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叶绿素荧光技术-植物逆境高温胁迫测量技术
作者:德尔塔 日期:2022-04-30
叶绿素荧光技术-植物逆境高温胁迫测量技术 随着全球变暖,植物高温胁迫研究受到越来越多的关注,研究手段也越来越丰富,其中包括植物荧光测量:NPQ, Fv/Fm, OJIP, and Quantum Photosynthetic Yield。本文将着重介绍如何高效、快速简便地测量这些荧光参数。 非光化学淬灭(NPQ)测量 非光化学淬灭(NPQ)测量可以很好地反映植物高温胁迫(Schreiber U. 2004)(Tang Y., Wen X., Lu Q., Yang Z., Cheng Z., & Lu C. 2007) (Haldiman P, & Feller U. 2004),但测量过程需要耗费较长的时间以及很好的耐心。 通常情况下,在野外测量植物非光化学淬灭(NPQ)之前要进行8-12 h或一整夜的暗适应,在实验室中,暗适应时间需要12-24 h(Maxwell and Johnson 2000)。除了暗适应时间的长短、暗适应是否成功等因素外,NPQ的测量还需要注意一点,就是必须要在叶片达到光合作用稳态后再开始测量,这很容易达到,只要将叶片放在稳定的光照水平下15-20 min即可实现,一般使用人工光源(Maxwell and Johnson 2000)。 植物非光化学淬灭要经过长达60 h的弛豫过程才能从光抑制状态恢复,所以即使是一整夜的时间也不充分,因此,NPQ过程总会有部分未完成测量。判断NPQ测量的尺码为Fv/Fm中的Fm值的高低(Baker 2008),所以在进行结果比较时,选择具有相同或者相似Fv/Fm的样品至关重要。 NPQ的测量主要用于研究35℃及以上的高温胁迫,NPQ饱和光闪曲线图能够很好的反映高温胁迫对植物的影响,NPQ随着时间降低,光合作用量子产量随时间增加。(Schreiber U. 2004) 高温胁迫的恢复期,样品在35℃条件下处理5 min,恢复期出现在20℃。 Fv/Fm and OJIP测量 Fv/Fm和OJIP可以快速测量,测量之前对样品进行暗适应的时间范围从20 min到整夜,也可以使用黎明前的测量数据。但研究显示这两个参数对于反映植物高温胁迫有一定的局限性,已有研究显示,Fv/Fm只能反映45℃左右的高温胁迫,OJIP只能反映44℃及以上的高温胁迫。 (Haldiman P, & Feller U. 2004), (Cra
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原代细胞与细胞株的区别
作者:德尔塔 日期:2022-04-30
原代细胞培养最大优点是:细胞直接来源于机体组织,生物性状尚未发生大的变化,在一定程度上能够反映体内的状态。 细胞株和原代细胞不是完全一样。 并非每一种组织源性细胞都有相应的细胞株,有些细胞必须养原代, 细胞株是来源于原代细胞,原代细胞导入了病毒增殖基因并转变为细胞株,细胞株带有癌变细胞的特点。 细胞株的遗传物质已经发生改变,并不再具有接触生长抑制现象。 细胞株形态及状态不如原代细胞,相对长时间传代;而原代细胞生长是有限性。 细胞株在传代过程中可能发生形态的改变及变异,细胞株没有用原代细胞稳定性。 原代细胞的受体能够正确反映体内的生理和病理状态。 原代细胞的信号传导信号系统能够正确反映体内的生理和病理状态。 原代细胞的蛋白质生物学特征能够正确反映体内的生理和病理状态。 原代细胞的RNA生物学特征能够正确反映体内的生理和病理状态。 原代细胞的DNA生物学和遗传学特征能够正确反映体内的生理和病理状态。 原代细胞对外界反应能够正确反映体内的生理和病理状态。 原代细胞对体外检测能够正确反映体内的生理和病理状态。 原代细胞对毒理和致畸反应能够正确反映体内的生理和病理状态。 原代细胞对药物筛选能够正确反映体内的生理和病理状态。 原代细胞对个体化药物**能够正确反映体内的生理和病理状态。 原代细胞培养与体内原组织在形态结构和功能活动上一样,绝对是检测判断、药物****的实验对象。 如在中国进行体外检测和药物研发进行细胞培养,请要用中国人组织源性原代细胞。
