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【没有最多，只有更多】细胞外囊泡中磷酸化蛋白质组学研究
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
蛋白磷酸化水平的变化可指针疾病的变化，但却鲜有磷酸化蛋白被开发成为疾病诊断标记物。细胞外囊泡是由膜封闭的微环境，不受外界蛋白酶和其他酶的影响。这使得细胞外囊泡在体液中高度稳定，为开发磷酸化蛋白应用于医学诊断提供了契机。 今天为大家介绍一篇细胞外囊泡中磷酸化蛋白相关的文章： Phosphoproteins in extracellular vesicles as candidate markers for breast cancer PNAS , doi: 10.1073/pnas.1618088114 本篇研究从微泡和外泌体中提取和鉴定到迄今为止数目最多的磷酸化蛋白，并对健康组和疾病组（乳腺癌）的磷酸化蛋白进行相对定量分析。筛选出了多个潜在的生物标记物，并从中挑选了几个靶点蛋白，用PRM的方法在健康组和疾病组中进行了后期验证。 【主要结果】 1. 迄今为止最多，没有之一 本实验中共鉴定到9643个磷酸化特征肽段，是迄今为止在人血样来源的细胞外囊泡中鉴定到数目最多的磷酸化肽段。实验流程示意图如下。 图1. 实验流程示意图（健康组n=6,疾病组n=18） 2. 微泡、外泌体大不同 平均1mL人血浆中可鉴定到7000条磷酸化特征肽段。在外泌体中鉴定到的磷酸化肽段，其中50%在微泡中也可被检测到。这些磷酸化蛋白主要参与细胞通讯、刺激响应和生物起源等生物学过程。微泡中酪氨酸、苏氨酸和丝氨酸磷酸化所占比例分别为2.0%、14.1%、83.9%。而外泌体中酪氨酸磷酸化的比例则较高，为13.7%。与苏氨酸的磷酸化比例（16.1%）接近。这表明微泡和外泌体的生物起源有很大差异。如图2所示。 图2. 微泡和外泌体中磷酸化肽段及磷酸化蛋白的分布 3. 不关蛋白组表达量的事，磷酸化水平确实升高了！ 健康组与患病组细胞外囊泡蛋白组表达近乎一致的情况下，蛋白磷酸化水平却表现出了显著差异。表明这种差异不是由蛋白表达量的变化引起的，而切实反映了病患组细胞外囊泡蛋白磷酸化的程度（图3）。 图3. 微泡和外泌体蛋白组与磷酸化蛋白组的交叠维恩图 4. PRM验证实验-完整而严谨 挑选了四
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鱼紧密连接蛋白检测试剂盒范围及实验原理方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
鱼紧密连接蛋白检测范围及实验原理方法 鱼紧密连接蛋白(Occludin)ELISA检测试剂盒 英文名称：Fish Occludin ELISA Kit 实验类型：夹心法 检测范围：0.625 ng/mL – 20 ng/mL 最低检测限：最低检测浓度小于0.1 ng/mL 应用范围：血清、血浆、组织匀浆、细胞培养物上清或其它相关液体（本产品仅供实验室科研及非临床用途） 说明 由于现有条件及科学技术水平尚不能对所有供货商提供的所有原料进行全面的鉴定与分析，本产品可能存在一定的质量技术风险。 最终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作以及当时的实验环境密切相关，请务必准备充足的标本备份。 不同批次的同一产品可能会有少许差别，如：检测限、灵敏度以及显色时间等，请依据试剂盒内说明书进行实验操作，网站电子版说明书仅作参考。 只有全部使用本试剂盒配套试剂才能保证检测效果，不能混用其他制造商的产品。只有严格遵守本试剂盒的实验说明才会得到最佳的检测结果。 本公司只对试剂盒本身负责，不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责，请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量，预留充足的样本。 使用化学裂解液制备的组织匀浆或细胞提取液可能会由于某些化学物质的引入导致ELISA实验结果偏差。 若样本为细胞培养上清，因该类样本干扰因素较多，如：细胞状态、细胞数量、采样时间等，所以可能存在检测不出的情况。 某些天然蛋白或重组蛋白，包括原核及真核重组蛋白，可能因为与本产品所使用的检测抗体及捕获抗体不匹配，而不被检测出。 实验原理 试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被鱼紧密连接蛋白（Occludin）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的鱼紧密连接蛋白（Occludin）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓
