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探索低丰度蛋白质
作者：德尔塔 日期：2022-05-01
生物样品中由于高丰度蛋白质（例如，血清或血浆中的白蛋白或免疫球蛋白）的存在，而会使低丰度蛋白质的检测变得极具挑战性。ProteoMiner 低丰度蛋白富集系统是一种新型的样品制备手段，它能极为有效地减少复杂生物样品中蛋白浓度的动态范围。ProteoMiner 系统： • 采用了组合的六肽文库方法，而不是传统的免疫去除方法，这就最大限度地减少了对已知抗体的依赖，并防止某些与高丰度蛋白相结合的低丰度蛋白质的误去除 • 对无法通过传统方法检测的低丰度蛋白质进行了有效富集和浓缩 • 适合处理多种类型的样品（血清，血浆，尿液，胆汁，血小板，Hela细胞裂解物，菠菜等） 其原理如下： ProteoMiner 低丰度蛋白富集系统。每个珠子都有不同的六肽配基，它们与样本的特定蛋白具有特定的亲和性。当一个复杂的蛋白质样品与文库中的六肽配基共孵育时，样品的那些蛋白质会相应地找到其结合位点而被珠子捕获。而没有与结合位点结合的那些过量的高丰度蛋白质则因为没被珠子捕获而在随后的珠子洗脱过程中被除去。与此相反，低丰度的蛋白质富集在其特定亲和力配基上。通过这种方式，低丰度蛋白质相对得到了富集与浓缩。 ProteinMiner的实例： 根据起始样品蛋白量的不同，ProteoMiner 低丰度蛋白富集系统分别提供了小容量和大容量两种试剂盒。小容量试剂盒适合处理有限的样本材料，建议至少10 mg蛋白；大容量试剂盒则适合处理50 mg以上的蛋白。ProteoMiner系统采用离心柱形式，操作方便，且一次性的离心柱避免样品的残留污染。试剂盒中包含了富集低丰度蛋白过程中所需的所有必要试剂。小容量和大容量试剂盒分别可处理2个或10个样本。
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鲎试剂选购导读--细菌内毒素检测新手指南
作者：德尔塔 日期：2022-05-01
鲎试剂选购导读--细菌内毒素检测新手指南 鲎试剂 鲎试剂是从栖生于海洋的节肢动物“鲎”的蓝色血液中提取变形细胞溶解物，经低温冷冻干燥而成的生物试剂，专用于细菌内毒素与β-葡聚糖检测。 鲎试剂按原料来源分：全世界目前有4个种属的鲎，其中仅有东方鲎(Tachypleus tridentatus Leach) 和美洲鲎(Limulus polyphemus Linnaeus)可制造鲎试剂，对应生产出来的鲎试剂分别为东方鲎鲎试剂（Tachypleus Amebocyte Lysate, TAL）和美洲鲎鲎试剂（Limulus Amebocyte Lysate，LAL），TAL与LAL具有相同的功效。 鲎试剂按方法分： 凝胶法鲎试剂 动态浊度法鲎试剂 终点浊度法鲎试剂 动态显色法鲎试剂 终点显色法鲎试剂 凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来定性检测或半定量内毒素的方法。凝胶法鲎试剂常见规格为0.1ml/支或0.5ml/支或者更大装量，使用时应加除热原水（细菌内毒素检查用水）复溶后使用。凝胶法是通过观察有无凝胶形成作为反应的终点。此法操作比较简单，经济，不需要专用测定设备，可以进行定性或半定量测定。 特异性鲎试剂，即弃G因子鲎试剂，是国内首创的产品， 它专一对内毒素起反应，避免了G因子旁路的干扰，使检测结果更加可靠，在药检和临床检验方面是不可或缺的理想检测试剂。 动态浊度法鲎试剂、终点浊度法鲎试剂、动态显色法鲎试剂、终点显色法鲎试剂，这四种方法都是定量检测内毒素的。 根据检测原理，终点浊度法和动态浊度法都属于浊度法。浊度法系利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中的浊度变化而测定内毒素含量的方法。终点浊度法未见商品化产品。动态浊度法（又称动态比浊法）是检测反应混合物的浊度上升某一预先设定的吸光度所需要的反应时间，或是检测浊度增加速度的方法。 终点显色法和动态显色法都是属于显色基质法。显色基质法系利用鲎试剂与内毒素反应过程中产生的凝固酶使特定底物显色释放出的呈色团的多少而测定内毒素含量的方法，根据产物颜色判断内毒素浓度
