-
显微颗粒图象分析仪选购指南
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
在颗粒测试领域，随着电子成像技术瓶颈的突破与计算机图象算法的逐渐成熟，“显微颗粒图象分析仪”以其独特的直观性优势成为**的颗粒测试设备之一，但采用类似原理的图象分析设备的层出不穷，例如：医疗分析、机件检测等行业，均有图象仪产品，用户初次采购“显微颗粒图象仪”时，往往容易混淆。有些厂家为推销自己的产品，也可能会误导用户，使用户更加不明就里，无从选择，不知道那种产品真正适合自己。笔者针对用户选购“显微颗粒图象仪”时常见的问题与误区给予提醒，愿广大用户都能够选择到满意的产品。 1，显微颗粒图象仪的原理与简介： 首先简单介绍一下“显微颗粒图象仪”的原理。“显微颗粒图象仪”一般是在显微镜上装配摄象机代替人眼进行观测，将测试样品的影象转化为数字信号，传输给电子计算机由专用图象分析软件代替人脑，针对影象信息进行计算与分析，即可获得此样品的型貌参数，分布规律等各项数据。观测样品直观、可保存和管理观测数据都是此类产品的特点，但与其他类型的颗粒测试设备相比，其最大特点是：可获得样品的型貌参数，并进行量化与对比。当然，它也存在一些不足，其主要问题在于：参与测试的样品数量较少，在对分布无规律的样品进行测试时，整体分布的代表性不强。 2，区分其他显微图象系统和“显微颗粒图象仪”： 在网上搜索，能够找到很多显微图象系统类的产品，其中很大一部分是生产显微镜的厂家为自己的显微镜产品延伸的配套产品，这类产品功能单一，一般只能做图象采集、影象采集、色彩转换等基础工作，主要是为了用户的观测之用。此外，还有其他行业专用的图象分析系统，例如医疗的显微检测仪、机械制造中常用的工件检测设备等，用户首先就是需要区分哪些是专门在颗粒测试中使用的“显微颗粒图象仪”。 一般来说，“显微颗粒图象仪”都是由生产颗粒检测设备的厂家推出的，因为颗粒测试是一门独立的学问，需要很专业的理论基础和研究经验，不是任何人都能够涉足的。例如：“中位径”、“长径比”
-
过滤的一般分类
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
过滤的分类 1）按过滤过程中杂质性质的变化可以分为物理过滤和化学过滤。袋式过滤系统属于物理过滤方式，是一种清除液体中固体或胶状颗粒的死端过滤方法。 2）按过滤对象分为气体过滤与液体过滤：气体过滤主要是指去除气体中的油、水及其他颗粒杂质；我们所指的液体过滤主要是指固液分离，集中在物理过滤领域；除色和除味很多通过化学处理完成，因此不完全在我们所指的液体过滤范畴内， 但少量的除色除味工作可以通过我们活性碳滤袋吸附完成。 物理过滤的杂质截留机理： -机械截留作用：具有截留比它孔径大或孔径相当的微粒等杂质的作用，即筛分作用。 -物理作用或吸附截留作用：除了要考虑孔径因素外，还要考虑其它因素的影响，其中包括 吸附和电性能（比如静电）的影响。 -架桥作用：通过电镜可以观察到，在孔的入口处，微粒因为架桥作用也同样可以被截留。 -内部截留作用：这种截留是将微粒截留在膜的内部，并非截在膜的表面 液体过滤可分为深层过滤和绝对过滤 1）深层过滤是在过滤层的表面和内部进行拦截的过滤方式， 无纺布（又称不织布）内的不织纤维无规则地交织在一起，大的颗粒首先被拦截在无纺布的外面，小一点的渗透进去，但到一定深度又被拦截，更小一点的杂质进一步深入，最后通过的为小于某一尺寸大小的颗粒和少量大于这一尺寸的颗粒。 通常用于深度过滤的有聚丙烯、聚酯、NOMEX、聚四氟乙烯等材质的滤袋，无纺布等过滤耗材的内部组织结构、材质的厚度、纤维表面都会对深度过滤的拦截效率产生影响。 通常，这种过滤又被称为相对过滤，过滤精度往往是按照某一孔径的杂质的过滤效率之来定义的。不同公司对滤袋精度的测试方法和达到的过滤效率要求不尽相同，有的定义为80~85%、有的定义为50~70%。导致使用不同公司的同一精度的滤袋后，实际过滤效果也不同。山姆公司可以帮助选择合适精度的滤袋。 2）绝对过滤是采用表面拦截的过滤方式，大于某一尺寸的颗粒95-99.9%被拦截，小于此尺寸
