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凝胶成像系统内主要光源的介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
凝胶成像系统内主要光源的介绍，凝胶成像系统，顾名思义以一套可对凝胶进行成像的光学系统，而光源便是其光路系统的重要组成部分，可以说没了光源，成像系统几乎无法运行使用，但与CCD、镜头以及分析软件相比，往往却没有得到应有的重视。我们经常遇到这样的用户，他们知道系统光源出现故障或整个系统报废的时候都不知道凝胶成像透射紫外中有305nm与365nm两种紫外灯管，或者搞不清他们之间有何区别。这其中固然有销售商售后的不到位，但也反映出我们对凝胶成像系统光源的不重视和缺乏足够的了解，为此我们撰以此文，以期帮助用户厘清他们的区别和各自的作用，让您能够更好的选择购买、使用以及保养维护凝胶成像系统。 下面我们对凝胶成像系统的各种光源及其用途做简要介绍，首先是双侧反射白光光源，也是我们使用*多的光源，通常作为系统照明光源使用，即放置或调整DNA胶或蛋白胶位置，或在对镜头调整聚焦时使用，当然在对非透明材质的蛋白胶或其他成像物质进行成像时也需开启反射白光。 其次透射白光，即通常所说白光板，主要用于蛋白质胶拍摄时使用，因为白光板位于透射紫外灯箱上方，所以为不影响透射紫外光源的使用，同时也更节约室内空间，白光板一般可以折叠竖立在箱体后部。 透射紫外光源，即紫外透射灯箱，主要用于DNA胶拍摄，由于DNA常用的荧光染料是EB（即Ethidium bromide，溴化乙锭），而用标准302nm 紫外光透射仪激发并放射出橙红色信号，可用带CCD成像头的凝胶成像系统拍摄到，所以透射紫外的波长通常是305nm段。 目前，许多厂家设计了双波长的透射紫外灯管（302nm、365nm），如美国著名的Alpha INNOTECH公司（产品详见www.bio-launching.com）其365nm光源主要适用于制备观察以及切割条带，减少对DNA的破坏，并减小对人的伤害。 紫外反射灯源，一般为选配件，主要原因是其使用并不广泛，只是在非透明材质的DNA跑胶载体如纸层析等的成像才需要使用。往往比较常用的还是透明的琼脂糖凝胶与聚丙烯酰胺凝胶，透
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大鼠1,25二羟基维生素D3（1,25-(OH)2D3）酶联免疫检测试剂盒使用说明书
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
大鼠1,25二羟基维生素D3（1,25-(OH)2D3）酶联免疫检测试剂盒使用说明书 AE90635Ra 使用前仔细阅读本说明书。本酶联免疫试剂盒是基于双抗体夹心技术原理，来检测大鼠 1,25二羟基维生素D3（1,25-(OH)2D3），只能用于研究用途，不得用于医学诊断。 用 途：用于大鼠血清、血浆及相关液体样本中1,25二羟基维生素D3（1,25-(OH)2D3）测定。 工作原理： 本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定样品中大鼠1,25二羟基维生素D3（1,25-(OH)2D3）水平。向预先包被了大鼠1,25二羟基维生素D3（1,25-(OH)2D3）单克隆抗体的酶标孔中加入大鼠1,25二羟基维生素D3（1,25-(OH)2D3），温育；温育后，加入生物素标记的抗1,25二羟基维生素D3（1,25-(OH)2D3）抗体。再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中大鼠1,25二羟基维生素D3（1,25-(OH)2D3）的浓度呈正相关。 试剂盒组成 试剂盒组成 48孔配置 96孔配置 保存 说明书 1份 1份 封板膜 2片（48） 2片（96） 密封袋 1个 1个 酶标包被板 1×48 1×96 2-8℃保存 标准品72ng/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存 标准品稀释液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存 链霉亲和素-HRP 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 生物素标记的抗1,25-(OH)2D3抗体 0.5ml×1瓶 1 ml×1瓶 2-8℃保存 显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 终止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存 浓缩洗涤液 （20ml×20倍）×1瓶 （20ml×30倍）×1瓶 2-8℃保存 需要而未提供的试剂和器材： 37℃恒温箱。 标
