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感受态制备：大肠杆菌感受态细胞的制备、重组DNA的转化、克隆筛选
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
1. 实验目的和要求 通过本实验学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞和外源质粒DNA转入受体菌细胞的技术以及筛选转化体的技术。了解细胞转化的概念及其在分子生物学研究中的意义。 2. 相关知识及原理 感受态细胞(Competent cells)： 受体细胞经过一些特殊方法（如：CaCl2，RuCl等化学试剂法）的处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许多有外源DNA的载体分子通过的感受态细胞(competent cell) 。 转化（transformation）： 是将异源DNA分子引入一细胞株系，使受体细胞获得新的遗传性状的一种手段，是基因工程等研究领域的基本实验技术。 进入细胞的DNA分子通过复制表达，才能实现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状。转化过程所用的受体细胞一般是限制－修饰系统缺陷的变异株，即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变株。 转化的方法： 化学的方法(热击法)：使用化学试剂（如CaCl2）制备的感受态细胞，通过热击处理将载体DNA分子导入受体细胞； 电转化法：使用低盐缓冲液或水洗制备的感受态细胞，通过高压脉冲的作用将载体DNA分子导入受体细胞。 克隆的筛选： 主要用不同抗生素基因筛选。常用的抗生素有：氨苄青霉素、卡那霉素、氯霉素、四环素、链霉素等；将经过转化后的细胞在选择性培养基中培养，才能较容易地筛选出转化体，即带有异源DNA分子的受体细胞。否则，如果将转化后的菌液涂在无选择性抗生素的培养基平板上，会出现成千上万的细菌菌落，将难以确认哪一个克隆含有转化的质粒。虽然只有那些含有被转化质粒的细菌才能在含有抗生素的平板上生长和繁殖，但对于连接混合物而言，此时并不能确定哪个克隆含有插入片段。 重组质粒克隆的鉴定 鉴定带有重组质粒克隆的方法常用的有a- 互补、小规模制备质粒DNA进行酶切分析、插入失活、PCR以及杂交筛选的方法。最常用的方法是小规模制备质粒DNA进行酶切分析，对于带有LacZ基因的载体还可以结合a-互补现象来筛选。 a-互补现象： 因为许多载体都带
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细胞转染实验介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
一、实验目的 学习和掌握外源基因导入真核细胞的主要方法——脂质体介导的转染。了解外源基因进入的一般性方法，观测外源蛋白的表达（绿色荧光蛋白），为染色准备实验材料。 二、实验原理 上图所示是脂质体介导转染的示意图，它显示了外源质粒进入细胞的一般过程。 外源基因进入细胞主要有四种方法：电击法、磷酸钙法和脂质体介导法和病毒介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入；磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入细胞；病毒法是利用包装了外源基因的病毒感染细胞的方法使得其进入细胞。但是由于电击法和磷酸钙法的实验条件控制较严、难度较大；病毒法的前期准备较复杂、而且可能对于细胞有较大影响；所以现在对于很多普通细胞系，一般的瞬时转染方法多采用脂质体法。 利用脂质体转染法最重要的就是防止其毒性，因此脂质体与质粒的比例，细胞密度以及转染的时间长短和培养基中血清的含量都是影响转染效率的重要问题，通过实验摸索的合适转染条件对于效率的提高有巨大的作用。 上图是本次实验采用的脂质体中阳离子组分的结构的示意图。 本次实验采用的脂质体是promega公司的TransFast脂质体试剂，它是一种阳离子脂质体和中性脂质体的混合物，是对于本次实验中采用的293T细胞优化的转染试剂。 三、实验材料与器材 1、材料 293T细胞 MyoD表达质粒和EGFP表达质粒 DMEM培养基 链霉素/青霉素（双抗） FCS（小牛血清） PBS（磷酸盐缓冲溶液） 胰酶/EDTA消化液 转染试剂（TransFast） 2、器材 20ul/200ul/1ml微量移液器和Tip头 酒精灯 废液缸 血球计数板 涡旋振荡器 恒温水浴箱 台式离心机 35mm培养皿 转染管 15ml离心管 观察用倒置显微镜 荧光显微镜和CCD 四、 实验步骤 1、细胞传代 （1） 试验准备：200ul/1mlTip头各一盒（以上物品均需高压灭菌），酒精棉球，废液缸，试管架，微量移液器，记号笔，培养皿，离心管。 （2） 弃掉