-
RealTime ready自由定制您的qPCR 检测方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
RealTime ready自由定制您的 qPCR 检测方法 让多重基因定量不再受约束 RealTime ready qPCR 分析方法是罗氏诊断公司应用科学部于2010年最新推出的即用型qPCR定制检测方法，可快速灵敏地一次性定量6-384个基因的表达情况。您可于免费的RealTime ready 在线配置工具上，自由选择人类相关靶基因并进行定制型多孔检测板的配置。除了通过基因名称搜索，您还可以直接从信号通路或功能基因组中直观地选择靶基因，整个定制过程就像您在网上购物一般，随心所欲，简单便捷。 检测技术 RealTime ready 检测基于罗氏独有的通用水解探针库Universal ProbeLibrary (UPL) 技术。UPL 探针是短序列的水解探针，5’ 末端标记荧光素(FAM)，3’ 末端标记淬灭染料。根据短片段序列在生物基因组中的高重复特性，每个探针可与接近 7000 个转录子结合，每个转录子可被约 16 个不同的UPL探针所检测到。因此，仅需要165条短的水解探针，即可覆盖约99%的人类、小鼠、大鼠、果蝇、拟南芥等常见模式生物的基因组。为保持qPCR 探针杂交至模板DNA上所需的特异性及熔解温度，特有的Locked Nucleic Acids (LNA) 结构被整合入每条 UPL 探针序列中 (图 3)。因此，标准 PCR 条件下，高度特异性的 RealTime ready 检测可用于所有实时荧光 PCR 系统中。 RealTime ready qPCR 分析方法 每种 RealTime ready qPCR 分析方法均含有对应于您的靶基因的特异性引物及UPL水解探针。每种分析方法在设计后都使用通用生物学样品材料，以标准PCR条件在LightCycler® 480上进行过测试。 每种分析方法都能满足以下严格标准： n 线性动态范围至少为 3 个数量级。 n PCR 扩增效率为 2.0 ± 0.2。 n 标准曲线 R2 值为 0.99 至 1.00。 n 扩增特异性高，凝胶分析中无副产物生成。 正如所有 UPL 检测，RealTime ready 检测可成功用于所有实时荧光 PCR 仪上。由于仅需加入模板和预混液，RealTime ready可以大量节省您合成引物和荧光探针所需的时间，并且一次性完成
-
新的MagNA Pure 96 DNA和病毒核酸试剂盒：兼顾快速和高产率的全新解决方案
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
新的MagNA Pure 96 DNA和病毒核酸试剂盒： 兼顾快速和高产率的全新解决方案 Michael Kirchgesser*, Agnes Aschenbrenner, Irene Huber, Sarah Müller, Heike Girgnhuber, Hubert Schuldlos, Anna Werner, Werner Malmberg, Robert Steiner, Martin Victor, Thomas Kirschbaum, Claudia Kappelsberger, Michael Knoll, and Peter Wenzig 德国匹茨堡，罗氏应用科学部 *通讯作者： 前言 MagNA Pure 96是最近进入市场的一种全新仪器：它是一种全自动、超高速的系统，它能用于将高质量核酸从各种样品类型中高速分离，1小时以内即可完成多至96个样本的自动纯化，处理的样品容量最高达到1 ml。该系统采用装有预装式即用型试剂的优化试剂盒，并配有相应的自动分离方法。 这种试剂盒的配置基于沿用已久的磁珠技术，后者成功用于不同的MagNA Pure系统已有多年。MagNA Pure 96试剂盒由配有不同预装式密封缓冲液容器的试剂盘和含磁粉的专用瓶组成。 