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遗传疾病研究新方法介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-25
近日来自Texas University Austen的研究人员做了一个有趣的实验，他们向酵母细胞内插入我们人类的某片段基因，发现这些携带我们遗传物质的酵母菌株并没有死亡，而这可能预示着一种新的遗传病研究方法的诞生。 酵母细胞和我们人类在遗传信息上存在着一定的联系。这种以单细胞形式存在的真菌存在着许多与人类相似的地方，而当遗传物质发生互换后酵母细胞仍可以活下来。这项实验是由Texas University Austen的研究人员完成的，利用基因工程技术将人类DNA片段插入酵母菌株中，研究人员发现这些实验菌株仍保持正常的生命力。 酵母菌株经过上述操作后，就可以作为研究遗传疾病的实验对象，随着酵母的生长繁殖，研究人员可以跟踪研究这些遗传疾病的演化过程，同时这些酵母还可以用来进行医药的研发。研究表明我们疾病的发生与遗传有着密切的联系，有些基因片段的变异往往会导致某些疾病的发生。在后面的遗传疾病研究中通过结合酵母菌株的使用，我们可以更好地了解基因变异是如何影响我们人类健康的。
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靶向FGFR3胞外区域的人scFv抗体的筛选和活性研究
作者：德尔塔 日期：2022-04-25
靶向FGFR3胞外区域的人scFv抗体的筛选和活性研究 -Molecular Devices 成纤维细胞生长因子(FGF)是最大的一类中胚层和上皮细胞生长分化多肽因子家族。FGFs在许多生物学过程中发挥重要作用，比如胚胎发育，伤口愈合，血细胞生成及血管发生等。此外，已有研究表明FGFs可以增加多种肿瘤细胞的浸润性，如前列腺、膀胱、肾脏、乳房、胰腺等部位肿瘤。 目前，共发现20多种FGFs，对不同类型细胞具有不同的作用。但是，只发现了5种FGF受体(FGFR)。在蛋白水平上，这些受体具有55%-72%的同源性。FGFR结构包括一个胞外配体结合区域，一个跨膜区域以及一个胞内激酶区域。配体结合区域包含三个不同的类似免疫球蛋白结构域(称为免疫球蛋白I，II和III)。FGFR1-3 mRNA的不同的剪接作用形成两种亚型α和β。其中FGFR3具有两种不同的突变体IIIb和IIIc。这两种变体具有不同的亲和活性：IIIc分布更加广泛，能和多种FGFs结合(FGF1，FGF2，FGF4，和FGF9)；IIIb优先和FGF1结合，能够较低程度和FGF8和FGF9结合。在有肝素(heparin)作用的情况下，FGFs和FGFRs结合后，FGFs诱导受体二聚化，引起胞内激酶区域的自身磷酸化以及下游信号级联反应的激活。配体受体结合后，FGFs会启动多种信号转导途径：胞内钙离子水平升高，诱导丝裂原活化蛋白激酶和蛋白激酶C通路，激活腺苷酸环化酶以及诱导原癌基因c-myc 和c- fos。 已发现FGFR3会发生特殊突变，导致其酪氨酸激酶活性激活，引起一些与骨骼发育，多发性骨髓瘤，颈部肿瘤以及膀胱肿瘤相关的综合征。最近的研究发现FGFR信号是前列腺肿瘤细胞在体外存活所完全必需的。近来，FGFR3已被作为多发性骨髓瘤的可能**性靶点。尽管已有确实证据表明激活的FGFR3突变存在于肿瘤组织中，但是关于FGFR3在肿瘤组织中的表达知道的非常少。近来，使用基因芯片技术对基因表达分析后，发现和正常组织相比FGFR3在膀胱肿瘤样品中过表达。基因表达水平通过Western blot和免疫组化分析在蛋白水平上进一步确证。事实上，这种蛋白的过
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单克隆抗体杂交瘤细胞筛选技术
作者：德尔塔 日期：2022-04-25