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正常小鼠腹股沟脂肪垫获取脂肪源干细胞
作者:德尔塔 日期:2022-04-30
PriCells: 正常小鼠腹股沟脂肪垫获取脂肪源干细胞 实验材料: 1. Hank’s缓冲盐溶液(HBSS); 2. ASC培养基:含10%胎牛血清的DMEM,添加1%的P/S; 3. 胶原酶溶液:100ml Hank’s缓冲盐溶液中加入1g牛血清白蛋白和0.1gⅡ型胶原酶; 4. 聚乙烯吡咯酮碘溶液; 5. 陪替氏培养皿,9cm;离心管,50ml;组织培养瓶,25cm2; 6. 剪刀(2把),镊子(2把); 7. PBSA; 8. 小鼠,4—6只; 9. 麻醉剂:三溴乙醇; 实验方法: 1. 37℃水浴中预热HBSS和脂肪源干细胞培养基; 2. 麻醉动物后处死; 3. 转移动物至层流净化罩中; 4. 70%酒精消毒腹部; 5. 采用低位横向切口打开腹腔; 6. 用镊子取出性腺/附睾和腹股沟处的脂肪垫; 7. 将脂肪组织置于培养皿中,加入HBSS; 8. 待所有动物脂肪取出后,将脂肪转移至新的培养皿中; 9. 加入含有5%聚乙烯吡咯烷碘酮的HBSS 2—3min; 10. 漂洗组织并用HBSS洗涤脂肪; 11. 用无菌镊子将脂肪转移至50ml离心管中; 12. 用无菌剪刀将脂肪切碎; 13. 加入与组织体积相同的胶原酶溶液并混匀; 14. 将离心管置于37℃水浴中60min,其间不时混匀一下; 15. 离心,50—100g,5min; 16. 取出离心管,用力摇晃(将基质细胞与原代脂肪细胞完全分离),再次离心5min; 17. 小心吸去上层油脂,油脂层中含有原代脂肪细胞,注意不要破坏位于下方的基质—血管细胞层; 18. 加入5—10ml PBSA,重悬沉淀,再次离心5min; 19. 洗涤三次,注意不要吸走基质—血管细胞层; 20. 最后一次洗涤后,加入8ml ASC培养基重悬沉淀,转移至T25培养瓶中,置于37℃,5%CO2温箱中; 21. 待细胞贴壁生长2—4天后换液; 22. 换液时通过弃去培养基,从而去除未贴壁的细胞; 23. 以后每周更换培养基2次;
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正常人羊膜细胞(HAM)原代细胞培养
作者:德尔塔 日期:2022-04-30
PriCells: 正常人羊膜细胞(HAM)原代细胞培养 实验材料: 1. 人胎盘; 2. PBSA/GASP:含抗生素的PBSA(庆大霉素,50μg/ml;两性霉素B,1.25μg/ml;链霉素100μg/ml;青霉素100U/ml); 3. 丙三醇; 4. 含50%丙三醇的DMEM; 5. 胰蛋白酶/EDTA; 6. Millicell微孔膜组织培养插片; 7. 塑料刮片和无菌棉拭子; 实验方法: 1. 用PBSA/GASP清洗组织; 2. 分离人羊膜,用戴手套的手从胎盘上将羊膜钝性分离下来,分离出的羊膜薄层包括上皮细胞,基底膜和一些基质组织; 3. 用无菌棉拭子除去基底膜下的基质组织,使分离的羊膜尽可能的薄; 4. 在监测供者血清以除外疾病的时期,可以将粗分离出的人羊膜保存在含有50%丙三醇的DMEM中,-70℃存放; 5. 临用前解冻人羊膜,用PBSA清洗后将其切成直径约为2mm的小块; 6. 用胰蛋白酶/EDTA消化组织块,37℃,30min; 7. 用塑料刮片轻刮消化过的人羊膜,除去上皮细胞,注意不要破坏基底膜; 8. 用PBSA清洗裸露的羊膜,并将它的基底膜面(去除上皮细胞的面)黏附在Millicell微孔膜组织培养插片上;