可提供的所有试剂盒都有小容量（SV）和大容量（LV）的不同规格，可根据要处理的样品量决定。 本文描述了2种MagNA Pure 96 DNA和病毒核酸试剂盒及其方法的特征和性能。 图1：试剂盒组件。 试剂盒、试剂盘、磁珠瓶。 材料和方法 新的试剂盒及方法是用人EDTA血浆、枸橼酸盐血浆、血清和全血以及培养细胞（K562和HeLa）作为样品材料开发和测试的。 全血不需要经过预处理即可用于基因组DNA分离。 培养细胞小球在使用前要悬浮于PBS中。 在病毒核酸分离时，使用前在样品中添加不同量的DNA病毒（巨细胞病毒、EB病毒、细小病毒B19）和RNA病毒（甲型肝炎病毒、甲型H1N1流感病毒）。然后用移液管将样品移入MagNA Pure 96仪器上的MagNA Pure 96处理盒中。所有样品至少以8倍复制进行试验。 根据实验需要，纯化核酸的洗脱体积被设定为50μl、100μl或200μl。在LightCycler® 480仪器上采用吸光度（OD）测定、琼脂糖凝胶电泳和/或参数特定的定量实时PCR和RT-PCR分析对洗脱液进行分析。采用1
-
MagNA Pure 96 DNA及病毒核酸试剂盒：兼顾快速和高产率的全新解决方案
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
新的MagNA Pure 96 DNA和病毒核酸试剂盒： 兼顾快速和高产率的全新解决方案 Michael Kirchgesser*, Agnes Aschenbrenner, Irene Huber, Sarah Müller, Heike Girgnhuber, Hubert Schuldlos, Anna Werner, Werner Malmberg, Robert Steiner, Martin Victor, Thomas Kirschbaum, Claudia Kappelsberger, Michael Knoll, and Peter Wenzig 德国匹茨堡，罗氏应用科学部 *通讯作者： 前言 MagNA Pure 96是最近进入市场的一种全新仪器：它是一种全自动、超高速的系统，它能用于将高质量核酸从各种样品类型中高速分离，1小时以内即可完成多至96个样本的自动纯化，处理的样品容量最高达到1 ml。该系统采用装有预装式即用型试剂的优化试剂盒，并配有相应的自动分离方法。 这种试剂盒的配置基于沿用已久的磁珠技术，后者成功用于不同的MagNA Pure系统已有多年。MagNA Pure 96试剂盒由配有不同预装式密封缓冲液容器的试剂盘和含磁粉的专用瓶组成。 可提供的所有试剂盒都有小容量（SV）和大容量（LV）的不同规格，可根据要处理的样品量决定。 本文描述了2种MagNA Pure 96 DNA和病毒核酸试剂盒及其方法的特征和性能。 图1：试剂盒组件。 试剂盒、试剂盘、磁珠瓶。 材料和方法 新的试剂盒及方法是用人EDTA血浆、枸橼酸盐血浆、血清和全血以及培养细胞（K562和HeLa）作为样品材料开发和测试的。 全血不需要经过预处理即可用于基因组DNA分离。 培养细胞小球在使用前要悬浮于PBS中。 在病毒核酸分离时，使用前在样品中添加不同量的DNA病毒（巨细胞病毒、EB病毒、细小病毒B19）和RNA病毒（甲型肝炎病毒、甲型H1N1流感病毒）。然后用移液管将样品移入MagNA Pure 96仪器上的MagNA Pure 96处理盒中。所有样品至少以8倍复制进行试验。 根据实验需要，纯化核酸的洗脱体积被设定为50μl、100μl或200μl。在LightCycler® 480仪器上采用吸光度（OD）测定、琼脂糖凝胶电泳和/或参数特定的定量实时PCR和RT-PCR分析对洗脱液进行分析。采用15μ
-
粒度测试的基本概念和基本知识问答
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
