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帕金森病动物模型制备
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
为模拟人类PD，理想的动物模型应具备以下一些特点： (1)多巴胺能神经元在出生时数量及形态正常，青年时期开始逐渐选择性地减少，减少量超过50％，且容易通过神经化学和神经生理学的方法检测到； (2)模型应能容易检测其运动功能的损伤，包括运动迟缓、肌僵直和静止性震颤等PD的主要症状； (3)模型应能显示出路易小体的形成；(4)如果模型是遗传性的，应基于单一突变而使突变模型有着强大的传播能力； (5)模型应有相对较短的疾病周期(如数月)，以使药物筛选得以经济、快速地进行。 国际通用国内应用较多是两种方法：①通过在大鼠的黑质或内侧前脑束注射6羟多巴胺（6-OHDA）②通过对模型动物(如:猴、小鼠、猪等)进行1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTR）的管饲法和立体定位注射等方法。前者是较精典的模型制备的方法，也是在国内较早开展的，但是其存在①神经元的毁损出现的较早，这与临床PD病人的中脑黑质多巴胺能神经元的渐进性死亡不同②近距离的毁损很难把握毁损的程度，这使得采用这种方法获取部分损毁的模型的成功率很低；较之前者采用MPTP管饲法和立体定位注射方法，在国内最近几年才运用到帕金森动物模型的制备，国外已经利用MPTR在猴和小鼠身上建立了较为理想的PD模型，制备通常采用皮下、静脉、腹腔注射和肌肉给药，具有方法可靠且重复性较好。但是其危险性较高，对于试验人员和试验条件有着严格的要求。 1、模型鼠制备 1968年Ungenstdet首先报道采用6—经多巴胺(6-OHDA)在大白鼠造成帕金森病动物模型．该动物旋转模型的某些特点和人类贼金森病相似。近来，人们根据6—OHDA的注射部位及注射剂量不同，来造成模拟不同阶段帕金森病的动物模型。 注射6-OHDA来制备帕金森病鼠的步骤： 1）实验选择体重250~300g健康雄性Wistar大鼠36只来制备帕金森氏病的大鼠模型 2）大鼠用戊巴比妥（48mg/kg）腹腔注射注射麻醉 3）解剖操作 将麻醉后的大鼠固定于江湾I型C立体定向仪上，头部正中切口，剥离骨膜，止血。参照George图
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大鼠痛觉模型的建立方法,Alzhermer病的动物模型,大鼠神经功能缺损的详细评分标准
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
大鼠痛觉模型的建立分为下面几个步骤： 1、领取SD雄性大鼠，体重200-220g为宜。 2、试验前测试痛阈（作者采用仪器为意大利Ugobasile的heat-flux meter测痛仪），痛阈极端大/小的挑除不用。 3、试验前至少3天每日上午9点－9点半将大鼠放入观察笼中适应环境。 4、试验时用微量注射器抽取100-200ul甲醛（浓度可自己定）于大鼠下肢脚掌皮内注射，注射后留置针头约30－60秒。 5、试验时，将大鼠放入观察笼，摄像，人员必须全部离开。 6、以大鼠抬足和舔舐足掌为指标记录相关数据。 注意事项：大鼠饲养时要勤换垫料（**每天换）。如果有大鼠胃肠不好，要及时用庆大霉素给予**，因为大鼠的健康状态对其行为影响甚是明显。为保证试验结果的准确性，空调应24h开放，保证室内温度22℃左右（环境温度小于16℃大鼠的行为明显改变！）并且确保每天能够光照12h。 SD大鼠200-250克。用3%戊巴比妥钠(35-40mg/kg体重)腹腔麻醉动物后，固定在脑立体定位仪上(参照大鼠全脑立体定位图谱)，以前囟为零点，选出进刀坐标：前后坐标(AP)1.8mm，中线旁开(L)坐标1.0mm，腹侧坐标(v)4. 0mm。首先用牙科钻在上述坐标的钻孔开骨窗，去除颅骨，挑开硬脑膜，用自制双刃不锈钢刀片(宽2mm，厚0.1mm)按上述坐标从脑冠状面插入脑内。然后，将刀向外移动1.5mm，再降刀1mm，并上下抽刀10余次，以完全切断弯窿海马伞。最后将刀片退至L1.0mm处，抽出刀片。 动物分组 1. 实验组：10只，按上述方法切断左侧穹窿海马伞； 2. 假手术组：10只,开颅并挑开硬膜膜，切断皮质，但不切断穹窿海马伞，最后缝合头皮； 3. 空白对照组：10只，做水迷宫行为学检测和电生理检验。以Morris水迷宫行为学检测。（提供两种数据）定位航行能力。 大鼠神经功能缺损的详细评分标准 1．神经行为评分 在梗死后24 h,按照Masao Shmi izu-Sasamata的方法[3]对所有大鼠进行神经行为评分,评分标准包括:①自主活动的程度,②左前肢偏瘫,③提尾时左前肢伸不直,④抗侧推能
