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常见缓释微球的制备方法和对应工艺设备介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
缓释微球的制备方法 缓释微球是指药物溶解或分散在高分子材料基质中形成的粒径尺寸大小分布在 5～250 μm 之间的球状实体，利用缓释微球开发新型的给药系统逐渐成为科学界及工业界关注的焦点，理想的缓释微球制剂的性质由活性物质、乳化技术以及聚合物材料三者共同决定。微球的制备关键在于不仅要保持药物原有的活性，还需要药物包封率高、微球粒径均一、制备工艺重复性好，因此在制备微球时，不仅要非常了解药物自身的理化性质，还要非常熟悉常用辅料的性质及乳化工艺技术。本文详细介绍了常见几种缓释微球的制备方法和对应的工艺设备。 1、缓释微球制剂的材料选择 目前微球制剂材料可大体分为两类:天然来源的聚合物和人工化学合成的聚合物。天然来源的聚合物价格低廉且来源广泛，可分为多糖和蛋白质类等，如葡聚糖、壳聚糖、海藻酸盐、淀粉、明胶、白蛋白等，天然来源的聚合物对纯化有着较高的要求，当作为微球辅料用于大批量生产时较难保持批次间严格的质量标准。常用的化学合成聚合物可分为聚酯、聚酸酐、聚磷腈、聚酰胺、聚磷酸酯等，其优点是可以通过人为控制聚合制备工艺，来保证药用辅料级别的质量，当作为载药微球的骨架材料时，聚合物材料还可以通过改变黏度及分子量等参数，灵活地控制载药微球的降解速度，以调节所包埋药物的释放速率。另外对聚合物材料或微球表面进行特异性修饰能使微球具有主动靶向性，精准定位到病灶区域或改变释放行为，因此化学合成的聚合物是微球研究及生产原料的主要来源。 2、微球的制备方法 微球的制备方法很多，常用的有乳化—溶剂挥发法、喷雾干燥法、相分离法、超临界流体沉积法和热熔挤出研磨法等，可根据药物的性质、制备微球的目的选择合适的方法。 2.1乳化溶剂挥发法 使用 PLGA 作为载体制备微球，乳化—溶剂挥发方式是最常用的，乳化溶剂挥发法包括单乳法和复乳法，适用于亲脂性药物，用水包油（O/W）方法进行制备，具体方法①根据药物的物理性质选择相应的
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淀粉样蛋白沉积和致病标志物周围细胞网络失调的揭示
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
近日，Cell 在线发表的论文 “Spatial Transcriptomics and In Situ Sequencing to Study Alzheimer’s Disease” 中，研究团队在 AD 小鼠模型中，利用空间转录组学研究淀粉样斑块周围直径 100 μm 的组织结构域的转录变化，证明了丰富的髓鞘和少突胶质细胞基因 (OLIGs) 的基因共表达网络的早期改变，而斑块诱导基因 (PIGs) 的多细胞基因共表达网络涉及补体系统、氧化应激、溶酶体和炎症，在疾病的后期表现突出。研究人员通过对小鼠和人脑切片的原位测序，证实了细胞水平上观察到的大部分变化。全基因组空间转录组分析提供了一个新的方法，以揭示 AD (淀粉样蛋白沉积) 和其他脑疾病的致病标志物周围的细胞网络失调。 研究背景 淀粉样斑块与神经变性过程的关系是 AD 研究中的一个核心问题。自从“淀粉样蛋白沉积”的病理现象被发现后，一个世纪以来，科学界展开了大量的研究，直到现在这种现象与 AD 疾病发展之间的关系仍未明了。已知： 1、淀粉样斑块可能起 AD 的触发或驱动作用。 2、散发性 AD 的风险与小胶质细胞中响应淀粉样蛋白沉积的基因表达相关，星形胶质细胞、神经元和少突胶质细胞也表现出对淀粉样斑块的分子反应。 3、在 AD 中，将神经元、各种神经胶质细胞分离再检测胞质 mRNA 结果并不理想，还可能人为的影响表达图谱，导致大多数空间信息的丢失，包括细胞和淀粉样斑块的关系。空间条形码阵列 (Spatially barcoded arrays) 支持进行组织中无偏倚的转录组分析，维持已测序分子的空间定位。 Bart De Strooper 和 Mark Fiers 研究团队通过一种开创性技术来具体研究斑块附近的脑细胞中发生的变化。 图 1. 研究概要图 文章概要 在小鼠和人脑样本中，该研究结合空间转录组法和原位测序的实验方法，显示了 AD 中的多细胞基因共表达网络。研究团队鉴定了两个由淀粉样斑块沉积诱导表达网络，一个是斑块诱导基因 (PIG) 网络，主要涉及小胶质细胞和星形胶质细胞；另一个是少突胶质细胞基因 (O