一、粒度测试的基本概念和基本知识问答 1. 什么是颗粒？ 颗粒是具有一定尺寸和形状的微小的物体，是组成粉体的基本单元。它宏观很小，但微观却包含大量的分子、原子。 2. 什么叫粒度？ 颗粒的大小称为颗粒的粒度。 3. 什么叫粒度分布？ 用一定方法反映出一系列不同粒径颗粒分别占粉体总量的百分比叫做粒度分布。 4. 粒度分布的表示方法？ 1) 表格法：用列表的方式给出某些粒径所对应的百分比的表示方法。通常有区间分布和累计分布。 2) 图形法：用直方图和曲线等图形方式表示粒度分布的方法。 3) 函数法：用函数表示粒度分布的方法。常见有R-R分布，正态分布等。 5. 什么是粒径？ 粒径就是颗粒的直径，一般以微米为单位。 6. 什么是等效粒径？ 等效粒径是指当一个颗粒的某一物理特性与同质球形颗粒相同或相近时，我们就用该球形颗粒的直径来代表这个实际颗粒的直径。根据不同的测量方法，等效粒径可具体分为下列几种： 1) 等效体积径：即与所测颗粒具有相同体积的同质球形颗粒的直径。激光法所测粒径一般认为是等效体积径。 2) 等效沉速粒径：即与所测颗粒具有相同沉降速度的同质球形颗粒的直径。重力沉降法、离心沉降法所测的粒径为等效沉速粒径，也叫Stokes径。 3) 等效电阻径：即在一定条件下与所测颗粒具有相同电阻的同质球形颗粒的直径。库尔特法所测的粒径就是等效电阻粒径。 4) 等效投影面积径：即与所测颗粒具有相同的投影面积的球形颗粒的直径。图像法所测的粒径即为等效投影面积直径。 7. 为什么要用等效粒径概念？ 由于实际颗粒的形状通常为非球形的，因此难以直接用粒径这个值来表示其大小，而直径又是描述一个几何体大小的最简单的一个量，于是采用等效粒径的概念。 8. 什么叫D50？ D50是指累计分布百分数达到50％时所对应的粒径值。它是反映粉体粒度特性的一个重要指标之一。D50又称中
-
土壤水势，含水量及其生理意义
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
土壤中的水分可以用两种方式描述：含水量和水势。含水量是指单位体积土壤中水分的体积或单位重量土壤中水分的重量，单位分别是cm3/ cm3%，kg/ kg%；土壤水势（water potential）是在等温条件下从土壤中提取单位水分所需要的能量，单位是巴（bar, 1 bar=100 kPa）土壤水分饱和，水势为零；含水量低于饱和状态，水势为负值，土壤越干旱，负值越大（测量土壤水分的仪器有TRS-II土壤水势测定仪，详细介绍可见http://www.top17.net/product/1708.html）。一般植物的生存范围是0到-15巴（-1500 kPa）。含水量,水势，这两个指标分别相当于电学中的电子密度和电势。和水势不同，含水量不能反映土壤水分对植物得有效性。譬如15%的含水量，在沙土中已经相当湿润，几乎所有植物都可以生长。如果黏土含水15%，几乎所有植物都无法生存。相反，如果用水势作为测量单位，测量结果则与土壤性质无关，不管土壤性质，不管地理位置，-10巴的土壤都很干旱，-0.5巴的土壤都很湿润。可以看出，单凭含水量，你无法判断土壤的干旱程度。某植物在土壤A中生长的最佳含水量为20% ，换一种土壤B，情况就不见得如此。因此，用含水量进行植物和环境的关系的研究，其结果一般无法推广。成千上万的人用含水量进行植物和水分的研究，但他们的研究结果无法应用于实际。这不仅是人力资源的浪费，更是水资源的浪费。可见测量土壤水势及土壤含水量的意义重大，本文向大家推荐两款测量土壤水分与土壤水势的仪器，测量土壤水分的仪器是TZS-II土壤水分速测仪，此款仪器可快速测定土壤的含水量，详细介绍请见；测量土壤水势的仪器是TRS-II土壤水势测定仪，其仪器携带方便，操作简单，在测量土壤水势方面得到广泛应用，其详细介绍请见。以上是本人对土壤水势及含水量的认识及见解，希望能帮助各位。
-
YSI 6600主导型 多参数水质监测仪 常见问题解答
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