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看最新白细胞介素研究报告，拓宽科研新思路
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
白细胞介素的由来？它们有什么重要作用？ 白细胞介素，简称白介素(interleukin, IL)，最初是由白细胞产生并在白细胞间发挥作用，因此而命名并沿用至。1979 年第二届国际淋巴因子专题讨论会将免疫应答过程中白细胞间相互作用的细胞因子统一命名为白细胞介素，在名称后加阿拉伯数字编号以示区别，例如 IL-1 、 IL-2… ，新确定的因子依次命名。 白介素是由巨噬细胞、淋巴细胞等细胞分泌的一类细胞因子，其主要生物功能涉及参与免疫应答与免疫调节，参与神经、内分泌系统和细胞因子共同构成细胞间信号传递的分子系统，参与炎症和免疫病理性的组织损害等。不同的白介素来源和功能不同，一些白介素可由多种免疫细胞产生，一种白介素也可对多种细胞发挥作用。 目前至少发现了38个白细胞介素，分别命名为IL-1~IL38，其功能复杂，成网络重叠；在免疫细胞的成熟、活化、增殖和免疫调节等一系列过程中均发挥重要作用，此外它们还参与机体的多种生理及病理反应。一些罕见的白细胞介素缺陷不足都常出现自身免疫性疾病或免疫缺陷。 不知道选择哪个家族？最新研究快报给您新思路 1.悉尼大学研究者对IL-17在糖尿病肾病中的作用进行相关研究，IL-17信号的缺失对链霉素诱导的糖尿病肾病具有保护作用，提示IL-17在其发病机制中具有促炎作用，靶向IL-17可能是**这种疾病的一种新的**方法。 2.中科院科学家首次发现PD-1的泛素化降解通路并发表于Nature杂志，其中一个关键酶FBXO38在调节T细胞抗癌功能发挥作用，IL-2能显著增加T细胞中FBXO38的转录，降低PD-1表达。 3.美国奥尔巴尼医学院研究者阐明了肠纤维化的信号级联，Cx3cr1+单核细胞自噬上调IL-23/IL-22，导致过度的纤维化反应，这种级联反应可能是缓解CD纤维化的**靶点。 4.研究发现，IL-17RB可能是幽门螺杆菌感染的早期干预靶点。研究定义了一个幽门螺杆菌感染早期的负调控网络，涉及IL-17E, GECs, IL-17R
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气相色谱法的分析方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
气相色谱法的分析方法 气相色谱法是利用气体作流动相的色层分离分析方法。汽化的试样被载气（流动相）带入色谱柱中，柱中的固定相与试样中各组份分子作用力不同，各组份从色谱柱中流出时间不同，组份彼此分离。 采用适当的鉴别和记录系统，制作标出各组份流出色谱柱的时间和浓度的色谱图。根据图中表明的出峰时间和顺序，可对化合物进行定性分析；根据峰的高低和面积大小，可对化合物进行定量分析。具有效能高、灵敏度高、选择性强、分析速度快、应用广泛、操作简便等特点。适用于易挥发有机化合物的定性、定量分析。对非挥发性的液体和固体物质，可通过高温裂解，气化后进行分析。可与红光及收光谱法或质谱法配合使用，以色谱法做为分离复杂样品的手段，达到较高的准确度。是司法鉴定中检测有机化合物的重要分析手段。 分析方法实际上是在某一特定的气相色谱分析中使用的一系列条件。建立分析方法实际上是确定对于某一分析的最佳条件的过程。 为了满足某一特定的分析的要求，可以改变的条件包括进样口温度，检测器温度，色谱柱温度及其控温程序，载气种类及载气流速，固定相，柱径，柱长，进样口类型及进样口流速，样品量，进样方式等。检测器还可能有其它可供调节的参数，这取决于所使用的检测器类型。有一些气相色谱仪还有可以控制样品与载气流向的阀门，这些阀门开启与关闭的时间也可能对分析的效果有重要影响。 该仪器有两个阀门，用来控制载气进入定量管。当定量管充满样品气后，切换阀门，载气就会通过定量管。载气的压强会将样品带入到色谱柱中进行分离。 ⒈气相色谱法载气选择与载气流速 典型的载气包括氦气、氮气、氩气、氢气和空气。通常，选用何种载气取决于检测器的类型。例如，放电离子化检测器（DID）需要氦气作为载气。不过，当对气体样品进行分析的时候，载气有时是根据样品的母体选择的，例如，当对氩气中的混合物进行分析时，**用氩气作载气，因为这样做可以避免色谱图中出现氩的峰。安全性与可获得性