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旋光原理
作者:德尔塔 日期:2022-04-30
自然光和偏振光 光是一种电磁波,并且是一种横波,即这种波的振动方向垂直于光的传播方向。自然光的白光是包含各种不同波长的光线。当我们迎着射来的一束自然白光观察时,如果能够观察到光的振动方向就会发现光波的振动方向都垂直于光的传播方向,其振动方位是无限多的。如果一束光中所有的光都在同一平面内振动,则此光称为平面偏振光。 尼克尔棱镜和平面偏振光 当自然白光穿过尼克尔棱镜时(由一种纯碳酸钙矿石制成)可以将光线分离为两种偏振光。按照原光线传播方向射出的偏振光称为不寻常偏振光(图一),沿纸面上、下振动。另一个是反射出的寻常光线,其振动方向垂直于不寻常光线的振动面。可以选择在反射出的镜面上涂抹黑漆将寻常偏振光吸收掉,只留下按原方向射出的不寻常偏振光。自然白光通过尼克尔棱镜产生的不寻常偏振光是由各种不同波长的光波组成的,他们穿过光学活性化合物时,偏振面旋转的角度各不相同。由此可见,从自然白光而来的偏振光不能用于旋光度的测定,只能使用单一波长的偏振光。通常采用589nm的纳黄光D线,通过尼克尔棱镜后就可得到单一波长的纳黄光的偏振光。 旋光度的测定 旋光仪是由2个尼克尔棱镜组成的。第一个尼克尔棱镜叫起偏镜,纳黄光穿过起偏镜后成为偏振光。第二个尼克尔棱镜称为检偏镜,它与起偏镜平行。为了在2镜之间放置样品,其间留有一点距离。当样品管中放入非光学活性的液体时,指针指向零,从目镜中可以看到亮光。但当放入光学活性的液体时,目镜是黑的,偏振光不能透过检偏镜。将检偏镜顺时针或逆时针旋转一定角度后,可以从目镜中重新看见亮光。此时检偏镜的旋转角度就是旋光度。如果检偏镜顺时针旋转X度观察到亮光,就称该样本是右旋性,记为+X度。若是逆时针旋转,则称为左旋性,记为-X度。如果顺时针X度与逆时针180-X度都能观察到亮光,就需要再做一次测试。第一种方法是改变样品管的长度。旋光度的大小与偏振光穿过的液体厚度成正比。例如,当样品管长为1
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正常角膜缘干细胞的免疫染色
作者:德尔塔 日期:2022-04-30
正常角膜缘干细胞的免疫染色 试剂和材料: 1. 一抗: (1) ABCG2-----------------小鼠单克隆BXP-21---------1:100 (2) 连接蛋白-43-----------兔多克隆CX43-------------1:100 (3) 细胞角蛋白3(K3)-----小鼠单克隆AE5----------- 1:500 (4) 细胞角蛋白12(K12)---兔多克隆J7-------------- 1:200 2. 二抗; (1) 抗小鼠IgG-------------Alexa-488----------------1:2500 (2) 抗兔IgG---------------Alexa-546----------------1:1500 3. 封闭抗体:PBSA配制的10%热灭活羊血清; 4. Trion X-100; 5. PBSA; 6. 多聚甲醛(PFA),将16%原液用PBSA现配成4%的工作浓度; 7. Immu-Mount防褪色封片剂; 8. 载玻片和#1盖玻片; 9. 共聚焦显微镜; 实验方法: 1. 培养在塑料平皿或羊膜上的细胞; 2. CMF-Saline G洗一遍; 3. 用新鲜配制的4% PFA室温固定15min; 4. PBSA洗一遍; 5. 0.1% Triton X-100破膜10min; 6. 样本与一抗室温孵育1h; 7. PBSA洗2遍; 8. 加入二抗室温孵育1h; 9. 用PBSA洗2遍; 10. #1盖玻片,用最小体积的防褪色的封片剂封片; 11. 在荧光或共聚焦显微镜下用40×油镜对样本进行观察;