YSI 6600主导型 多参数水质监测仪 常见问题解答 YSI 6600与YSI 6920相比有哪些不同的功能？ YSI 6600的许多特征具有其独特性。YSI 6600有一个深度传感器，可在水下200米测量。电池寿命约为90天（25℃，每15分钟采样间隔）。YSI 6600的软件适用于英语或法语操作系统，同时还在开放其它语言的版本。除此之外，两个光学传感器接口可用于测量浊度、叶绿素或罗丹明。 YSI 6600 的哪些探头可在野外更换？ 除深度/水位传感器不需要更换外，所有探头均可在野外更换。pH和ORP探头被组合在一个传感器中。 哪些离子选择电极传感器可同时使用？ 所有离子选择电极传感器均可同时使用：酸碱度、氧化还原电位、铵氮/氨氮、硝酸盐和氯化物。 YSI 6600 最大可测深度是多少？ YSI 6600最大可测深度为200米。 YSI 6600有透气式水位和明渠流量测量功能吗？ 有。在浅水中，YSI 6600可以用作高精度的透气式水位测量；YSI 6600还可测明渠流量。 YSI 6600 有内存吗？ 有内存。YSI 6600的内存可用于无人值守监测，每15分钟采样间隔，可投放使用75天，记录150,000个读数。 YSI 6600 适用于10厘米直径的测井吗？ 是的，YSI 6600的直径仅为8.89厘米。 YSI 6600可测量多少参数？ 功能完备的YSI 6600可支持11个不同的直接测量参数和7个计算参数。 YSI6600适合剖面分析吗？ 是的，实际上大多数用户正在使用YSI 6600作剖面分析。探头上的深度传感器提供了数据的空间位置信息，探头自身的时间信息也同时被复合在一条条由其它传感器测量的参数信息上，构成了用户需要的在剖面上水体变化的完整信息。
-
PC-ADP 常见问题解答
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
PC-ADP（脉冲相干声学多普勒剖面仪）代表了多普勒剖面技术的技术发展水平。因为它在固件和硬件上与传统ADP都有所不同，因此，对于这种产品，用户常有很多疑问。 脉冲相干模式到底是什么？ 在脉冲相干模式下，ADP发送一对脉冲，两脉冲间通过一个时间的延迟将之分开。然后测量每个脉冲返回信号的相位。被时间分开的两脉冲之间的相位变化直接与水中颗粒的速度成比例。这与SonTek ADV所采用的技术相同。ADV能以极低的不确定度进行高精度测量而著称。ADP系统的PC模式所能做的是能允许极小单元大小（小至1.6厘米），并且是极低的测量不确定度。有关完整解释，请参阅PC-ADP的操作原理。 PC-ADP与具有“脉冲相干模式”的ADP有何不同？ 作为一种可选的功能，SonTek的许多ADP系统支持脉冲相干模式操作。我们常说的“PC-ADP”是脉冲相干的一个固件选项、特殊硬件和软件的组合（包括一个经优化的用于高分辨率剖面测量、半径为10厘米的换能器头）。 人们通常如何配置PC-ADP？ 最为常见的应用是用于输沙率的研究或其它底部边界层的研究工作。在这些应用中，通常将PC-ADP头朝下安装在三脚架上或其它结构上，距底部约1～2米。当然，也可将其朝上安装以用于其它研究。 PC-ADP可否用于低流速的测量？ 脉冲相干技术是一项优秀的技术，可测量低至毫米级/秒的低流速。最小分辨率为0.1毫米/秒。 PC-ADP可否用于高流速或动态环境？ 高于2米/秒的水流建议使用标准ADP模式测量。 哪种压力传感器可用于PC-ADP？ PC-ADP可以选用连续型、模拟型或频率型各种不同的压力传感器。模拟传感器是一种应变式的压力传感器，位于PC-ADP换能器的头部，其精确度为0.1%；还可以选择更为先进的、精确度为0.01%的RPT共振式压力传感器，但其最大深度限于20米；作为第三个选择，我们也可以外置Paroscientific公司生产的石英压力传感器。 其它有哪些传感器可连接于PC-ADP？ ADP电子设计允许与外部的一个串行口设备和两个模拟口设备（0-5V）集成。通常，串行口设备是
-
LGR激光分析仪参考文献
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