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高分辨率熔解曲线(HRM)分析预混Mix(PCR)，能基因筛查吗？
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
高分辨率熔解曲线(high-resolution melting，HRM)是一种基于单核苷酸熔解温度不同而形成不同形态熔解曲线的基因分析新技术，具有极高的敏感性，可以检测出单个碱基的差异。 作为一种高效稳健的"post－PCR"技术，它不受突变碱基位置与类型的限制，无需序列特异性探针，在PCR结束后直接运行高分辨熔解即可完成对样品的分析。HRM技术因操作简便快捷、成本低廉、结果准确，并且实现了真正的闭管操作而受到普遍关注。 HRM原理： 在PCR反应前将新型DNA饱和荧光染料加入反应体系，然后将PCR产物直接导入高分辨熔解分析仪中，在一定的温度范围内将PCR扩增产物进行加热变性，仪器的光学检测系统采集、分析荧光信号并绘制温度熔解曲线，根据不同熔解曲线形状来区分（单个）碱基差异。 最广泛的 HRM 分析应用领域是基因筛查。基因筛查是搜索 PCR 扩增片段中是否存在未知变异，它可在测序步骤之前进行或者作为替代测序方法。由于 PCR 产物突变可导致 DNA 熔解曲线的形状改变，因此它可以利用 HRM分析检测。杂交双链 DNA 样本扩增并熔解时，其熔解曲线不同于纯合野生型或突变样本。如果操作得当，可以减少至少95%的测序工作量。随着DNA染料和分析仪器的发展，HRM技术还将继续完善和改进，在遗传病分子诊断领域发挥更多的作用。 HRM应用： • 基因筛查 (突变研究) • 杂合性研究 • 突变分析 • 物种鉴定 • 单核苷酸多态性 (SNP) 检测 • 甲基化分析 高分辨熔解曲线分析技术(HRM) 疑问与解答 作为专注于PCR领域超过24年的高品质试剂供应商，Solis BioDyne为您推荐，5X热启动EvaGreen高分辨率熔解曲线分析-预混Mix（PCR）： 名称 货号 兼容的PCR仪器 5x HOT FIREPol EvaGreen HRM Mix (NO ROX) 08-31-00001 Bio-Rad: CFX96™ & CFX384™ Qiagen: Rotor-Gene® 6
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HSP10,鱼热休克蛋白10ELISA试剂盒的检测范围及操作方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
HSP10,鱼热休克蛋白10ELISA试剂盒的检测范围及操作方法 检测范围：3.125 ng/ml – 100 ng/ml。 灵敏度：最低检测浓度小于0.1 ng/ml。 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。 重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 。 操作步骤 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL； 样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。 实验原理 试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被鱼10kDa热休克蛋白1（HSP10）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的鱼10kDa热休克蛋白1（HSP10）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。 说明 由于现有条件及科学技术水平尚不能对所有供货商提供的所有原料进行全面的鉴定与分析，本产品可能存在一定的质量技术风险。 最终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作以及当时的实验环境密切相关，请务必准备充足的标本备份。 不同批次的同一产品可能会有少许差别，如：检测限、灵敏度以及显色时间等，请依据试剂盒内说明书进行实验操作，网站电子版说明书仅作参考。 只有全部使用本试剂盒配套试剂才能保证检测效果，不能混用其他制造商的产品。只有严格遵