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实验室如何实现安全管理及规范操作？
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
实验室安全管理工作不仅关系到科研、教学工作的顺利进行，也关系到实验人员的生命安全。大家都知道实验室多用于分析化验、产品检验，和教学、科研、小试等。其特点就是化学药品、实际种类繁多，数量相对较少，分析仪器较多，如离心机、灭菌锅等实验设备，且涉及气体钢瓶，如气相色谱用到的空气、氮气、氢气、氩气、氦气等，液相色谱测定用到的流动相，如甲醇、乙腈等，都是属于危险化学品。由于人为或者自燃的原因，引起化学品的泄漏、污染、爆炸造成的事故称为化学事故。据统计，实验室发生的化学事故占整个实验室事故中的大部分比例。 7月27日，广东某大学发生一起实验安全事故，称实验室在清理此前毕业生遗留在烧瓶内的未知白色固体，一博士生用水冲洗时发生炸裂。炸裂产生的玻璃碎片刺穿该生手臂动脉血管。随后，该生已经被送到医院救治。目前，伤情已经得到控制，无生命危险。 7月24日上午，江西省吉安市吉水县一玻璃厂化学实验室发生爆炸。据悉，该爆炸由于化学实验室实验员操作不当所致，引发了气流冲击，造成了小范围的爆炸，事故最终造成一人死亡一人轻伤。 暑期至，高校实验室改造、调整与搬迁、教师和学生尤其是研究生开展科学研究与创新创业活动等相对集中，因而会进入到或企业或工厂的实验室参与研究，面对不熟悉的环境和实验操作，大家一定要时刻注意安全。那么实验室该怎么进行安全管理及规范操作！ 一、推行网格化管理 各高校要健全学校、二级单位、实验室三级联动安全责任体系，进一步明确各级职责和各实验室安全责任人，并签订责任书，建立网格化管理清单，构建“横向到边、纵向到底、全面覆盖，分级管理、层层履责”工作体系。 二、坚持常态化检查 各高校要坚持日常检查和不定期抽查相结合，暑期重点检查开放式实验室。学校层面检查不少于2次，学院层面检查每周不少于1次，各实验室责任人每天要开展例行检查；各级检查记录要留档备查，及时消除隐患。 三、严格准入制度 各高校要严
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肝炎病毒的分类和诱发肝癌的作用机制
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
肝炎病毒分类 肝炎病毒是世界上最常见的肝炎病因，其它原因包括酗酒、某些药物、毒素、其他感染、自身免疫性疾病和非酒精性脂肪性肝炎 (NASH)。肝炎病毒共有五种主要的肝炎病毒株，分别为 A、B、C、D 和 E 型。目前，全世界大约有 3.25 亿人患有乙型和/或丙型肝炎。 ■ 甲型肝炎病毒 (Hepatitis A virus, HAV) 通过摄入被污染的食物、水或者感染者直接接触传播。甲型肝炎不会引起慢性肝病，并且很少致命，但它能引起致命的衰弱症状和暴发性肝炎 (急性肝衰竭)。 ■ 乙型肝炎病毒 (Hepatitis B virus, HBV) 传播途径包括母婴传播，血液、体液传播，破损皮肤粘膜以及性传播。HBV 会侵袭肝脏并导致急性和慢性疾病，使患者肝硬化和肝癌发生风险升高。在成年人中，慢性感染的者有 20–30% 会发展为肝硬化和/或肝癌。 除乙型肝炎病毒遗传物质为双链 DNA 外，其他类型病毒均为单链 RNA。 ■ 丙型肝炎病毒 (Hepatitis C virus, HCV) 主要是血液传播，其他少见的传播方式有性传播、母婴传播，不会通过母乳、食物、水或与受感染者拥抱，亲吻和共享食物或饮料等偶然接触传播。大约有 30% 的感染者在感染后 6 个月内自发清除了病毒，其余 70% 的人会发展成慢性 HCV 感染。在慢性 HCV 感染者中，在 20 年内肝硬化的风险介于 15% 和 30% 之间。抗病毒药物可治愈 95% 以上的丙型肝炎感染者，从而降低肝硬化和肝癌死亡的风险。 ■ 丁型肝炎病毒 (Hepatitis D virus, HDV) 传播途径与 HBV 相同，通过与受感染的血液或血液制品接触而经皮或性传播。HDV 的复制依赖于 HBV 。HDV-HBV 共同感染被认为是最严重的慢性病毒性肝炎，因为共同感染加速疾病的进程，加快肝细胞癌的发展。 ■ 戊型肝炎病毒 (Hepatitis E virus, HEV) 主要通过受污染的水 (粪口途径) 传播。通常 HEV 感染是自限性的，即可在 2-6 周内消退，但也可能会诱发暴发性肝炎 (急性肝衰竭)，并导致死亡。 HBV 与 HCV 的结构与感染机制参见往期：典型传染病的