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正常人角膜上皮细胞和干细胞的分离
作者:德尔塔 日期:2022-04-30
正常人角膜上皮细胞和干细胞的分离 实验材料: 1. 完整的人角膜; 2. GMF-Saline G; 3. 中性蛋白酶Ⅱ,1.2U/ml(用DMEM/F12/GASP稀释2.4U中性蛋白酶Ⅱ); 4. 胰蛋白酶/EDTA; 5. DMEM/F12/GASP; 6. DEME/F12/2FB/GASP:DMEM/F12/GASP含2%FBS; 7. CMF/GASP; 8. LSC培养基; 9. 弯虹膜剪,11cm(4-3/8in); 10. Jeweler’s镊,10cm(4in); 11. 角膜剪,19mm刃,尖头; 12. Colibri缝纫钳,0.1mm; 实验方法: 1. 清洗角膜3×5min; 2. 剪除残留的巩膜,结膜和虹膜; 3. 加入2ml中性蛋白酶Ⅱ,4℃过夜,轻微搅动; 4. 将加入中性蛋白酶Ⅱ的角膜放入4℃摇床摇30min; 5. 用DMEM/F12/GASP清洗角膜; 6. 解剖显微镜下,小心去除角膜中央的上皮细胞(此时多数的中央上皮细胞已经剥脱)并除去角膜缘包含有Vogt栅栏区的色素上皮细胞; 7. 用胰蛋白酶/EDTA消化角膜缘上皮细胞片37℃,10min; 8. 加入等体积DMEM/F12/2FB/GASP; 9. 400g离心10min,弃上清; 10. 用DMEM/F12/2FB/GASP洗一遍,离心,弃上清; 11. 加入LSC培养基,将细胞拍散并用血细胞计数板计数; 12. 将细胞以1×104/cm2的密度接种至铺有3T3饲养层的组织培养皿或准备好的人羊膜上; 13. 每三天更换一次培养基; 14. 当细胞达90%汇合时用胰蛋白酶消化传代:
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测定比旋光度
作者:德尔塔 日期:2022-04-30
有些有机化合物,特别是很多的天然有机化合物,在分子结构上呈现为螺旋形。这样的构成能使偏振光的振动平面旋转一定的角度α,其中使偏光振动向左旋转的为左旋性物质,使偏光振动向右旋转的为右旋性物质。 角度α就是相对应得旋光度。旋光度的大小和样品管的长度(即溶液厚度)成正比。在一定的范围内与溶液的浓度大约为正比关系。此外,旋光度还和溶剂、温度、波长等因素有密切的关系。 所以有必要使用一个标准,以便于比较光学活性化合物的旋光度大小,这个标准就是比旋光度,用于考察单位浓度,单位溶液厚度下的旋光度。 比旋光度是旋光物质重要的物理常数之一,经常用它来表示旋光化合物的旋光性。通过测定旋光度,可以检验旋光性物质的纯度并测定它的含量。测定旋光度的基本结构及其测量原理如下图。 光线从光源经过起偏镜,再经过盛有旋光性物质的旋光管时,由于物质具有旋光性,使得产生的偏振光不能通过第二个棱镜,必须旋转检偏镜才能通过。检偏镜转动角度由标尺盘上移动的角度表示,此读数即为该物质在此浓度时的旋光度α。 旋光度α除了与样品本身的性质有关以外,还与样品溶液的浓度、溶剂、光线穿过的旋光管的长度、温度及光线的波长有关。一般情况下,温度对旋光度测量值影响不大,通常不必使样品置于恒温器中。因此常用比旋光度[α]λt来表示各物质的旋光性。