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利用非损伤微测技术研究Na+/H+流与SOS抗盐文献汇总
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
上周，中国农大郭岩课题组在Nature Communications在线发表题为Calcium-activated 14-3-3 proteins as a molecular switch in salt stress tolerance的研究成果。 研究揭示了14-3-3蛋白通过感受钙信号，选择性的结合和抑制SOS2和PKS5的激酶活性，并协同调控Na+/H+反向转运蛋白SOS1和质膜H+-ATPase活性，影响植物耐盐能力。 拟南芥根尖分生区Na+流结果 我们为您整理了利用非损伤微测技术（Non-invasive Micro-test Technology, NMT）研究SOS基因家族的盐胁迫文章。 Co-expression of SpSOS1 and SpAHA1 in transgenic Arabidopsis plants improves salinity tolerance. BMC Plant Biology, 2019, 19(1):74. Overexpression of the PtSOS2 gene improves tolerance to salt stress in transgenic poplar plants. Plant Biotechnology Journal, 2015, 13(7): 962-73. Co-expression of the Arabidopsis SOS genes enhances salt tolerance in transgenic tall fescue (Festuca arundinacea Schreb.). Protoplasma, 2014, 251(1):219-31. SOS1 gene overexpression increased salt tolerance in transgenic tobacco by maintaining a higher K+/Na+ ratio. Journal of plant physiology, 2012, 169(3): 255-261. Nax loci affect SOS1-like Na+/H+ exchanger expression and activity in wheat. Journal of Experimental Botany, 2016, 67(3):835-44. Haem oxygenase modifies salinity tolerance in Arabidopsis by controlling K+ retention via regulation of the plasma membrane H+-ATPase and by altering SOS1 transcript levels in roots. Journal of Experimental Botany, 2013, 64(2): 471-481. Na+-H+ antiporter activity of the SOS1 gene, lifetime imaging analysis and electrophysiological studies on Arabidopsis seedlings. Physiologia Plantarum, 200
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为什么人们不愿再用滋养层细胞的形式培养NK细胞？