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实时荧光定量PCR的研究进展及其应用
作者：德尔塔 日期：2022-05-01
实时荧光定量PCR的研究进展及其应用 (张蓓，沈立松 上海第二医科大学附属新华医院上海儿童医学中心实验诊断中心) 摘要:多聚酶链反应飞速的发展使其成为了分子生物学实验室重要的工具，实时荧光定量PCR(real-timequantitative PCR)技术以其敏感性高、重复性好、速度快和污染少使PCR技术又向前迈进了一步。本文对real-timeQ-PCR技术的原理、五种主要的荧光化学及定量方法作一介绍，同时也讨论了此技术存在的不足，并对其目前在研究领城中主要的应用进行了概述。 多聚酶链反应(polymerasechainreaction,PCR)技术发明至今已近20年了，在这期间其技术得到了不断的发展，近年来出现的实时荧光定量PCR(real-timequantitativePCR)技术实现了PCR从定性到定量的飞跃，它以其特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点成为了分子生物学研究中的重要工具，本文就此技术及其应用做一综述。 1实时荧光定量PCR技术的方法学 1.1原理 所谓real-timeQ-PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进 程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。在real-time技术的发展过程中，两个重要的发现起着关键的作用:(1)在90年代早期，TaqDNA多聚酶的5'核酸外切酶活性的发现，它能降解特异性荧光标记探针，因此使得间接的检测PCR产物成为可能。(2)此后荧光双标记探针的运用使在一密闭的反应管中能实时地监测反应全过程。这两个发现的结合以及相应的仪器和试剂的商品化发展导致real-time令PCR方法在研究工作中的运用。 PCR反应过程中产生的DNA拷贝数是呈指数方式增加的，随着反应循环数的增加，最终PCR反应不再以指数方式生成模板，从而进入平台期。在传统的PCR中，常用凝胶电泳分离并用荧光染色来检测PCR反应的最终扩增产物，因此用此终点法对PCR产物定量存在不可靠之处。在real-timeQ-PCR中，对整个PCR反应扩增过程进行了实时的监测和连续地分析扩增相关的荧光信号，随着
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细胞总乙酰化水平的快速测定方法
作者：德尔塔 日期：2022-05-01
细胞总乙酰化水平的快速测定方法 -------免疫亲和色谱-ELISA 方法 步骤一：亲和色谱分离提纯乙酰化蛋白 1. 用细胞裂解液裂解细胞，10000rpm 离心2 分钟，取上清备用。 2. 取20-40ul 抗乙酰化赖氨酸抗体填料(Anti-acetylated lysine Agarose,ICP0388，如右图所示)， 用PBS 洗2 次，每次1ml。 3. 将细胞裂解上清液与洗好的填料（ICP0388）混匀，39oC 旋转摇床低速孵育60 分钟。 4. 1000rpm 离心1 分钟，去上清，用PBSt 重悬沉淀，1000rpm 离心1 分钟，去上清，重复3 次， 最后一次用PBS 洗，吸弃上清。 注：细胞裂解液里应该含有蛋白酶抑制剂，组蛋白乙酰化酶抑制剂等。 步骤二：释放及包被固定分离提纯的乙酰化蛋白 5. 用20ul 0.1M HCL 将步骤2 的抗赖氨酸抗体填料-乙酰化蛋白复合物于沸水中煮2 分钟，10000rpm 离心1 分钟，将上清液体全部转移到含有80ul 的0.2M Na2CO3 的ELISA 薄板上，39oC 孵育30 分钟； 6. 取出ELISA 薄板，拍干。