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细胞转染：脂质体转染的几个实验方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
摘要： 本实验介绍了脂质体转染的几个方法。 实验原理 脂质 体(LR)试剂是阳离子脂质体DOTMA和DOPE的混合物(1：1)。它适用于把DNA 转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前条件下最方面的转染方法之一。转染率高，优于磷酸钙法，比它高5-100倍，能把DNA和RNA转染到各种细胞。 用LR进行转染时，首先需要优化转染条件，应找出该批LR对转染某一特定细胞适合的用量、作用时间等，对每批LR都要做。先要固定一个DNA的量和DNA/LR混合物与细胞相互作用的时间，DNA可从1-5ug和孵育时间6h，开始，按这两个参数绘出相应LR需用量的曲线，再选用LR和DNA两者最佳的剂量，确定出转染时间。因LR对细胞有一定的毒性，转染时间以不超过24h为宜。 细胞种类：COS-7、BHK、NIH-3T3、Hela和Jurkat等任何一种细胞均可作为受体细胞。 实验步骤 1. 操作步骤(方法一)： 1) 取6孔培养板，向每孔中加入2ml含(1-2) x 105 个细胞的培养基，37℃、18% CO2 培养基40%-60%汇合时。 2) 转染液制备：在聚苯乙烯管中制备以下两液(为转染1个空细胞所用的量)。 A液：用不含血清培养基稀释DNA使浓度为1-10ug，终量100ul。 B液：用不含血清培养基稀释LR，使终浓度为2-50ug，终量100ul。 轻轻混合A液、B液，室温中置10-15min，稍后会出现微浊现象，但并不妨碍转染。 3) 转染准备：用2ml不含血清培养基漂洗2次，再加入1ml不含血清培养基。 4) 转染：把A/B复合物缓缓加入培养基中，摇匀，置37℃温箱中6-24h，吸除无血清转染液，换入正常培养基继续培养。 5) 其余处理：如观察、筛选、检测等与其他转染法相同。 6) 注意：转染时切勿加血清，血清对转染效率有很大影响。 2. 快速脂质体转染法操作步骤(方法二)： 1) 将细胞以5 x 105个/孔接种于6孔板中培养24h，使其达到50%-60%板底面积。 2) 在试管中配制DNA-脂质体复合物。 a. 在1ml无血清DMEM中稀释PSV1-neo质粒DNA或供体DNA。 b. 旋转1s，再加入脂质体悬液，旋转。
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感受态制备：枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备实验
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备可以：（1）用于建立枯草芽孢杆菌转化体系；（2）用于其基因改造；（3）用于提高枯草芽孢杆菌生产性能相关研究。 实验方法 化学法 化学改进法 实验材料 试剂、试剂盒 仪器、耗材 实验步骤 一、试剂配制 1. SP 盐 0.2%( NH4 )2SO4，1.4% K2HPO4，0.6% KH2PO4， 0.02% MgSO4·7H2O， 0.1% 柠檬酸钠。 2. CAYE (100×) 2 % Casamino acid，10%酵母膏。 3. SPI 培养基 SP 盐溶液加入1 %体积浓度为50%葡萄糖溶液，1 %体积100×CAYE 溶液。 4. SPII 培养基 SPI 培养基加入1 %体积50 mmol/L CaCl2 溶液，1 %体积250 mmol/L MgCl2 溶液。 