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心肌缺血和心肌梗塞动物模型复制
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
复制动物心肌缺血和心肌梗塞模型的方法有结扎冠状动脉法，有的结扎左旋冠脉，但多数是结扎左前降冠脉，鉴于结扎冠状动脉主干死亡率高，故亦有使用多处结扎的方法，即同时结扎几处的冠脉分支，以形成一个梗死区域。经验证明，结扎的冠状动脉，因其分布的心肌范围和该区内是否有其他冠状动脉，而决定着心肌梗塞的面积，结扎方法是建立很早而至今还普通使用的方法。此外，还有用油质、石松子孢或汞等作弥散性冠状动脉微栓塞或选择性冠状动脉梗塞的。前者大多是在早年使用的方法，近年来发明制造了塑料微粒手术，以其数量的多少和球体的大小，来决定不同范围的梗塞区。后者则以某支冠状动脉为目标，通过导管术输入颗粒样或小球类异物，这种方法要求技术熟练，条件严格。还有通电造成冠状动脉内栓塞等方法。但这些方法因受多种条件限制，使用得还不多。 近年来为建立一种逐渐发生发展的心肌梗塞模型，较为广泛地使用了一种遇水膨胀的纤维素环（Ameriod），这种纤维素环套在预期闭塞的冠状动脉上，环外边以金属圈（如不锈钢）固定起来，手术后两周或更长的时间内可将冠状动脉逐渐闭塞。这种模型制造较易，动物生存率高。但即是使用这样的方法，仍然缺乏人类的动脉粥样硬化的病理学基础。近来有报告指出，家猪可以喂饲高脂饮食形成冠状动脉的粥样硬化，引起心肌缺血，又可以通过改变饮食或**使动脉粥样硬化的斑块消退。看来，这是值得注意探索的目标。 复制心肌梗塞模型所选用的动物，大多用哺乳动物，其中最常用的是犬。其他还有兔、小牛、猪、豚鼠、大鼠等。狗的体积大小适中，性情温顺易于训练。但狗的冠状血管结构和人相比，有较大差异，尤其是犬冠状动脉变异多，侧支吻合丰富，室间隔动脉特别发达等，常使研究人员苦恼。近年报导，猪冠状循环系统结构酷似人类，故提倡用家猪或小猪作心肌梗塞的实验研究，但国内尚未见到报告。其他小动脉兔、鼠等，体积过小，取材受限，故除特定条件以外使用的不多．灵长类动物狒狒、猴子
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T迷宫、Barnes迷宫、八臂辐射迷宫、Morris水迷宫比较
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
T迷宫、Barnes迷宫、八臂辐射迷宫、Morris水迷宫比较 在非临床有效性研究过程中，主要采用行为学试验研究药物对动物学习记忆功能的影响。人和动物的内部心理过程是无法直接观察到的，只能根据可观察到的刺激反应来推测脑内发生的过程，对脑内记忆过程的研究只能从人类或动物学习或执行某项任务后间隔一定时间，测量他们的操作成绩或反应时间来衡量这些过程的编码形式、贮存量、保持时间和它们所依赖的条件等等。学习、记忆实验方法的基础是条件反射，各种各样的方法均由此衍化出来。目前已经建立了大量的学习记忆研究的行为学方法，各有优缺点。现将常用的迷宫简述如下。 1、T迷宫实验 观察指标：动物完成实验所需的时间、每次探索和前一次不同臂的比例。 优缺点：优点是T型迷宫未提供奖惩条件，完全是利用动物探索的天性，因此能最大可能的减少影响实验结果的混杂因素。缺点是啮齿动物有天生的偏侧优势，即动物在T型迷宫中更偏向于一边走（左边或右边），而且这种现象存在种系差异以及性别差异。 由于动物每次转换探索方向时都需要记住前一次探索过的方向，因此T型迷宫实验能很好的测验动物的工作记忆，从而测定动物的空间记忆能力。和T型迷宫类似的还有Y型迷宫，其实验的设计原理和实验方案和Y型迷宫都十分相似，只是把迷宫的形状由T型换成Y型。 2、Barnes迷宫实验 原理：动物利用提供的视觉参考物，有效确定躲避场所的臂所在的部。Barnes迷宫由一个圆形平台构成，在平台的周边，布满了很多穿透平台的小洞。平台的直径、厚度以及洞口宽度根据实验动物不同而不同。洞口数目由实验者习惯而定，一般为10到30个。在其中一个洞的底部放置有一个盒子，作为实验动物的躲避场所；其它洞的底部是空的，试验动物无法进入其中。实验场所和其它迷宫实验场所类似，要求能给实验动物提供视觉参考物。实验方案根据实验者的习惯以及不同的实验要求而定，每次训练后都用70%的酒精进行清洗，并变换正确的洞口，但洞口的空间位置不变