用PBSt 清洗2 次，每次均需拍干。加入100ul 含0.5%BSA 的PBSt ，39oC 封闭10 分钟。 步骤三：用抗乙酰赖氨酸抗体HRP 标记物检测蛋白乙酰化水平 7. 取出ELISA 薄板，拍干，用PBSt 清洗2 次，拍干。加入100ul 浓度为0.25ug/ml 抗赖氨酸抗体 HRP 偶联复合物（Anti-acetylated lysine HRP conugates,ICP0381，如右图所示），39oC 孵育30 分钟。 8. 取出ELISA 薄板，拍干，用PBSt 清洗板孔3 次，每次均需拍干。加入100ul TMB 液，39oC 孵育显色 10-20 分钟。最后加入100ul 0.1 M H2SO4 终止反应，在450nm 波长下读数。
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肿瘤标志物分类、检测原理和检测方法
作者：德尔塔 日期：2022-05-01
肿瘤标志物分类、检测原理和检测方法 根据WHO资料，全球范围内恶性肿瘤是人类仅次于心脑血管病的第二大死亡原因，占总死亡人数的22%，并逐年增加。 10种常见肿瘤：胃癌、肝癌、食管癌、结直肠肛门癌、白血病、子宫颈癌、鼻咽癌、乳腺癌和膀胱癌。肿瘤的早期发现、早期诊断、早期**是患者获得长期生存的最主要途径。以肝癌为例，肿瘤直径＜2cm，5年生存率几乎100%；直径每增加 1cm，5年生存率下降20%。肿瘤诊断三大支柱是图像诊断（包括B超、CT、核磁共振）、化学诊断（血清学和免疫学）及细胞学和组织学诊断，而后两者均以肿瘤标志为主要或辅助观察指标。 当前，肿瘤标志物的检测已从细胞水平深入到分子基因水平，在检测技术上，它将生物化学、核医学、免疫学、细胞学、病理学、分子生物学等诸多学科融合在一起，不仅使检测的项目有了大幅度的增加，而且检测的特异性和灵敏度也有很大的提高。肿瘤标志物在肿瘤诊断，检测肿瘤复发与转移，判断疗效和预后以及人群普查等方面都有较大的实用价值，而且在肿瘤发生和发展机理研究中也具有重要作用。肿瘤标志物除用于肿瘤诊断外，可为临床肿瘤**提供依据及以其为靶，进行肿瘤的靶向**及免疫**。肿瘤标志学已成为肿瘤学中一个重要的新学科、新领域。 肿瘤标志（Tumour Markers）是1978年Herberman在美国国立癌症研究所（NCI）召开的“人类免疫及肿瘤免疫诊断”会上提出的，次年在英国第七届“肿瘤发生生物学和医学”会议被大家确认，并开始引用。肿瘤标志物是指由肿瘤细胞由肿瘤组织和细胞产生的与肿瘤的形成、发生相关的物质，这些物质存在于肿瘤细胞的胞核、胞质、胞膜上或体液中，进入到血液或其他体液或组织中，或是宿主对体内新生物反应而产生并进入到血液或体液或组织中而含量明显高于正常参考值的一类生物活性物质。不存在于正常成人组织而见于胚胎组织,或在肿瘤组织中含量超过正常含量。 肿瘤标志物分类 目前肿瘤标志物尚无统一的分类和命名，临床常用的肿瘤标志
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原位分子杂交和免疫组化SP法对PTEN的检测
作者：德尔塔 日期：2022-05-01
原位分子杂交和免疫组化SP法对PTEN的检测 【摘要]目的： 研究原位分子杂交和免疫组化sP法检测PTEN mRNA及其蛋白在HCC中的表述隋况。 方法：56例肝细胞肝癌组织、17例肝硬化组织手术切除标本，经40g／L福尔马林固定，4 m厚连续切片，HE染色，病理诊断证实。 结果：HCC组织中，PTENmRNA~蛋白的阳性表达率分别为62.5％和71.4％。17例肝硬化 组织中的阳性表达率分别为88．2％和94．1％。21例癌旁组织中的阳性率分别为90.5％和100％。HCC与肝硬化组织和癌旁肝组织中PTEN mRNA及其蛋白的表达具有显著性差异(P
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原位杂交HPV DNA检测技术应用及体会
作者：德尔塔 日期：2022-05-01