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离心机分类及技术原理和转子介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
一、离心机原理和功能简介 离心机是一种高速旋转机械，它是利用离心力，不同物质在离心场中沉淀速度的差异，分离液体与固体颗粒或液体与液体的混合物中各组分的机械。对混合溶液进行快速分离的专门设备，是一种将装有样品溶液的离心管、瓶或袋韵转头置于离心轴上，利用转头绕轴高速旋转所产生的强大离心力，使样品中不同性质颗粒相互分离的特殊装置，可以实现样品的分析、分离。它也可用于排除湿固体中的液体，例如用洗衣机甩干湿衣服；特殊的超速管式分离机还可分离不同密度的气体混合物；利用不同密度或粒度的固体颗粒在液体中沉降速度不同的特点，有的沉降离心机还可对固体颗粒按密度或粒度进行分级。 以下是离心机的技术、分类和原理性能综述。 离心机主要用于将悬浮液中的固体颗粒与液体分开，或将乳浊液中两种密度不同，又互不相溶的液体分开（例如从牛奶中分离出奶油）；结构主要由电机驱动系统、制冷系统、机械系统、转头和系统控制等几部分组成。 DD5自动脱帽离心机 二、离心机的分类 离心机的式样和型号很多，有国产的和进口的，按用途可分为分析式离心机和制备式离心机； 按转速可划分为： 低速离心机：80000r／min； 离心机按结构分类： 一般高速和低速离心机根据结构和功能进行分类，品种繁多，各厂家命名也无统一标准。可分为台式离心机、多管微量台式离心机、细胞涂片离心机、台式血液洗涤离心机、高速冷冻离心机、大容量低速冷冻离心机、低速冷冻离心机、落地式高速冷冻离心机、台式低速自动平衡离心机等。另外国外还有三联式（五联式）高速冷冻离心机，专作连续离心用。 按体积一般可分为：落地式离心机(也叫立式离心机)，台式离心机(也叫桌面式离心机)和迷你（掌上）离心机。 按容量有分为：大容量离心机、超大容量离心机、小容量离心机、微量离心机。落地式的处理容量大体积大，迷你离心机处理容量小体积小。 可以根据实验目的和实验需要，选择不同容量、不同转速、不同温度控制的离心
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利用超声波萃取鹿茸多肽方法介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
一、鹿茸多肽简介 据我国《本草纲目》中记载：鹿茸具有补肾、强筋健骨、生精益血等功效。鹿茸是一种特殊的软骨组织，含有多种活性因子。现代医学表明，鹿茸的化学成分较为复杂、其中含有大量的氨基酸、多肽、蛋白质、无机元素等成分，而蛋白质成分高达55.26%，更加证明鹿茸多肽是其主要的生物活性成分物质。 鹿茸多肽是一种小分子、分子量在1,000～50,000之间，活性强、便于吸收、副作用小的蛋白。经研究，鹿茸多肽具有抗炎、抗氧化、增强免疫并能促进细胞分化、伤口愈合、抑制肿瘤细胞、促进神经系统、周围神经系统的再生等药理作用，因此对鹿茸多肽的研究具有越来越重要的意义。而如何高效提取鹿茸多肽是进行鹿茸多肽研究的必要前提。 二、鹿茸多肽常见的提取方法 1、 有机溶剂萃取法 利用提取物在两种互不相容的试剂中分配系数不同，使用有机溶剂萃取剂来提取鹿茸中的蛋白质及多肽有效成分。 2、 裂解液法 通过裂解液使细胞组织快速破裂的方法。 3、 酶解法 酶解法是利用活性酶来水解特定的某种物质。在实验中，通过对酶的种类和反应的时间与温度以及氢离子浓度指数等等多方面控制，从而进行有效的提取。 4、 匀浆法 将含一定量水的样品与提取溶剂在匀浆提取装置中混合匀浆，通过机械及液力剪切作用将物料撕裂和粉碎，使物料破碎和有效成分的提取同步进行，实现有效成分快速、强化提取的目的。 5、 超声波萃取法 超声波萃取是使用超声波萃取机，利用超声波辐射压强产生的强烈空化应效应、机械振动、扰动效应、高的加速度、乳化、扩散、击碎和搅拌作用等多级效应，增大物质分子运动频率和速度，增加溶剂穿透力，从而加速目标成分进入溶剂，促进提取进行的成熟萃取技术。 三、匀浆法和超声波萃取法对比研究 1、 匀浆法和超声波萃取法步骤 2、 结果 依照统计学方法对以上匀浆法和超声波萃取法实验步骤每组数据均测定 3 次，并计算平均值，求 3 个数据的 SD（相