单克隆抗体杂交瘤细胞筛选技术 -Molecular Devices ClonePix 2 1986年，美国FDA批准了第一个单克隆抗体药物上市，距今已快30年。目前，全世界共有超过40个**用抗体药物被批准上市，每年实现超过600亿美元的销售额。在国际及国内形成了抗体药物开发热潮。巨大的市场前景和现存的技术问题及壁垒并存的现实不可避免地引发抗体药物新一轮技术革命。而其结果又将毫无疑问地改变抗体药物的市场格局。 但是，抗体不管是作为检测试剂，还是作为具有巨大市场前景的**药物。首先，我们都需要通过筛选找到单克隆抗体。传统的单克隆抗体制备方法主要是杂交瘤技术。这是目前比较成熟，技术难度比较低，大多数实验室仍然在使用的方法。 在单克隆抗体制备过程中，有两次筛选过程，第一次是使用选择性培养基选出杂交瘤细胞；第二次就是进一步选出能产生我们需要的抗原特异性抗体的杂交瘤细胞。 利用杂交瘤技术制备单克隆抗体的基本原理是根据以下三个原则： 1、一种淋巴细胞克隆只产生一种抗体； 2、细胞融合技术产生的杂交瘤细胞可以保持双方亲代细胞的特性； 3、利用代谢缺陷补救机理筛选出杂交瘤细胞，并进行克隆化，然后大量培养增殖， 制备所需的单克隆抗体。 第一次筛选的原理和方法： 细胞融合后，杂交瘤细胞的选择性培养是第一次筛选的关键。普遍采用的HAT选择性培养液是在普通的动物细胞培养液中加入次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸腺嘧啶核苷酸。其依据是细胞中DNA的合成有两条途径： 一条途径是生物合成途径(D途径)，即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸，为DNA分子的合成提供原料。在此合成过程中，叶酸作为重要的辅酶参与这一过程，而HAT培养液中氨基蝶呤是一种叶酸的拮抗剂，可以阻断DNA合成的“D途径”。 另一条途径是应急途径或补救途径(S途径)，它是利用次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核苷转移酶(HGPRT)和胸腺嘧啶核苷激酶(TK)催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相应的核苷酸，两种酶缺一不可。 因此，在HAT培养液中，未融合的B细胞及两个
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高通量RNA干扰技术筛选DNA损伤实验介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-25
高通量RNA干扰技术筛选DNA损伤 -Molecular Devices ImageXpress 目前，将RNAi库和基于细胞水平的高通量分析技术相结合对于我们鉴定药物敏感性和抵抗性的新机制有非常广阔的前景。举例来说，已有研究者对全基因组进行RNAi筛选找出了导致非小细胞肺癌对紫杉醇敏感的基因。这项研究也证实了RNAi技术在发现影响癌症细胞细胞有丝分裂的靶点上具有很大潜力。 Molecular Devices公司开发了一款非常强力的筛选平台—ImageXpress系统。该系统拥有完整的图像获取及分析模块，可以快速生成想要的数据。 本文我们列举了如何通过对磷酸化的组蛋白H2AX和DNA进行免疫荧光双色分析方法来检测DNA损伤。组蛋白H2AX在丝氨酸139位点的磷酸化被认为是药物或辐射造成的DNA损伤的敏感标记。文中也阐明了我们利用RNAi对双色标定DNA损伤分析是一个敏感和快速的自动化过程，而且这种方法被证明可以有效发现新的目标。图1列举了这种分析的设置方法。 图1 通过标记磷酸化组蛋白H2AX检测DNA损伤的示意图 实验步骤 细胞及其培养条件。用加入10%FCS的DMEM培养HeLa细胞。细胞移入384孔避光且底面光洁的聚苯乙烯板(Greiner)中，密度为每孔约600个细胞。 利用ImageXpress系统检测DNA损伤。在经过RNAi及/或DNA损伤处理后，细胞固定，打孔并用相应抗体直接免疫染色组蛋白H2AX的丝氨酸139的磷酸化位点。所用二抗为抗兔Alexa Fluor-488(AF-488，Invitrogen)，propidium iodide(PI)标记所有的细胞核。ImageXpress激光扫描平台设置为绿色滤光通道(Ch1,510-540nmBP)及红色滤光通道(Ch3,600nm LP)。利用红色通道的逐区扫描可以对全板孔图像进行分析，背景则由整合了绿色及红色通道的荧光强度进行调整和修正。在图2中我们列举了阳性和阴性样本的图像。 图2 利用ImageXpress系统对DNA损伤实验的阴性和阳性孔进行整空成像，细胞生长于384孔板，左侧为绿色通道，右侧为红色通道。 结果及讨论 我们整合了ImageXpress 系统和机械加样臂对超过20000个RN