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脑立体定位仪详细实验方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
一、实验目的 1. 了解脑立体定位技术。 2. 掌握脑立体定位仪及脑图谱的使用方法。 二、实验原理 脑立体定位技术被广泛的运用于脑的损毁、刺激和脑电记录的精确定位中，成为研究脑结构和功能必不可少的工具。脑立体定位技术主要是使用脑立体定位仪作为定位仪器，利用某些颅骨外面的标志（如前囟、后囟、外耳道、眼眶、矢状缝等）或其它参考点所规定的三度坐标系统，来确定皮层下某些神经结构的位置，以便在非直视暴露下对其进行定向的刺激、破坏、注射药物、引导电位等研究，是神经解剖、神经生理、神经药理和神经外科等领域内的重要研究方法。常用的实验动物，如大鼠、小鼠、猫等高等哺乳动物以及鸟类，其均有完全的外耳道，可用（耳棒）来定位。在确定了颅外标记之后，就可按脑立体定位图谱所提供的数据进行定位操作。 三、实验器材 ZS-B/C516000（规格参数参考网站：），MC-5微操作仪，常规手术器械，钻孔针，纱布，干棉球，酒精，0.4%戊巴比妥钠（麻醉剂，现配现用），生理盐水，1ml注射器，3%双氧水， 小白鼠。 四、实验步骤 1.脑定位仪的使用 1.1 校验仪器 定位仪经过搬动或长期不用后，使用前需先加以校验。重点是检验电极移动架各滑尺是否保持直角，可用三角板测定各滑尺所成的角度是否是直角；各衔接部与螺丝有没有松动；滑尺是否太松；检查主框两臂的平行情况；最后观察固定头的装置两侧对称程度，小框是否与主框平行。检查仪器无故障后，可进行下列校验性操作： （1）将两侧耳杆柱旋松，在主框上前后滑动，然后再按照原规定刻度装好，看两侧耳杆尖是否完全对正。 （2）取下一侧耳杆，将一侧电极移动架装好，前后左右上下移动各滑尺，使装在电极夹上的金属定位针尖正对耳杆尖的中心，记下各滑尺的刻度读数，再卸下移动架再装上，并按上法测定耳杆尖的部位，记下三个滑尺的读数，反复操作取平均数首先将放置水平的脑立体定位仪上的两个滑道，按实验的要求调节好合适的高度后。 （3）然后再用水平尺
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动物行为轨迹分析平台
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
1. Morris水迷宫（Morris water maze, MWM） Morris水迷宫实验是一种强迫实验动物（大鼠、小鼠）游泳，学习寻找隐藏在水中平台的一种实验，Morris水迷宫主要用于测试实验动物对空间位置感和方向感（空间定位）的学习记忆能力，被广泛应用于学习记忆、老年痴呆、海马/外海马研究、智力与衰老、新药开发/筛选/评价、药理学、毒理学、预防医学、神经生物学、动物心理学及行为生物学等多个学科的科学研究和计算机辅助教学等领域，在世界上已经得到广泛地认可，是医学院校开展行为学研究尤其是学习与记忆研究的**经典实验。 2. T迷宫实验（T-maze） T迷宫由1条干和2条臂构成。迷宫使动物在获取食物奖励时没有任何参考，只能根据自我判断选取食饵正确摆放一端。一般在测试前几天对其食量进行限制，测试前2天对动物进行训练。之后进行正式测试，每日连续测试15次，每次测试间隔1min，共测3d。 The T-maze is a choice task. The subject is placed in the base of the "T". Following a short delay, it is allowed to explore the maze and choose to enter either the right or left arms. The choice is scored according to variety of criterion, including spontaneous alternation, cued reward, or to indicate a preference. Based on the criterion used in an experiment, the T-maze can be used to test learning and memory, preferences for stimuli or reward, or spontaneous alternation behavior. 