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
NK细胞培养一直存在两种培养方式。 一种是滋养层细胞培养方式，首先获得具有不分裂不增殖但仍保持代谢活性的滋养层细胞。该细胞通过基因工程技术进行改造，再经过钴60辐照，细胞膜表面稳定表达多种细胞因子，在多种细胞因子协同作用下，外周血单个核细胞中的自然杀伤细胞得到定向激活和扩增，该种培养方式的价格相对便宜，仅有3000元左右。从培养结果来看，细胞收获量可达到20亿/L的水平，NK表型阳性率达到80%-90%左右。 另一种是NK细胞培养方式是纯因子细胞培养。顾名思义就是使用相应的细胞因子来刺激单个核细胞，向NK细胞方向诱导，并配合相应的细胞培养基，使NK细胞大量增殖。纯因子细胞培养技术以其安全性高而著称，其原因在于所使用的细胞因子，都是体内环境原本就存在的。培养过程相当于模拟体内环境，促进NK细胞的激活及大量增殖。日本在该项技术上走在国际前列。由于日本老龄化严重，因此抗衰老研究较多。NK细胞在抗衰老研究中的应用符合其严格的风险管理原则。因此国内使用的纯因子试剂盒多进口自日本。但由于技术壁垒，纯因子试剂盒的价格一直居高不下，多在6000元以上。 那为什么越来越多的人不愿再用滋养层细胞的形式培养NK细胞呢？ 虽然滋养层细胞培养方式从培养结果来看，细胞收获量可达到20亿/L的水平，NK表型阳性率达到80%-90%左右，价格便宜、效果稳定，但用户对此种培养方式实际是心存排斥的，主要原因是在培养过程中选用的滋养层细胞为肿瘤细胞。尽管从理论上讲，经过相应处理的肿瘤细胞已经不再具备增殖的可能性。但其潜在风险难以证明可以完全排除。另外，就是伦理方面的问题，将正常细胞与肿瘤细胞共培养，然后将培养后的NK细胞回输体内，确实存在难以克服的伦理障碍。正如上述原因，确实制约了滋养层培养技术的推广。
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糖基化修饰的基本原理
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
一、 糖基化修饰 蛋白质的糖基化是一种最常见的蛋白翻译后修饰，是在糖基转移酶作用下将糖类转移至蛋白质和蛋白质上特殊的氨基酸残基形成糖苷键的过程。研究表明70%人类蛋白包含一个或多个糖链1%的人类基因组参与了糖链的合成和修饰。 二、糖基化修饰功能 在参与糖基化形成的过程中,糖基转移酶和糖苷酶扮演了重要的角色。糖基化的结果使不同的蛋白质打上不同的标记,改变多肽的构象,增加蛋白质的稳定性。 三、糖基化修饰加工过程 糖基化修饰主要发生在内质网和高尔基体。主要过程是将糖基在糖基转移酶作用下将糖链转移至蛋白质，和蛋白质上的氨基酸残基形成糖苷键，经过一系列转运、糖链末端的剪切，修饰和岩藻糖化或者唾液酸化等完成糖基化蛋白质的组装 四、糖基化修饰分类 哺乳动物中蛋白质的糖基化类型主要可分为两种：N-糖基化和O-糖基化。大多数糖蛋白质只含有一种糖基化类型。但是有些蛋白多肽同时连有N-糖链和O-糖链。 1. N-糖基化 N-糖链通过与蛋白质的天冬氨酸的自由NH2基共价连接,将这种糖基化称为N-糖基化。N-连接的糖链合成起始于内质网(ER),完成于高尔基体。 N-糖基化生成加工过程 N-糖链合成的第一步是将一个14糖的核心寡聚糖添加到新形成多肽链的特征序列为Asn-X-Ser/Thr(X代表任何一种氨基酸)的天冬酰胺上,天冬酰胺作为糖链受体。核心寡聚糖是由两分子N-乙酰葡萄糖胺、九分子甘露糖和三分子葡萄糖依次组成,第一位N-乙酰葡萄糖胺与ER双脂层膜上的磷酸多萜醇的磷酸基结合,当ER膜上有新多肽合成时,整个糖链一起转移。寡聚糖转移到新生肽以后,在ER中进一步加工,依次切除三分子葡萄糖和一分子甘露糖。在ER形成的糖蛋白具有相似的糖链,由Cis面进入高尔基体后,在各膜囊之间的转运过程中,原来糖链上的大部分甘露糖被切除,但又由多种糖基转移酶依次加上了不同类型的糖分子,形成了结构各异的寡糖链。血浆等体液中蛋白质多发生N-糖基化,因此N-糖蛋白又称为血浆型糖蛋白。 2. O-糖基化 O-糖链与蛋白质的丝氨酸或苏
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红外分析仪类型和工作原理