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柱层析法与沉淀法精制蛋黄卵磷脂的生产工艺区别
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
你知道柱层析法与沉淀法精制蛋黄卵磷脂有何区别吗？本编文章就由AVT小编来给大家讲解一下蛋黄卵磷脂的生产工艺的区别吧！ 精制蛋黄卵磷脂的生产工艺目前主要有柱层析法、沉淀法。 柱层析法是一种常见的传统的分离方法，它以填料选择多样性以及分离效果的优越性，成为蛋黄卵磷脂主要的分离手段之一。柱层析的填料主要有树脂、硅胶以及氧化铝。 沉淀法提纯卵磷脂又分为溶剂法、金属离子法，溶剂法提纯优于金属离子法，是先用于卵磷脂提纯的技术；金属离子沉淀法主要是利用金属离子与卵磷脂的特异性结合实现的。 除以上所述，近几年热门的生产工艺还主要有膜分离法、超临界二氧化碳法、酶法等，但是由于成本较高、对仪器设备要求高等因素，暂未得到广泛应用。 精制蛋黄卵磷脂的生产工艺多种多样，尤其近几年新兴的工艺增加了精制蛋黄卵磷脂的提取率，但是，广使用和实际生产应用性的还是有机溶剂萃取法。不过，溶剂萃取法适合粗提，但是在溶剂萃取法的基础上加入一些新技术辅助，如微波辅助、超声波辅助等辅助萃取磷脂，可提高溶剂提取的效率。 另外一种重要的提纯分离方式，柱层析法，该法虽然可得到含量在90%左右的高纯度磷脂酰胆碱，但是柱层析法分离周期长，负载量低，而且要用到许多有一定毒性的有机溶剂，产品中易有溶剂残留都是这种方法的缺点。 近几年的热门方法—超临界二氧化碳法，提纯蛋黄卵磷脂的萃取率可高达89.2%，虽然超临界萃取技术需要条件较高，但是因其简单高效、无毒无害等完全符合当前绿色环保技术的发展趋势，也是蛋黄卵磷脂生产的一个发展方向。 了解更多磷脂辅料的相关信息欢迎访问我们的官方网站（avt-avt.com）或拨打我们的400官方电话（400-6262-623）！
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MeRIP-qPCR方法原理、结果含义、展示方法及应用细谈
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
m6A等RNA修饰的主要研究手段是通过MeRIP方法对发生修饰的片段进行富集，其后进行高通量测序分析修饰位点。而无论是一篇仅展示修饰位点分布特点的谱学文章，还是深入研究修饰调控基因表达机制的文章，在高通量测序这一步之后，通常都需要对筛选出来的部分修饰位点进行低通量的MeRIP-qPCR验证。这个实验说来简单却必不可少，对于刚刚接触RNA修饰研究的小伙伴来说，可能会对MeRIP-qPCR的方法原理、结果含义、展示方法等有一些疑问，而看文章中又常常是几句话带过，无法解答心中的困惑，看过仍然对自己手里的数字一头雾水。这次我们就在这里详细谈一谈MeRIP-qPCR相关问题。 1.MeRIP-qPCR的目的是什么？ 首先我们需要明确的是，MeRIP-qPCR的目的是验证某个目标基因上的某个修饰位点（以一小段区域的形式，MeRIP法精确不到单碱基）的修饰水平。 得到的结果往往是一个%（IP/Input）的数值，它体现的是该位点的修饰水平（可以大致理解为：这个转录本表达了很多条，其中百分之多少是这个位点有修饰的？）需要与普通qPCR验证基因表达水平（可以大致理解为：这个转录本表达了多少条？）的目的区分开。 2.MeRIP-qPCR的实验方法？ MeRIP-qPCR就是MeRIP实验后进行一个qPCR。 这里的MeRIP实验同MeRIP-seq测序中的其实相同：对RNA进行片段化。然后每个样品一分为二，一部分片段用针对该修饰的特异性抗体与RNA片段进行免疫共沉淀(IP)，留为IP样品，另一部分不进行IP直接留作Input样品。之后对两部分RNA片段分别进行逆转录和qPCR。如果是测序，就是在这里把紧接的qPCR改为接建库测序。 3.MeRIP-qPCR引物如何设计？ 由于目的是定量位点的修饰水平，因此MeRIP-qPCR的引物不仅是针对目标基因，还要是针对其上的那个修饰位点（区域）。这个位点信息可以从： （1）MeRIP-seq的测序结果中筛选得来 通常是一段位置坐标，比如云序生物提供的MeRIP-seq结果，某个甲基化峰位置如：chr1:111234-111567。有了这个位置信息，可以去UCSC genome b