3. 八臂迷宫（Radial Arm Maze） Subjects are placed in the center of an eight-arm radial maze. Four randomly chosen arms are baited with food pellets in opaque containers. The subject is given the opportunity to visit all the arms and collect all the available food pellets. After a rentention delay, the subject is returned to the maze. In win-stay condition
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运动影响学习与记忆研究中的动物模型,学习记忆行为实验
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
运动影响学习与记忆研究中的动物模型 摘自读生物论坛 建立理想的学习记忆实验动物模型，是开展运动与学习记忆研究工作的基础。动物模型的制备应尽量模拟临床致病因素，以期在发病机理、运动干预等方面获得科学的数据。 1.1 老年痴呆（AD）模型 理想的AD动物模型应具有与老年性痴呆相似的基本特征：一、模型动物具有AD的主要神经病理学特征老年斑（SP）和神经元纤维缠结（NFT）；二、出现AD的重要病理变化如大脑神经元死亡、突触丢失和反应性胶质细胞增生等；三、行为学上出现认知和记忆功能障碍。 AD动物模型的研究经过几十年的努力取得了很大进展,目前大致可概括为：一、自然衰老模型：SAMPs鼠由日本京都大学竹田俊男教授开发成功，主要以学习记忆功能增龄性加速衰退，中枢神经系统如皮质、海马等部位发生病理改变为主，是一种比较理想的研究脑老化和痴呆的模型。二、损害模型：Nelson等将D—半乳糖注入大鼠侧脑室，6周后免疫组化分析可见NFT样磷酸化和Aβ淀粉样沉积斑块，引起记忆严重缺失。H等利用小鼠脑室内注射AlCl3、长期腹腔内连续注射或口服铝溶液获得NFT病理改变的动物模型等等。三、转基因动物模型：通过转基因技术将AD的APP变异基因植入鼠，其脑能产生β淀粉样蛋白沉积、神经炎性老年斑、突触减少、星形细胞和小胶质增生、神经元退化及神经元程序性坏死等AD症状。 但每一种模型都只是在一定程度或某些方面模拟了AD的症状和病理改变，它们各有优势和不足，应根据不同的实验目的选择合适的模型。总体趋势从单因素的损伤模型到复合损伤模型，从单转基因模型到双转甚至三转基因模型，但仍存在诸多问题，如造价昂贵等，目前国内多数实验室都选择代价较少的复合损伤AD动物模型。随着对AD发病的细胞分子机制认识的不断深入,新的更完善的动物模型将会出现， 进一步促进对AD发病机制的了解和推动防治研究的进步。运动影响学习与记忆能力动物实验的研究进展. 学习记忆行为实验 第一节 记忆的基本类型和
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morris水迷宫实验准则,morris水迷宫实验的研究进展
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