在一定的波长和温度下比旋光度[α]λt可以用下列关系式表示: 纯液体的比旋光度= [α]λt=α/(d·l) 溶液的比旋光度= [α]λt=100·α/(c·l) α:标尺盘转动的角度读数(即旋光度),用旋光仪测定; λ:光源的光波长; d:纯液体的密度(单位:g/cm3); l: 旋光管的长度(单位:dm); c:溶液的浓度(100mL 溶液中所含样品的质量,g); t: 测量时的温度(℃)。 操作: 1. 溶液样品的配制: 在分析天平上精确称取0.1至0.5g 纯样品,溶解,置于25mL的容量瓶中定容,溶剂常选水、乙醇、氯仿等。溶液配好后必须透明无固体颗粒,否则须经干滤纸过滤。
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晶体的光学活性
作者:德尔塔 日期:2022-04-30
晶体物质的种类很多,按照晶格结点上粒子的种类和粒子间作用力的不同,可以分成不同的类型。从立体化学的角度可以将晶体分成2大类,具有光学活性,和不具有光学活性。和具有光学活性的化合物一样,晶体中粒子的排列如果存在一重反轴S1(一重对称反轴即对称面),二重反轴S2(即对称中心),四重反轴S4或更高级的反轴时,则此晶体不具有光学活性。如果不存在以上几种对称因素,则具有光学活性。即粒子在晶体中的排列是非手性的,就不具备光学活性,若是手性的就具备光学活性。从宏观上观察晶体,若具有光学活性,则晶体的晶形是手性的,若不具有光学活性,则晶体的晶形是非手性的。当然,只有透明的手性晶体才能观察到它的光学活性。从光学活性晶体的微观结构观察,其中的粒子都是以某种螺旋的形状排列的。有些晶体的晶面螺纹在显微镜下可以清楚的观察到。 光学家很早就发现,晶体中的粒子若以右手螺旋的形式排列时,晶体呈右螺旋。若以左手螺旋的形式排列时,晶体呈左螺旋(如下图)。 左侧是右手螺旋,右侧是左手螺旋 由于平面偏振光是由左旋圆偏振光和右旋圆偏振光组合而成。当平面偏振光射入各向异性的晶体时。这2种圆偏振光的折射率不相等。折射率的差别,其本质上是因为2种圆偏振光在晶体中的传播速度不同而产生的。传出晶体时,2种圆偏振光不会是同步的,重新组合成偏振光时,就改变为椭圆偏振光,其偏振面将会产生一个角度的变化,这个角度就是晶体的旋光度。偏振面向右旋转,称为右旋,用“+”来表示。偏振面向左旋转,称为左旋转,用“-”来表示。为了比较各种不同晶体旋光能力的大小,须要排除晶体厚度、晶体浓度、光的波长等对旋光度测定的影响因素。因此要将旋光度转化为比旋光度(即在单位密度、单位厚度下的旋光度)。 [a]D20=a/(l*d) 式中: [a]--比旋光度,20表示在室温20摄氏度下测定,D表示钠光D线589nm。 a--实际测得的旋光度。 l--光通过的晶体厚度,以dm为单位。 d--晶体的密度,以g*cm-
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脂肪族化合物的旋光性
作者:德尔塔 日期:2022-04-30
脂肪族化合物从光学活性物质的数量及其复杂性上看都是一类重要的化合物。脂肪族化合物的结构是非刚性的,容易发生变化。各种不同构象之间的转化能垒很小,这些构象在平衡体系中所占的比例易受外界条件的影响。理论上每个C-C单键的自由旋转都可产生无限多的构象。因此它是分析和研究旋光性与结构之间关系最困难的一类化合物。 尽管这类化合物中每一个C-C单键都可产生无限多个构象,但是只有3个能量最低的交叉式和3个能量最高的重叠式构象,其他都是介于交叉式和重叠式之间的构象。在常温下每个C-C键的构象平衡体系中,3种交叉式构象的总百分比含量约占99%以上。这个百分比实际上包含交角接近于60度的构象,因为这些构象的能量与交角为60度的交叉式构象能量差值很小,而且这些中间构象中6个共价键的相对平均位置,其交角都是60度。常温下,在构象平衡体系中的重叠式构象很少。