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平行生物反应器的界定及其与多联反应器的区别
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
平行生物反应器的界定 摘要 “平行性”是衡量平行生物反应器性能的综合指标，其硬件基础是如泵、阀门等执行元件及仪表、变送器等检测元件的稳定性(stability)和一致性(consistency)，以及控制系统的鲁棒性(robustness)。平行生物反应器的核心功能是实验设计(DoE)和高通量筛选（high-throughput screening），使用过程中会产生大量的数据。因此平行生物反应器必须配备具有强大数据管理系统（data management system）。同时，操作平行生物反应器工作量巨大，容易出错，平行生物反应器所配套的软件必须高度的自动化与智能化。软、硬件的结合是平行生物反应器的灵魂，是平行生物反应器与多个独立反应器联用的根本区别。 引言 合成生物学技术的蓬勃发展使构造新的菌种和细胞系越来越容易，但要在大量的候选者中选出最适合工业化生产的一个却非常困难的。这是因为，作为一个生命体，无论是微生物还是细胞，其表现出来性能都是生物本身与环境相互作用的结果。实验室常用的筛选工具如孔板，摇瓶等，受其尺寸限制，无法做到与工业规模反应器相似的混合、传质、剪切等特性。使用不合适的设备进行菌种筛选和工艺研发，经常会造成错选不适合大规模生产的突变体而漏选真正有潜力的菌种。橘生淮南则为枳，千里马常有而伯乐不常有。这一问题的潜在损失无法估量。然而，使用常规台式反应器进行菌种与培养基筛选或者工艺优化，需要分多次配置培养基、灭菌、接种、诱导等等，甚至会涉及到不同的操作者。这些操作条件以及实验人员的经验与水平乃至工作态度之间的差异，使从常规台式反应器上得到的数据可靠性大打折扣。即便是在最优的假设下，常规台式反应器的最多只能进行对照实验，进行定性或者半定量的比对，而不能胜任实验设计(Design of Experiments)这种定量的研究。这其中有硬件和软件的原因，本文将分别介绍。为了方便讨论，本文中我们可能偶尔会笼统将“生物反应器”称为“发酵罐”，但讨论的内容也适用于细胞培养。 图1 单罐与平
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木质素含量检测试剂盒微量检测方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
产品内容： 试剂一：液体 34mL×1 瓶，4℃保存。每次用完用封口膜密封保存。试剂二：液体 30mL×1 瓶，4℃保存。 微量法 标准品：粉剂×1 支，50mg 木质素，4℃保存。临用前加入 1mL 高氯酸，充分混匀溶解，配成50mg/mL 的标准液。 产品说明： 木质素是构成植物细胞壁的成分之一，具有使细胞相连的作用。木质素存在于木质组织中，主要作用是通过形成交织网来硬化细胞壁，为次生壁主要成分。 木质素中的酚羟基发生乙酰化后在 280nm 处有特征吸收峰，280nm 的吸光值高低与木质素含量正相关。 试验中所需的仪器和试剂： 紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量石英比色皿/96 孔 UV 板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、玻璃管、封口膜、高氯酸、冰乙酸和蒸馏水。 操作步骤： 一、样品处理： 样品 80℃烘干至恒重，粉碎，过 40 目筛，称取约 3mg 于 1.5mLEP 管中。 二、测定步骤： 1、分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 280nm，冰乙酸调零。 2、操作表：在玻璃管中依次加入下列试剂： 测定管 标准管 空白管 样品（mg） 3 - - 试剂一（µL） 300 300 300 高氯酸（µL） 12 - 12 标准液（µL） - 12 - 封口膜密封，充分混匀。于 80℃水浴锅水浴 40min，进行乙酰化。每隔 10min 震荡一次， 然后自然冷却。 试剂二（µL） 300 300 300 充分混匀后于常温 8000g 离心 10min，取上清。 上清液（µL） 12 12 12 冰乙酸（µL） 588 588 588 测定 280nm 下的吸光值 A，记为 A 测定管、A 空白管、A 标准管，计算△A=A 测定管-A 空白管、△A 标准=A 标准管-A 空白管。 三、木质素含量计算： C 标准=C 原液×V 标准÷V 乙酰化×V 上清÷V 检测=0.0196 mg/mL 木质素（mg/g）= △A÷（△A 标准÷C 标准）×V 检