原位杂交技术是新近开展的一项新技术，其原理是采用荧光、生物素、地高辛等标记的探针，依据碱基对互补配对原理，与组织切片、细胞制片等标本中的靶序列特异杂交，经信号放大显色后，镜下观察结果。此方法具有很高的灵敏性和特异性。本文就HPV DNA检测技术在常规实验中的操作体会等问题，总结如下。 1材料与方法 1．1材料南京中医药大学附属第三医院病理科2006～2007年肛肠外科肛周手术病例。其中男性患者45例，女性55例，平均55岁。试剂均购自福建泰普公司的HPV高危型、低危型试剂盒。 1．2方法 1．2．1切片处理将4Ixm厚组织切片粘附在APES处理的载玻片上。 1．2．2脱蜡玻片经二甲苯3次X20min，100％乙醇2次X3min，95％乙醇1次×3min，70％乙醇1次×3min，蒸馏水2移(X3min。 1．2．3微波修复将切片放入盛有1×杂交增强液的容器里，微波高火状态煮30min，自然冷却至不烫手，蒸馏水浸片2次×2min。 1．2．4杂交(1)小心擦干切片后，每张切片可根据组织的大小滴加适量的探针约25 l，并加盖盖玻片。(2)把切片放置于95℃的原位杂交加热器上变性5arin。(3)放入装有30％湿盒增效液的湿盒中，37℃，孵育4～16h(
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四维核酸杂交技术介绍
作者：德尔塔 日期：2022-05-01
定义 四维核酸杂交技术[ 1 ]（4DH），即在传统核酸杂交三维空间(XYZ：表征DNA片段的长度、碱基组成和碱基的排列)的基础上引入温度作为第四位参数所构成的四维温度空间平台上建立的核酸杂交技术。 背景 基因组(genome)是指人类细胞中所有遗传信息的总和。基因组信息是由脱氧核糖核酸(又称为DNA)携带的。基因组的DNA是一种由4种碱基(A,G,C和T)组成的双链聚合体，这种双链结构的每条单链核苷酸链都以磷酸核糖为骨架，其碱基顺序称作DNA的一级序列结构。基因组DNA的两条链是通过每条链上互补碱基间氢键的相互作用而连结在一起的。碱基的化学结构显示，A与T相互作用形成两对氢键（而不与其他任何碱基作用），G与C相互作用形成三对氢键（而不与其他任何碱基作用）。DNA固有的内部双链以及碱基对相互作用的精确性在杂交过程中被利用。杂交是两条互补的单链核苷酸链之间形成一条稳定的双股螺旋双链结构的过程。杂交反应可以在溶液中两个互补单链之间发生，也可以一个溶液中的单链和固定在固相载体上的互补单链之间发生。而DNA芯片分析（或基因芯片分析）是利用了标有荧光的单股核苷酸链与DNA芯片上的单股序列链的杂交反应，是一种核酸杂交生物化学过程，这是DNA芯片（或基因芯片，也称DNA微阵列或基因微阵列）的原理基础，也是PCR技术中引物（寡核苷酸链）和样品靶（核苷酸单链）相互作用的基础。 基因芯片（或称DNA芯片）技术是基于碱基互补原理，在固体芯片表面（数平方厘米）按一定的排列组合阵列集成大量的DNA探针，通过与待测DNA（或基因）进行杂交反应，进而一次对大量DNA（或基因）进行平行快速分析检测的技术。 PCR技术是利用人工合成的引物（寡核苷酸链）在适当退火温度（或杂交温度）下与样品靶（核苷酸单股链）杂交后，由聚合酶在引物3’端按照靶序列的互补碱基逐个连结成一条新寡核苷酸链的周期过程，在经过几十个周期后可将样品靶核苷酸链经过扩增放大上百万倍。 由此可见，核酸的杂交反应（DNA单股之间称South
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固态发酵的分类知识
作者：德尔塔 日期：2022-05-01