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占领C位！云序生物解析如何做到快速同时检测各类癌症当中RNA甲基化相关酶&RNA甲基化水平(上)
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
云序生物解析如何做到快速同时检测各类癌症当中RNA甲基化相关酶&RNA甲基化水平(上) RNA甲基化作为云序生物的主打科研产品，已经帮助多个研究团队展开了RNA甲基化研究。作为国内RNA甲基化研究的领跑者，云序生物是国内RNA甲基化10分文章发表的成熟服务商，首发推出了非编码RNA甲基化测序研究，首发推出了超微量RNA甲基化测序技术，首发推出RNA甲基化研究一站式系统性解决方案，云序在公众号新年开篇当中结合18年的综述文章（Multiple functions of m6A RNA methylation in cancer）为广大研究者带来最新RNA甲基化相关酶在癌症当中的研究汇总。此次文章意在为大家强调RNA甲基化酶研究的重要性的同时，为大家提供成熟的RNA甲基化研究思路，如何研究，怎样研究才是云序长期以来想为大家回答的问题。 众所周知，RNA甲基化相关酶功能全面，在多种癌症疾病的发生发展当中都起到了关键作用。同一种酶在不同癌症中作用竟截然相反！例如，METTL14在胶质瘤GBM和肝癌HCC当中是抗癌卫士，可到了急性白血病AML当中摇身一变成了原癌基因，变化之大令人感叹。虽然甲基化修饰位点各种各样，功能各有不同，但最终都引起了癌细胞表型的改变，相信在接下来的基础研究中RNA甲基化酶Writer、去甲基化酶Eraser、识别蛋白Reader仍然是重中之重。 1.m6A相关酶在癌症中的功能 甲基化转移酶（METTL3和METTL14），去甲基化酶（NSun2，FTO和ALKBH5）和阅读酶（YTHDF2）在各个癌症中的功能总结如下。 表1. m6A RNA 甲基化修饰在各个癌症中功能 2. m6A在癌症中的分子机制 接下来我们将一一介绍m6A RNA 甲基化在调控肿瘤干细胞CSC分化、增殖、迁移和免疫过程中发挥的重要功能。 2.1 RNA甲基化酶与癌症干细胞（CSC）多能性与细胞分化相关 1）造血干细胞（HSCs）因为分化状态易于检测往往作为研究细胞分化过程的理想模型，髓系血液恶性肿瘤最显著的特点就是展现出异常的分化状态。最新的研究表明，相比于正常的造血干细胞，白血病细胞当中METTL3表
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【科研前沿】华中科技大学发现骨髓瘤骨病的新型标志物
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
近日，华中科技大学的研究人员报告称，多发性骨髓瘤的细胞外囊泡（MM-EV）有望作为新型的生物标志物，应用于骨髓瘤骨病的诊断和**。 这篇题为“Tumor-derived extracellular vesicles inhibit osteogenesis and exacerbate myeloma bone disease”的文章于1月发表在《Theranostics》杂志（IF: 8.537）上。华中科技大学同济医学院附属协和医院的李秋柏教授和生命科学与技术学院的郭安源教授为共同通讯作者。 背景介绍 在我国，多发性骨髓瘤（MM）的发病率已超过急性白血病，位居血液系统恶性肿瘤的第二位。大约80%的患者会出现骨髓瘤骨病（MBD），严重影响了患者的生活质量及生存期。MBD的特点在于成骨细胞活性严重受损，这是因为骨髓来源的间充质干细胞（BM-MSC）成骨功能受阻。不过，受阻的具体机制还不太清楚。 