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高通量筛选神经毒性实验方案
作者：德尔塔 日期：2022-04-25
高通量筛选神经毒性 -Molecular Devices ImageXpress 优点： 完全自动化的图像获取与分析 快速得到每个细胞的多表型参数 实时监测活细胞的毒性，可持续几分钟至几天 神经系统对许多毒性化合物以及自然环境中生成的有害物质非常敏感。在疾病发生过程中，神经毒性可以对大脑或者外周神经系统造成短暂或持续性的损伤，例如脊髓损伤，中风，创伤性脑损伤等。同时这种神经毒性也是造成很多神经退行性疾病诸如阿尔兹海默和帕金森的主要诱因。 诱导人多功能干细胞的高通量成像技术可以用于筛查候选药物或者环境污染物的神经营养，保护功能或者神经毒性大小。本篇说明会阐述如何结合iPSCs，分子仪器和软件自动对诱导多功能干细胞进行终点法及活细胞的神经毒性筛选。 以iPSC为基础的毒性筛查 诱导多功能干细胞技术对我们研究神经元毒性是十分有用的，iPSCs可以大批量的展示成熟神经元的功能。如果将这种独特的生物学相关的细胞类型和高通量成像分析结合在一起，我们就可以快速的筛选出在引起神经元毒性中起主导作用的化合物并大大减少临床前研究和相关动物实验的成本。此篇中用到的是Cellular Dynamics International公司完全分化的人神经细胞。 量化完整的神经细胞网 高通量分析是一种定量化的分析方法，其可以测量神经突触长度表征被测物的阳性或阴性作用。iPSC衍生的神经元细胞可以在3-5天内于96或者384孔板中形成神经元网络，然后用毒性化合物刺激48-72小时。神经网被ß-tubulin标记后，可利用ImageXpress® Micro 宽敞成像系统获取图像。和抗抗体我们可以实现神经元网络的可视化。使用MetaXpress® 图像处理软件中Neurite Outgrowth模块和AcuityXpress™ 高内涵数据分析软件对相关图像和实验数据进行分析。 无论是否进行了细胞核复染色，Neurite Outgrowth模块都能找到神经细胞胞体，并根据这些荧光标记的神经细胞轴突将之标定为阳性细胞。神经细胞网络具有几个重要的特征参数包括轴突数目，轴突长度，每个
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核转位筛选实验介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-25
核转位筛选实验 -Molecular Devices ImageXpress XLS 优点 · 可重复性表型检测 · 既高通量又不牺牲质量的图像获取 · 应用交互式预览，大大减少分析设置时间 · 统一的统计方法使结果更准确 躁郁症（BD）是一种高度遗传性的心理疾病，它影响到全球大概1%的人口。1949 年锂被第一次应用于躁郁症，到目前为止锂仍是**BD 的主要药物。然而在一半的病例中，锂并不能起到很好的**效果，同时此药的毒性和副作用也值得关注。 目前为止人们对于锂的**机制还未完全了解，已知锂会阻断糖原合成酶激酶3 (GSK-3)的活性并激活Wnt 信号通路，后者直接或者间接地减少蛋白酶对b-catenin 的降解。我们可以利用Wnt/b-catenin 信号通路中新的蛋白以及药理学调节分子对b-catenin 的阻断作用来鉴别这些蛋白，这种方法是通过检测残留在细胞中的b-catenin 量来达到的。 可以通过高效系统的成像技术使这种定量技术变得简单，从而进一步提高检测和分析的质量。