5. SP-A Salts Solution(500 ml) （1）0.4% (NH4)2SO4 ：2 g （2）2.8% K2HPO4·3H2O ：14 g （3）1.2% KH2PO4 ：6 g （4）0.2% Trisodium Citrate Dihydrate ：1g （5）121°C灭菌20 min。 6. SP-B Salts Solution(500 ml) （1）0.04% MgSO4·7H2O： 0.2 g （2）121°C灭菌20 min。 7. 100×CAYE Solution(100 ml) （1）2% Casamino acid ：2 g （2）10% Yeast Extract：10 g （3）121°C灭菌20 min。 8. SPI Medium(20 mL) SP-A Salts Solution：9.8 mL SP-B Salts Solution：9.8 mL (1%V)Glucose(50%w/v，115°C灭菌20 min) ：200 μL (1%V)100×CAYE：200 μL 10. SPII Medium(6 mL) SPI Medium：5.88mL (1%V)50mM CaCl2 ：60μL (1%V)250mM MgCl2：60μL 11. 100×EGTA Solution 10mmol/L EGTA 溶液，溶解时需加少量NaOH 至pH8.0。 二、实验步骤 1. 准备新鲜的168 单克隆平板，取一满环枯草芽孢杆菌甘油菌划LB 平板，37°C 培养箱培养12 h。 2. 转化前一天晚间挑单菌落至3 ml LB 培养基中，37°C，250 r/min 培养过夜。 3. 第二天上午取160 μl 培养液转接至8 ml SPI 培养基中，37°C，250 r/min 培养至对数生长末期(168 约4-5 h)。 4. 取0.2 ml 生长至对数期末的培养液至2 ml SPII 培养基中，3
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感受态制备：酵母感受态细胞制备实验
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
酵母感受态细胞制备可以：（1）用于建立酵母转化体系；（2）用于酵母表达系统构建；（3）用于酵母其他分子生物学研究。 实验方法 化学法 试剂盒制备法 实验材料 试剂、试剂盒 仪器、耗材 实验步骤 一、试剂与耗材 1. 试剂 细菌用-酵母提取物（Fisher）、 细菌用-蛋白胨（Fisher）、葡萄糖（Fisher）、细菌用-琼脂粉、去离子水、甘油(Sigma)、二甲基亚砜(Sigma)、聚乙二醇3350(Sigma)、醋酸锂(Sigma)、鲑鱼精子细胞DNA(Invitrogen)、酵母无氨基酸氮源(Sigma)、 2-(N-吗啉代) 乙磺酸、腺嘌呤(Sigma)、葡萄糖。 2. 仪器 水浴锅(VWR)、离心机(Eppendorf)、30 °C摇床与恒温培养箱(VWR)、培养皿。 二、 试剂配方 1. YPDA液体或固体培养基 （1）1%酵母提取物： 10 g/L （2）2%胰蛋白胨： 20 g/L （3）2%葡萄糖：20 g/L 2. 转化液 （1）聚乙二醇3350(50 % (w/v)：260 μl （2）1 M醋酸锂：36 μl （3）SsDNA（10 mg/ml）：10 μl （4）质粒：3 μl （5）总计：360 μl 3. YNB+ MA 培养基（100 ml） （1）YNB：0.67 g （2）2-(N-吗啉代) 乙磺酸（20mM ）：0.39 g （3）腺嘌呤：0.01 g （4）琼脂粉：2g （5）葡萄糖：2g 三、制备步骤 1. 在转化实验的两天前，于YPDA培养基的平皿上活化酵母菌株。 2. 转化前一天，挑取活化的酵母细胞（单克隆）于YPDA液体培养基中，30°C，200 rpm培养过夜。 3. 将培养过夜的酵母细胞液按1：3的比例转接与新的YPDA液体培养基中，于30°C摇床内，200 rpm培养4 h。 4. 3 000 g 离心 5分钟收集酵母细胞，用0.5倍体积的无菌水洗酵母细胞。 5. 再次3 000 g 离心 5分钟。 6. 用0.01倍体积的无菌水重悬酵母细胞，并转入适宜的离心管中，20°C ，3 000 g 离心 5分钟。 7. 用0.01倍体积的无菌细胞悬浮液(5 % v/v 甘油，10% v/v 二甲基亚砜)重悬酵母细胞。 8. 将重悬的酵母细胞按50 ul分装到1.5 ml离心管中。 9. 将管放入塑料盒或