最近，越来越多的证据表明，细胞外囊泡（EV）是以往被忽略的细胞间通讯机制。癌细胞会释放含有多种分子的细胞外囊泡，如蛋白质、RNA和miRNA，影响肿瘤微环境。于是，研究人员此次研究了骨髓瘤细胞外囊泡（MM-EV）的生物活性成分，并检测了它对BM-MSC成骨功能以及骨髓瘤骨病的影响。 MM-EV富含调节MBD的各种分子 研究人员从人多发性骨髓瘤细胞系RPMI 8226和U266中分离出MM-EV，分别称之为R-EV和U-EV。这些EV为球形，大小在200-1000 nm。它们是CD138、Annexin-V和PKH-26阳性的，同时表达EV标志物Alix、TSG101、CD63、MFGE8或CD9。 之后，他们对R-EV中的RNA分子进行测序。由于miRNA被选择性分泌到EV中，并充当主要调节因子，他们重点分析了R-EV中包含的miRNA，并与来自B细胞和K562白血病细胞的EV进行比较。R-EV表达了287种miRNA，而K562-EV表达176种miRNA。 他们发现，一些调节细胞增殖的miRNA在R-EV和K562-EV中高表达。有意思的是，一些参与成骨细胞或破骨细胞分化的miRNA只在R-EV中高表达，如miR-103a-3p、miR-181a-3p和miR-21-3p。这
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鱼雌激素受体ELISA试剂盒操作方法技术检测范围
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
鱼雌激素受体ELISA试剂盒操作方法技术检测范围操作步骤 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL； 样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。 鱼雌激素受体ELISA试剂盒操作方法技术检测范围试剂盒性能 检测范围：12.5 pg/mL – 400 pg/mL。 灵敏度：最低检测浓度小于1.0 pg/mL。 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。 重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 。 试剂盒组成 名称 96孔配置 48孔配置 备注 微孔酶标板 8孔×12条 8孔×6条 无 标准品 0.3mL*6管 0.3mL*6管 无 样本稀释液 6mL 3mL 无 检测抗体-HRP 10mL 5mL 无 20×洗涤缓冲液 25mL 15mL 按说明书进行稀释 底物A 6mL 3mL 无 底物B 6mL 3mL 无 终止液 6mL 3mL 无 封板膜 2张 2张 无 说明书 1份 1份 无 自封袋 1个 1个 无 备注：1. 标准品浓度依次为：400、200、100、50、25、12.5 pg/mL2. 经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过最大标准品浓度时，可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。 注意事项 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
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冷冻切片的制作方法及注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
冷冻切片的方法及注意事项 一、实验前准备 ⒈清理实验台及仪器 ⒉开启冷冻切片机并将冷冻切片机预降至所需温度（- 15~-20 ℃*） ⒊准备好处理好的载玻片、刀片、胶水以及药品 二、取材 解剖之后迅速取出所需的新鲜组织，用干纱布或滤纸擦干后不需固定直接取材（24×24×2mm*）,以防形成冰晶造成切片中形成形状不一的空泡,使细胞内结构移位。 注：取材中目的标本既要明确也要确保其结构的完整性，应避免不必要的脂肪及坏死组织附着;要尽量剔除毛发、硬骨或钙化物;保乳手术切缘由于脂肪组织较多,取材厚度**不要超过 3mm，厚者冰冻费时，大者难以切完整。甲状腺及淋巴结组织要带全组织被膜并除去多余的脂肪组织。 