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
红外分析仪类型 红外分析仪类型，目前使用的红外线气体分析器类型很多，分类方法也较多。 1.从是否把红外光变成单色光来划分，可分为不分光型(非色散型)和分光型(色散型)两种。 2.从光学系统来划分，可以分为双光路和单光路两种。 3.从使用的检测器类型来划分。 4.从检测组分的数量来划分，有单组分和多组分两种。 本文主要讲从是否把红外光变成单色光来划分，可分为不分光型(非色散型)和分光型(色散型)两种。 不分光型(NDIR) 光源发出的连续光谱全部都投射到被测样品上，待测组分吸收其特征吸收波带的红外光，由于待测组分往往不止一个吸收带，因而就NDIR的检测方式来说具有积分性质。因此不分光型仪器的灵敏度比分光型高得多，并且具有较高的信噪比和良好的稳定性。其主要缺点是待测样品各组分间有重叠的吸收峰时，会给测量带来干扰。 固定分光型(CDIR) 分光型仪器采用套分光系统， 使通过测量气室的辐射光谱与待测组分的特征吸收光谱相吻合。其优点是选择性好，灵敏度较高;缺点是分光后光束能量很小，分光系统任一元件的微小位移，都会影响分光的波长。因此，分光型仪器一直用在条件较好的实验室，长期未能用于在线分析。近年来，随着窄带干涉滤光片的广泛使用分光型仪器开始进入在线分析。不过这种窄带干涉滤光片的分光不同于光栅系统的分光，它不能形成连续光谱，只能对一个或几个特定波长附近的狭窄波带进行选通，因此，将其称为固定分光型(CDIR)仪器，以别于连续分光型仪器。 红外分析仪工作原理 红外分析仪工作原理，从使用的检测器类型来划分。气体分析器中使用的检测器，目前主要有薄膜电容检测器、微流量检测器、光电导检测器、热释电检测器四种。根据结构和工作原理上的差别，我们可以将其分成两类，前两种属于气动检测器，后两种属于固体检遇器。 气动检测器靠气动压力差工作，薄膜电容检测器中的薄膜振动靠这种压力差驱动，微流量检测器中的流量波动也是由这种压力差引起的。这种压
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云序客户新成果揭秘：汽车尾气污染物竟影响女性生殖健康！
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
文章导读： 燃料细颗粒物（FPM）是重要的环境污染物，具有广泛的生物活性，可以引起各种疾病。流行病学研究发现FPM可以降低人类生育率，延缓胚胎生长，并导致男性生殖功能损伤。然而，它对女性卵巢功能的影响及相关机制并不清楚。 云序生物携手长海医院科研团队首次发现了FPM对卵巢功能和卵泡成熟的显著抑制作用，并能下调类固醇生物合成信号通路。为了解FPM对卵巢的毒性及相关机制提供了一个新的视角，有助于探索**它所导致的卵巢功能障碍的新方法。 发表期刊：Environmental Science & Technology Letters 影响因子：6.6 实验方法：mRNA测序 实验材料：FPM处理小鼠的卵巢和血清（实验组），FPM未处理小鼠的卵巢和血清（空白组） 文章内容： 1. FPM诱发卵泡成熟障碍 本篇文章作者首先收集了由汽油和柴油产生的FPM，并使用不同浓度处理小鼠，收集处理组小鼠的卵巢为实验组（Gasoline FPM和Diesel FPM），未做处理的小鼠卵巢为空白对照组（Control），统计卵巢中不同阶段卵泡的数目，发现两种FPM在不同浓度下均能显著抑制卵泡成熟进程，引起卵泡成熟紊乱；并且在高浓度FPM中暴露时还能降低卵巢储备功能。那么问题来了，FPM是如何对卵泡成熟过程产生影响的呢？ 图1. 汽油和柴油FPM影响卵泡的成熟和卵巢结构的变化 2.FPM抑制卵巢雌激素的产生，破坏下丘脑-垂体-卵巢轴 因为下丘脑-垂体-卵巢轴在卵泡发育和卵母细胞成熟的过程中起重要的作用，作者从此入手，对上述问题展开研究。E2（卵巢分泌）和FSH、LH（垂体分泌）是三种重要的血清激素可用于评估卵巢功能。作者通过测量血清中三者含量，发现FPM会导致E2含量下降（图2A），FSH和LH含量上升（图2C和D）；另外作者还测量了卵巢组织的重量，发现FPM可以诱导卵巢体重减轻，导致卵巢萎缩和功能障碍（图2B）。综上所述，FPM确实可以破坏下丘脑-垂体-卵巢轴并导致卵巢功能障碍。 图2. FPM处理后小鼠下丘脑−垂体−卵巢轴的血清激素浓度 3.FPM引起卵巢中金属元素不