为了有助于这一研究，利用Molecular Devices 公司的高内涵成像系统基于细胞水平的检测技术，我们已经建立了包含1856 种新蛋白的库，这使我们能准确的通过wnt 信号通路的影响程度来检测细胞核中b-catenin 的量。 终点法高通量实验流程 U2OS 细胞可以表达融合了绿色荧光蛋白（EGFP）的人源.-catenin，我们在384 孔板中每孔加入1500 个细胞。细胞37 度培养48 小时后，加入库中筛选的蛋白。细胞继续培养24h然后用含5μg/mL Hoechst 33342 DNA 染料的4%多聚甲醛进行固定染核。在此基础上，我们对库中的活性蛋白进行了进一步的筛选，结果后面会显示。 获取大量细胞数据进行统计分析 ImageXpress. Micro Widefield System 可以对目标进行高通量成像测定。采用10 倍物镜双波长光分别检测EGFP 荧光和Hoechst 核染料，每孔检测4 个位点。在每个视野中捕获到放大10 倍超过1000 个细胞的数据，而且还可以持续的保持这种高质量的分析结果。 鉴定对化合物刺激的表型变化 由于蛋白酶持续的
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检测不同样品中三聚氰胺的含量实验介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-25
使用 Molecular Devices公司的SpectraMax光吸收型读板机及罗默实验室AgraQuant三聚氰胺检测试剂盒可快速 检测不同样品中三聚氰胺的含量 简介： SPECTRAMAX APPLICATION NOTE #13使用 Molecular Devices公司的SpectraMax光吸收型读板机及罗默实验室AgraQuant三聚氰胺检测试剂盒可快速检测不同样品中三聚氰胺的含量有机碱三聚氰胺可用于生产很多产品，如塑料、阻燃材料、颜料和肥料等。最近有报道称某些厂家在动物饲料和人类的食品中添加三聚氰胺用于增加其中蛋白质的含量。由于三聚氰胺潜在毒性可引起人和动物的一系列疾病，甚至死亡。所以在各种食品中检测三聚氰胺含量方法越来越受到大家重视。在此篇应用文章中介绍并验证了两种来自于罗默实验室的三聚氰胺ELISA检测试剂盒：AgraQuant三聚氰胺检测试剂盒和AgraQuant灵敏型三聚氰胺检测试剂盒。 AgraQuant三聚氰胺检测试剂盒采用的原理为直接竞争酶联免疫吸附法(ELISA)，主要用于麦麸和宠物食品中的三聚氰胺含量的检测。AgraQuant灵敏型三聚氰胺检测试剂盒适合于对灵敏度要求更高的ELISA实验，如对牛奶、奶粉和其它日常消费品中三聚氰胺的检测。两种试剂盒，都是将待检测的样品和酶标记三聚氰胺加入预先包被有三聚氰胺抗体的微孔板中，待检测样品和标准品与酶标记三聚氰胺相互竞争的与微孔板中已包被的抗体结合。孵育一段时间后，使用缓冲液清洗微孔板，随后加入底物后再孵育一段时间后显色。在第二次孵育后，加入反应终止液来终止反应，在酶标仪中检测其在450nm波长下的吸光度值。颜色深度与混合物中样品及标准品中三聚氰胺的含量成反比。样品中三聚氰胺的含量可由标准曲线拟合后算出。 Molecular Devices光吸收型读板机检测三聚氰胺的吸光度值，针对三聚氰胺ELISA检测使用SoftMax® Pro GxP 软件中预先内置的模板进行数据的收集和分析，此软件是工业标准的分析软件， 具有美国FDA21 CFR Part11认证。 材料： 方法： 针对两个检测试剂盒，都遵循以下检测步骤：
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移液器快速检测精确度的三种方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-25