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感受态制备：农杆菌感受态的制备和转化
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
双元载体的农杆菌转化 1.1农杆菌感受态细胞的制备 1.1.1. 取-70℃保存的EHA105于含50μg/ml链霉素平板划线，28℃培养。 1.1.2. 挑取单菌落接种于5ml YM液体培养基中，220rpm 28℃振荡培养12-16 hr。 1.1.3. 取2ml菌液转接于100ml YM液体培养基中，28℃220rpm振荡培养至OD600=0.5。 1.1.4. 转入无菌离心管，5000rpm离心5min,去上清液。 1.1.5. 加入10ml预冷的0.1M的CaCl2溶液，轻轻悬浮细胞，冰上放置20min。4℃5000rpm离心5min，去上清。 1.1.6. 加入4ml预冷的含15%甘油的0.1M的CaCl2溶液，轻轻悬浮。 1.1.7. 农杆菌悬浮液分装于无菌Eppendorf管中，每管200μl冻存于-70℃。 1.2. 双元载体转化农杆菌EHA105 取1μg左右的质粒DNA加入到200ml EHA105感受态细胞中，混匀后，冰浴30min，-70℃放置10min 。再在37℃水浴5min或42℃水浴1min，接着冰浴2min，加入800mlYM液体培养基28℃，175rpm摇培3hr后涂在含50μg/ml Kanamycin的YM平板上。28℃培养到形成单菌落。 其中 YM 可以用LB 代替 ，第一次的 CaCl2 溶液可用溶液（0.1MCaCl2 0.01Tris-HCl（7.0） 0.01 DTT）替代。
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感受态制备：农杆菌感受态细胞制备实验
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
农杆菌感受态细胞制备可以：（1）用于建立农杆菌转化体系；（2）用于农杆菌表达系统构建；（3）用于农杆菌其他分子生物学研究。 实验方法 氯化钙法 电转农杆菌感受态 实验方法原理 在基因工程操作中，感受态细胞的制备和质粒的转化是一项基本技术。感受态是细菌细胞具有的能够接受外源DNA的一种特殊生理状态。农杆菌的感受态可用CaCl2处理而诱导产生。将正在生长的农杆菌细胞加入到低渗的CaCl2溶液中，0℃下处理便会使细菌细胞膜的透性发生改变，此时的细胞呈现出感受态。制备好的农杆菌感受态细胞迅速冷冻于-70℃可保存相当一段时间而不会对其转化效率有太大的影响。 实验材料 试剂、试剂盒 仪器、耗材 实验步骤 一、实验仪器、材料和试剂 1. 仪器超净工作台，恒温摇床，冷冻高速离心机，高压灭菌锅，冰箱，-70℃超低温冰柜，分光光度计，接种针，10ml试管，50ml离心管，1.5ml离心管，冰浴，微量进样器及吸头。 以上玻璃仪器和离心管需在用前灭菌，灭菌条件：120℃，15分钟。 2. 材料土壤农杆菌LBA4404菌株或其它农杆菌菌株 3. 试剂（1）YEB液体培养基（1 L）：酵母提取物1 g，牛肉膏5 g，蛋白胨5 g，蔗糖5 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，pH7.0，高压灭菌。 （2）利福平（Rif）储液：50 mg/ml （3）20 mM CaCl2，高压灭菌。 二、实验步骤 1. 挑取根癌农杆菌LBA4404单菌落于3 ml的YEB液体培养基（含Rif 50 mg/l）中，28℃振荡培养过夜。 2. 取过夜培养菌液1 ml接种于50 ml YEB（Rif 50 mg/l）液体培养基中，28℃振荡培养至OD600为0.5。 3. 取2 ml菌液，13 000 rpm，离心30 sec，弃上清。 4、加入1000 μl 20 mM CaCl2，使农杆菌细胞充分悬浮，冰浴30 min。 5、13 000 rpm，离心30 sec，弃上清，置于冰上，加入500 μl预冷的20 mM CaCl2，充分悬浮细胞，冰浴中保存，24 hr内使用，或液氮中速冻1 min，置-70℃保存备用。
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社会失败抑郁模型和Alzhermer病的动物模型、学习记忆的实验模式的发展