因此在一般情况下,在分析结构和旋光性之间的关系时,只考虑3个交叉式构象及其百分含量,不必考虑重叠式构象。只有个别的特殊化合物在极性很小的溶剂中或气相中,有可能存在接近于重叠式的构象。当电负性很强的原子取代丙烷中C1上的氢原子时,就会出现这种情况。因取代的原子电负性很大,诱导效应使它们带有过剩的负电荷。由于同样的原因,使其相邻原子上的氢原子带有部分正电荷。氟、氧、氯原子与邻位C上的氢原子都有较强的静电引力。因而接近于重叠式的构象反而稳定。在极性溶剂中,如水、醇,因溶剂化效应,这种重叠式构象会因此而消除。在确定最稳定的构象时,还须注意通常2种取代基处于对位交叉式是最稳定的构象。如果2种取代基之间可以形成氢键或其他某种引力,也会使邻位交叉式成为最稳定的构象(如下图)。 邻位交叉式为稳定构象的几种化合物 由此可见,在分析结构和旋光性之间的关系时,要特别注意构象分析。在确定稳定构象时,要注意能否形成氢键以及偶极间的作用力。构象分析时不能忽略溶剂的作用。 范德华力和弯曲键
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正常人原代角膜间质细胞的分离
作者:德尔塔 日期:2022-04-30
正常人原代角膜间质细胞的分离 实验材料: 1. 完整的人角膜; 2. GMF-Saline G; 3. 中性蛋白酶Ⅱ;PriCellls原代细胞分离试剂盒 4. L型胶原酶,1mg/ml在DMEM/F12/GASP中; 5. GMF-Saline G配制的TrypLE Express或0.25%胰蛋白酶; 6. DMEM/F12/GASP; 7. DEME/F12/2FB/GASP:DMEM/F12/GASP含2%FBS; 8. CMF/GASP; 9. 3.5cm塑料组织培养皿或6孔板; 10. 手术刀或单刃的安全刀片; 11. 细胞滤网,70μm血液尼龙过滤网; 12. 塑料刮片,“Cell Lifter”或“Cell Scraper”; 13. 弯虹膜剪,11cm(4-3/8in); 14. Jeweler’s镊,10cm(4in); 15. 角膜剪,19mm刀刃,尖头; 16. Colibri缝纫钳,0.1mm; 17. SDS样本缓冲液,使用终浓度:0.058mol/L Tris,5%丙三醇,1.67% SDS,0.02%溴酚蓝; 18. PriCells原代细胞特制基础培养基; 19. PriCells原代细胞培养特制添加剂; 实验方法: 1. 用GMF-Saline G清洗角膜3×5min; 2. 剪除残留的巩膜,结膜和虹膜; 3. 加入PriCells原代细胞分离试剂盒的试剂,4℃摇床摇动过夜; 4. 将加入试剂的角膜4℃摇30min; 5. 用DMEM/F12/GASP清洗角膜; 6. 解剖显微镜下,小心去除上皮和内皮细胞; 7. 用塑料刮片轻刮基膜的上皮细胞面和内皮细胞面。显微镜下观察,以确保完全去除这些细胞层; 8. 用新鲜培养基清洗角膜基质一次; 9. 用手术刀或安全刀片或精细手术剪将基质剪碎成2mm左右的小块; 10. 用DMEM/F12/2FB/GASP配制的胶原酶37℃消化3h,直至大多数组织消失; 11. 400g离心10min,弃上清; 12. 用DMEM/F12/2FB/GASP重悬细胞,用70μm细胞滤网过滤消化液,并离心; 13. 重复上述清洗步骤2遍,每遍之后细胞计数; 14. 用MJM将分离出的间质细胞重悬并以1×104/cm2的密度接种至塑料组织培养皿; 15. 每三天更换一次PriCells原代细胞特制基础培养基+PriCells原代细胞培养特制添加剂; 16. 当细胞达90%汇合时用胰蛋白酶消化传代:
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利用Hoechst 33342外流性质分选原代角膜间质干细胞