固态发酵的分类知识 一、传统固态发酵与现代固态发酵 虽然固态发酵与液态发酵相比，具有它独特的优势，但也存在着许多不足。特别是传统固态发酵是发酵工业中古老而又落后工艺的代名词。甚至，在发酵工程或生化工程的教科书中，也很少提到固态发酵。现代发酵技术的关键条件是纯种大规模集约化培养．随着科学技术发展和可持续发展的影响，国内外逐步重视对固态发酵的研究开发，已取得了很大进展。因此，依据固态发酵过程中是否能实现限定微生物纯种培养，分为传统固态发酵与现代固态发酵。现代固态发酵是为了充分发挥固态发酵的优势，针对传统固态发酵存在的问题，使之适应现代生物技术的发展而进行的，可以实现限定微生物的纯种大规模培养。 二、固态发酵的形式 1.按微生物的情况和形成的产品条件不同分类 固态发酵可以以许多不同的形式进行，按照使用的微生物的情况和形成的产品条件不同，固态发酵可分为自然富集固态发酵、强化微生物混合固态发酵、限定微生物混合固态发酵和单菌固态纯种发酵。 自然富集固态发酵是指利用自然界中的微生物，由不断演替的微生物进行的富集混合发酵过程。典型的例子是传统酒曲和酱油、腌莱、烟草发酵、茶叶发酵、青贮、堆肥等。它不需要人工接种微生物，其所需发酵的微生物主要依赖于当地空气和物料中的自然微生物区系，多种微生物演替成最适于生长代谢或共生协作的小生态环境。其微生物富集区系不仅与当地空气和物料中的自然微生物区系有关，而且与小生态环境自然变化密切相关。 强化微生物混合固态发酵是指在自然富集固态发酵的基础上，根据人们部分掌握的微生物代谢机制，人为强化接种微生物茵系不明确的富集培养物或特定微生物培养物所进行的混合发酵过程。强化微生物混合固态发酵除应用于沼气发酵、白酒发酵作用外，在石油采收、湿法冶金、食品发酵等领域同样显示其优势。人们在长期的科学研究和生产实践中却不断发现，不少生命活动及其效应是借助于两种以上的生物在同一环境
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微阵列—比较基因组杂交技术检测染色体异常
作者：德尔塔 日期：2022-05-01
微阵列—比较基因组杂交技术检测染色体异常 【摘要】近年微阵列一比较基因组杂交(microarraycomparativegenomichybirdization，microarray．CGH)技术被应用到临床细胞遗传学领域。该技术是选择DNA特殊片段作为靶，固化在载体上，形成密集、有序的分子微阵列。然后，从测试标本中提取DNA，将测试DNA和参考DNA用不同的荧光色素标记，杂交到微阵列上，通过检测这两种荧光色素的比率，了解待测标本基因拷贝数的变化。其能够检测染色体亚微结构异常。微阵列技术已成为一个重要的工具，用于产前、产后和植人前诊断染色体亚微结构异常。 在过去30年中，染色体核型分析是诊断染色体病的标准方法。近年来，微阵列一比较基因组杂交(microarraycomparativegenomichybridization，microarray—CGH)技术用于染色体病研究中．该技术又称为“分子核型分析”。可对染色体亚微结构异常进行诊断．本文主要介绍microarray—CGH技术在细胞遗传学方面的应用。microarray—CGH技术简介 一、技术原理与发展 microarray—CGH技术是近年发展起来的一种分子细胞学技术，虽然与传统的比较基因组杂交(CGH)技术基于相同的原理，但传统的CGH是选择中期分裂相作为靶．而microarray．CGH是选择DNA特殊片段作为靶，固化在载体上，形成密集、有序的分子微阵列。因为DNA的特殊片段作靶，可以根据DNA片段大小及密度决定解析度。microarray—CGH可检测到那些不能为传统方法检测到的微重复和缺失。为与传统的核型分析相比较，这种全染色体组阵列检测称为“分子核型分析”。最初．microarray—CGH引入肿瘤细胞遗传学研究领域，是因为肿瘤细胞培养困难，所获得中期分裂相形态欠佳．而且肿瘤细胞染色体改变复杂，用 传统染色体分析方法很难监测到遗传物质微小缺失和重复。应用全基因组的microarray—CGH研究大量的肿瘤标本，可以绘出常发生基因拷贝数改变的区域。而用高密度的microarray—CGH能对这些区域基因拷贝数改变进行详细的分析[。依照基因拷贝数变化的类型和数目可对
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药用精油的超临界萃取
作者：德尔塔 日期：2022-05-01