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甲基转移酶 SETD2 抑制前列腺癌转移机制
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
近日，中国科学院上海营养与健康研究所秦骏课题组与陆军军医大学大坪医院江军主任、南京医科大学王晓明教授的合作在 Cancer Cell 在线发表了题为 “SETD2 Restricts Prostate Cancer Metastasis by Integrating EZH2 and AMPK Signaling Pathways” 的研究，揭示了 H3K36 甲基转移酶 SETD2 通过底物 EZH 限制前列腺癌的转移的分子机制。 图 1. 文章概要图 EZH2：负责 H3K27me3 修饰的组蛋白甲基转移酶。H3K27me3 的修饰使基因沉默，使细胞获得侵袭性特征。 SETD2：催化 H3K36me3 的主要甲基转移酶。SETD2 通过组蛋白 H3K36 的甲基化来调节基因组不稳定性、RNA 加工和基因内转录起始。 图 2. 文章亮点 SETD2 在限制前列腺癌发展中发挥重要作用 为了探索 SETD2 在前列腺癌 (Prostate cancer, PCa) 的潜在重要性，H3K36me3/SETD2 和 H3K27me3/EZH2 的抑癌基因 Pten 缺失小鼠或同时缺失抑癌基因 Trp53 小鼠对比 (Pten-/- vs Pten-/-;Trp53-/-) ，H3K27me3 和 EZH2 水平与小鼠肿瘤进展呈正相关，且同时缺失的表达量更高。重要的是，H3K36me3/SETD2 和 H3K27me3/EZH2 在小鼠前列腺组织中是互斥的。进一步地，通过 qRT-PCR 检查前列腺肿瘤中 SETD2 表达，公共数据集分析 SETD2 表达与疾病复发关联性，以及类器官 SETD2 沉默与过表达实验，综合表明 SETD2 在限制 PCa 进展中发挥重要作用。 图 3. SETD2 在限制 PCa 的发展中发挥重要作用 另外，前列腺上皮 SETD2 缺失的小鼠病变情况观察结果表明，仅 Setd2 基因丢失不足以驱动 PCa。对比 Pten+/- 与 Pten+/- ;Setd2-/- 中前列腺肿瘤发展情况，结果表明：Pten 基因缺失时， SETD2 的失活促进前列腺癌转移。 SETD2 缺失诱导的 PCa 转移依赖 EZH2 活性的增加 Pten+/- 和 Pten+/-;Setd2-/- 类器官转录组分析发现，与 EZH2 和 H3K27me3 信号转导相关的特征显着丰富，通过 qRT-PCR、组织学和 ChIP-seq 等实验分析 SETD2 缺失与 EZH2 蛋白和 H3K27m3 水平的
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HIV 衣壳蛋白有望成为 HIV **新靶标
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
目前，针对 HIV 的致病机制，已获批准上市的抗 AIDS 药物共分为六大类：非核苷类逆转录酶抑制剂 (NNRTIs)、核苷类逆转录酶抑制剂 (NRTIs)、整合酶抑制剂 (INSTIs)、蛋白酶抑制剂 (PIs)、病毒成熟抑制剂 (MIs) 和辅助受体 CCR5 抑制剂。目前还没有获批上市的 HIV-1 衣壳蛋白抑制剂。 常见的 HIV 感染**方案是将两种 NRTI 与 PI、NNRTI 或 INSTI 结合的联合抗逆转录病毒疗法 (cART)。这种疗法非常有效，可以延长预期寿命和减缓艾滋病的传播。然而，cART 并不能治愈患者，且存在一些风险，例如停止**导致的病毒载量迅速反弹，病毒耐药性的出现，以及长期**的副作用影响预期寿命。