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
社会失败抑郁模型（Social defeated） 当今社会，抑郁症发病的应激事件主要为社会应激事件。因此，研究人员在小鼠上制作了社会失败抑郁模型。按已建立方法，将C57BL/6J小鼠放入攻击性强烈的CD1小鼠笼内，每天10分钟，连续10天。经过10分钟的接触后，用有气孔透明隔板将C57BL/6J小鼠与CD1小鼠分离，使待检测C57BL/6J小鼠在24小时内继续接受刺激。对照小鼠则与同品系小鼠分隔而住，但每天更换对象。 10天造模之后，给药处理7/14/28天。给药结束后24小时，将通过检测C57BL/6J小鼠对攻击者的接触和逃避来衡量抑郁水平。实验在黑暗中进行，C57BL/6J小鼠被放入一边拥有透明透气小笼的新环境中，检测它们在2.5分钟内的活动情况，在接下来的2.5分钟放入攻击性强烈的CD1小鼠。使用软件分析小鼠在接触区域和其他区域的时间，依此评价对照组与药物组的抑郁状态。 新环境进食抑制实验（Novelty suppressed feeding test, NSF） 新环境进食抑制实验（Novelty suppressed feeding test, NSF）：使用边长50cm、高40cm箱底铺匀2cm高木削的试验箱，箱底中央放置糖丸或小块食物于白纸上。试验前动物禁食24h，试验时从任意的箱角放大/小鼠入箱内，通过摄像系统观察5min，记录大/小鼠的活动量，同时计算由放入小鼠到小鼠前肢抱起糖丸进食的时（latency）。大/小鼠的活动量和进食时间的长短反应了大/小鼠的焦虑/抑郁程度，随后将动物放回笼中记录5min内食物消耗量，以排除食欲差异对进食时间的影响。 SD大鼠200-250克。用3%戊巴比妥钠(35-40mg/kg体重)腹腔麻醉动物后，固定在脑立体定位仪上(参照大鼠全脑立体定位图谱)，以前囟为零点，选出进刀坐标：前后坐标(AP)1.8mm，中线旁开(L)坐标1.0mm，腹侧坐标(v)4. 0mm。首先用牙科钻在上述坐标的钻孔开骨窗，去除颅骨，挑开硬脑膜，用自制双刃不锈钢刀片(宽2mm，厚0.1mm)按上述坐标从脑冠状面插入脑内。然后，将刀向外移动1.5mm，再降刀1mm，并上下抽刀10余次，以完全切断弯窿海马伞。最后将
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常用实验动物的生理学特点
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
常用实验动物的生理学特点 小鼠（Mouse） 1，成熟早，繁殖力强。小鼠6～7周龄时性成熟。 2，体形小，易于饲养管理。 小鼠出生时1.5克左右，哺乳一月后可达12～15克，哺乳、饲养1.5～2月即可达20克以上，可供实验需要。小鼠发育成熟时体长小于15.5cm，体重雌性为18～40克，雄性为20～49克 3，主要生理数据：小鼠的体温38（37～39）℃，呼吸频率163（84～230）次/分，心跳频率625（470～780）次/分，耗氧量1530mm2/g活体重，通气量24（11～36）ml/分，潮气量0.15(0.09～0.23)ml，收缩压113（95～125）mmHg、舒张压81（67～90）mmHg 4，性情温顺，胆小怕惊。对外来刺激极为敏感。 大鼠（Rat） 1，繁殖快。大鼠2-3月龄时性成熟。寿命2.5-3.5年。 2，大鼠出生时5-6克左右，成年体重雌性为250～300克，雄性为450～520克。体长为15~20厘米之间，尾长在10~15厘米之间，体长大于尾长。 3，主要生理数据：体温39（38.5～39.5）℃，心跳频率475（370～580）次/分，呼吸频率85.5(66～114)次/分，潮气量0.86(0.6～1.25)ml，收缩压84-134，舒张压60mmHg 4，性情较凶猛、抗病力强。 豚鼠（Guinea-pig） 1，又名天竺鼠、海猪、荷兰猪，几内亚猪。 2，晚成性动物，即母鼠怀孕期较长，为63（59～72）天，胚胎在母体发育完全，出生后即已完全长成 3，主要生理数据：正常体温38.6(37.8～39.5)℃，心跳频率280（200～360）次/分，呼吸频率90（69～104）次/分，潮气量1.8(1.0～3.9)ml，血压75-120mmHg 4，草食性动物，喜群居。习性温顺，胆小易惊，喜干燥清洁的生活环境。 家兔（Rabbit） 1，食草类单胃动物。喜欢独居，白天活动少。 2，正常体温39.0(38.5～39.50)℃、皮肤温度33.5～36℃，心跳频率258±2.8次/分，动脉血压110（95～130）mmHg，循环血量59±2.3ml/Kg体重，呼吸频率51（38～60）次/分，潮气量21.0(19.3～２4.6)ml 3，主要品种： 中国本兔（又名白家兔、菜兔）：毛色为纯白、体重3～5斤，