LGR是世界上激光痕量气体和稳定性同位素分析技术的领导者。随着OA-ICOS技术日臻完善，为研究者带来了更大的方便，在以往很难测量的领域提供了测量的可能。 因为仪器性能优良，数据稳定，越来越得到用户的认可，目前全世界已有400多台分析仪在为人类更好的服务。仪器广泛应用在碳水通量测定，大气痕量气体变化的测量，水文同位素研究，CO2/H2O稳定性同位素廓线测量和土壤CH4通量等方向的研究。在近几年在国际权威刊物如Nature、Science上发表了大量的文献；同时，很多研究者对LGR激光分析仪做了性能等方面的测试，结果表明分析仪精度高、稳定性好，是目前世界上最先进的激光分析仪。现将部分文献目录列出，共各位用户参考。 Los Gatos 参考文献： [1] Natalia Shakhova, Igor Semiletov, Anatoly Salyuk, Vladimir Yusupov, Denis Kosmach, Örjan Gustafsson. Extensive Methane Venting to the Atmosphere from Sediments of the East Siberian Arctic Shelf. Science, 2010, 327: 1246-1250. [2] D. R. Bowling, J. B. Miller, M. E. Rhodes, S. P. Burns, R. K. Monson, D. Baer. Soil, plant, and transport influences on methane in a subalpine forest under high ultraviolet irradiance. Biogeosciences, 2009, 6: 1311-1324. [3] P. Sturm, A. Knohl. Water vapor δ2H and δ18O measurements using off-axis integrated cavity output spectroscopy. Atmospheric Measurement Techniques Discussions, 2009, 2: 2055–2085. [4] Christopher T. et al., The influence of environmental water on the hydrogen stable isotope ratio in aquatic consumers. Oecologia, 2009, 161: 313-324. [5] D. Penna, B. Stenni, M. S. Wrede. et al.. On the reproducibility and repeatability of laser absorption spectroscopy measurements for δ2H and δ18O isotopic analysis. Hydrology and Earth System Sc
-
鸡β内酰胺酶（β-lactamase）ELISA试剂盒使用说明书
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
鸡β内酰胺酶（β-lactamase）ELISA试剂盒使用说明书 document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') document.write('') 6. 标本采集后尽早进行提取，提取
-
原代细胞传代技术
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