因此，仍然需要研发具有优良特性的新药和探索新的靶点。 近日，Nature 上关于 HIV 的最新研究“Clinical Targeting of HIV Capsid Protein With a Long-Acting Small Molecule”引起了广泛的关注，该研究证明了 HIV 衣壳蛋白长效抑制剂 GS-6207 具有**或预防 HIV 感染的潜力。 图 2. 靶向 HIV 衣壳蛋白的长效小分子相关研究 衣壳蛋白的结构及作用 HIV 感染细胞时，病毒将其单链 RNA 基因组逆转录成双链 DNA，穿越细胞质并穿过核膜，然后整合到宿主染色体中 (HIV 感染和复制机制见往期：典型传染病的始作俑者——五大病毒及其靶向药物)。 下面我们以 HIV-1 为例，对 HIV 的衣壳蛋白及其作用进行介绍。 在成熟、具有感染能力的 HIV-1 中，病毒基因组位于一个由病毒衣壳蛋白 (Capsid protein, CA) 组成的圆锥形衣壳核心 (Capsid core) 内。衣壳核心由约 250 个 CA 六聚体和 12 个五聚体组装而成。CA 亚基又由两个结构域组成，即 N-端结构域 (NTD) 和 C-端结构域 (CTD)。在每个六聚体中，每个 CA 子单元都通过 NTD-NTD 接口和 NTD-CTD 接口相互连接 (图 3)。 图 3. HIV-1 衣壳蛋白的结构[7] a. Envelope, ENV：蛋白包膜 (ENV 糖蛋白复合物包含了 gp120 亚基和 gp41 亚基)；Matrix，MA ：Gag 多肽衍生蛋白基质；CA：衣壳蛋
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ELISA酶标板分类方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
酶标板(ELISA PLATE):在酶联免疫吸附试验(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)中, 参与免疫学反应的抗原、抗体、标记抗体或抗原的纯度、浓度和比例；缓冲液种类、浓度和离子强度、pH值和反应温度、时间等条件起着关键作用。酶标板分类：根据不同的分类标准，酶标板有着不同的分类。 一、根据孔数，可分为96孔、48孔等，由于酶标板主要是配合酶标仪用，目前市面上的酶标仪最多为96孔，因此酶标板最为常用的也是96孔。 二、根据其底部的不同，又分为平底的，u型底、v型底等。平底的折射率低，适于在酶标仪检测；u型底的酶标板折射率较高，方便加样、吸样、混匀等操作，可以不用放在酶标仪上，直接通过目测观察颜色变化情况，从而判定有无相应的免疫反应。v底的酶标板可以精确的吸取样品。 三、根据酶标板与蛋白和其它分子结合能力的不同，又分为高结合力、中结合力和氨基化等。 (1）、 高结合力 此种酶标板，表面经处理后，其蛋白结合能力大大增强，可达300~400ng igg/cm2，主要结合的蛋白分子量＞10kd。使用该类酶标板可提高敏感性，并可相对减少包被蛋白的浓度和用量，不足之处为较易产生非特异性反应。抗原或抗体包被后，以非离子去污剂无法有效地封闭未结合蛋白的部位，需使用蛋白作为封闭剂。 （2) 、中结合力 此类酶标板经表面疏水键被动与蛋白结合，适合作为分子量＞20kd的大分子蛋白的固相载体，其蛋白结合能力为200~300ng igg/cm2。由于该类酶标板所具有的仅与大分子结合的特性，适用于作为未纯化抗体或抗原的固相载体，可降低潜在的非特异性交叉反应。该类板可以惰性蛋白或非离子去污剂作为封闭液。 （3) 、氨基化 这种酶标板经表面改性处理后拥有带正电荷的氨基，其疏水键由亲水键取代。该类酶标板适合作为小分子蛋白的固相载体。使用合适的缓冲液和ph值，其表面可通过离子键与带负电荷的小分子结合。由于其表面的亲水特性和可通过其它交联剂共价结合的能力，可用于固定溶于triton-
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GAN饮食诱导的NASH小鼠的临床转化性
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