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大鼠无创血压测定方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
工作原理： 工作原理与用普通人体血压计量人体动脉血压的克氏音原理类似。高敏脉搏换能器能感受动脉血流量变化而产生的强弱不同的血管搏动，经换能和放大处理，可通过多种记录显示系统描记出血管搏动曲线。用充气方式人为改变压脉套内压力，对动脉实施压迫（阻断血流）和松解（恢复血流）。当尾套内压力处于动脉血流从完全阻断到心脏射血能使动脉血流开始贯通时，此时脉搏波从消失到再次出现第一个波，此波出现时所对应的压力表上指示的压力代表血管收缩压。而后压脉套内压力逐渐降低，脉搏波逐渐加大，当尾套内压力恰好处于心脏舒张也不对动脉血流产生阻碍时，此时脉搏波曲线不再增大并产生二级波峰，此波峰对应的压力代表血管舒张压。 收缩压和舒张压出现的时间，由高敏脉搏换能器得到的脉搏曲线提供明显的标志。脉搏波从完全消失到出现第一个脉搏波，此波对应的管道内压力为收缩压。压脉套内的压力继续逐渐降低，脉搏波逐渐加大并产生基线位移，出现一个二级波峰，此波峰最高点（或脉搏波增大到不再增大点）对应的压力为舒张压。 血压测量装置安装： 1、 该血压计需与其它微电信号记录系统配套使用，如心电图机、多道生理记录仪、示波器，多媒体生物机能实验系统等。 2、记录仪器应有良好的接地。为避免干扰，测量时动物应放置在软垫上。 3、换能器与记录仪联接好后，打开记录仪电源和工作开关，选择适当的放大敏度、时间常数，曲线显示速度。用手轻微触动换能器表面，记录曲线会有波动出现，证明换能器与记录仪联接完好。 4、如需同步记录压力曲线和脉搏波曲线，应将压力换能器(自备)连接到血压计管道系统的压力换能器接口上,再将压力换能器连接到相应的压力放大器。如：用于二道仪上的血压放大器，记录压力曲线，用于读取舒张压力。 测量血压步骤：（以大白鼠为例） 1、 动物固定：大白鼠处于安静状态是顺利测量血压的必要条件，动物的适当固定或麻醉都能做到这一点。 2、 动物加热：大白鼠尾巴皮肤厚，脉
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条件性位置偏爱实验系统
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
摘要 方法 采用剂量递增**依赖模型空白对照法及**依赖动物自身对照方法，评价条件性位置偏爱实验系统。 结果 从给药d3天开始，受试动物表现出与用药相关的一侧实验箱（伴药盒）的偏好，停留时间比在另一侧箱（非伴药盒）的长(P
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条件性位置偏爱实验系统
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
一、心理应激动物模型的制作 人们在复制心理应激动物模型方面做了大量工作,但情绪毕竟是复杂的,躯体应激与心理应激因素的区别始终是应激研究中的难关,难于绝对地在实验中进行模拟或类比。下面是几种常见的动物模型制作方法,为进行心理应激研究提供参考。 1 . 社交失败应激动物模型: 雄性大鼠放入单独饲养大鼠笼中, 单独饲养大鼠会攻击实验组大鼠, 撕咬侵入者的头部、颈部和背部(无外伤发生)。社交失败的定义是:实验大鼠至少受到一次攻击, 并且表现出驯服的姿势, 如防御性直立、仰 卧、静止不动等 。由于最后得到的实验对象未受到明显的躯体刺激, 因而可以认为是较理想的心理应激模型。 2 .Communication Box 大鼠模型: 被电击的大鼠惊叫、惊跳; 实验组大鼠不受电击, 但旁观其他大鼠遭受电击的过程,通过视觉、听觉等而产生心理应激。每次持续30分钟,隔天1次, 连续两周 。 3 . 行为限制( 束缚制动) : 将造模大鼠置于自制束缚制动盒内, 限制大鼠的活动空间, 每日1 次, 每次2小时,造模大鼠在制动期间禁食、禁水。