原代细胞传代技术 一、贴壁细胞的消化法传代 1、吸除或倒掉瓶内旧培养液。 2、加入1ml左右消化液（胰蛋白酶或与EDTA混合液）轻轻摇动培养瓶，使瓶底细胞都浸入溶液中。 3、消化2-5分钟后把培养瓶放置在显微镜下进行观察，发现原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，在还未漂起时，弃去消化液，加入培养液终止消化。 4、用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液，分别接种到另外两到三个培养瓶中，置37℃培养箱中继续培养。第二天观察贴壁生长情况。 二、悬浮细胞的传代 1、直接传代 ① 让悬浮细胞慢慢沉淀在瓶底后，将上清吸掉1/2-2/3。 ② 用吸管吹打形成细胞悬液后，分别接种到另外两到三个培养瓶中，置37℃培养箱中培养。 2、离心法传代 ① 将细胞连同培养液一并转移到离心管内，离心800-1000rpm，5分钟。 ② 去除上清，加新的培养液到离心管内，用吸管吹打使之形成细胞悬液。 ③ 将细胞悬液分别接种到另外两到三个培养瓶中，置37℃培养箱中培养。
-
原代细胞分离技术
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
原代细胞分离技术 取人或动物体内（或胚胎）的组织，将其剪碎至1mm3的组织块，再采用的如下方法进行分离培养： 一、悬浮细胞的分离方法 1、将血液、羊水、胸水或腹水等悬液直接转至离心管中，1000rpm/分钟离心5分钟。 2、去掉上清，离心沉淀用无钙、镁的PBS清洗后1000rpm/分钟离心5分钟。此步重复两次。 3、用培养基重悬，调整适当细胞浓度后分瓶培养。 4、如选用悬液中某种细胞，可采用离心后的细胞分层液收获目的细胞。 二、实体组织材料的分离方法 （一）机械分散法 1、纤维成分很少的脑组织，部分胚胎组织，用剪刀剪碎至1mm3的组织块。 2、用PBS清洗两次后 ①用吸管吹打，分散组织细胞。 ②或将已充分剪碎分散的组织放在注射器内（用九号针），使细胞通过针头压出。 ③或在不锈钢纱网内用钝物（注射器钝端）压挤使细胞从网孔中压挤出。 3、收集细胞转入离心管中，1000rpm/分钟离心5分钟。 4、去上清，加入含血清的培养基，重悬后移至培养瓶中培养。 （二）消化分离法 1、酶消化分离法（过夜冷消化法） ①细胞间质较少的软组织，如肝、肾、甲状腺、羊膜、胚胎组织、上皮组织等，用Hanks液清洗组织三次，剪成碎块大小为4毫米左右。 ②再用Hanks液洗2-3次以除去血球和脂肪组织。 ③加入0.25%的胰蛋白酶，摇匀后放4℃过夜。 ④次日再用Hanks液洗涤，弃去上清，共洗2-3次。 ⑤加入少量含血清的培养基吹打分散，细胞计数，按适当的浓度分瓶培养。 2、非酶消化法（EDTA消化法） ①把组织块剪碎，呈1mm3大小的组织块。 ②将碎组织块在平皿中用无钙镁PBS洗2-3次。 ③加入消化液（胰蛋白酶或胶原酶或EDTA）于37℃水浴中作用适当时间（中间可轻摇1~2次），若组织块膨松呈絮状可终止，若变化不大可更换一次消化液，继续消化直至膨松絮状为止。 ④弃去上清，加入含有钙、镁离子的培养基中止消化反应，并洗涤2-3次后，加入完全培养基。 ⑤用吸管吹打，使细胞充分散开后用纱网过滤后分瓶培养。
-
正常人脐静脉原代内皮细胞培养
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
PriCells - 正常人脐静脉原代内皮细胞培养 一、实验试剂 1、培养基： PriCells Medium + 10% FBS + 1% P/S + PriCells Supplement 2、冻存液： PriCells Medium + 20% FBS + 10% DMSO 3、洗涤液： 1 × PBS （pH 7.4 ）+ 1% P/S 4、染色液： 0.4% Trypan Blue 5、消化液： PriCells Isolation of Primary Cell Kit 6、检测试剂：抗人Ⅷ因子抗体，荧光标记二抗，乙醇丙酮混合液（1：1） 二、实验器械 1、培养皿 2、培养瓶 3、直剪和眼科剪 4、眼科镊和止血钳 5、10ml注射器 6、玻璃滴管 7、烧杯 