞周期反应了细胞增殖速度。 单个细胞的周期测定可采用缩时摄影的方法，但它不能代表细胞群体的周期，故现多采用其 他方法测群体周期。 BrdU（5-溴脱氧尿嘧啶核苷）加入培养基后，可做为细胞 DNA 复制的原料，经过两个细 胞周期后，细胞中两条单链均含 BrdU 的 DNA 将占 l/2，反映在染色体上应表现为1条单 体浅染。如经历了三个周期，则染色体中约1半为两条单体均浅染，另1半为1深1浅。细 胞如果仅经历了1个周期，则两条单体均深染。计分裂相中各期比例，就可算出细胞周期的 值。 实验材料 细胞 试剂、试剂盒 BrdU 甲醇
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NCI-N87细胞/ NCI-N87人胃癌细胞 培养步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-01
NCI-N87细胞/ NCI-N87人胃癌细胞 培养步骤 产品名称：NCI-N87细胞 中文名称：人胃癌细胞；NCI-N87 规格：T25 形态特征：NCI-N87细胞表达表面糖蛋白癌胚抗原(CEA)和TAG72,并且没有左旋多巴胺脱羧酶(DDC)活性。它们的血管活性的肠肽(VIP)受体活性极低并缺乏胃泌激素受体。它们表达蕈毒碱胆碱受体。没有证据表明存在N-myc,L-myc,myb和EGF受体基因的重组。这个细胞株表达的c-myc和c-erb-B2RNA水平与其它细胞株相当。以下基因不表达:N-myc,L-myc,c-cis,IGF-2,或胃泌激素释放肽。报道NCI-N87细胞的植板率为4.3%。 生长状态：上皮细胞样 特征特性：贴壁生长 培养条件：RPMI1640+10%FBS (推荐HAKATA优等胎牛血清货号：HN-FBS-500） 传代方法：消化15-20分钟。1:2。4-5天长满。 冻存条件：HAKATA ® 无血清细胞冻存液 货号：H-W-100 规格：100ML 支原体检测：阴性 使用权限：A类 参考文献：Amelogenin：X，Y；CSF1PO：8,12；D13S317：8,11；D16S539：9，13；D18S51：17；D19S433：14,14.2；D21S11：30；D2S1338：23，24；D3S1358：14；D5S818：12,13；D7S820：10,11；D8S1179：14；FGA：20,21；TH01：9；TPOX：9,11；vWA：15，16； 供应商：上海慧颖生物科技有限公司 复苏周期：10个工作日左右 培养步骤： 1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 1、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法： 1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回
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RKO细胞| RKO人结肠癌细胞（低分化 处理方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-01
RKO细胞| RKO人结肠癌细胞（低分化 处理方法 素冉生物依托同济大学，上海市东方医院，上海市di一妇婴保健院供应人脐带间充质干细胞，人脂肪干细胞，无血清细胞冻存液，IPS功能性细胞，HUVEC细胞，各类细胞株细胞系，所有人源细胞均STR鉴定后入库。并供应各类血清，培养基，胰酶，双抗，完全培养基等。 产品名称：RKO细胞 中文名称：人结肠癌细胞（低分化 规格：T25瓶 形态特征：上皮样 生长状态：贴壁生长 是否STR鉴定： 培养条件：DMEM(高糖）+10%FBS（推荐HAKATA优等胎牛血清 货号：HN-FBS-500） 传代方法：消化3-5分钟。1:2。3天内可长满。 冻存条件：HAKATA ® 无血清细胞冻存液货号：H-W-100 规格：100ML 支原体检测：阴性 使用权限：A类 参考文献：Amelogenin：X,X；CSF1PO：8,10；D12S391：15,20；D13S317：8,11；D16S539：13,13；D18S51：11,12；D19S433：14,14；D21S11：27,30；D2S1338：16,16；D3S1358：16,19；D5S818：11,13；D6S1043：14.1,19；D7S820：8,10；D8S1179：9,13,14；FGA：20,21,22,23；Penta E：11,13；TH01：6,10；TPOX：11,11；vWA：16,22； 复苏周期：10个工作日左右 培养步骤： 1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 1、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法： 1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。 3.轻轻吹打细胞，完全脱
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Caco2细胞| Caco2人结肠癌细胞 处理方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-01