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质控菌株的基本分类及特点
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
质控菌株的基本分类及特点 自从2015版药典生效后，质控菌株这一标准菌株的商业衍生物慢慢热了起来，原来的微生物实验室，多数使用CMCC菌株，因此基本购买中检所的0代标准菌株制成1代标准贮备菌株然后再制成工作菌株进行使用，或购买地方所制备的2-3代商业衍生物作为工作菌株。其实在此之前已有不少外企使用质控菌株作为其微生物实验室菌株实验的基本耗材，但市场上的商品基本局限于ATCC、NCTC、NCPF等欧美国家菌种保藏中心的菌株，针对于CMCC菌株（中国医学细菌保藏管理中心）的质控菌株基本难寻踪迹。 质控菌株本质上是标准菌株的商业衍生产品，其应有可靠的溯源证明追溯至其使用的标准菌株来源，在微生物实验室仅可作为工作菌株进行使用，在使用前也应进行特性和纯度的确认。质控定量菌株使用起来非常方便，基本就是用无菌水复溶带菌小球，震荡后即可或在其允许的存放条件及时间内使用。 质控菌株基本分为两类： 一类为满足低浓度接种量需求，含菌量一般为＜100cfu，为各类微生物培养基促生长实验，微生物实验阳性对照、无菌工艺模拟试验中培养基灵敏度检查，无菌或微生物限度检查实验方法学验证等的接种量需求。 另一类为满足高浓度接种量需求，含菌量一般在105-106cfu，为对防腐剂、抑菌剂及消毒剂等抗微生物活性物质的效能测试或挑战实验，该类实验对微生物有下降几个对数降的统计需求，因此需要相对浓度较高的菌液。 质控菌株的优势非常明显，最显著的是以下三点： ⒈精确的已知菌株cfu数量，减少实验失败率 这点优势真的非常大，实验室建立一个各类菌株稳定的稀释至定量的方法至少需要3~6个月不等，培养人员可有效执行该方法每人基本需要3个月，检验所买来菌株的原始情况不一样，即使同一株菌，一样的复苏方法、培养条件、培养时间，同样的稀释方法但是不同人稀释出来的菌量还是不一样，每个微生物实验室肯定遇到过当天稀释加入供试品后发现第二天计数结果超限，或者当天计数第二天放在冰箱里取出的菌液里的菌株都
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DNA测序方法中自动测序法的操作步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
DNA测序方法中自动测序法的操作步骤 基因分析仪(即DNA测序仪)，采用毛细管电泳技术取代传统的聚丙烯酰胺平板电泳，应用该公司专利的四色荧光染料标记的ddNTP(标记终止物法)，因此通过单引物PCR测序反应，生成的PCR产物则是相差1个碱基的3'末端为4种不同荧光染料的单链DNA混合物，使得四种荧光染料的测序PCR产物可在一根毛细管内电泳，从而避免了泳道间迁移率差异的影响，大大提高了测序的精确度。由于分子大小不同，在毛细管电泳中的迁移率也不同，当其通过毛细管读数窗口段时，激光检测器窗口中的CCD(charge-coupled device)摄影机检测器就可对荧光分子逐个进行检测，激发的荧光经光栅分光，以区分代表不同碱基信息的不同颜色的荧光，并在CCD摄影机上同步成像，分析软件可自动将不同荧光转变为DNA序列，从而达到DNA测序的目的。分析结果能以凝胶电泳图谱、荧光吸收峰图或碱基排列顺序等多种形式输出。 它是一台能自动灌胶、自动进样、自动数据收集分析等全自动电脑控制的测定DNA片段的碱基顺序或大小和定量的高档精密仪器。PE公司还提供凝胶高分子聚合物，包括DNA测序胶(POP 6)和GeneScan胶(POP 4)。这些凝胶颗粒孔径均一，避免了配胶条件不一致对测序精度的影响。它主要由毛细管电泳装置、Macintosh电脑、彩色打印机和电泳等附件组成。电脑中则包括资料收集，分析和仪器运行等软件。它使用最新的CCD摄影机检测器，使DNA测序缩短至2.5h，PCR片段大小分析和定量分析为10～40min。 由于该仪器具有DNA测序，PCR片段大小分析和定量分析等功能，因此可进行DNA测序、杂合子分析、单链构象多态性分析(SSCP)、微卫星序列分析、长片段PCR、RT-PCR(定量PCR)等分析，临床上可除进行常规DNA测序外，还可进行单核苷酸多态性(SNP)分析、基因突变检测、HLA配型、法医学上的亲子和个体鉴定、微生物与病毒的分型与鉴定等。 一、准备工作 1. BigDye测序反应试剂盒 主要试剂是BigDye Mix，内含PE专利四色荧光标记的ddNTP和普通dNTP，AmpliTa