三、冷冻切片 ⒈取出组织支承器，放平摆好组织，周边滴上包埋剂，速放于冷冻台上冰冻，用吸热器压住组织，至包埋剂与组织冻结成白色冰体即可切片（1~3分种）。 ⒉将冷冻好的组织块，夹紧于切片机持承器上，启动粗进退键，转动旋钮，将组织修平。 ⒊调好欲切的厚度，根据不同的组织而定，原则上是细胞密集的薄切，纤维多细胞稀的可稍为厚切，一般在5 ～10μm间。 ⒋调好防卷板。制作冰冻切片，关键在于防卷板的调节上，这就要求操作者要细心，准确地将其调较好，调校至适当的位置。切片时，以切出完整、平滑的切片为准。切好的组织在干净的玻片上黏附时顺着一个方向稍微用力轻轻一带 ,可避免组织摊片过程中皱折 ,保证组织结构的完整及切片的美观。 注：①包埋剂的选用：包埋剂是对冷冻切片质量一重要影响因素，包埋剂用量要适宜，过多或过少都会影响标本冷冻质量。常用的有三种包埋剂OCT剂、B超藕合剂以及普通胶水。B超藕合剂适用于细胞丰富质地较嫩的组织,普通胶水或 OCT剂适用于纤维丰富质地偏硬组织。（OCT包埋剂骤冷时固化，其冷冻速度和软硬韧度与组织相近，其还具有水溶性，不影响染色等优点。） ②组织块过小：先将少量胶挤在托架上预先放在冰冻机中冷冻,约30秒钟左右待胶凝固时将小组织放上,组织周围再加一些胶,再次置
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梅特勒（METTLERTOLEDO）天平使用注意事项与维修
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
METTLERTOLEDO电子天平注意事项： 因为天平砝码一般精度都比较高，对环境及操作要求也比较多，日常使用的时候应该注意哪些问题，该如何延长电子分析天平的使用寿命。 1.1 天平砝码不要放置在空调器下的边台上。搬动过的电子分析天平必须重新校正好水平，并对天平的计量性能作全面检查无误后才可使用。 1.2称取吸湿性、挥发性或腐蚀性物品时，应用称量瓶盖紧后称量，且尽量快速，注意不要将被称物(特别腐蚀性物品)洒落在称盘或底板上；称量完毕，被称物及时带离天平，并搞好称量室的卫生。 1.3同一个实验应使用同一台天平进行称量，以免因称量而产生误差。 一、仪器安装 1、工作环境：电子天平为高精度测量仪器，故仪器安装位置应注意： 安装平台稳定、平坦，避免震动； 避免阳光直射和受热，避免在湿度大的环境工作； 避免在空气直接流通的通道上。 2、天平安装：严格按照仪器说明书操作。 二、天平使用 1、调水平：天平开机前，应观察天平后部水平仪内的水泡是否位于圆环的中央，否则通过天平的地脚螺栓调节，左旋升高，右旋下降。 2、预热：天平在初次接通电源或长时间断电后开机时，至少需要30分钟的预热时间。因此，实验室电子天平在通常情况下，不要经常切断电源。 3、称量： 按下ON/OFF键，接通显示器； 等待仪器自检。当显示器显示零时，自检过程结束，天平可进行称量； 放置称量纸，按显示屏两侧的Tare键去皮，待显示器显示零时，在称量纸加所要称量的试剂称量。 称量完毕，按ON/OFF键，关断显示器。 三、注意事项 1、为正确使用天平，请您熟悉天平的几种状态： 显示器右上角显示O：表示显示器处于关断状态； 显示器左下角显示O：表示仪器处于待机状态，可进行称量； 显示器左上角出现菱形标志：表示仪器的微处理器正在执行某个功能，此时不接受其他任务。 2、天平在安装时已经过严格校准，故不可轻易移动天平，否则校准工作需重新进行。 3、严禁不使用称量纸直接称量！每次称量后，
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蛋白质组学应用于诱导毛发重生的关键细胞分泌蛋白的鉴定思路
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