非酒精性脂肪肝疾病（non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）是一种在无大量饮酒的患者肝脏中出现过量脂肪堆积而产生的类似于酗酒造成的肝脏损伤。而非酒精性脂肪性肝炎（non-alcoholic steatohepatitis，NASH）是NAFLD 的一种形式，除了肝脏中过量的脂肪堆积外，还伴随着肝脏炎症和不同程度的肝脏损伤。尽管多数NASH患者并无明显症状，但NASH可能进一步发展为肝纤维化、肝硬化，甚至是肝癌。NASH在超重或肥胖的中年人群中比较常见，通常伴随着高血脂（胆固醇和甘油三酯水平升高）和糖尿病的出现。NASH发病机制复杂，目前还没有直接有效的药物，**方式主要是进行生活方式的干预，包括减轻体重、改变饮食、加强运动以及避免饮酒和服用不必要的药物等[1]。因此，建立可靠的动物模型对探索NASH的发病机制及**手段十分重要。 Henrik等人通过构建Gubra-Amylin NASH (GAN) 饮食诱导肥胖 (diet-induced obese，DIO) 小鼠模型（GAN DIO-NASH小鼠），在体内模拟NASH患者中的肝脏纤维化，并对该模型进行了临床转化性的评估[2]。 该研究使用含40%饱和脂肪、22%果糖和2%胆固醇的GAN饲料喂养C57Bl/6J小鼠38周以上，对代谢参数、血浆和肝脏的生物标志物进行了检测，同时，也对小鼠肝脏病理学特征和转录组特性进行了评估，并与体重正常的健康人和NASH患者进行了对比。 GAN DIO-NASH小鼠和NASH患者的肝脏组织具有相似的病理学特征和量变 NASH 的主要病理学改变包括脂肪变性（steatosis），肝细胞气球样变（ballooning degeneration）、小叶炎症（inflammation）和纤维化（fibrosis）。虽然肝纤维化实际上并不参与NAFLD活动评分（NAFLD activity score，NAS），但纤维化程度可以用于预后评估。 肝脏组织切片显示，GAN DIO-NASH小鼠与NASH患者在脂肪变性、炎症病灶和肝细胞气球样变上具有相似的形态学特征（图1）。在GAN DIO-NASH小鼠肝小叶中，肝细胞脂质堆积呈分散式分布，主要表现为大泡性脂肪变性（macrovesicular steato
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BCA蛋白定量法和Bradford蛋白定量法的优缺点对比
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
目前实验室里常用的蛋白定量的方法通常主要有三种： BCA蛋白定量、Bradford蛋白定量法和紫外分光法。 BCA 蛋白定量 的实验原理是在碱性条件下，H | NH2----C-COOH | R 将Cu²+还原为CU+与 BCA 结晶为紫色的化合物，再通过测定 562 nm波长OD值来判定还原剂的含量。 下列表分别对两种实验方法做以对比： 通过上表中的的对比，我们不难看出Bradford实验法的速度比较快，平常BCA 蛋白定量 的孵育时间大约30分钟甚至更长，而采用Bradford蛋白定量法则需要几分钟即可完成实验。 虽然其标准曲线的线性拟合程度不如BCA定量法，但它的二项式契合度却较高。 （下图显示为：二项式的标准曲线制作方法） 除此之外，Bradford 蛋白定量还有一个小小的缺陷，那就是它比较容易受高浓度的去垢剂影响，比如需要SDS的实验浓度低于0.01%，TRITON X-100的实验浓度低于0.005%等。 解决的办法是：使用与Bradford 兼容的去垢剂，从而匹配到相应的实验浓度即可。 Bradford蛋白定量实验虽然实验在制作二项式标线和公式计算较繁琐，但如果能成功破解以上三个问题，那么Bradford法对比BCA法来说还是有不少优势的，比如可以节省很多时间等。对于追求实验效率的实验员来说，熟练掌握Bradford实验法是个不错的选择。
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文献解读：南开大学团队揭示P-选择素结合肽修饰ADSC靶向修复血管损伤
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