本文描述了超临界流体技术在精油提取中的应用，未来化学科技有限公司为对此领域感兴趣的研究人员提供一些精油超临界萃取的实验数据，以供参考： Plant Targets Gas Conditions Allium cepa (onion) Onion oleoresin; sulphur content;fractional separation CO2 100/300bar 45/65。C Curcuma Tumeric oil (atlantona, tumerone, zingiberene); modelling and kinetic studies CO2 CO2+ethanol 250-300bar 40/45。C Rosa damascena (rose), concrete Rose oil (phenylethanol, citronellol, phenylethyl acetate); fractional separation CO2 80-160bar 45/45。C
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降落PCR的原理及常见问题解答
作者：德尔塔 日期：2022-05-01
提问：降落PCR（Touchdown PCR）的原理？ 回答：Touchdown PCR是指每隔一个循环降低1°C反应退火温度，直至达到“Touchdown”退火温度，然后以此退火温度进行10个左右的循环。该方法最初出现是为了避开确定最佳退火温度而进行的复杂的反应优化过程。正确和非正确退火温度之间的任何差异将造成每个循环PCR产物量的两倍差异（每摄氏度造成4倍差异）。因此相对于非正确产物，正确的产物可以得到富集该方法的另一个应用是在确定已知序列肽的DNA序列。 具体过程如下：使用两套与已知序列肽两末端可能配对的简并引物，这只需要知道一段长为13个氨基酸的肽段序列，5’和3’引物各长18个碱基（6个氨基酸），两者之间有一个碱基以上的间隔。使用简并引物即可以进行“Touchdown PCR”。由这种方法将获得大量的产物，但因为由肽序列可以知道引物之间的确切距离，所以可以根据产物的大小来选择所需要的产物。该方法的优点在于可以富集引物与模板正确配对的产物。如果克隆和测需一打PCR产物，将可以确定肽的正确编码序列，设计进行杂交的寡核苷酸等。该技术特别适用于由Ser，Lys和Arg（每个有6个密码子）构成的多肽。 提问：降落PCR的优点？ 回答：综合比较普通PCR技术和最大耐受量聚合酶链反应，认为前者程序简单，省时，一般的PCR扩增仪都可完成，但缺点是退火温度不适当时容易出现假阳性;而最大耐受量聚合酶链反应虽然程序复杂，需要扩增仪有较大的内存，但能非常有效地降低或避免假阳性，且不在理想的工作条件（比如最佳镁离子浓度）下也可扩增出产物。 这就是降落PCR技术的优点吧。不过我认为。如果能用普通PCR技术扩出来的话，尽量用普通的聚合酶链反应，虽然降落聚合酶链反应比较省事省力，但是，它在一个很宽的退火温度里扩增，乱七八糟的条带肯定比较多哈。虽然，电泳可能看不到。 降落PCR的一个优点是可以增加某些基因的特异性,不仅我自己在扩基因的艰难历程中,发现了这一优点,而且也推荐给周围的人,如果常规PCR循环程序的
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固相萃取柱的一般操作方法
作者：德尔塔 日期：2022-05-01
的一般操作 反相萃取柱操作 正相萃取柱操作 离子交换萃取柱 从极性基体中提取 非极性的样品 从非极性基体中提取 极性的样品 提取带电荷的样品 活化 以3—5毫升甲醇淋洗萃取柱; 以3—5毫升去离子水（或缓冲液）淋洗萃取柱并保持萃取柱湿润 3—5毫升非极性溶剂 淋洗萃取柱 以3—5毫升去离子水/或低离子强度的缓冲液淋洗萃取柱 上样 以合适的流速使样品 均匀通过萃取柱 以较低的流速,使样品均匀通过萃取柱 清洗 以5毫升适当极性的溶剂洗脱吸附样品的萃取柱（常用的有纯水,缓冲液,水/有机溶剂混合液） 以5毫升适当非极性的溶剂洗脱吸附样品的萃取柱 5毫升去离子水/或低离子强度的缓冲液淋洗萃取柱 洗脱 将被测样品,用1—5毫升非极性溶剂分批洗脱至收集容器 将被测样品,用1—5毫升极性溶剂分批洗脱至收集容器 将被测样品,用1—5毫升高离子强度的缓冲液洗脱至收集容器