蛋白质组学：搞定脱发无烦恼！ 脱发是目前非常难于有效治愈的一种流行病，近期研究结果证实真皮乳头细胞早期分泌蛋白可以诱导毛发的产生。小编今天来给大家分享一篇通过蛋白质组学研究的手段寻找诱导毛发重生的关键细胞分泌蛋白的文章。 iTRAQ-Based Quantitative Proteomic Comparisonof Early- and Late-Passage Human Dermal Papilla Cell Secretome in Relation toInducing Hair Follicle Regeneration PLOS ONE , doi:10.1371/journal.pone.0167474.g008 样本来源 真皮乳头细胞（dermal papilla cells, DPC）早期和晚期的分泌蛋白。 技术路线 iTRAQ蛋白质组学技术和靶向MRM蛋白质组学技术。 研究结果 作者首先遗传上证实DPC早期分泌蛋白确实可以诱导毛发的重生，把DPC早期分泌蛋白和晚期分泌蛋白分别注射到无毛的小鼠中，发现早期DPC分泌蛋白确实可以诱导毛发的重生，而晚期分泌蛋白不能诱导毛发的产生（下图A）；同时通过皮肤组织切片发现早期DPC分泌蛋白可以诱导毛囊结构的产生（下图B）。 DPC分泌蛋白的鉴定及早晚期分泌蛋白的差异：作者通过iTRAQ蛋白质组学技术（分20级）从DPC早期分泌和晚期蛋白中一共鉴定到了1360个蛋白（FDR1.2,p-values
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DNA测序基本原理及流程
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
DNA测序基本原理及流程 1977年，Sanger等人发展建立起来的一种DNA测序方法。 基本原理： 双脱氧链末端终止法 双脱氧链末端终止法通过使用链终止剂—类似于正常dNTP的2’,3’-双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)，将延伸的DNA链特异性地终止。其反应体系也包括单链模板、引物、4种dNTP和DNA聚合酶。共分四组，每组按一定比例加入一种 (ddNTP)，它能随机渗入合成的DNA链，一旦渗入合成即终止，于是各种不同大小片段的末端核苷酸必定为该种核苷酸，可以从放射自显影带上直接阅读DNA的核苷酸序列。 双脱氧链末端终止法不仅具有化学测序法的优点，而且更适用于大规模的测序。但它要求有一个纯净的单链DNA模板和一个合成反应所需的特异性的引物。因此，早期的工作仅局限于单链噬菌体为模板，若干个不同的特定限制性内切酶酶解片段为引物，在模板链的不同部位引导合成，从而确定出噬菌体DNA的核酸序列。然而，对于大量存在着的天然双链DNA分子，因没有良好的制备产量和质量高的分离链的技术，而限制了双脱氧链末端终止法的应用程度。 经典的双脱氧链末端终止法测序技术的改进 标记物方面的改进： 由于放射性同位素对人体的危害，许多实验室开始利用非放射性物质来取代放射性同位素。如生物素、地高辛、银染法、荧光标记物等化学发光物生物素、地高辛、银染法、荧光标记物等化学发光物 。在双脱氧法测序时，它们作为标记物，示踪测序反应的产物，最后通过酶显色反应或者荧光信号显示出测序的结果。这些方法比传统的放射性同位素方法检测容易、安全、快速、费用也低。 经典的双脱氧链末端终止法测序技术的改进 电泳方法的改进 : 电泳方法的改进主要采用毛细管电泳法。 毛细管电泳是被分离物质在毛细管中的电泳。1992年，Matnies等首先提出陈列毛细管电泳法，采用激光聚焦荧光扫描检测装置。25只毛细管并列电泳，每只毛细管在1.5小时内可读出350bp。DNA序列分析效率可达6000bp/h。 测序过程: DNA Sequencing with GenomeLab TM ⒈分离纯化模板DN
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【技术报告】基于高通量Peggy Sue系统建立高效药物筛选平台
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