作者:德尔塔 日期:2022-04-30
利用Hoechst 33342外流性质分选原代角膜间质干细胞 试剂和材料: 1. 2—4代的间质细胞; 2. HBSS/2FB; 3. Hoechst 33342染料,1mg/ml水溶; 4. 碘化丙啶(PI),2mg/ml水溶; 5. 维拉帕米,500μg/ml水溶; 6. DEME/2FB; 7. 胰蛋白酶/TrypLE:TrypLE Express或0.25%胰蛋白酶,溶于CMF-Saline G; 8. MoFlo(或与其类似的)高速细胞分选仪,具备350nm激发能力; 实验方法: 1. 用PriCells原代细胞分离试剂盒2—4代的间质细胞; 2. 细胞计数,用DMEM/2FB将细胞稀释至1×106/cm2个细胞/ml; 3. 加入5μg/ml Hoechst 33342染料,37℃,90min,每20min搅动一次; 4. 对照组细胞在加入Hoechst 33342染料前,先加入50μg/ml维拉帕米孵育20min; 5. 染色后,在4℃环境下用HBSS/2FB将细胞洗两遍并离心,之后在冰上用冷HBSS/2FB重悬细胞; 6. 于分选前加入2μg/ml PI以鉴别无活性的细胞; 7. 无菌条件下分选细胞,高速细胞分选仪,用350nm激发。收集蓝色(670nm)和红色(450nm)荧光均减弱的细胞。边群细胞通过上述步骤与死细胞和完全被染料标记的细胞分离开并被收集起来。对照组要确保用维拉帕米先行孵育后使边群细胞消失;
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叶绿素荧光技术:常量和微量营养元素胁迫测量
作者:德尔塔 日期:2022-04-30
植物生长与各种常量和微量营养元素密切相关,所以测量各种常微量元素对植物的胁迫效应具有很重要的意义。大量的研究表明,Fv/Fm、Yield和ETR是与植物CO2固定能力密切相关的三个参数,所以在研究中倍受瞩目。 但我们应该知道,植物营养元素的胁迫除非到了非常严重或者较为严重的程度才会影响到光系统II。这三个参数并不能反映所有的植物营养元素胁迫,有的可以反映轻度胁迫、有的只能反映中度胁迫、有的则只能反映非常严重或者较重程度的胁迫。 下面的内容指出了Fv/Fm和 Yield两个参数在指示作用上的局限性。 Fv/Fm – 暗适应条件下测量 Fv/Fm 对非常低水平的氮素胁迫比较敏感。 (Baker 2004) Fv/Fm 对较为严重的硫素胁迫比较敏感。 (Baker 2004) Fv/Fm 对镍元素胁迫不敏感。 (Joshi 2004) Fv/Fm 对锌元素胁迫不敏感。(Joshi 2004) Yield or ⊿F/Fm’ –光照条件下测量 Yield 对较为严重的硫素胁迫比较敏感。(Baker 2004) 注:Fv/Fm需要在暗适应条件下测量,可使用OPTIC公司的所有调制式荧光测量仪进行测量,包括OS-5P、OS1P 性价比很高的便携式OS-30P;Yield的测量需要在光照条件下当叶片达到光合作用稳态的时候进行测量,可使用OPTIC公司的OS1-FL、OS5p进行测量。K-Step、 Performance Index、NPQ、qP、FRFex360/FRFex400等参数则只能使用OS5P进行测量。硫元素和氮元素胁迫可以通过叶绿素相对含量测定仪CCM200进行测量 下面的列表显示了对不同植物胁迫类型敏感的测量参数,及其应用文献。 营养元素 测量参数 参考文献 Fv/Fm Yield 硼 Yield and ETR Kastori R., 1995 Unknown Yes 钙 Fv/Fm Shmidts-Eiberger 2002 Yes Unknown 氯 没有文献 - - - 钴 Yield Joshi 2004 Tripathy 1983 Unknown Yes 铜 1. Yield, 2. Fo/F 测量时间5 minutes 1. Joshi 2004, Lanaras 1993 2. Adams 2000, Kriedemann 1985 Unknown Yes 铁 K Step in O