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凝胶成像概述（一）
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
凝胶成像定义 凝胶成像即对dna/rna/蛋白质等凝胶电泳不同染色（如eb、考马氏亮蓝、银染、sybr green）及微孔板、平皿等非化学发光成像检测分析。 凝胶成像系统可以应用于分子量计算,密度扫描,密度定量, PCR定量等生物工程常规研究。 凝胶成像系统的原理 样品在电泳凝胶或者其他载体上的迁移率不一样，以标准品或者其他的替代标准品相比较就会对未知样品作一个定性分析。这个就是图像分析系统定性的基础。根据未知样品在图谱中的位置可以对其作定性分析，就可以确定它的成份和性质。 样品对投射或者反射光有部分的吸收，从而照相所得到的图像上面的样品条带的光密度就会有差异。光密度于样品的浓度或者质量成线性关系。根据未知样品的光密度，通过于已知浓度的样品条带的光密度指相比较就可以得到未知样品的浓度或者质量。这就是图像分析系统定量的基础。采用*新技术的紫外透射光源和白光透射光源使光的分布更加均匀，*大限度的消除了光密度不均造成的对结果的影响。 凝胶成像应用范围 总体上来说凝胶成像可应用于：凝胶成像系统可以用于：蛋白质、核酸、多肽、氨基酸、多聚氨基酸等其他生物分子的分离纯化结果作定性分析 （1）分子量定量 对于一般常用的DNA胶片,利用分子量定量功能,通过对胶上DNA Marker条带的已知分子量注释,自动生成拟合曲线,并以它衡量得到未知条带的分子量。通过这种方法所得到的结果较肉眼观察估计要准确很多。 （2）密度定量 一般常用的测定DNA(脱氧核糖核酸)和RNA(核糖核酸)浓度的方法是紫外吸收法,但它只能测定样品中的总核苷酸浓度,而不能区分各个长度片段的浓度。利用凝胶成像系统和软件,先将DNA胶片上某一已知其DNA含量的标准条带进行密度标定以后,可以方便的单击其他未知条带，根据与已知条带的密度做比较，可以得到未知DNA的含量。此方法也适用于对PA GE蛋白胶条带的浓度测定。 （3）密度扫描 在分子生物学和生物工程研究中,*常用到的是对蛋白表达产物占整个菌体蛋白的百分含量的计
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凝胶成像概述（二）
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
凝胶成像一般操作步骤 1．打开凝胶成像系统开关。 2．打开电脑，系统自动打开并进入成像软件。 3．打开凝胶成像系统前面板，选择使用紫外透射光源或者白光透射光源，将相应光源安放到位。 4．将样品放置在透射光源的样品台上。 5．在成像操作界面里面选择使用Upper white光源，点击绿色（即时成像）按钮。 常见问题 1、是不是像素越高，产品就越好？ 像素是要针对成像设备来看的，比如数码相机与CCD的像素就不具备可比性，其次CCD本身的质量比单纯的像素高低更重要。对于同级别CCD*重要的指标是其大小，也就是CCD尺寸，尺寸越大其本身价值就成几何倍地增长。 2、配件紫外反射灯源的主要用途为何？ 紫外反射灯源使用并不广泛，主要是提供非透明材质的DNA跑胶载体如纸层析等的成像需要而使用。由于比较常用的还是透明的琼脂糖凝胶与聚丙烯酰胺凝胶，透射光源完全可以满足，因此将紫外反射光源作为选配件不列入标配中。 3、能否在凝胶成像上直接切胶？ TOCAN凝胶成像可以，如需直接切胶，首先按系统中间的观察窗，打开装有进口防紫外玻璃的观察窗口，然后打开左右两侧专为割胶所设计的小门，即可进行切胶操作。 4、如何调节焦距 聚焦 光圈以获得高质量的图片？ 三个*重要的可调参数分别是焦距 聚焦和光圈。其中焦距调节清晰度，聚焦调节图像大小，光圈调节明暗。一般先把光圈调节到适宜的亮度后，再调节聚焦将图像放到*大，*后调解焦距，在图像较大的情况下焦距比较容易调节到*清晰状态，然后再把图像缩放在适宜大小后成像即可。
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