南开大学领导的研究团队在《Advanced Science》杂志上发表题为“Targeted Repair of Vascular Injury by Adipose-Derived Stem Cells Modified with P-Selectin Binding Peptide”的论文，采用一种新颖的方法对脂肪来源的间充质干细胞进行修饰，从而实现血管损伤的靶向修复。 心血管疾病，包括冠状动脉阻塞，已成为人类健康的头号杀手。目前心血管疾病的主要**手段是经皮冠状动脉介入**（PCI），但这类手术易过度表达P-选择素，往往会造成病理性血管损伤。 因脂肪来源的间充质干细胞（ADSC）具有易于分离且能够自我更新的特性，现已成为组织工程和再生医学的主要细胞来源。不过，研究人员面临的难题是如何将细胞有效输送到感兴趣的组织。之前的一项研究表明，全身注射ADSC可以将其募集到受伤的血管，但ADSC缺乏与P-选择素结合的表面配体。因此，需要对ADSC进行修饰以增强其靶向能力。 DPP修饰 在这项研究中，研究人员将P-选择素结合肽（PBP）与聚乙二醇偶联的磷脂衍生物（DMPE-PEG）相结合，通过DMPE-PEG与磷脂双分子层之间的疏水相互作用将PBP插入ADSC细胞膜表面。 在对这种DPP（DMPE-PEG-PBP）修饰进行鉴定后，他们首先评估了修饰对ADSC行为的影响。结果表明，DPP修饰没有改变ADSC的基本功能。它既不影响ADSC的增殖，也不影响细胞凋亡和旁分泌细胞因子基因表达。 DPP-ADSC的靶向性 接着，研究人员评估了DPP-ADSC在体外和体内的靶向性。为了模拟血管损伤部位的P-选择素过表达，他们分别通过肿瘤坏死因子-α和二磷酸腺苷预处理来激活人脐静脉内皮细胞（HUVEC）和血小板。生物发光成像结果显示，5×10−6 M DPP修饰的ADSC（DPP-ADSC）与活化的HUVEC和血小板有着最强的结合。 在体内实验中，大鼠股动脉损伤诱导了P-选择素的管腔表达。为了评估DPP-ADSC的结合，他们注射了不同浓度的经过修饰的ADSC。与体外结果一样，5×10−6 M DPP-ADSC对富含P-选择素的损伤部位显示出最强的靶向结合能力。 DPP-ADSC修
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SMN1基因敲除小鼠与脊髓性肌萎缩症(SMA)的介绍与研究
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
脊髓性肌萎缩症（SMA）是一种具高致亡性、致残性的罕见病，被称为两岁以下婴幼儿的头号遗传病杀手。自1996年起，包括欧洲、美国、加拿大、澳大利亚等地在内的全球脊髓性肌萎缩症（SMA）群体将每年的8月定为SMA关爱月，并在这个月里举行各种疾病宣传活动，提升社会公众对SMA这一罕见疾病的了解，以及对SMA群体的关爱支持。 绝大部分SMA患者（95%）是因SMN1基因第7号外显子纯合缺失所致病，另外5%患者的致病因也与这一基因的第7号外显子有关。鉴于“7”这个数字对SMA的特殊意义，2018年北京市美儿SMA关爱中心倡导发起在原来国际普遍接受的8月为SMA宣传月的基础上，将8月7日定为国际SMA关爱日，提高各界社会公众对SMA患者的重视及关爱。今天的《Gene of the Week》就让我们一起了解SMA及其致病基因SMN1吧！ 图1. 国际SMA关爱日LOGO。这是由两条出现断裂的DNA螺旋结构组成数字“7”主图案，代表SMA主要是由致病基因上第7号外显子缺失所致。红蓝两主色分别代表了对SMA群体的持续关爱和对疾病的不懈探索研究。配合英文文字“World SMA Awareness Day”和国际化的设计风格构成了承载完整信息的“国际SMA关爱日”LOGO。 基因基本信息 表1. SMN1的基本信息 备注：标有√的意为赛业红鼠资源库有该种保存状态的小鼠 SMN1基因研究概况 运动神经元存活基因1（survival motor neuron gene 1, SMN1）编码与之同名的蛋白。该蛋白与人类遗传病脊髓性肌萎缩（Spinal Muscular Atrophy, SMA）密切相关，该疾病大多数情况下会导致新生儿2周岁之前死亡。SMN1的单拷贝失活（无症状）现象在亚洲人群中大约是1/50，这就造成了1/10000左右的新生儿发病率（不同人种地域的突变频率有所区别）。SMN1是剪接体的组成部分，剪接体复合物在小核糖核蛋白 (snRNPs)的组装中起着催化剂的作用，因此在pre-mRNA的剪接中起着重要的作用。从其命名就可以看出，该蛋白在维持运动神经元的生存方面不可或缺。 图2. SMN1结构。图中显示人类SMN1成熟的mRNA
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