-----统计方法学准则 潜伏期时间为计量资料，可用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。计数资料，比如说穿越站台的次数，可用X2检验，四格表总例数小于40，或总例数等于或大于40但出现理论数等于或小于1时，应改用确切概率法。 的实验数据较为复杂，其统计分析难度也较大，尤其是对大鼠在寻找隐蔽站台试验中所测得的逃避潜伏期如何进行统计学分析既往存在的问题较多。在过去的研究中，国内文献中有的直接计算每天的平均逃避潜伏期后再进行t检验或方差分析，或根据大鼠的逃避潜伏期在定位航行试验后3d趋于稳定的情况，仅对后3d的平均逃避潜伏期进行t检验或方差分析。有的研究则就1～5d的逃避潜伏期进行单因素方差分析。我们认为以上统计方法均不正确。一个较明显的错误是，以趋于平稳的后3d的平均逃避潜伏期代表记忆水平，首先遇到的问题是仅在生理状态下的大鼠才表现如此，而实验记忆损伤组大鼠往往后3d的逃避潜伏期仍然持续下降。正常青年组和初老年组大鼠的逃避潜伏期在后3d趋于平稳，但实验损伤组大鼠的逃避潜伏期由于学习记忆损伤后其基线较高，第3～5天逃避潜伏期仍然呈下降的趋势，并不象正常对照组一样趋于稳定。不仅如此，还存在上述统计方法对隐蔽站台试验中测得的逃避潜伏期数据统计学特征的认识错误。隐蔽站台试验中的逃避潜伏期具有以下特点：①系重复测量设计，即在给予某种处理后，在不同的时间点上从同一受试对象上重复测量获得的数据(逃避潜伏期)；②影响逃避潜伏期(自变量)统计分析结果的至少有动物组别、检测时点等多个效应因子，效应因子之间存在交互影响效应；③同一受试动物的不同时间点所测得的逃避潜伏期存在高度的自相关性；④存在截尾数据
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复方酸枣仁油栀子油对小鼠学习记忆的影响
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
复方酸枣仁油栀子油对小鼠学习记忆的影响 【摘要】 目的观察酸枣仁油、栀子油组成的复方酸枣仁油栀子油促进学习记忆作用和二药的相互作用。方法采用避暗、跳台、水迷宫实验，分别利用东莨菪碱、环己酰亚胺、亚硝酸钠、4.282mol/L乙醇造成小鼠的记忆获得、巩固、再现障碍，观察复方酸枣仁油栀子油对正常及记忆障碍小鼠的学习记忆作用。结果对正常和记忆损伤小鼠，复方酸枣仁油栀子油、酸枣仁油、栀子油能缩短训练时入室潜伏期、减少入室错误次数;能延长训练后入室潜伏期、减少入室错误次数，减少跳台错误次数;也能缩短水迷宫实验小鼠的登台潜伏期，增加其穿越次数，复方中剂量缩短小鼠登台潜伏期较酸枣仁油、栀子油作用强。结论复方酸枣仁油栀子油、酸枣仁油、栀子油具有促进学习记忆作用;复方中酸枣仁油、栀子油起协同作用。 【关键词】 复方酸枣仁油栀子油;酸枣仁油;栀子油;学习记忆 ABSTRACT: ObjectiveTo observe the effects of compound jujube seed oil and gardenia oil in improving learning and memory in mice as well as the interaction between jujube seed oil and gardenia oil.MethodsScopolamine, cycloheximide, sodium nitrite and ethanol were utilized to study the acquisition, consolidation and retrieval processes of memory in mice by the step-through test, step-down test and Morris water maze test, and to observe the effects of jujube seed oil and gardenia oil compound on learning and memory in mice.ResultsIn normal mice and memory-damaged mice, the jujube seed oil, gardenia oil and their compound all could shorten delitescence of training, reduce error number times of training errors, extend delitescence of post-training by the step-through test, reduce error number of post-training by the step-through and step-down tests, shorten t