Caco2细胞| Caco2人结肠癌细胞 处理方法 素冉生物依托同济大学，上海市东方医院，上海市di一妇婴保健院供应人脐带间充质干细胞，人脂肪干细胞，无血清细胞冻存液，IPS功能性细胞，HUVEC细胞，各类细胞株细胞系，所有人源细胞均STR鉴定后入库。并供应各类血清，培养基，胰酶，双抗，完全培养基等。 产品名称：Caco2细胞 中文名称：人结肠癌细胞 规格：T25瓶 形态特征：上皮样 生长状态：贴壁生长 是否STR鉴定： 培养条件：RPMI1640+10%FBS（推荐HAKATA优等胎牛血清 货号：HN-FBS-500） 传代方法：1：2传代 冻存条件：HAKATA ® 无血清细胞冻存液货号：H-W-100 规格：100ML 支原体检测：阴性 使用权限：A类 参考文献：Amelogenin：X；CSF1PO：11；D13S317：11，13，14；D16S539：12，13；D18S51：12；D19S433：15；D21S11：30，32；D2S1338：17，19.2，25；D3S1358：14，17；D5S818：12，13；D7S820：11，12；D8S1179：12，14；FGA：19；TH01：6；TPOX：9，11；vWA：16，18； 复苏周期：10个工作日左右 培养步骤： 1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 1、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法： 1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。 3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。 4. 按5-6ml/瓶
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研究发现外泌体外排的APOBEC3能够增强相邻细胞的抗病毒能力
作者：德尔塔 日期：2022-04-01
乙型肝炎病毒(human hepatitis B virus，HBV)是引起人类乙型肝炎的病原体，能引起急慢性肝炎、肝硬化、肝癌等多种临床疾病，是我国常见的病毒性肝炎。虽然目前有HBV疫苗，但对慢性HBV感染仍无有效**手段。HBV感染仍然是世界性的严重公共卫生问题。缺乏合适的HBV感染动物模型是研究发病机制和研发药物及疫苗的瓶颈。 树鼩是灵长类动物亲缘关系较近的新型实验动物，有研究发现HBV可感染树鼩，也能检测到乙肝表面抗原和e抗原(HBsAg和HBeAg)。基于树鼩对HBV的易感性，发现鉴定出HBV功能受体——钠离子-牛磺胆酸共转运蛋白(sodium taurocholate cotransporting polypeptide， NTCP)，为新药研发提供了重要**靶点。但HBV对成年树鼩的感染率较低以及难以形成持续性感染等缺点限制了该模型的推广应用。 宿主限制因子是限制病毒跨种传播和模型建立的主要原因之一。宿主限制因子APOBEC3家族成员能够通过胞嘧啶脱氨基作用导致病毒基因组突变来抑制病毒的复制。 在中国科学院昆明动物研究所研究员郑永唐的指导下，博士研究生罗梦婷对树鼩APOBEC3家族基因序列特征、进化、表达和抗HBV作用及机制进行了研究。*鉴定发现，树鼩有5个APOBEC3基因家族成员，分别为APOBEC3A，-3C，-3F，-3G，-3H，也命名为A3Z1a、A3Z2a-Z2b、A3Z2d-Z2e、A3Z2c-Z1b、A3Z3。 树鼩A3Z1的2个基因和A3Z2的5个基因分别独立进化而来，并且在免疫器官中表达较高。树鼩APOBEC3A和APOBEC3H能够形成同源二聚体。干扰素和HBV感染刺激能够上调树鼩APOBEC3家族基因的mRNA表达水平，提示树鼩APOBEC3可能有限制HBV复制的能力。 随后在树鼩原代肝细胞中发现，使用干扰素后确实能够限制HBV在树鼩原代肝细胞中的复制水平，cccDNA指标甚至能够下降至与使用拉米夫定阳性药物相似水平。同时检测到干扰素刺激树鼩原代肝细胞后APOBEC3家族表达上调。体外实验验证，除A3Z2d-Z2e外，树鼩APOBEC3能够通过其基因编辑作用以及非编辑作用，在体外发挥较强抗HB
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研究发现神经系统中细胞死亡模式的改变能促进新型神经元群体进化产生
作者：德尔塔 日期：2022-04-01
近日，来自弗朗西斯克里克研究所等机构的科学家们通过研究发现，在大脑生长过程中预防神经元的死亡，意味着这些“僵尸”细胞可以发展成为功能性的神经元细胞。 在大脑发育过程中，大量神经元会自我破坏作为移除过量细胞的一种必要调节性机制，在大脑的特定区域，细胞凋亡（细胞）会影响大约50%的神经元的功能；研究人员通过对黑腹果蝇进行研究后发现，通过阻断阻断这些细胞死亡，其后来就会发育出新型的神经元网络，而且其作用和性质与现有的神经元并不相同。 研究人员对果蝇嗅觉系统中的神经元细胞凋亡的后阶段进行了遗传性地抑制，他们发现，被救援的僵尸细胞会发育称为功能性的嗅觉神经元细胞从而帮助果蝇进行嗅觉的检测，然而，这些僵尸神经元要比标准的相同细胞表达不同的嗅觉感受器，比如，在嗅觉器官下颚须中发现的某些僵尸细胞就拥有能检测二氧化碳的受体，昆虫就能利用这一线索来感知动物或人类的存在（当其呼吸时能够吸附二氧化碳来感知）；这些额外的神经元还能够给予果蝇与冈比亚按蚊相似的特性，但与果蝇不同的是，冈比亚按蚊的下颚须中含有二氧化碳感知的嗅觉神经元。这两种物种拥有一个大约生活在2.5亿年前的共同祖先。 当正常状况下会发生死亡的神经元被保护免于细胞凋亡时，其就会发育称为僵尸神经元，从而拥有与蚊子体内特定神经元相类似的特性，因此，细胞凋亡是一种特殊的因子，其能帮助蚊子和果蝇随着时间延续不断适应不同的环境。 从进化学的角度来看，研究结果表明，神经系统中细胞死亡模式的改变或能使得一个物种适应来自新环境的新压力，从而就能促进具有新型结构和功能特性的神经元群体得以进化产生。虽然研究人员并没有详细研究携带更多嗅觉神经元的果蝇的行为，但从理论上来讲，这种增加会使其以更高的灵敏性来感知气味，这或许有助于其寻找伴侣、食物并感知危险，因此相比其它个体而言，这或许就是一种特殊的优势了。
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