木薯是热带和亚热带地区的重要作物，与马铃薯和甘薯并称为世界三大薯类作物。当然，在中国大部分地区，我们最常见到的木薯，应该是这个样子出现的： 吃货们看过来~ 好，看完美食我们接着聊。木薯虽然不错，但是采后很容易变质，难以贮存。这在吃货界显然是不可以忍受的事！还好，大批科学家上线，希望找到让木薯更容易保存的方法。 最近，就有一个瑞士的研究团队利在相对定量蛋白组学技术的帮助下找到了缓解木薯变质的办法（VanderschurenH,et al., Plant Cell, 2014）。 文献来源：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24876255 这个团队对于之前所有人都在研究变质相关基因的状况，提出了自己的看法：“整天基因基因哒，蛋白也很重要啊！修饰也很重要啊！能不能考虑考虑它们的感受？”于是乎，他们选择了Label Free对木薯根的蛋白组做了相对定量分析。 今天小编就和大家聊聊这个研究案例。 不同采后时间的蛋白表达差异 研究人员首先选取了采收后0、6、12和24 h小时的木薯根切片样本，每个时间点三次生物学重复。他们利用SDS提取了各样品的总蛋白，每个样品分五级，分别进行LC-MS/MS检测，每次检测两次技术重复。 所有质谱检测的数据在ProgenesisLCMS上合并分析，使用的是cassava 4.1蛋白数据库。本研究通过分级，木薯根的蛋白组覆盖程度被大大提高，最终一共鉴定到了2632个蛋白，并对其中1199个蛋白的TP3Q丰度进行了排序。在采后生理变质过程中，有293个蛋白表现出显著的丰度变化。 差异蛋白的通路分析 在对293个差异蛋白进行分子功能分类后，研究人员发现，这些差异蛋白的分子功能多数与氧化还原活性相关，由此推断氧化是木薯采后变质的主要原因。在通路分析方面，这个研究和目前大部分的研究不太一样。他们使用的通路分析数据库为AraCyc。通路分析结果显示，这些差异蛋白主要参与了抗坏血酸盐/谷胱甘肽循环、乙烯生物合成、苯丙素生物合成、脂
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APT分享 | 蛋白质组学解锁木薯保鲜新技能
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
具有独特选择性的C18 键合相： 1.有保证的可重现性 2.极佳的键合相稳定性 3.疏水和五氟苯基“混合模式”的相互作用 改善色谱分离度 色谱分离的目标是在最短的时间内获得目标组分的足够分离度（Rs）。 1.5的分离度可以实现基线分离，然而对于可以在实验室之间易于转换的耐用、可重复方法而言，理想的分离度是1.8-2.0。 分离度方程告诉我们什么变量可以影响分离度： Rs = 目标峰之间的分离度 N = 柱效- 由理论塔板数测定 α= 选择性- 两峰的保留值比率（k值） k =保留因子- 洗脱峰所需的柱体积数 增加分离度Rs可以通过增加N、α或k来实现。 然而，如图1所示，可以看出，增加N或k以改善Rs的回报率快速下降。 例如，Rs仅随着N平方根的增加而增加。 可以通过增加柱长或降低柱填充材料的粒径或两者的某种组合来增加N。 无论哪种方式，系统背压随着N的增加而增加，因此通过增加N实现令人满意的分离，其“成本”可能是极高的压力。 同样，增加保留值（k值）将会增加Rs，但回报率也快速下降。 将k增加至超过10通常是Rs与分析时间之间的不利权衡，因为只有Rs的边际收益随着保留时间的增加而实现。 该效应的图形表示参见下述图1。 图1 N、α和k对分离度(Rs)的影响 对于典型的分离，其中：N = 10,000, k = 4, α= 1.1 增加N、α或k可以提高分离度(Rs)。 然而，从这些图中可以看出，N或k的提高都会迅速降低回报率。 另一方面，提高选择性（α）则没有这个问题，因此其成为开发分离方法时的最佳优化变量。 增加α可以增加Rs，但不同于N和k,不会受回报率下降的约束。 α的变化对压力没有影响，对分离时间的影响也是微乎其微的（参见图2）。 因此，在开发分离方法时，α是最重要的变数。 优化α可以使您在所有目标峰之间达到满意的分离度，同时保持系统背压和分离时间在可接受范围内。 改善色谱分离度- 选择性或柱效？ 选择性(α)由流动相、温度和固定相化学物质控制。大多数方法开发策略将
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ACE C18-PFP色谱柱介绍Ⅱ- 改善分离度
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