6天后进行检测。 4 . 多重复合慢性应激: 将隔离应激、新环境应激、拥挤、社交失败应激等4 种刺激随机安排到28 日内,每日1种,产生慢性轻度不可预见性的应激。由于慢性应激是模拟抑郁症的环境诱因,动物的行为特征改变、血浆皮质激素升高等均与内源性抑郁症状相似,作为抑郁模型具有较高的价值。 5 . 大鼠空瓶刺激情绪应激: 给予经过定时喂水训练的大鼠空瓶刺激,以诱发其情绪应激。实验中行为观察证实情绪应激组动物被给予空瓶刺激后表现出明显的攻击性行为,如咬笼子和空瓶;生理应激组仅有个别表现出探求行为,但无攻击性行为。 6 . 其他应激模型: 国内外尚有水浸束缚、电击足底或尾巴、强迫游泳、噪声刺激以及声—光—电复合刺激等多种应激动物模型。 二、心理应激的行为学测试 对心理应激动物模型的判定, 行为学测试是必不可少的。常用的测试方法多借用精神科的情绪测试实验方法; 常见的有、行为测定、
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常见小鼠给药及采血方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
小鼠灌胃 小鼠灌胃方法比较简单，需要关注的只有两点： 一是要保持小鼠的头部和颈部成一直线，方便灌胃针头进入； 二是动作要轻柔，从口角进入，防止损失食道。做的多了自然就熟练了。 具体操作过程如下： 1.准备灌胃针头。一般可以从市场上面买到，实在没有的话，可以用12号的针头，剪去针尖，用砂纸将头端磨平，也可以用。但是买的灌胃针头的头端用锡或者适宜的方法处理了针头的锐口，自己用砂纸不可能将所有的锐口都磨掉，用这样的针头灌胃，损失小鼠食道的可能性比较大。 2.抓住小鼠，使其头、颈和身体呈一直线。抓小鼠的动作很简单，左手的小指和无名指抓住小鼠的尾巴，另外三个手指抓住小鼠的颈部即可。因为小鼠始终在活动中，若一次抓的感觉不是很顺手，要放开重新抓，不要逞强进行下一步操作。 3.抓好小鼠就可以灌胃了，一般用1ml的注射器配灌胃针头。灌胃针头从小鼠的嘴角进入，压住舌头，抵住上颚，轻轻向内推进，进入食管后会有一个刺空感，进入食道后就可以推注药液了。（我认为，所谓的灌胃，不必要灌胃针头进入小鼠的胃部，进入食管后就可以推药了，这样对小鼠食道的损伤要小点，特别是要长期灌胃给药的情况下。）当然，灌胃针头也可以再往里面深入一点，防止药液从口中流出。 4. 灌胃容积一般是0.1～0.2ml/10g，最大0.35ml/10g，每只小鼠的灌胃最大容积不超过0.8ml。 小鼠腹腔注射 腹腔注射是常见的给药方式，尤其是在麻醉时。常见的麻醉方法均是***物腹腔注射。 1. 小鼠腹腔注射可以用1ml的注射器，配合4号针头。 2.腹腔注射时右手持注射器，左手的小指和无名指抓住小鼠的尾巴，另外三个手指抓住小鼠的颈部，使小鼠的头部向下。这样腹腔中的器官就会自然倒向胸部，防止注射器刺入时损伤大肠、小肠等器官。进针的动作要轻柔，防止刺伤腹部器官。 3.尤其是对于体重较小的小鼠，腹腔注射时针头可以在腹部皮下穿行一小段距离，**是从腹部一侧进针，穿过腹中线后在腹部的另一侧进入腹腔，注射
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大鼠及小鼠麻醉剂量参考
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
IM:肌肉注射 IV:静脉注射 SC:皮下注射 IP:腹腔注射 药 物 剂量 途径 麻醉前给药 Atropine 0.002-0.005 mg/100 gBW 0.12 mg/100 gBW IM, IV,SC* IP* 镇静剂 Acepromazine Diazepam Ketamine 0.075 mg/100 gBW 0.5 mg/100 gBW 2.0 mg/100 gBW IM IP IM 注射麻醉剂 Ketamine Pentobarbital Thiopental Thiamylal 2.2-4.4 mg/100 gBW 10 mg/100 gBW 2.5 mg/100 gBW 1.5 mg/100 gBW 6.0 mg/100 gBW 2.5 mg/100 gBW 5.0 mg/100 gBW 2.5-5.0 mg/100 gBW IM IP IV IV IP IV IP IV 混合注射麻醉剂 Ketamine & Xylazine