8、15ml离心管 三、实验流程 取材 ↓ 洗涤脐带外血渍,将胶带剪为15cm左右长 ↓ PBS灌洗，去掉淤血 ↓ 推注空气，排出残存1 × PBS （pH 7.4 ） ↓ 注射器灌注消化液（PriCells），至另一端有消化液流出时用止血钳截断，继续灌注消化液至血管充盈用另一止血钳截断此端，放置到含抗生素1 × PBS （pH 7.4 ）烧杯中 ↓ 烧杯放置到37℃，15-20min水浴 恒温消化，间隔2-3min摇动 ↓ 收集消化液，用培养基洗涤静脉3-4次，3ml/次，之后加入消化终止液（PriCells）反应 ↓ 离心，1000rmp,10min，弃去上清 ↓ 重悬，计数细胞 ↓ 接种密度以5 × 105个/ml ↓ 培养37℃，5%CO2 四、实验操作 1、培养瓶预包被。试验前一天预包培养瓶，置于超静台吹干或45℃烘箱烘干（切记保持无菌），4℃冰箱放置，备用。 2、取材：正常分娩胎儿脐带，长15-20cm。 3、材料预处理：将获取的血管放入含有1% P/S的1 × PBS （pH 7.4 ）中反复洗涤，去除脐带外部的血渍，之后用注射器吸取洗涤液反复灌住冲洗脐带静脉血管，至血管内无血渍，洗涤液澄清为止。 4、消化液：用注射器关注空气推注入血管中，排出残余洗涤液，在从血管一端开口处注入消化液，当另一开口端有消化液流出即可用止血钳结扎血管，继续灌注消化液，到血管充盈为止，同样用止血钳截流血管，放入含无菌PBS的烧杯中37℃水浴消化30min。 5、终止消化：去掉止血钳，让酶
-
正常小鼠原代骨骼肌细胞培养
作者：德尔塔 日期：2022-04-30
PriCells –正常小鼠原代骨骼肌细胞培养 一、实验试剂 1、培养基： PriCells Medium + 10% FBS + 1% P/S + PriCells Supplement 2、冻存液： PriCells Medium + 20% FBS + 10% DMSO 3、洗涤液： 1 × PBS （pH 7.4 ）+ 1% P/S 4、染色液： 0.4% Trypan Blue 5、消化液： PriCells Isolation of Primary Cell Kit 6、检测试剂：鼠抗人及大鼠desmin一抗，肌球蛋白（myosin）单克隆抗体 二、实验器械 1、培养皿 2、培养瓶 3、直剪和眼科剪 4、眼科镊和止血钳 5、烧杯 6、15ml离心管 三、实验流程 取肌肉于平皿，Hank’s洗3次 ↓ 剔除脂肪、结缔组织 ↓ 肌肉标本剪约0.1cm3小块 ↓ 移至离心管，Hank’s洗3次 ↓ 静置1min，弃去上层液及漂浮组织 ↓ 0.25%胰酶，37度水浴消化20min，每5min摇动或吹打1次 ↓ 生长培养基终止消化，反复吹打，依次100，200，400目过筛 ↓ 离心，1000rmp,10min，弃去上清 ↓ 重悬，计数细胞，接种密度以5 × 105个/ml ↓ 悬液加入未经PPL包被培养瓶中，差速贴壁去除成纤维细胞，37度，1h ↓ 转移包被瓶中，生长培养基培养，培养37℃，5%CO2 ↓ 4d换液，以后每天换 四、实验操作 1、 新生小鼠拉颈椎处死，乙醇消毒腿部，在超净工作台内，取肌肉于平皿，Hank’s洗3次，剔除脂肪、结缔组织，将肌肉标本剪约0.1cm3小块； 2、 将剪碎的肌肉移至离心管，Hank’s洗3次，静置1min，弃去上层液及漂浮组织 3、 向上述离心管中加入0.25%胰酶，37度水浴消化20min，每5min摇动或吹打1次离心管，然后加入生长培养基终止消化； 4、 反复吹打后，依次100，200，400目过筛，滤液收集后，1000r/min离心10min； 5、 弃去清夜，用生长培养基重悬细胞，悬液加入未经PPL包被的培养瓶中，差速贴壁去除成纤维细胞，37度培养1h后，转移包被瓶中，生长培养基培养，4d换液，以后每天换液1次。 五、细胞鉴定 1、显微鉴定：刚分离出的原代细胞比较小，呈球形，折光性强。12h后，细胞开始贴壁，72h后贴壁完全，细胞逐渐延展成梭
咨询热线
18133906270
德尔塔官方微信