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关于液相维护的相关知识与经验
作者：德尔塔 日期：2022-05-01
一、混合溶剂必须要过滤以后才能混合，万一要混合后过滤的话，只能用有机的，绝对不能用水系的。因为水系的材料是纤维素，有机相回或多或少的溶解一点纤维素的，造成污染。 二、标样或样品**用流动相溶解（排除特殊情况），可以避免很多麻烦。 三、给色谱柱加温，温度升高的目的，部分在于增加溶质的溶解度，但更重要的是降低溶剂的黏度，从而改进峰形和分离度。注意：温度升高会降低保留时间，这对分离度也有影响，温度的变化对谱带宽度的影响甚大，而塔板高度受温度的影响虽然也取决于所采用的色谱类型，而温度升高总是要降低塔板高度的。 四、C18柱的柱温一般不要超过40摄氏度，否则健合相容易脱落的。 五、进样器使用，除每次用水清洗外，隔一段时间后，**用甲醇或乙腈反复吸取，清洗一下。 六、用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在?如何解决? 答：关于漂移问题： 1、温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定 2、流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等 3、柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡 七、关于快速变化问题： 1、流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定 2、泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。 3、流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合 八、液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么? 1、筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。 2、存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子 九、毛细管色谱分流进样时，非线性分流的主要原因是什么? 1、进样器温度太低，样品汽化不完全，发生分级分流。 2、进样器温度太高，某些组分可能发生热分解，也有的样品可能发生催化分解，或样品部分地被吸附在进样器内表面上。 3、在分流点以前样
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脐血MSCs的分离
作者：德尔塔 日期：2022-05-01
脐血MSCs的分离 试剂和材料： 1. 培养基； 2. 0.05%胰蛋白酶，含EDTA； 3. PBSA； 4. T25； 实验方法： 1. 为了获得新鲜制备的CB-MNCs，按密度梯度分离法分离单个核细胞（MNCs）； 2. 用培养基重悬新鲜分离或冻存的MNCs。冻存的MNCs在铺板前要37℃迅速复苏并用培养基洗一遍； 3. 将重悬在培养基的CB-MNCs接种到T25的培养瓶，接种密度为3×105 个细胞/cm2； 4. 将细胞放入37℃ 5%CO2的培养箱中； 5. 每7天更换一次培养基，直到贴壁生长的成纤维细胞样的细胞达到汇合； 6. 一旦达到汇合，用0.05%胰蛋白酶/EDTA处理5min，重悬细胞，然后将细胞按1×105 个/瓶重新接种； 7. 达到细胞汇合后，用培养基按1：5稀释后再接种培养；
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