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焦虑和抑郁动物模型的建立方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
焦虑和抑郁动物模型的建立方法应激、焦虑和抑郁是密切相关的现象，大多数焦虑和抑郁患者都曾经历严重的心理应激事件。因此，应激事件被看作焦虑和抑郁的原因，或者至少是在遗传基础上的诱因，能够导致情绪障碍的产生。焦虑和抑郁动物模型就是将动物置于一系列应激性情境中（潜在的或实际的威胁，急性的或慢性的），使其产生情绪障碍，然后应用特定的手段来对行为和生理指标进行检测，从而探讨此情绪障碍的深入机制，以及鉴定和筛选抗焦虑药或抗抑郁药。 1.1 焦虑动物模型 焦虑是由预先知道但又不可避免的、即将发生的应激性事件引起的一种预期反应，以恐惧、担心、紧张等精神症状为主要表现，同时多伴有心悸、多汗、手脚发冷等植物神经功能紊乱，其核心症状为担忧。从进化的角度讲，动物所表现的防御反应是人类恐惧和焦虑反应的原始成分。因此，动物所表现的恐惧样反应与人类的焦虑反应是相似的，这就是焦虑动物模型的行为学基础。人类的焦虑反应主要表现为逃避现实、逃跑行为、警觉性提高，同样的行为反应也可在动物身上观察到。例如，当动物面临一种不熟悉的环境时，动物就会表现出一系列的行为和生理反应，包括探究行为的抑制、呆滞、逃走、心率加快、排尿、血浆皮质酮水平增加等。 这些反应可看作动物面临危险情景时防御反应系统的激活。因此，通过科学比较可认为人类和动物具有相同的焦虑情绪状态。焦虑和抑郁生物学机制的研究已经获得了飞速发展，逐渐深入到分子和基因水平。但是，由于研究领域的自身特点，焦虑和抑郁动物模型的研究却发展相对缓慢。而且，在应用过程中研究者倾向于使用比较经典的动物模型，由此，这也限制了其发展。1.2 行为学检测方法 目前常用的焦虑动物模型主要包括两类：一类是基于动物非条件化的模型，根据其行为特点又可分为探究行为模型和社会行为模型。探究行为模型主要包括比较经典的高架十字迷宫实验和旷场实验。 测验将动物置于迷宫的中央区，然后在一定的时间内观察动
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荧光素酶的种类以及应用介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
在细胞和基因的微观世界中研究探索，遗传报告基因是非常有用的"可视化和量化"工具，具有广泛的应用。荧光素酶（萤光素酶）以出色的灵敏度、使用方便、可以定量检测而成为理想的报告基因。 荧光素酶不是特定的分子，是一类中能催化产生生物发光的酶的统称，不同来源的荧光素酶各有特点，可催化底物发出不同颜色的光，有的还可以配合进行双色发光检测。这种酶最早的来源，也是最有代表性一种来自学名为Photinus pyrali'的北美萤火虫体内的萤光素酶，之所以称为萤光素酶，一方面也有助于区分需要激发光源才可以生成激发荧光的荧光蛋白，而萤光素酶是一个催化底物分解的发光反应，荧光素酶在细胞内没有背景，因此可以检测非常微弱的表达，灵敏度更高。不过，随着发光检测设备的不断推进和升级，生物发光灵敏度高，检测方便的优势使得这类酶与荧光蛋白一起渐有取代其他报告基因的趋势。于是，越来越多新的并非来自萤火虫的新荧光素酶进入市场，不再是“萤光”的天下了。 种类更多 来自萤火虫的荧光素酶是最经典的荧光素酶，这个61KD单体酶无需修饰直接具有酶活，催化反应依赖ATP，很适合作为遗传报告基因，也最为人熟知；此外还有Renilla（海肾）荧光素酶，只有36KD大小的蛋白，底物是腔肠素，只需要氧气，不需要ATP，发蓝色光，一直是萤火虫荧光素酶的替代，并常与萤火虫荧光素酶组合成为双色检测，或者作为内对照。 那么，让我们来看看现在有哪些新荧光素酶了？ 1. Gaussia荧光素酶，这是一种分泌型的蓝色荧光素酶，蛋白分子量更小，只有22KD，含有天然的分泌型信号肽，可以引导荧光素酶分泌到细胞培养上清中，从而无需裂解细胞即可检测报告基因活性。所表达的荧光素酶85%以上都会分泌至胞外，不过由于这种分泌型荧光素酶产生的信号比来自Firefly（萤火虫）或Renilla（海肾）的信号强很多倍，所以还可以在细胞裂解物中检测到细胞内残留的荧光素酶。分泌表达为检测带来很大的方便——不需要裂解珍贵的细胞，即可作活细胞实
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高架十字迷宫实验应用及ZS行为学实验视频分析系统