移液器是上海巴玖实业有限公司众多优质产品之一，有着多年的销售和技术经验。那么移液器快速检测精确度的三种方法具体都有什么呢，下面来看一下。 第一种情况：我们要确定移液器是否存在漏气的问题。 1.检测方法： A目视法检测：先使用需要检测的移液器吸取液体，然后将其垂直静置 15 秒，观察有没有液滴缓慢的流出。如果有液滴缓慢流出，就说明该移液器有漏气现象。 B压力泵检测：使用专用的压力泵，检测压力情况，判断移液器是否漏气。 2. 如果发现移液器有漏气现象，那么我们就要分析产生漏气的可能原因： 首先，查看吸头是不是匹配？推荐使用原装匹配的吸头。如果不是原装匹配的吸头，**咨询下厂商或代理商（如果您是在上海旦鼎国际贸易有限公司购买，可咨询我们技术人员）看看自己使用的吸头是否与所用的移液器匹配。 其次，装配吸头的时候有没有装紧？很可能由于装吸头的时候没有装紧导致移液器漏气。 最后，如果上述两种情况都没有发现问题，那么很可能是移液器内部气密性不好。这时候就需要与移液器公司维修工程师联系了。 第二种情况：我们需要检测是不是由于移取液体的温度与移液器和吸头之间的温度差异导致影响了移液器的准确度。 一般情况下，当移取液体的温度与吸头和移液器的温度不一致的情况下会产生以下两种差异： 1、当液体温度高于吸头的，移取的液体体积会偏大； 2、当液体温度低于吸头的，则移取的液体体积会偏小 第三种情况：一般来说，移液器出厂前的校准是用水作为标准液进行测试的，所以如果所操作的液体与水的比重有很大差异，所给出的精确度和准确度可能就不能满足，从而产生了误差。 排除以上所有的问题之后，我们还要注意吸液速度不要太快，吸液速度过快会产生反冲和气泡，导致移液体积不准确，最终影响移液器的准确性。 以上是移液器的基本信息，更多的移液器信息请查看： 全国免费热线电话：400-618-0588或登录巴玖官网进行查询：
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岛津液相色谱仪维修大全
作者：德尔塔 日期：2022-04-25
一、仪器的安装对环境的要求 １、 电源电压(２２０V)： 有条件的情况下，**使用照明电，此电压比较稳定,对仪器的性能稳定性较好，在没有办法的时候，必须要用动力线路供电时，就要采取相应的办法克服或减少由于电机频繁启动，停止运行时对电网电压波动的影响(电机是感性负载，停止和启动能产生很强的干扰尖脉冲电压)。如请电工师傅单独从动力变压器零线以及负载较轻一些的火线上单独引线至实验室，这样可以大大减少对仪器的干扰，在经济上允许时，**使用交流稳压器。总之，电压最低不能超过１９８V，最高不超过２３０V为好。 ２、对实验室的要求： A、 室内**有防尘设施，仪器工作时产生大量的热量，通过仪器的风扇散热，这样就有可能将周围的灰尘带入机内，在静电的作用下，附于电路上，时间长了，特别是南方，多雨季节比较潮湿，有可能给仪器工作造成不良的影响。 B、 对实验室温度的要求是温度变化相对要很小。特别是太阳光线不要直射于仪器上，否则仪器将会出现不稳定的情况。如流动相内可能产生肉眼看不到的气泡，进入系统内时，基线稳定性变差。柱子温度变化，会使保留时间有所变化，对分析的结果有一定的影响。紫外检测器的稳定时间以及工作中的稳定性都与环境温度的恒定有很大的关系。有条件时，**安装空调。注意，空调机供电不要与仪器供电用同一线路。 C、 地线，消除干扰。提高仪器稳定性，保证人身安全。 二、、高压恒流泵在工作中常见的一些故障及排除方法（共六个问题） 1、 压力显示值忽高忽低无规律的跳动引起这种现象的主要原因是系统内存在气泡。此时需要仔细检查输液管与泵头下阀是否拧紧，四氟管有无裂纹等，因为液体在流动时，在流经处产生微小的负压，空气会进入系统。 当检查完确认以后，将放空阀逆时针旋转一圈左右后，用手按住运行键，此时，泵以最高的流速从排空阀流出，气泡随之流出。当泵头经过清洗后，或者更换流动相时，必须要经过这一相操作。 此法效果
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看ART手持分散机如何破碎药丸
作者：德尔塔 日期：2022-04-25