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人衰老成纤维细胞经紫外线损伤后的DNA 修复和细胞周期调控
作者:德尔塔 日期:2022-04-30
人衰老成纤维细胞经紫外线损伤后的DNA 修复和细胞周期调控 段建明 张宗玉 童坦君 (北京医科大学生物化学与分子生物学系, 北京 100083) 摘要 以体外培养的不同代龄的人胚肺二倍体成纤维细胞(2BS) 为对象, 紫外线诱导DNA 损伤后, 观察细胞形态、增殖特性、细胞周期、DNA修复变化等细胞应答以及gadd153、p21、p53 等基因的转录水平的表达变化. 结果显示: 紫外线诱导DNA损伤后, 衰老(>55代) 2BS 细胞形 态及增殖能力的改变不如年轻细胞(
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ACQUITY UPLC-TUV测定奶粉和牛奶中三种牛乳清蛋白的含量
作者:德尔塔 日期:2022-04-30
ACQUITY UPLC-TUV测定奶粉和牛奶中三种牛乳清蛋白的含量 赵淑军 沃特世科技(上海)有限公司 摘要:一种α-牛乳清蛋白和两种β-牛乳清蛋白标准分别用超纯水稀释配制,采用ACQUITY UPLC BEH300 C18色谱柱分离,ACQUITY UPLC-TUV超高效液相色谱检测。Bα-La、Bβb-Lg和Bβa-Lg三种乳清蛋白可达基线分离,线性范围为1.000-100.000mg/kg,复相关系数R2_0.999,方法的检出限为1.000 mg/kg。 关键词:超高效液相色谱 奶粉 牛奶 牛乳清蛋白 Bα-La Bβb-Lg Bβa-Lg 前言 乳清蛋白是牛奶中的主要蛋白质,乳清蛋白主要包括α-牛乳白蛋白(Bα-Lactalbumin,Bα-La)、β-牛乳球蛋白(Bβ-Lactoglbulin,Bβ-Lg)、蛋白酶-胨和牛血清白蛋白等,前两者是乳清蛋白的主要成分,分别占其总量的10-20%和40-50%,β-牛乳球蛋白包括Bβb-Lg和Bβa-Lg两个遗传变异体。[1-2] 乳清蛋白具有营养价值高、易消化吸收、含有多种活性成分等特点,已经被越来越多地应用于食品工业,市场上同时出现了不同种类和品牌的乳清蛋白保健品,如儿童营养蛋白粉、婴儿配方奶粉等[3]。但有报道乳清蛋白又是一种常见的过敏原,β-乳球蛋白是最主要的过敏原,α-乳白蛋白紧随其后[4]。UPLC以其1.7μm超细填料色谱柱和15000psi的超高效液相色谱系统,可以完美实现Bα-La、Bβb-Lg和Bβa-Lg三种乳清蛋白分离;尤其对于Bβb-Lg和Bβa-Lg两个遗传变异体可实现完全分离。以及配备高灵敏度Waters ACQUITY TUV紫外检测器,整个系统检测三种乳清蛋白检出限达到1ppm。该检测方法可应用于牛奶或奶粉中α-牛乳白蛋白和β-牛乳球蛋白的定量检测。 实验方法 材料、试剂和仪器 乙腈为色谱纯,三氟乙酸为优级纯,Triton X-100,氯化钠(优级纯),实验用水为超纯水(18MΩ,TOC3ppb),牛乳清蛋白标准品Bα-La、Bβb-Lg和Bβa-Lg;ACQUITY UPLC®超高效液相色谱系统,配Acquity TUV检测器、FILTER MIXER (425μl,P/N 205000403)。 数据处理系统 Empower 2 中文版 前处理方法 称取0.20 g奶粉样品或2ml液