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
高架十字迷宫实验应用 高架十字迷宫实验应用 一、实验概述 高架十字迷宫是利用动物对新异环境的探究特性和对高悬敞开臂的恐惧形成矛盾冲突行为来考察动物的焦虑状态。高架十字迷宫具有一对开臂和一对闭臂，啮齿类动物由于嗜暗性会倾向于在闭臂中活动，但出于好奇心和探究性又会在开臂中活动，在面对新奇刺激时 二、实验仪器 仪器型号为ZS-3000，仪器由十字迷宫组件、摄像装置以及ZS动物行为轨迹分析系统组成 十字迷宫组件两条相对开放臂，材质采用高级医用有机板制作，接触面不反光，可使用酒精清洗除味； ZS为用户提供了两种跟踪算法：灰度法和背景减法，稳定可靠的头、中、尾三点跟踪算法，甚至可以可识别果蝇幼虫等微小生物。 三、实验方法及应用 实验开始时将小鼠从中央格面向闭合臂放入迷宫，记录ZS行为学软件进行数据分析。 进入开放臂次数及停留时间与大鼠的焦虑情绪成负相关，进入开放臂次数越少，停留时间越短，说明老鼠的焦虑情绪越严重。 ZS行为学实验视频分析系统是北京众实迪创科技发展有限责任公司新推出的集视频采集、行为学分析、参数记录及数据统计为一体的新一代行为学实验分析系统。该系统通过可灵活配置的摄像组件，采集模拟或数字摄像机影像，并借助计算机视觉相关算法对影响进行分析和评估，获取被试动物的行为学参数。系统对主流统计软件提供数据接口，实验数据可导出分析，同时带有针对动物实验分析的统计分析报表模块，方便用户快速完成数据的采集分析和电子归档。 系统采用模块化设计，用户可根据需要定义实验场景，通过区域设定和实验条件设定，完成多样化实验步骤，并可根据场景定义和区域定义自动记录实验数据及实验录像。既可通过高清数字摄像系统进行视频数据采集，也可分析预先录制好的视频文件，便于演示与教学。 统一化设计的实验平台，安装简易便捷，方便清洁同时也为用户节约了实验设备占用场地空间。系统可重复测量而不影响其它行为分析，轻松了解实验
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动物行为学实验方法文献综述
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
前言 人生活在世界中，有各种各样的行为。这些行为构成了我们生活的社会环境。动物也有很多行为，繁殖行为、觅食行为、趋避行为、战斗行为、利他行为等等。动物行为学就是研究动物行为的一门学科。通过学习前人对动物行为学的研究得出的规律，能够以观察、实验的方式了解动物的状态、需求等。作为一门经验性学科，实验方法尤为重要。本文作为0迷宫(zero maze)视频分析系统的文献综述，在阅读了12篇动物行为学分析论文之后选择性提取了包括0迷宫在内的几种常规实验方法，详细做了描述。动物行为学实验方法文献综述 2 正文 动物行为学实验主要有学习记忆类、药物成瘾类、抗焦虑抑郁类、抗疲劳类、神经精神类、痛觉测试类共六大类。其中抗焦虑抑郁类又可作为大部分动物行为学实验的前置实验，作为每一组动物的焦虑度的一个评判。当然洞板实验测得的探索性也可以作为一组动物的生理心理指标的。 2.1 学习记忆类 学习记忆类实验要求实验动物与实验员之间已经建立熟识的条件，保证实验员与动物的接触不会对实验动物产生试验中的干扰因素。动物行为学实验方法文献综述 2.1.1 洞板实验 洞板试验是基于大鼠喜欢探洞的天性而设计的，它能有效反映大鼠对新环境的探索能力(Kameiet al, 2004; Calamandrei etal,1996)。实验箱分内外两层，外层为隔音用；内层中间有一方形中空塑料柱用以限制动物的部分活动。内层有22只水平方向的光电管。光电管对面设红外线光源。一组光电管距底板40mm用来记录活动量、向前运动等。另一组光电管距底板125cm用以记录动物站立式的探究活动。箱的4个角各有一个光电管，用以记录拐角处的活动。底板下面0.5cm处由光电管记录大鼠的探洞次数和时间 试验时间30分钟将实验动物放入洞板装置中同时开始测量记录，每隔两分钟读取一次探洞次数用来做探洞次数—时间曲线图。动物行为学实验方法文献综述 洞板实验实际结果中可以看出随着时间推后，探洞频率会降低，如果几天重复再同一装置中测量也能看到
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原核表达（原理、材料与实验方案）的介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