具有独特选择性的C18 键合相： 1.有保证的可重现性 2.极佳的键合相稳定性 3.疏水和五氟苯基“混合模式”的相互作用 改善色谱分离度 色谱分离的目标是在最短的时间内获得目标组分的足够分离度（Rs）。 1.5的分离度可以实现基线分离，然而对于可以在实验室之间易于转换的耐用、可重复方法而言，理想的分离度是1.8-2.0。 分离度方程告诉我们什么变量可以影响分离度： Rs = 目标峰之间的分离度 N = 柱效- 由理论塔板数测定 α= 选择性- 两峰的保留值比率（k值） k =保留因子- 洗脱峰所需的柱体积数 增加分离度Rs可以通过增加N、α或k来实现。 然而，如图1所示，可以看出，增加N或k以改善Rs的回报率快速下降。 例如，Rs仅随着N平方根的增加而增加。 可以通过增加柱长或降低柱填充材料的粒径或两者的某种组合来增加N。 无论哪种方式，系统背压随着N的增加而增加，因此通过增加N实现令人满意的分离，其“成本”可能是极高的压力。 同样，增加保留值（k值）将会增加Rs，但回报率也快速下降。 将k增加至超过10通常是Rs与分析时间之间的不利权衡，因为只有Rs的边际收益随着保留时间的增加而实现。 该效应的图形表示参见下述图1。 图1 N、α和k对分离度(Rs)的影响 对于典型的分离，其中：N = 10,000, k = 4, α= 1.1 增加N、α或k可以提高分离度(Rs)。 然而，从这些图中可以看出，N或k的提高都会迅速降低回报率。 另一方面，提高选择性（α）则没有这个问题，因此其成为开发分离方法时的最佳优化变量。 增加α可以增加Rs，但不同于N和k,不会受回报率下降的约束。 α的变化对压力没有影响，对分离时间的影响也是微乎其微的（参见图2）。 因此，在开发分离方法时，α是最重要的变数。 优化α可以使您在所有目标峰之间达到满意的分离度，同时保持系统背压和分离时间在可接受范围内。 改善色谱分离度- 选择性或柱效？ 选择性(α)由流动相、温度和固定相化学物质控制。大多数方法开发策略将
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NAT COMMUN | 蛋白质组学（TMT+label-free）破译衰老密码
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
NAT COMMUN | 衰老退化为哪般？蛋白质组学（TMT+label-free）破译衰老密码 众所周知，干细胞的老化被认为是导致组织和器官老化的根本原因，尤其是在高周转率的生物系统中，比如造血作用。随着干细胞的老化，受损组织被替换的潜能也会随之减弱，在人体中，贫血，适应性免疫系统能力的下降，以淋巴细胞为代价的骨髓细胞的扩张，以及频发的血液系统恶性肿瘤，这些都已经被报道与衰老息息相关。但是这些变化的机制仍然难以捉摸。2018年新发表于NATURE COMMUNICATIONS上的来自欧洲分子生物学实验室的科学家们就关注该方向，这项研究的首要目的就是利用TMT和labelfree技术对人类hpc细胞以及骨髓壁龛中的细胞群老化过程进行研究，从而揭秘衰老的分子机制。 文献来源 https://www.onacademic.com/detail/journal_1000040868031610_5093.html IF=12.353 研究材料 59例年龄在20到60岁之间的志愿者，对通过髂后嵴穿刺得到的细胞进行分离，得到HPC细胞，和其它5种与骨髓壁龛相关的细胞：LYM（淋巴细胞和前体），MON（单核细胞/巨噬细胞和前体），GRA（粒细胞前体），ERP（红细胞前体），MSC（间充质干细胞/wd基质细胞）。 技术方法 TMT标记定量蛋白质组和label free分级非标记定量蛋白质组学（如下图）。转录组学研究提供了潜在分子机制的蓝图，并指出与年轻的HPCs相比，老化HPC中与细胞周期，骨髓谱系规范以及髓样恶性肿瘤相关的基因上调。基于TMT的定量方法，准确测定同一细胞群内衰老过程中的变化，而利用 label free(LF)的方法来评估不同细胞群之间的蛋白质丰度。这也是本文的一个创新点，利用2种定量组学来分别分析细胞群内和细胞群之间的蛋白水平的变化。文章还结合Single-cellRNA-sequencing法对HPCs进行了单细胞测序，检测了蛋白组中显著变化的蛋白的相关转录水平的变化。 结果分析 1. 鉴定到蛋白的结果展示 对分离得到的6种细胞分别进行label free和TMT定量分析，总共鉴定到12158中蛋白，并展示了6种细胞的
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