Fentanyl& Droperidol & Diazepam Ketamine &Acepromazine 8.7 & 1.3 mg/100g BW 0.2-0.5 ml/100g BW(10% solution) 0.5 mg/100gBW 2.2-4.4 & 0.075mg/100 g BW IM IM IP IM 吸入麻醉剂 Methoxyflurane Halothane CO2 Induction:2-4% Maintenance:0.5-1.5% Induction:1-3% Maintenance:0.5-1.5% Induction: 10-15seconds 止痛剂 Meperidine Pentacozine Nalbuphine Butorphanol Buprenorphine 2.0 mg/100 gBW 0.4 mg/100 gBW 1.0 mg/100 gBW 0.5 mg/100 gBW 0.1-0.5 mg/100 gBW 0.2 mg/100 g BW/12h 0.2 mg/100 g BW/6-8h IM, SC IP IM, SC,IV IM, SC IM, SC SC IP 不推荐使用的药物 Chloroform Carbon tetrachloride Chlorpromazine Ether Trichloroethylene Tribromoethanol 药 物 剂量 途径 麻醉前给药 Atropine 0.002-0.005 mg/100 gBW IM, IV,SC 镇静剂 Acepromazine Diazepam Xylazine Ketamine 0.5 mg/100 gBW 0.25 mg/100 gBW 1.3 mg/100 gBW 2.2 mg/100 gBW 2.0 mg/100 gBW IM, SC IP IM IM IP 注射麻醉剂 Fentanyl &Droperidol Ketamine Pentobarbital 0.2-0.4 ml/kg (10%solution) 4.4 mg/100 gBW 4-16 mg/100 gBW 5 mg/100 gBW 3-4 mg/100 gBW 3-5 mg/
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无创血压测量系统的选择
作者：德尔塔 日期：2022-04-27
大小鼠无创血压仪主要由三部分组成，一个是检测单元，一个是保温单元另外就是软件系统。随着大小鼠无创血压仪在药物毒理、药物监测、高血压研究等领域的越来越广泛的应用，市面上不同品牌和设计的大小鼠无创血压仪也不断推陈出新，面对各种不同性能的产品，您购买时又该如何选择呢？ 首先购买仪器之前建议大家走出熟悉大小鼠无创血压仪的两个误区： 误区一：仪器通道越多越好 随着大小鼠无创血压仪的运用越来越多，国内许多厂家都推出6通道、8通道甚至12通道大小鼠无创血压仪，就有人一不小心走进了“通道越多越好”的误区。实际上仪器的检测瞬间可以完成，测血压主要耗时是在动物的固定和保温上，购买前确认大小鼠无创血压仪的固定和保温上是否合理尤为重要，不能单单只听宣传通道的多少。 误区二：加温速度快。 大小鼠本身对环境温度、湿度很敏感，经不起温度的骤变和过高的温度，加温时要考虑大小鼠的反应，还有一点大小鼠本身没有汗腺，加温过快心率加快，逐步加温才能让大小鼠尽快适应测试环境，才能获得真实可靠的测量数据。 当我们走出误区，想要选择一款最适合自己需求的大小鼠无创血压仪时我们又该关注些什么呢？ 1. 仪器的检测部分 目前市面上大小鼠无创血压仪的检测原理基本上都是Tail-Cuff法，要害是看仪器的重复性；数据真实性；用户的认可度。 2. 固定和保温系统 测量大小鼠的血压时，我们会碰到的很多问题，如被测量的大小鼠无法适应环境造成血压值不具有代表性，血压产生的振动波微弱很难检测到或是夹杂噪音，大小鼠在测量过程中骚动破坏了测量过程，对于无创血压检测系统来说，产品的设计是否利于大小鼠安定，以避免鼠的惊恐造成结果的准确性。每种设计都有它的独到之处但也都有无法避免的缺憾，这就是我们常说的是否“鼠性化”。 3. 软件部分 操作是否方便，是否能实时检测大小鼠的心率波动。软件数据是否经过大量的实验验证，数据自动处理、储存、数据的统计、分析是否方便等。
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