广州某制药厂使用德国ART手持分散机D-1对药丸作破碎实验，效果完美。 2015年5月，ART厂方代表与代理商拜访广州一制药厂用户，该用户主要对药丸做微生物含量检测和其他一些成分的检测。 为了检测该厂生产的各种中药药丸的微生物含量，他们需要将药丸加水粉碎之后，经过一系列的稀释过滤，培养, 计数菌落并检测其他一些成分。按照实验标准，药丸必须在试管或烧瓶中粉碎，比例大概为50g的药丸加100-150mL的水。 实验的难点在于：为了方便操作，不能选用大功率的分散主机，必须手持；同时样品的硬度高，样品量大，加水后又有一定的黏性，很容易粘在分散刀头的转子上，从而达不到分散的效果。 + = ART为用户提供了比较好的解决方案：采用ART的手持式分散主机D-1，同时采用20mm直径的DS-20/PG SMIR粗分散刀头，转速设为23000RPM左右。仪器工作一分钟，即完美地达到了用户的要求，药丸被全部粉碎，无残渣。用户对处理效果非常满意。 关于语特 和 英国Bibby / 德国ART / 德国CAT / 瑞士Gerber Instruments ( . Tel/Fax: 020 8252 0656; E-mail： ) 广州语特仪器科技有限公司专注于搅拌器/分散乳化机等实验室样品制备等通用仪器， 熔点仪/光度计/冰点仪等分析仪器，以及PCR等生命科学仪器。 作为英国比比（Bibby ）在中国南方的首代，广东，广西，四川，重庆，云南，海南，贵州和西藏是我司的服务范围。语特公司也是德国ART， 德国CAT，瑞士Gerber Instruments 在中国的首代。 ※ 英国BIBBY 成立于上个世纪50年代，作为英国最大的实验室科学仪器生产商， 旗下有4个子品牌：Stuart，Techne，Jenway，Electrothermal. 专注于样品前处理等通用实验室仪器（如：熔点仪, 搅拌器, 混匀器，摇床, 培养箱，干浴器/氮吹仪，水浴，菌落计数器, 纯水蒸馏器），分子生物学研究设备(基因扩增仪PCR，荧光定量，杂交箱)；分光光度计/超微量紫外等分析仪器，及平行反应工作站相关产品。 ※ 德国ART 成立于上
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酶标仪利用”无创”技术检测活细胞荧光蛋白
作者：德尔塔 日期：2022-04-25
酶标仪利用”无创”技术检测活细胞荧光蛋白 简介 在过去的五年中，荧光蛋白在监测体内生物学研究中，起到越来越重要的作用。源于维多利亚多管发光水母中的绿色荧光蛋白(GFP)是最早被我们应用的荧光蛋白，但是随着时间的推移，现在我们可以使用的荧光蛋白种类也越加丰富，包括加强型的变异GFP蛋白、从其他种类水母中发现的荧光蛋白和珊瑚礁蛋白。它们都可以在众多的细胞和组织中被克隆复制，从细菌到酵母，从植物到哺乳动物。这些荧光蛋白稳定、细胞毒性小、而且不需要额外的辅助也能在体内产生可见的荧光。因此，它们可以被用作分子靶标或者独立的报告因子去视化、追踪和定量多种不同的细胞进程，包括细胞合成与代谢，蛋白转运，基因诱导和细胞谱系。不同的荧光蛋白具有不同的颜色，因此也可被用于多重检测。这些荧光蛋白都能被荧光显微镜和流式细胞仪检测到。但是相应的，如果我们不做细胞分选或监测细胞内迁移，微孔板荧光读板仪将是一个更好、更方便和更高通量的检测系统。下面，我们将会向大家展示Molecular Devices酶标仪如何利用”无创”技术检测活细胞荧光蛋白。 我们将从BD Biosciences Clontech公司获得的三株HEK-293细胞系进行不同荧光蛋白的稳定转染。这次研究的目的：1）优化三株细胞系的波长设置，2）通过稀释细胞系来确定检测下限LLD，3）证明在一种细胞系中识别另一种细胞系的可行性。 材料： HEK-293细胞系稳定表达三种荧光蛋白： AcGFP---多管发光水母中产生的另一种GFP(但不同于维多利亚水母) ZsGreen---与GFP相似，但更亮(来自珊瑚礁) DsRed---一种来自珊瑚礁的红色荧光蛋白非转染的HEK-293细胞系，作为对照 方法： 细胞准备与分析 细胞都培养在大烧瓶中，应用含10% FBS+ 1% Pen/Strep/L-glutamine +500 μg/mL G 418的DMEM的培养基。没有转染的HEK-297细胞作为对照。在实验前一夜，对细胞进行胰酶消化，然后进行密度梯度稀释，最终密度范围为从500,000到100个细胞每毫升。然后把它们过夜接种到96孔(10
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