一、原理 1、E .coli 表达系统 E .coli 是重要的原核表达体系。在重组基因转化入E .coli 菌株以后，通过温度的控制，诱导其在宿主菌内表达目的蛋白质，将表达样品进行SDS-PAGE 以检测表达蛋白质。 2、外源基因的诱导表达 提高外源基因表达水平的基本手段之一，就是将宿主菌的生长与外源基因的表达分成两个阶段，以减轻宿主菌的负荷。常用的有温度诱导和药物诱导。本实验采用异丙基硫代-β-D-半乳糖昔（IPTG）诱导外源基因表达。 不同的表达质粒表达方法并不完全相同，因启动子不同，诱导表达要根据具体情况而定。 二、材料 1、诱导表达材料 (1 )LB （Luria—Bertani）)培养基 酵母膏 (Yeast extract)5g 蛋白胨 (Peptone)10g NaCl10g 琼脂 (Agar)1-2% 蒸馏水 (Distilled water)1000ml pH 7.0 适用范围：大肠杆菌 (2 )IPTG 贮备液：2 g IPTG溶于10 ml 蒸馏水中，0 .22 μm 滤膜过滤除菌，分装成1 ml /份，－20 ℃ 保存。 (3 )l× 凝胶电泳加样缓冲液： 50 mmol / L Tris -CI (pH 6 .8 ) 50 mmol / L DTT 2 % SDS （电泳级） 0.1 % 溴酚蓝 10 % 甘油 2、大肠杆菌包涵体的分离与蛋白纯化材料 1 ）酶溶法 （1）裂解缓冲液： 50 mmol / L Tris-CI (pH 8 .0 ) 1 mmol / L EDTA 100 mmol / LNaCI （2）50 mmol / L 苯甲基磺酰氟（PMSF ）。 （3）10 mg / ml 溶菌酶。 （4）脱氧胆酸。 （5）1 mg / ml DNase I。 2 ）超声破碎法 (1 )TE 缓冲液。 (2 )2×SDS -PAGE 凝胶电泳加样缓冲液： 100 mmol / L Tris-HCI (pH 8 .0 ) 100 mmol / L DTT 4 %SDS 0.2 % 溴酚蓝 20 % 甘油 三、实验方案 1、外源基因的诱导表达 (1 ）用适当的限制性内切核酸酶消化载体DNA 和目的基因。 (2 ）按连接步骤连接目的基因和载体，并转化到相应的宿主菌。 (3 ）筛选出含重组子的转化菌落，提取质粒DNA 作限制性内切核酸酶图谱，DNA 序列测定， 确定无误后进行下一步。 (4 ）如果表达载体的原核启动子为PL 启动子，
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感受态专题：磷酸钙法转染HEK293T细胞的介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
一.试剂配制 无菌水ddw： 高温灭菌； 分装； 2XHBS： 280mM NaCl 10mM KCl 1.5 mM Na2HPO4 12 mM glucose 50 mM HEPES Adjust the pH , every 0.05pH from 7.00 to 7.45 using 10N NaOH, then add ddw. to the final volume. 过滤灭菌，分装； 2M CaCl2： 过滤灭菌，分装。 二. 实验过程： 1. 铺细胞： 选择状态良好的293T细胞传代， 2-3x105个细胞/35mm dish。 2. 20-24h后，待细胞长至铺满瓶底约50-70%的时候，进行转染。下面就35mm dish为例，采用以下转染体系： ddw： 105ul plasmid： 2 ug （如0.5ug/ul， 即用4ul） 2M CaCl2： 16.5ul 2XHBS： 125ul 按上述顺序，往eppendorf管中依次加入上述四种试剂。 先将前三者混匀， 最后加2XHBS。 一种方法是，加2XHBS时要逐滴加入， 吹打至微现乳白色， 立即均匀滴入培养皿，轻轻摇匀后置于培养箱中，6-8h后换液。 另一种方法是， 加入2XHBS后立即吹打约40下（不过这个要根据每个人的力道和吹打的频率而定， 建议做一个梯度实验，吹打不同的次数看哪次的转染效率高以后就按这个次数来吹打）， 之后步骤同上， 立即均匀滴入培养皿，轻轻摇匀后置于培养箱中，6-8h后换液。
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